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不同培养条件对CHO细胞表达EPO的影响
促红细胞生成素(Erythropoietin, EPO)是一种高糖蛋白激素.EPO分子中糖链结构末端的唾液酸的含量对其生物活性有重要影响.我们研究不同培养条件(培养基和pH)对CHO细胞表达EPO的产量和质量的影响,结果表明:不同培养基对EPO的表达有非常显著的影响,但对EPO的糖基化程度几乎没有影响;pH对EPO的表达无显著影响,但对EPO的糖基化程度有显著影响. 我们的研究表明,选择适合的培养基和控制适当的pH可显著提高EPO的产量和质量,降低EPO的生产成本,为工业化生产EPO提供基础.
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卵巢癌与正常卵巢组织中糖抗原125N-糖链结构比较分析
糖抗原(CA)125是一种卵巢癌相关抗原,由MUC16基因编码,为一大分子糖蛋白,其碳水化合物占总量的24%~28%,含有N-和O-连接糖链.是目前临床上惟一用于卵巢癌诊断的较理想的肿瘤标志[1],但由于CA125不仅存在卵巢癌组织,而且存在苗勒氏管起源的组织及少数非卵巢肿瘤组织中,故CA125对卵巢癌诊断的特异性不高.
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凝集素亲和电泳-免疫印迹法检测甲胎蛋白变异体
甲胎蛋白(AFP)是一个公认的肝细胞癌(HCC)标记物.然而,部分慢性肝炎、肝硬化等良性肝病亦可合成少量AFP.由于糖基化过程的差异,不同疾病状况下肝细胞分泌的AFP 在糖链结构上并不相同.为了鉴别AFP是产生于恶性肝癌细胞还是良性肝病细胞,人们已建立多种 AFP糖链变异体测定方法.新近的报告表明, AFP糖链变异体测定还有助于HCC复发转移的监测和预后的判断[1,2].我们在已建立的凝集素亲和免疫电泳自显影法[3]的基础上,又建立了操作更简便、敏感度更高的凝集素亲和电泳-免疫印迹法,并初步用于良恶性肝病的AFP糖链变异体检测.
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高尔基体蛋白73与甲胎蛋白异质体在原发性肝癌诊断中的临床应用
原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)是位列全世界第五、我国第二的恶性肿瘤,病死率高。患者早期无特异性临床表现和体征,至临床确诊时已发展至中晚期,预后较差,因此早发现、早诊断、早治疗是提高肝细胞癌患者生存率的佳途径[1]。目前PHC的检测相关肿瘤标记物主要有甲胎蛋白(AFP)、脱-酌-异常凝血酶原(DPC)、AFP-L3、高尔基体蛋白(GP)73、抑癌基因(DLC)-1[2]。GP73是近年发现的一种新的肿瘤标志物,有望成为诊断肝癌尤其是早期肝癌的血清标志物[3]。依照AFP分子糖链结构的差异,与小扁豆凝聚素(LCA)亲和电泳时,其电泳迁移率大小的不同将AFP区分为AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3。其中,AFP-L3为LCA结合型AFP异质体,由肝癌细胞产生,主要是肝动脉供血的癌组织,AFP-L3即为常称的AFP异质体[4]。本文采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法定量检测54例PHC患者、42名健康体检者、38例肝脏良性疾病患者血清中GP73、AFP-L3的浓度,探讨二者在PHC诊断中的临床应用价值,现报告如下。
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齐墩果酸型皂苷药理活性研究
齐墩果酸型皂苷是以齐墩果酸为苷元的五环三萜类皂苷,广泛存在于自然界中,天然的齐墩果酸型皂苷从结构上分为三个系列:3-单糖链齐墩果酸型皂苷,28-单糖链齐墩果酸型皂苷,3.28-双糖链齐墩果酸型皂苷.齐墩果酸型皂苷糖链结构和连接位置的不同与其药理活性有着密切联系,齐墩果酸型皂苷具有多种显著的药理活性,如在抗肿瘤、降血糖、保肝活性等方面比游离的苷元齐墩果酸更为明显.因此综述近年来国内外对齐墩果酸型皂苷药理活性的研究进展,并对其中可能的作用机制进行了阐述.
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肝癌组织和肝癌旁组织中γ-谷氨酰转肽酶糖链结构分析
目的比较肝癌组织和肝癌旁组织中γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活力及其N-连接型糖链结构的变化.方法用荧光分光光度法测定肝癌组织和肝癌旁组织中的γ GT活力,并用固相凝集素亲和层析测定γ-GT的糖链与刀豆球蛋白(ConA)和曼陀罗凝集素(DSA)结合百分比,以研究肝癌γ-GT糖链结构的变化.结果肝癌组织中γGT活力均较肝癌旁组织明显增高.两者相比,肝癌组织中γ GT与ConA柱不结合的组分明显升高,弱结合和强结合的组分显著降低;在DSA柱上则相反,不结合的γ-GT组分显著降低,弱结合和强结合的γ-GT组分显著升高.结论肝组织癌变后,其γ-GT活力明显增高,而且伴随着γ-GT糖链结构的明显变化:二天线糖链结构明显减少,三、四天线糖链结构明显增高.提示带多天线糖链结构的γ-GT可能是一种肝癌标志物.
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人肝组织谷氨酰转肽酶mRNA亚型转化与肝细胞癌变关系的研究
与正常肝组织相比,肝癌细胞表达的γ-谷氨酰转肽酶(GGT)具有特异的糖链结构,但是在肝细胞癌变过程中,GGT异常表达的机制尚不清楚.我们检测人肝组织及肝癌组织三种GGT mRNA亚型,分析不同疾病肝组织的GGT mRNA亚型,探讨GGT mRNA亚型转化与肝细胞癌变的关系.
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核心岩藻糖基化γ-GT测定对原发性肝癌的诊断价值
甲胎蛋白(AFP)用于检测原发性肝癌(HCC)具有较高的敏感性和特异性,但仍有1/3左右的患者呈阴性或低浓度阳性[1].因此,寻找其它的肿瘤标志物来诊断AFP阴性患者是急待解决的问题.近年来的研究显示,肝细胞癌变时,谷氨酰转肽酶(γ-GT,一种含有N-型糖链的糖蛋白)的N-型糖链结构可发生多种异常改变,其中由于岩藻糖苷酶的升高,可使核心岩藻糖基化γ-GT(core fucosylated transferrin,cFuc-γ-GT)增多[2,3].
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全反式维甲酸诱导分化的HL-60细胞表面凝集素受体的变化
目的:了解人类早幼粒细胞性白血病细胞株(HL-60)细胞经全反式维甲酸诱导分化后各时相细胞表面5种凝集素受体的变化.方法:以刀豆凝集素(ConA)、麦胚凝集素(WGA)、花生凝集素(PNA)、蓖麻凝集素(RCA)、荆豆凝集素(UEA-1)共5种Na125I-凝集素,标记经全反式维甲酸诱导分化的HL-60细胞,检测各时相细胞表面凝集素受体的变化.结果:HL-60细胞从幼稚分化发育至成熟各阶段中,细胞表面与UEA-1、WGA、ConA结合的凝集素受体有增多的趋势,诱导分化前后各凝集素放射活性比较有显著性差异(P<0.05),其中WGA放射活性在分化前后明显增加,而与PNA结合的凝集素受体在HL-60细胞分化过程中呈减少的趋势,在诱导分化后期减少为明显,诱导分化前后放射活性比较有显著性差异(P<0.05).结论:D-半乳糖-N-乙酰氨基半乳糖结构主要表达于HL-60细胞早幼粒阶段,随着细胞的分化成熟而显著减少,其可能是肿瘤特异性抗原.HL-60细胞在经全反式维甲酸诱导分化过程中,细胞膜上含L-岩藻糖糖链结构增多,N-乙酰氨基葡萄糖结构增多和/或唾液酸化作用增强,并出现D-葡萄糖和/或D-甘露糖糖链结构.
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肝癌γ-谷氨酰转肽酶糖链的凝集素亲和分析
目的研究肝癌γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)糖链结构的变化以寻找新的肝癌标志物.方法将肝癌组织和癌旁正常肝组织中γ-GT抽提液、肝癌患者血清和正常人血清,分别用ConA和DSA两种固相凝集素柱进行亲和层析,用荧光分光光度法测定各收集管的γ-GT活力并计算不同结合组分的百分比.结果肝癌组织与癌旁正常肝组织相比,其γ-GT中与ConA柱不结合的组分明显升高,弱结合和强结合的组分显著降低;在DSA柱上则相反,不结合的γ-GT组分显著降低,弱结合和强结合的γ-GT组分显著升高.血清γ-GT分析结果与此相似.结论肝组织癌变后,其γ-GT的糖链结构发生了明显变化:2天线糖链结构明显减少,3、4天线糖链结构明显增高.提示带多天线糖链结构的γ-GT可能是一种肝癌标志物.
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碱性磷酸酶及其糖链结构的研究
碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)由许多同工酶组成.近几年研究了各种同工酶的免疫原性、基因的核苷酸序列及其染色体定位和多肽链的氨基酸顺序,并提出了AP同工酶基因进化的观点.现在AP糖链结构的研究已引起极大的兴趣.
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碱性磷酸酶糖链分析在肝癌诊断中的价值
我们使用不同凝集素对碱性磷酸酶(ALP)糖链结构进行分析,以寻找新的肝癌标志物。1.资料与方法:正常血清来自体检健康者,不同疾病患者血清取自住院患者,疾病诊断均经临床或病理证实;糖链分析采用凝集素亲和层析法,包括L型红腰豆凝集素(L-PHA)、小扁豆凝集素(LCA)和蔓陀萝凝集素 (DSA);统计方法为t检验。2.结果:不同疾病患者血清ALP的凝集素结合率结果见表1;经相关分析,血清ALP的L-PHA、LCA、DSA 结合率与肿瘤(单个癌结节)大直径及AFP水平有关。3.讨论:凝集素是一类能与特定糖链结构结合的糖蛋白,我们使用多种凝集素亲和层析发现原发性肝癌患者血清ALP的N-糖链结构发生改变,多天线 (L-PHA、DSA结合)、核心岩藻糖 (LCA结合) 糖链结构明显增多。若取正常对照组血清ALP凝集素结合率的单侧99%作为参考范围,则血清ALP的L-PHA、LCA和DSA结合率在原发性肝癌患者中的阳性率分别为75.0%、56.9%和44.4%,在AFP阴性的原发性肝癌患者中阳性率也分别高达54.5%和40.9%和31.8%,且 L-PHA结合率和LCA结合率特异性较高。