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亲和吸附胶体金免疫层析检测甲胎蛋白变异体方法的建立及应用
目的 建立一种简便、快速检测甲胎蛋白变异体(AFP-L3)的新方法.方法 用离心柱亲和吸附结合胶体金测试条检测1350例血清标本中AFP-L3(110例正常体检人员、550例慢性乙肝、350例肝硬化、320例肝细胞肝癌和20例脐带).结果 脐带血AFP-L3均为阴性.189例AFP升高的肝癌患者中AFP-L3有153例(81.0%)为阳性.其中AFP<400ng/mll>20 ng/ml的患者中AFP-L3检出率为34.2%(13/38),>400ng/ml患者中AFP-L3检出率为92.7%(140/151).结论 AFP-L3检测可预警肝癌的发生,主要特点为:不受AFP>400 ng/ml作为肝癌诊断标准的限制;不受影像学检查结果为阴性的束缚;有助于鉴别影像学检查难以确诊的肝占位性病变;从而可缩短肝癌的诊断时间.借助A FP-L3与AFP检测值的对比,判断患者手术治疗是否彻底.从而为后续治疗提供重要参考依据.
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"注射用瑞替普酶"技术转让
项目介绍背景:注射用瑞替普酶(r-PA)是非糖基化组织型纤溶酶原激活物的变异体,含有绞链区2及人组织型纤溶酶原激活物的酶结合点,含有天然组织型纤溶酶原激活物527个氨基酸中的355个(氨基酸1-3和176-527 ).注射用瑞替普酶是爱德药业(北京)有限公司采用先进的基因工程技术独家生产的第三代溶栓药,是国内首个第三代心梗溶栓药,商品名——派通欣TM,2003年12月获得新药证书.2003年底获得了注射用瑞替普酶的生产批准文号.
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"注射用瑞替普酶"技术转让
项目介绍背景:注射用瑞替普酶(r-PA)是非糖基化组织型纤溶酶原激活物的变异体,含有绞链区2及人组织型纤溶酶原激活物的酶结合点,含有天然组织型纤溶酶原激活物527个氨基酸中的355个(氨基酸1-3和176-527).注射用瑞替普酶是爱德药业(北京)有限公司采用先进的基因工程技术独家生产的第三代溶栓药,是国内首个第三代心梗溶栓药,商品名一派通欣TM,2003年12月获得新药证书.2003年底获得了注射用瑞替普酶的生产批准文号.
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我国维、汉族CCR5△32、CCR2-64I、CX3CR1-V249I和CX3CR1-T280M多态性分析及其对HIV感染的影响
本研究选择了该区维族和汉族两个主要民族,分析了上述三个基因4个突变体在这些民族的分布及其分布的差异.并与HIV感染者相比较,观察了上述变异体对HIV感染的影响.
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髓样造血抑制因子(MPIF)存在一种新的mRNA剪切变异体
目的克隆并原核表达趋化因子,研究其结构与功能. 方法 RT-PCR技术,DNA测序和计算机网上比对,DNA重组及原核表达技术,离子交换层析技术,半固体骨髓集落培养. 结果在利用RT-PCR扩增趋化因子MPIF-1的过程中发现存在一种新的变异体形式.该变异体比MPIF-1多51个碱基,编码的蛋白质比MPIF-1长17个氨基酸,基因定位于人类第17号染色体上,其序列符合内含子和外显子的剪切规律,因而很可能为MPIF-1的mRNA不同剪切形式,将其命名为MPIF-1β.应用DNA重组技术构建原核表达质粒PKPL-MPIF-1β,转化大肠杆菌,诱导表达,获得重组蛋白.SDS-PAGE表明MPIF-1β的表达效率达15%,相对分子质量(Mr)约为(14~15)×103.功能研究表明,MPIF-1β有抑制小鼠骨髓集落形成的作用. 结论 MPIF-1β是与MPIF-1功能类似的新变异体.
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新型组织型纤溶酶原激活剂对鼠急性脑血栓疗效的研究
目的 评价新型组织型纤溶酶原激活剂变异体对鼠急性脑血栓溶栓作用及脑组织保护作用.方法 将87只成年Wistar大鼠随机分为对照组(生理盐水)、爱通立组(10 mg/kg)、低剂量组织型纤溶酶原激活剂变异体(rt-Pam)组(5 mg/kg)、及rt-Pam组(10 mg/kg).体外制作新鲜血栓(直径0.35 mm,长度18 mm),并将它注射入鼠的右大脑中动脉形成急性脑血栓,血栓形成3 h后进行相应治疗.血栓形成24 h后应用2,3,5-氯化三苯四唑染色评估梗死面积,采用9分法评价神经系统损伤,肉眼观察脑出血的情况,并通过Western blot测量髓过氧化物酶来评价中性粒细胞浸润及免疫组化法测定蛋白酶激活受体1(PAR-1)的浓度,从而了解溶栓剂对脑组织的保护作用.统计分析计是资料采用均数±标准差((x-)±s)表示,组间分析采用配对t检验,方差分析,直线回归分析评价梗死面积与神经系统损伤评分的关系.以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 梗死后应用低剂量rt-Pam[(108.5±27.3)mm3 vs.(323.4±42.3)mm3]及常规剂量rt-Pam[(68.3±17.2)mm3 vs.(323.4±42.3)mm3]组梗死容积均较对照组有明显降低,同时梗死容积与神经评分有明确的相关性(r=0.613,P<0.01).且低剂量rt-Pam在溶栓的同时没有明显增加脑出血的几率.rt-Pam还减少了髓过氧化物酶的生成,并与爱通立组相比减少了PAR-1的生成[(13.8±3.1) vs.(28.3±4.5),P<0.01].结论 新型组织型纤溶酶原激活剂变异体有较好的溶栓作用,同时对缺血脑组织有明显的保护作用.
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凝集素亲和电泳-免疫印迹法检测甲胎蛋白变异体
甲胎蛋白(AFP)是一个公认的肝细胞癌(HCC)标记物.然而,部分慢性肝炎、肝硬化等良性肝病亦可合成少量AFP.由于糖基化过程的差异,不同疾病状况下肝细胞分泌的AFP 在糖链结构上并不相同.为了鉴别AFP是产生于恶性肝癌细胞还是良性肝病细胞,人们已建立多种 AFP糖链变异体测定方法.新近的报告表明, AFP糖链变异体测定还有助于HCC复发转移的监测和预后的判断[1,2].我们在已建立的凝集素亲和免疫电泳自显影法[3]的基础上,又建立了操作更简便、敏感度更高的凝集素亲和电泳-免疫印迹法,并初步用于良恶性肝病的AFP糖链变异体检测.
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诱骗受体3在疾病检测中的进展
DcR3又名TNFRSF6B/TR6/M68,其编码基因位于人类染色体20q13.3,是一种缺乏穿膜结构域的可溶性受体,DcR3编码长度为300个氨基酸(NCBI accession #NM_032945),产物相对分子质量为30 000的糖基化蛋白,有2个变异体DcR3v1( NCBI accession#AAM94173)和DcR3v2(NCBIaccession #AAM94172),分别编码74和139个氨基酸[1].DcR3能够中和3种肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员[死亡因子(Fas)、LIGHT和TL1A]的生物学效应.现将其在疾病检测中的进展阐述如下.
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Ss-A/Ro 60 ku亚单位变异体1在胃癌多药耐药中的作用
目的:对Ro 60变异体1在胃癌多药耐药中的功能进行研究.方法:克隆Ro 60变异体1编码基因,构建Ro60变异体1编码基因的正义真核表达载体,将其转导入SGC7901细胞,应用半定量RT-PCR技术,对基因转染细胞进行鉴定,通过MTT法进行体外药物敏感性分析,借助流式细胞仪检测细胞内蓄积的阿霉素.结果:成功构建Ro 60变异体1正义真核表达载体;应用脂质体介导法将其转导入SGC7901,其表达量明显增加;体外药物敏感性试验提示,与SGC7901和SGC7901-pcDNA3.1细胞相比,转染细胞对长春新碱(IC50:2.87±0.10mg/L vs 0.47±0.07 mg/L,0.63±0.08 mg/L,P<0.01)、5-氟尿嘧啶(IC50:3.89±0.12 mg/L vs0.59±0.17 mg/L,0.92±0.12 mg/L,P<0.01)、丝裂霉素(IC50:1.02±0.06 mg/L vs 0.50±0.04mg/L,0.73±0.09 mg/L,P<0.05)、顺铂(IC50:1.15±0.06 mg/L vs 0.46±0.04 mg/L.0.52±0.05 mg/L,P<0.01)、阿霉素(IC50:0.45±0.03mg/L vs 0.15±0.03 mg/L,0.16±0.02 mg/L,P<0.01)的敏感性减低:流式细胞仪检测结果显示,转染细胞内阿霉素的蓄积减少(50.39±2.09 mg/L vs 94.99±4.07 mg/L,88.06±2.67mg/L,P<0.01).结论:Ro 60变异体1真核表达载体转染SGC7901细胞后,显示多药耐药特性.
关键词: 胃癌 Ss-A/Ro 60ku亚单位 变异体 多药耐药 基因转染 -
Ss-A/Ro核蛋白60 ku亚单位及其变异体在耐药胃癌细胞中的表达
目的:克隆Ss-A/Ro 60 ku亚单位编码基因,检测Ss-A/Ro60 ku亚单位及其变异体在耐药胃癌细胞中的表达情况.方法:应用RT-PCR克隆Ss-A/Ro 60 ku亚单位编码基因,应用半定量RT-PCR检测Ss-A/Ro 60 ku亚单位及其变异体在胃癌细胞中的表达情况.结果:成功克隆了Ss-A/Ro 60 ku亚单位编码基因,并发现了他的两种变异体,长度分别为52 bp和41bp.半定量RTPCR结果显示,Ss-A/Ro 60 ku亚单位在SGC7901/VCR中的表达强度高于SGC7901细胞(P=0.0001),Ss-A/Ro 60 ku亚单位的两种变异体在SGC7901/VCR中的表达强度也高于SGC7901细胞(P=0.001).结论:Ss-A/Ro 60 ku亚单位及其两种变异体为胃癌多药耐药相关分子.
关键词: 胃癌 Ss-A/Ro 60 h亚单位 变异体 多药耐药 -
基因芯片技术检测HBV HCV及HBV YMDD变异株
目的:探讨基因芯片技术在乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)及HBV YMDD变异株检测中的应用.方法:采用HBV、HCV联合基因芯片检测40份血清标本,并与HBV,HCV基因定量检测方法比较;采用HBVYMDD变异株芯片检测20份血清标本,并与错配PCR及DNA序列测定方法比较.结果:HBV,HCV联合基因芯片与HBV DNA定量检测的符合率为85%(34/40),HBV检出率为83%(19/23),假阳性率为12%(2/17);与HCV RNA定量检测的符合率为85%(34/40),HCV检出率为58%(7/12),假阳性率为4%(1/28).HBV YMDD变异株芯片与本室设计的错配PCR符合率为70%(14/20),5份芯片检测的标本与DNA序列测定结果一致,该芯片尚可检测出不同病毒体或变异体的混合感染.结论:HBV,HCV联合基因芯片对HBV的检测有较高的敏感性,但存在一定程度的非特异性;对HCV的检测敏感性偏低,但特异性较高.HBV YMDD变异株芯片敏感性和特异性均较高,同时能检测出病毒变异体的共生现象.
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晚期非小细胞肺癌EML4-ALK融合变异体与克唑替尼治疗的临床分析
目的 探讨克唑替尼对间变性淋巴瘤激酶(ALK)阳性的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效和安全性,及与ALK变异体的相关性;分析克唑替尼的临床疗效和不良反应.方法 收集皖南医学院弋矶山医院及南京军区南京总医院自2013年9月至2017年5月收治的68例ALK阳性晚期NSCLC患者,口服克唑替尼胶囊250 mg,2次/d.利用二代测序技术检测初治标本基因情况,探索ALK变异体与克唑替尼治疗的疗效.结果 68例患者的客观缓解率和疾病控制率分别为61.8%和85.3%,中位PFS和中位OS分别为10.5个月和33.9个月.根据二代测序结果,35例患者中变异体1常见(42.9%),其次是变异体2(20.0%).变异体1和非变异体1两组的中位PFS(10.7个月vs.9.8个月,P=0.647)和中位OS(27.33个月vs.22.40个月,P=0.831)没有统计学差异.患者的不良反应常见是视觉影响和消化道反应,多数为Ⅰ~Ⅱ度.结论 ALK阳性的晚期NSCLC患者接受克唑替尼治疗具有较好的疗效且不良反应多可耐受.ALK阳性不同变异体之间与克唑替尼的疗效没有明显的生存差异.
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ER-β亚型及其异构体与乳腺癌(文献综述)
雌激素受体β(estrogen receptor β,ER-β)是另一个新的雌激素受体亚型,两者生物学特性在不同条件下表现为既相似又相对、既协同又拮抗的关系,共同调节乳腺癌发生与发展,并影响乳腺癌激素治疗敏感性和预后等;而ER变异体或异构型的存在使乳腺癌生物学特性复杂多变,为乳腺癌生物学特性研究增添新的内容.
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蛋白质组学技术在儿童疾病研究中的应用
蛋白质组是指在细胞、器官或组织中表达的全部蛋白,包括所有的亚型及翻译后的变异体.蛋白质组学是研究蛋白质组的动态过程,具有时间和部位双重特性.差异显示性蛋白质组学或比较蛋白质组学是目前临床相关研究有效的手段之一,即比较两种状态下(如正常人群和患病人群、年轻人和老年人、治疗前和治疗后等)蛋白表达及丰度上的不同[1].
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人乳头瘤病毒变异株与宫颈疾病
人乳头瘤病毒(HPV)感染是发生宫颈癌的必要条件.根据病毒基因组核苷酸序列,在亚型的基础上可以进一步将HPV分为不同的变异株.HPV变异株的分布与地理位置关系密切.某些特定的HPV变异株感染可能增加发生宫颈癌的风险,其可能的机制是免疫逃逸、改变病毒癌基因的表达等.
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基质金属蛋白酶和细胞黏附因子与头颈部鳞癌转移的相关性研究
头颈部鳞状细胞癌(简称鳞癌)是人类10大常见的肿瘤之一,虽然肿瘤的诊断和治疗水平有很大的提高,但是肿瘤的转移和浸润仍是目前临床治疗的大障碍.本研究通过显示基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、-9及其组织抑制剂(tissue-inhibitor of matrix metalloproteinase,TIMP)-1,细胞黏附因子44变异体6(cell adhesion molecule 44 variant6,CD44v6)在头颈部鳞状细胞癌的表达,试图了解肿瘤转移和浸润的分子学机理.
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口腔颌面部恶性肿瘤CD44v6的表达及临床意义
细胞表面粘附分子CD44变异体CD44V的异常表达与某些恶性肿瘤细胞浸润、转移密切相关.我们对不同类型和临床期别的口腔颌面部恶性肿瘤细胞CD44v6表达进行了定量测定.
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替奈普酶(TNK-tPA)
溶栓是急性心肌梗死治疗的重要里程碑.然而目前溶栓治疗再通率低,90分钟TIMI3级血流再通率仅为50~60%,再通血管闭塞率高达5~15%,且出现严重出血并发症,颅内出血发生率约1%.而新型溶栓剂开发的目的是,再灌注率高且迅速,颅内和全身出血发生率低,再通血管闭塞率低及无抗原性.新型溶栓剂-替奈普酶(TNK-tPA,Tenecteplase,Metalyse)是t-PA的多点变异体,是FDA批准生产上市的第六个新型溶栓剂.
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SARS常用药物的不良反应和相互作用
严重急性呼吸系统综合症(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS)指近期爆发的一种呼吸系统传染病,它首先在我国广东地区发生流行,目前已在20多个国家和地区流行.WHO也已确定其病原体为冠状病毒变异体,命名为"SARS病毒".SARS冠状病毒的全基因组序列的测定已经完成,但SARS的疫苗的研制仍需一段时间.
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重视SARS治疗中的合理用药
2002年11月份,全球发生了首例严重急性呼吸综合症(Severe Acute Respiratory SyndromeSARS),这是一种由新发现的变异冠状病毒引起的以呼吸道病变为主要表现的急性传染病.WHO已确定其病原体为冠状病毒变异体,可能为动物来源.本病的主要临床表现为高热(体温多高于38℃)、干咳、白细胞正常或偏低,大部分感染者表现出急性呼吸困难综合症(ARDS,Acute Respira-tory Distress Syndrome)和急性肺损伤(ALI,AcuteLung Injury),患者通常都需要气管插管或者呼吸机维持.目前尚未发现治疗SARS的特效药物,临床一般采用对症支持疗法,缓解症状,改善预后.本文将对治疗SARS的合理用药做一简要的小结,希望对临床用药有所帮助.