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乙型肝炎病毒表面大蛋白N-糖基化修饰对内质网应激的影响
目的 研究乙型肝炎病毒表面大蛋白(large surface protein of HBV,LHBs)N-糖基化修饰对内质网应激的影响.方法 将LHBs基因进行单点突变,检测野生型LHBs和突变型LHBs对内质网应激和EAED路径相关蛋白表达的影响.检测LHBs与多种泛素链的结合状态,确定LHBs的糖基化基序.结果 LHBs N-糖基化修饰与内质网应激有关.N15S、N123S、N177S位点突变的LHBs可以诱导L02细胞过表达EDEM.野生型LHBs和突变型LHBs均包含有P62衍生的UBA结合域.结论 LHBs N-糖基化修饰可以调节内质网应激.N320K可能是LHBs N-糖基化修饰的关键位点.
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综合管理对老年2型糖尿病患者血糖控制达标的促进作用
目的 了解综合管理对老年2型糖尿病(T2DM)患者血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)达标的促进作用及影响因素.方法 经过多年采取糖尿病综合防治措施,干2009年度体检时对长期在我院保健的老年T2DM患者进行综合评估.常规体检项目包括:测量身高、体重和坐位血压,静脉采血测定空腹血糖、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TC),糖尿病患者均测定HbA1c.各项控制标准按美国糖尿病学会T2DM指南.结果 2009年评估的老年T2DM患者共688例,占参检人数的34.9%.其中男652例,女36例,年龄60～95(78.2±9.1)岁.HbA1c平均值为(6.6±0.9)%,达标率以<6.5%和<7.0%分别计算,各为50.6%和76.3%.TC、LDL-C、HDL-C、TG、血压和体重指数(BMI)的达标率分别为77.1%、46.4%、66.1%、67.8%、36.3%、57.4%,相关影响因素分析显示:糖尿病病程、降血糖需用药情况、血压控制情况、LDL-C、HDL-C、TC、BMI与HbAlc的控制有关(P<0.05).10年来无1例因糖尿病酮症、高血糖高渗状态急诊入院,因中重度低血糖就诊3例,无l例因糖尿病死亡.结论 本组中药50%的老年T2DM患者达到HbA1c<6.5%(CDS标准)、75%达到HbA1c<7.0%的标准.长期得到有效的糖尿病综合管理可促进老年糖尿病患者总体控制水平达标且安全性良好.
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不同培养条件对CHO细胞表达EPO的影响
促红细胞生成素(Erythropoietin, EPO)是一种高糖蛋白激素.EPO分子中糖链结构末端的唾液酸的含量对其生物活性有重要影响.我们研究不同培养条件(培养基和pH)对CHO细胞表达EPO的产量和质量的影响,结果表明:不同培养基对EPO的表达有非常显著的影响,但对EPO的糖基化程度几乎没有影响;pH对EPO的表达无显著影响,但对EPO的糖基化程度有显著影响. 我们的研究表明,选择适合的培养基和控制适当的pH可显著提高EPO的产量和质量,降低EPO的生产成本,为工业化生产EPO提供基础.
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糖化血红蛋白与妊娠期糖尿病的临床筛查
目的:探讨糖化血红蛋白(HbAlc)测定结果在妊娠糖尿病(GDM)筛查和监测中的应用价值.方法:选择100例妊娠期糖尿病患者(GDM 组)和160例非妊娠期糖尿病患者(非GDM 组);另选取未妊娠的非糖尿病健康妇女60例作为对照组,进行空腹血糖(FPG)、口服50g葡萄糖筛查试验(GCT)、糖化血红蛋白(HbAlc)测定.结果:与对照组比较,GDM 组FPG、GCT、HbA1c均显著升高(P ＜ 0.01);GDM 组的阳性检出率显著高于对照组和非GDM 组(P＜ 0.05);HbA1c的敏感性、特异性、可靠性及阳性预测均较FPG及GCT高.结论在妊娠期糖尿病患者的诊断和筛查中HbA1c检查方法敏感性和特异性均较高,且具有检测速度快、操作简单等优点,可以作为一种较为实用的筛查GDM 的指标使用.
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肺结核合并糖尿病患者糖化血红蛋白含量与临床表现间的关系
目的 探讨肺结核合并糖尿病患者的临床表现与糖化血红蛋白(HbA1c)含量间的关系.方法 将北京胸科医院2011年1月1日至2011年12月31日收治的糖尿病合并肺结核患者395例,根据人院后次日检测的HbA1c结果,按照中国糖尿病防治指南标准分为三组:HbA1c含量＜6.5％为糖尿病控制良好组(Ⅰ组),40例；HbA1c含量6.5％～为糖尿病控制中等组(Ⅱ组),63例；HbA1c含量≥7.5％为糖尿病控制不良组(Ⅲ组),292例.对三组患者的痰菌情况及胸部影像学病变特点进行比较.采用SPSS 19.0统计软件,计量资料采用成组t检验.当方差不齐(sig＜0.05)时用校正t检验.率的比较应用x2检验,采用线性趋势性x2检验分析三组资料的线性变化趋势,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 Ⅰ组患者痰菌检测阳性率50.0％(20/40),Ⅱ组患者痰菌检测阳性率73.0％(46/63),Ⅲ组患者痰菌检测阳性率90.4％(264/292).Ⅲ组痰菌检测阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ组(x2=5.83,P＜0.01)；Ⅱ组痰菌检测阳性率高于Ⅰ组(x2=5.63,P＜0.05)；三组痰菌检测阳性率呈递增(x2趋势性=47.46,P＜0.01).Ⅰ组患者干酪渗出性病变发现率45.0％(18/40),Ⅱ组患者为58.7％(37/63),Ⅲ组患者为80.1％(234/292).Ⅲ组干酪渗出性病变发现率明显高于Ⅰ、Ⅱ组(x2=30.08,P＜0.01)；三组干酪渗出性病变发现率呈递增(x2趋势性=29.67,P＜0.05).三组虫蚀样空洞病变发现率分别为12.5％(5/40)、14.3％(9/63)、28.4％(83/292).Ⅲ组虫蚀样空洞病变发现率明显高于Ⅰ、Ⅱ组(x2=9.08,P＜0.05)；三组虫蚀样空洞病变发现率呈递增(x2趋势性=8.17,P＜0.05).三组干酪性空洞病变发现率分别为25.0％(10/40)、27.0％ (17/63)、53.1％(155/292).Ⅲ组干酪性空洞病变发现率明显高于Ⅰ、Ⅱ组(x2=22.16,P＜0.01)；三组干酪性空洞病变发现率呈递增(x2趋势性=19.57,P＜0.05).结论 HbA1c的含量与肺结核合并糖尿病患者的临床表现密切相关.
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瘦素对生殖系统的作用
瘦素(leptin)是1994年被发现的一种蛋白激素,系16-KDa非糖基化多肽,含有46个氨基酸,是肥胖基因(Ob基因)的激素产物Ob基因主要表达于脂肪组织,在下丘脑、垂体、骨骼肌、乳腺、性腺、胎盘等器官低水平表达.
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免疫球蛋白GN-糖基化与糖尿病视网膜病变的相关性研究
目的 探讨糖尿病视网膜病变(DR)与免疫球蛋白G (IgG) N-糖基化的相关性,为疾病的发生发展提供依据.方法 将纳入的2型糖尿病患者以是否患有DR分为病例组和对照组,比较两组IgG N-糖基化水平,通过二分类logistic模型校正其他协变量.结果 直接测量的糖基峰中,GP4、GP6、GP17和GP19在病例组水平较高,而GP15、GP16、GP18和GP21在对照组含量较高(P＜0.05);在校正年龄、性别等其他协变量后,代表唾液酸化的10种衍生结构差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 IgG N-糖基化的唾液酸化与DR的发生发展有相关性.
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"注射用瑞替普酶"技术转让
项目介绍背景:注射用瑞替普酶(r-PA)是非糖基化组织型纤溶酶原激活物的变异体,含有绞链区2及人组织型纤溶酶原激活物的酶结合点,含有天然组织型纤溶酶原激活物527个氨基酸中的355个(氨基酸1-3和176-527 ).注射用瑞替普酶是爱德药业(北京)有限公司采用先进的基因工程技术独家生产的第三代溶栓药,是国内首个第三代心梗溶栓药,商品名——派通欣TM,2003年12月获得新药证书.2003年底获得了注射用瑞替普酶的生产批准文号.
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"注射用瑞替普酶"技术转让
项目介绍背景:注射用瑞替普酶(r-PA)是非糖基化组织型纤溶酶原激活物的变异体,含有绞链区2及人组织型纤溶酶原激活物的酶结合点,含有天然组织型纤溶酶原激活物527个氨基酸中的355个(氨基酸1-3和176-527).注射用瑞替普酶是爱德药业(北京)有限公司采用先进的基因工程技术独家生产的第三代溶栓药,是国内首个第三代心梗溶栓药,商品名一派通欣TM,2003年12月获得新药证书.2003年底获得了注射用瑞替普酶的生产批准文号.
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检测肠产毒性大肠埃希菌GM1-ELISA方法的建立
肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)是重要的致病因子不耐热肠毒素(LT),由一个具有5-腺苷二磷酸二钠盐(ADP)糖基化活性的A亚单位(LTA)和神经结苷脂(GM1)有特异性高亲和力的B亚单位(LTB)构成.
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组蛋白ADP-核糖基化及其生物学效应
与原核生物不同，绝大多数真核生物DNA以结构复杂、高度折叠的染色质为载体，这使得两者在基因表达上具有很大的差异。染色质以核小体为基本组成单位，每个核小体包括一个八聚体的组蛋白（两分子的H2 A-H2 B二聚体，两分子的H3和两分子的H4）以及缠绕其上1.75圈的长约146 bp的DNA，核小体之间以40～60 bp的DNA连接，组蛋白H1与之结合。八聚体的三维结构为球状，而组蛋白亚基的氨基端则游离出来，称为氨基端尾巴（或组蛋白尾巴）。氨基端尾巴上的许多残基可以被共价修饰，不同位点上的不同修饰可形成大量特殊信号。组蛋白的翻译后修饰不仅与染色体的重塑和功能状态紧密相关，而且在决定细胞命运、细胞生长以及致癌作用的过程中发挥着重要的作用，如组蛋白磷酸化就在有丝分裂、细胞死亡、DNA 损伤修复、DNA 复制和重组过程中发挥着直接的作用。
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急性感染期内恒河猴外周血中人/猴嵌合免疫缺陷病毒包膜蛋白的N糖基化位点分析
目的：分析人/猴嵌合免疫缺陷病毒（SHIVSF162P3）包膜蛋白N糖基化位点的数量和分布及病毒传播能力。方法两只雌性成年（4周岁）中国恒河猴，编号Rh1和Rh2，体重分别为4和5 kg。通过静脉攻毒的方式向Rh1和Rh2接种SHIVSF162P3，每只剂量为300半数组织培养感染剂量，在攻毒后第3、7、10、14、17、21、24、28、35、42、49、56、63、70和77天采集血液样本。对样本进行病毒RNA抽提和cDNA合成，采用实时荧光定量PCR测定病毒RNA水平。对攻毒后第7、14、28和77天的血浆样本进行单基因组扩增，使用Bio-edit中的Clustal W软件进行包膜蛋白全长多序列比对，用MEGA6.06软件计算配对差异距离，采用HIV Databases中的软件计算包膜蛋白N糖基化位点和可变区氨基酸数目，比较序列多样性、N糖基化位点数量的差异。结果从接种的病毒中共扩增得到55条包膜蛋白全长序列，其核苷酸序列平均配对差异距离为（0.1666±0.0963）%。病毒载量在攻毒后第10天达到峰值，lg转换值分别为7.68和7.49拷贝/ml；在攻毒后第42天，病毒载量达到调定点，lg转换值分别为4.27和4.81拷贝/ml。攻毒后第7天，Rh1和Rh2血样中包含25个N糖基化位点的病毒包膜蛋白序列的比例分别达到83%（20/24）和94%（29/31），高于接种病毒中的比例[49%（27/55）]。随着感染时间的延长，Rh1和Rh2血浆中SHIVSF162P3病毒包膜序列的多样性逐渐增大，包含25个N糖基化位点的包膜蛋白序列比例逐渐降低，包含27个N糖基化位点病毒所占比例逐渐升高；在第28天Rh1体内包含27个N糖基化位点的序列比例达到29%（6/21），Rh2在第77天达到35%（13/37）。V1~V5区糖基化位点分析发现，N糖基化位点数目的变化主要来自于V4区。与包含27个糖基化位点的包膜蛋白序列相比，包含25个糖基化位点的病毒包膜蛋白序列在V4区缺失7个氨基酸（TWNNTIG），导致V4区在392位和396位缺少2个N糖基化位点。结论 V4区低糖基化的SHIVSF162P3在传播过程中占优势地位；而随着感染时间的延长，V4区高糖基化的SHIVSF162P3逐渐在猴体内获得复制优势。
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决明子提取物对非酒精性脂肪肝大鼠的护肝、拮抗胰岛素抵抗和抗氧化糖基化作用
目的：探讨决明子乙醇提取物( semen cassiae extract,SCE)对高脂高糖诱导非酒精性脂肪肝大鼠血糖、血脂、胰岛素抵抗及肝功能和肝细胞脂肪变性病理改变以及氧化应激—糖基化作用。方法 SD大鼠72只,雌雄各半,随机分成正常对照组(12只)和模型组(60只)。正常对照组给予普通饲料,饮用蒸馏水；模型组大鼠给予高脂饲料,饮用10%果糖水。饲养至第6周末,将模型组大鼠随机分为模型对照组(蒸馏水10 mL/kg)、二甲双胍组(0．2 g/kg)、决明子乙醇提取物( SCE)高(2 g/kg)、中(1 g/kg)、低(0．5 g/kg)剂量组。连续灌胃给药4周后,测定大鼠血清超氧化物歧化酶( superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶( glutathione peroxidase,GSH-Px)、一氧化氮合成酶( nitric oxide synthase, NOS )活性,测定血清一氧化氮( nitric monoxide, NO )、丙二醛( malondialdehyde,MDA)、果糖胺( fructosamine, FMN )、晚期糖基化终产物( advanced glycation end products,AGEs)、葡萄糖含量( fasting blood glucose,FBG),血清胰岛素水平( insulin,INS)及胰岛素敏感度( insulin sensitivity index,ISI)。测定大鼠肝脏组织SOD、NOS活性及NO、MDA含量。结果与正常对照组相比,模型组大鼠血清GSP-Px、SOD和NOS活性降低,NO、MDA、FMN、AGEs、FBG含量升高,INS水平升高、ISI下降；模型组大鼠肝脏组织中SOD和NOS活性降低,NO和MDA含量明显升高(P<0．01)。 SCE和二甲双胍处理4周后,明显提高模型大鼠血清GSP-Px、SOD和NOS活性,降低NO、MDA、FMN、AGEs、FBG水平,并降低INS水平,上调ISI；同时,明显提高肝组织中SOD和NOS活性,降低NO、MDA含量(P<0．01,P<0．05),尤以SCE高剂量组作用更为明显。结论决明子提取物的护肝作用,与其拮抗胰岛素抵抗、增强抗氧化能力以及抑制氧化糖基化反应有关。
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黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠脑内GLUT3及tau蛋白O-GlcNAc糖基化的影响
目的:观察黄连解毒汤(HLD)对链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病(T2DM)模型大鼠脑内葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)及tau蛋白O-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)糖基化水平的影响,探讨HLD抑制其脑内tau蛋白过度磷酸化的作用机制.方法:健康雄性Wistar大鼠72只,随机分为6组:空白组,模型组,罗格列酮组,黄连解毒汤低、中、高剂量组(1.5、3、6g/kg).通过高糖高脂饮食及小剂量STZ制备T2DM模型.除空白组、模型组灌胃给予等容积的蒸馏水,其他治疗组以相应药物治疗.8周后,采用Western blot和免疫组化法观察大鼠脑内GLUT3及tau蛋白O-GlcNAc糖基化水平.结果:与空白组比较,模型组大鼠海马中GLUT3的含量明显减少(P＜0.01),RL2表达明显下降(P＜0.05);与模型组比较,HLD可增加大鼠海马中GLUT3表达(P＜0.01),增加RL2蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:HLD通过改善T2DM大鼠脑内葡萄糖摄入和代谢障碍,增加tau蛋白O-GlcNAc糖基化表达,进而降低tau蛋白磷酸化水平.
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小檗碱对D-半乳糖诱导糖基化模型大鼠血糖、血脂和肝肾功能的影响
蛋白质非酶糖基化反应形成稳定的晚期糖基化终末产物(advanced glycation end-products,AGEs)可以通过交联形成大分子物质,这些物质可以沉积在肝脏和肾脏组织,从而导致这些器官组织病变损伤,此过程与糖尿病并发症的发生密切相关[1].体外实验证明,小檗碱对蛋白非酶糖基化反应中的限速酶-醛糖还原酶的活性有抑制作用,并可降低血糖、改善糖尿病并发症等作用[2、3].本实验通过D-半乳糖诱导糖基化模型大鼠,观察小檗碱抑制体内蛋白质糖基化反应,以及对糖基化状态发生的高血脂、高血糖、低胰岛素敏感指数和肝、肾功能损伤的保护作用.
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益气养阴活血法对糖尿病大鼠肾组织非酶糖基化作用的影响
目的:观察益气养阴活血法(糖瘀平)对STZ糖尿病大鼠糖基化作用的影响,探讨从气阴两虚兼瘀论治糖尿病及慢性并发症的机理.方法:对STZ诱发的糖尿病大鼠分别给予糖瘀平高剂量(8g/kg/d)、中剂量(6g/kg/d)及低剂量(4g/kg/d)灌胃,对正常对照组及糖尿病模型组分别给予等体积的蒸馏水灌胃,药物对照组给予水飞蓟素(100mg/kg/d).处理9周后,观察各组大鼠体重、肾重、血糖、果糖胺、肾皮质AGEs、24h尿蛋白定量、血肌酐及尿素氮等指标的变化.结果:糖瘀平能降低血糖,对早期糖化产物果糖胺及肾皮质AGEs均有抑制作用,能使尿蛋白排泄量明显减少,血尿氮素水平下降.结论:依据气阴两虚兼瘀的病机,采用益气养阴活血法(糖瘀平)可通过降低血糖,抑制糖尿病大鼠蛋白非酶糖基化反应,降低尿蛋白排泄及血尿素氮水平,起到控制糖尿病发展,防治糖尿病肾病的作用.
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人参毛状根生物合成熊果苷的研究
目的:研究人参毛状根生物合成熊果苷的基本条件.方法:以熊果苷的含量、氢醌(1,4-对苯二酚)的转化率为指标,找出适于生物合成的培养条件、持续时间和底物浓度.结果:培养22 d的人参毛状根更换含底物的B5培养基后,对浓度为2 mmol@L-1的氢醌持续转化24 h,所合成的熊果苷占干重的13.0%,转化率达89.0%.结论:本文首次以人参毛状根为反应器,人工合成出人参属植物所不具有的熊果苷.
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葛根素对D-半乳糖诱导糖基化大鼠脑损害的干预作用
目的:研究葛根素(puerarin,Pue)对D-半乳糖诱导的糖基化模型大鼠并发脑损害的干预作用.方法:D-半乳糖(150 mg·kg-1·d-1,ip)给药8周,诱导糖基化模型大鼠,并于第3周开始给予葛根素高、中、低(300,150,75mg·kg-1)剂量处理6周.测定红细胞醛糖还原酶活性、糖化血红蛋白、血清果糖胺和晚期糖基化终末产物(AGEs)含量及脑组织中AGEs含量、脑神经细胞内钙离子水平,并以透射电镜观察脑内海马神经细胞线粒体的变化.结果:葛根素高、中剂量明显降低模型组大鼠红细胞醛糖还细胞酶活性,抑制糖化产物的形成(P＜0.01),降低脑组织中AGEs及脑细胞内钙的含量(P＜0.05,P＜0.01),保护海马神经细胞线粒体结构的完整性.结论:葛根素具有抑制D-半乳糖诱导的蛋白糖基化反应,并对糖基化状态并发的脑神经细胞损害具有保护作用.
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羊瘙痒病263K毒株感染的仓鼠脑中PrP分子形式多样性的动态测定
正常细胞的朊蛋白(PrPC)代谢和构象的改变是引发动物和人类可传播性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs)的根本原因.将羊瘙痒病( scrapie)仓鼠适应株263K颅内接种仓鼠, 在接种后的第20、40、50、60、70、80天, 通过Western blot 动态检测仓鼠脑中PrP存在的形式.结果在接种后第40天, 在感染动物脑组织中即检测到 PrPSc分子,比临床症状出现的时间早(平均潜伏期为66.7±1.1天),且无糖基化形式的PrP分子所占百分比在接种后期增加明显.除了标准分子量大小(30kD～35kD)的 PrP分子外,在感染动物脑中存在着高分子量和低分子量形式的PrP分子 .定量分析显示,随着接种潜伏期的延长,不同形式PrP分子的含量也在增加,其中低分子量形式的PrP分子与临床症状的出现密切相关.蛋白去糖基化实验表明,在感染动物脑组织中,除了标准分子量大小的PrP蛋白外,还存在一条更小分子量的PrP条带,而正常动物脑组织仅存在标准大小的Pr P分子.低分子量形式的PrP分子具有与全长PrP分子相类似的糖基化模式.结果提示,scrapie 263K感染的仓鼠脑组织中存在不同分子形式的PrPSc,其PrP分子的代谢可能不同于正常动物.
关键词： 羊瘙痒病毒株263K PRP PrPSc 糖基化 -
化学修饰辅助技术在蛋白质组研究中的应用
介绍了化学修饰辅助技术在蛋白质组表达谱、比较蛋白质组、磷酸化蛋白质组、糖蛋白质组和酶蛋白质组研究中的应用,对当前蛋白质组研究中所用到的化学修饰辅助技术进行了评述.
