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人参毛状根生物合成熊果苷的研究
目的:研究人参毛状根生物合成熊果苷的基本条件.方法:以熊果苷的含量、氢醌(1,4-对苯二酚)的转化率为指标,找出适于生物合成的培养条件、持续时间和底物浓度.结果:培养22 d的人参毛状根更换含底物的B5培养基后,对浓度为2 mmol@L-1的氢醌持续转化24 h,所合成的熊果苷占干重的13.0%,转化率达89.0%.结论:本文首次以人参毛状根为反应器,人工合成出人参属植物所不具有的熊果苷.
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Ri质粒人参转化系统的建立及鉴定
目的：建立人参毛状根转化体系。 方法：利用含有Ri质粒的发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes感染人参 Panax ginseng 进行毛状根诱导，利用PCR技术及TLC分析方法对毛状根进行鉴 定。结果：首次从人参带叶幼茎处诱导出毛状根，用激素和AS（乙 酰丁香酮）处理可提高转化率并缩短转化时间。毛状根在无激素B5培养基上生长并失去向 地性，月增长倍数可达50倍（鲜重）。PCR分析证实农杆菌Ri质粒含有rol C序列（564bp） 的T-DNA已整合到人参转化株的染色体组中，TLC分析证明T-DNA特异的表达产物冠瘿碱在 转化细胞中合成。人参毛状根中人参总皂苷含量为2.486%(干重)，而人参原药材总皂苷含量 为1.403%(干重)。结论：人参毛状根生长迅速，皂苷含量高于原药 材，该体系的建立为利用生物技术工业化生产人参活性成分奠定了基础。
关键词： 发根农杆菌 人参毛状根 聚合酶链式反应(PCR) 冠瘿碱 -
真菌诱导子对人参毛状根皂苷生物合成和生长的影响
目的:考察真菌诱导子对人参毛状根的生长和人参皂苷生物合成影响.方法:提取黄瓜炭疽病菌Colletorichum lagnarinm、青菜炭疽病菌Phoma filtrate、棉花枯萎病菌Fusarium oxysponum、黑曲霉Asperillus niger中的真菌诱导子与人参毛状根共培养,应用HPLC及比色法对培养物中总苷及几种单体皂苷进行分析测定.结果:真菌诱导子不但能影响人参毛状根总苷的合成量,也能使某些单体皂苷消失或增加,如培养液中黑曲霉多糖诱导子增加到20mg·L-1浓度时,使总苷含量增加到3.649%,而单体皂苷中Rg1和Re未检出,Rg2和Rb1的含量则有明显增加,并可促进人参毛状根的生长.结论:真菌诱导子对人参毛状根某些皂苷的合成具有特异性,同时也影响人参毛状根的生物量.培养过程中通过外源性诱导子的添加,有利于人参毛状根次生代谢产物的定向积累.
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人参毛状根转化水杨酸研究
目的:利用人参毛状根作为有效的生物反应器,对水杨酸进行结构改造.方法:培养人参毛状根22 d,外源加入0.1 mmol · L-1水杨酸后,连续培养48 h,利用TLC、HPLC等方法鉴定,分析转化物清除自由基能力.结果:人参毛状根中有新化合物产生,化学鉴定试验结果提示水杨酸的酚基被糖基化生成相应的糖苷.结论:水杨酸转化后人参毛状根醇提物能够清除活性氧自由基,具有良好的应用前景.
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人参毛状根糖基转移酶的分离纯化及酶学性质研究
首次从人参毛状根中提取分离了糖基转移酶,用SDS-PAGE测定其相对分子质量为56.6 k.该酶以对羟基苯甲酸为底物时的Km=0.399 nmol/L,Vmax=2.74 nmol/min,反应的适温度为45℃,适pH值为8.0.该酶在60℃以下,pH 4.0～10.0范围内保持稳定.Na+,K+,Mg2+,Ca2+,Zn2+,Ag+,Ba2+对酶活力有抑制作用,Fe2+和Cu2+对酶活力有一定的促进作用,而Mn2+和Co2+对酶活力没有影响.
