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雌激素受体α在六氟双酚A诱导细胞外调节蛋白激酶激活中的作用研究
目的 研究六氟双酚A (bisphenol AF,BPAF)诱导T47D乳腺癌细胞中细胞外调节蛋白激酶(extraeellular regulated protein kinases,ERK)激活的分子机制,探讨雌激素受体α(estrogen receptor α,ERα)在BPAF诱导ERK激活过程中的作用.方法 通过蛋白免疫印迹实验(Western Blot)检测ERK磷酸化水平,研究BPAF对ERK磷酸化的诱导作用.运用表达ERα shRNA的慢病毒感染细胞,下调表达ERα,研究ERα在BPAF激活ERK过程中的作用.结果 Western Blot结果显示,BPAF在浓度为50 nmol/L时即可诱导ERK磷酸化水平显著升高(P＜0.05),并且随着剂量的升高呈现出剂量-效应关系.当BPAF浓度达到1μmol/L时ERK磷酸化水平达到高(P＜0.05).BPAF诱导ERK激活时间效应实验中,BPAF处理细胞5～60 min时,ERK磷酸化水平均显著升高(P＜0.05),在BPAF处理细胞15 min时,ERK磷酸化水平达到高.在运用表达ERαshRNA的慢病毒感染细胞后,ERα的表达水平显著降低(P＜0.05).与正常细胞相比,在下调表达ERα的细胞中,BPAF对ERK磷酸化的诱导作用显著降低(P＜0.05).结论 BPAF能够诱导ERK磷酸化,并且呈现剂量-效应关系.ERα在BPAF诱导的ERK激活过程中起到重要作用.
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细胞外调节蛋白激酶通路活化参与邻苯二甲酸二丁酯诱导昆明小鼠睾丸损伤
目的 探究细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)通路活化参与邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)诱导昆明(KM)小鼠睾丸损伤的作用机制.方法 性成熟雄性KM小鼠56只,随机分为8组:对照组、50mg/(kg·d) DBP组、50 mg/(kg·d)维生素E(vitmin E,VE)组、2 mg/(kg·d)尼莫地平(nimodipine,Ni)组、DBP+VE组、DBP+Ni组、Ni+VE组、DBP+Ni+VE组,处理28 d后测定小鼠体重、睾丸重量、脏器系数及精子密度,观察睾丸的组织病理学结果,DCFH-DA荧光定量法检测小鼠睾丸中的活性氧(reactive oxygen species,ROS)、硫代巴比妥酸(TBA)比色法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测钙调蛋白(calmodulin,CaM)含量及磷酸化ERK(p-ERK)水平.结果 与对照组比较,50 mg/(kg·d) DBP组小鼠体重、睾丸重量以及睾丸脏器系数下降为(36.48±0.99)g、(0.25±0.01)g、(0.54±0.09)％(P＜0.05),精子密度下降为(11.70±0.23)×106/mL(P＜0.05),睾丸组织损伤程度增加,ROS荧光强度、MDA含量增加为(1698.18±77.58)、(1.65 ±0.13) μmol/g prot(P ＜0.05),CaM含量下降为(45.61±2.69) μg/mL(P ＜0.05),p-ERK水平增加为(1150.43±48.79) pg/mL(P＜0.05);加入抗氧化剂VE和钙离子通道拮抗剂Ni处理后,与50 mg/(kg·d)DBP组比较,DBP+Ni+VE组小鼠体重、睾丸脏器系数增加为(40.69±0.75)g、(0.69±0.03)％(P＜0.05),精子密度增加为(13.50±0.16)×106/mL(P ＜0.05),睾丸组织损伤程度缓解,ROS荧光强度、MDA含量降低为(1080.60±98.64)、(1.06±0.13) μmoL/g prot(P＜0.05),CaM含量增加为(54.76±1.74) μg/mL(P＜0.05),p-ERK水平下降为(904.55±64.73) pg/mL(P＜0.05).结论 VE作为抗氧化剂,Ni作为钙离子通道拮抗剂,均可不同程度地降低DBP对小鼠睾丸组织的损伤,推测DBP可能经氧化应激与Ca2+信号激活ERK1/2通路,从而导致小鼠睾丸组织的损伤.
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人参皂苷20(s)-Rg3对llc-pk1细胞中顺铂所致肾毒性的保护作用
目的:探讨人参皂苷20(s)-Rg3对llc-pk1细胞中顺铂所致肾毒性的保护作用.方法:通过基于细胞的肾脏保护试验,研究了发酵黑参(FBG)及其活性成分人参皂苷20(S)-Rg3对猪肾(LLC-PK1)细胞中顺铂(化疗药物)诱导的损伤的保护作用.结果:由顺铂诱导的细胞活力降低,再使用FBG提取物和人参皂苷20(S)-Rg3依赖剂量后明显恢复.用FBG提取物或人参皂苷20(S)-Rg3处理后会降低顺铂诱导升高与磷酸化c-Jun N-末端激酶(JNK),p53和裂解的半胱天冬酶-3升高的蛋白.通过用FBG和人参皂苷20(S)-Rg3的共同处理,由于顺铂的诱导导致凋亡LLC-PK1细胞升高的百分比显著降低.结论:人参皂苷20(s)-Rg3可改善LLC-PK1的细胞毒性,人参皂苷20(S)-RG3可能是通过阻断JNK-P53-caspase-3信号级联反应来介导这种作用的重要组成部分.
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手针干预对慢性温和不可预知应激模型大鼠前额叶皮层细胞外调节蛋白激酶1/2和脑源性神经营养因子表达的影响
目的:观察在阻断剂PD 98059特异性阻断下,针刺对慢性温和不可预知应激(CUMS)大鼠前额叶细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、磷酸化ERK 1/2(p-ERK 1/2)和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达水平的影响,探讨针刺抗抑郁的机制.方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、氟西汀组、模型+DMSO组、模型+ERK通路阻断剂(简称阻断剂)组、针刺+阻断剂组、氟西汀+阻断剂组,每组8只.采用慢性温和不可预知应激方法造模21 d.针刺干预选取"百会""印堂",于每日造模前30 min进行,每次10 min,共21 d.氟西汀组与氟西汀+阻断剂组于造模前30 min给予氟西汀灌胃.模型+DMSO组于造模前1 h给予DMSO侧脑室注射,模型+阻断剂组、针刺+阻断剂组、氟西汀+阻断剂组于造模前1 h予侧脑室注射阻断剂.通过糖水消耗实验对大鼠进行行为学评价,蛋白免疫印迹法检测大鼠前额叶ERK 1/2、p-ERK 1/2和BDN F的蛋白表达水平.结果:与空白组比较,模型组大鼠糖水消耗量及前额叶p-ERK 1/2、BDN F蛋白表达水平均明显下降(P<0.01).与模型组比较,针刺组、氟西汀组糖水消耗量、p-ERK 1/2蛋白表达水平均明显上调(P<0.01),BDNF蛋白表达水平上调(P<0.05,P<0.01),模型+阻断剂组糖水消耗量减少(P<0.05).与针刺组比较,针刺+阻断剂组糖水消耗量、p-ERK 1/2蛋白表达水平均明显下调(P<0.01).各组大鼠ERK 1/2蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05).结论:针刺可能是通过上调前额叶ERK 1/2的磷酸化水平,增加BDNF蛋白表达,改善CUMS模型大鼠抑郁样行为,从而发挥抗抑郁效应.
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柴胡疏肝散对围绝经期综合征肝郁证大鼠模型海马ERK1/2的影响
目的:研究柴胡疏肝散对围绝经期综合征(PMS)肝郁证大鼠行为学的影响及对海马细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2) mRNA表达水平的作用机制.方法:选择13月龄雌性大鼠,采用慢性束缚法制备围绝经期综合征肝郁证模型,以3月龄成年大鼠为正常对照组,经过3周的柴胡疏肝散干预后,对大鼠进行Open-field test行为学评分;采用定量PCR法检测大鼠海马中ERK1/2的表达变化.结果:PMS肝郁证治疗组大鼠Open-field水平运动得分、垂直运动得分均高于模型组(P＜0.05);ERK1组间比较无统计学差异,治疗组ERK2表达高于模型组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:柴胡疏肝散能够改善PMS肝郁证大鼠行为,其作用的部分机制可能与提高海马中ERK2的表达相关.
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滑膜炎颗粒对Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型改善作用的机制研究
目的:探讨滑膜炎颗粒对Ⅱ型胶原诱导的关节炎(CIA)模型改善作用机制.方法:牛Ⅱ型胶原乳剂大鼠尾根部皮下注射制备CIA模型,造模成功后按随机数字表法分为对照组(Ⅰ)、模型组(Ⅱ)、不完全弗氏佐剂组(Ⅲ)、雷公藤多苷片组(Ⅳ)、醋酸泼尼松龙组(Ⅴ)、滑膜炎颗粒大剂量组(Ⅵ)、中剂量组(Ⅶ)、小剂量组(Ⅷ),每组各10～11只大鼠.免疫组化方法观察大鼠左膝关节滑膜组织IL-1、TNF-α、Erk、Jnk、Ras、Raf的表达,图像分析软件计算阳性面积比.结果:各造模组大鼠膝关节滑膜组织IL-1、Erk、Jnk、Ras、Raf表达量均较对照组增高;各给药组Erk表达量均较模型组降低,其中Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组Erk表达量与模型组比较差异有统计学意义.结论:IL-1、Erk、Jnk、Ras表达升高,参与CIA模型大鼠滑膜组织病理损伤过程;滑膜炎颗粒改善关节损伤症状可能与降低Erk的表达相关,而与IL-1、TNF、Jnk、Ras、Raf不相关.
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不同灸量隔姜灸对脾虚证大鼠胃组织丝裂原细胞外激酶和细胞外调节蛋白激酶表达的影响
目的 观察不同灸量隔姜灸对脾虚证大鼠胃组织丝裂原细胞外激酶(MEK)1/2和细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2表达的影响,探讨隔姜灸治疗脾虚证的可能作用机制及量效特征.方法 将75只SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、隔姜灸3壮组、隔姜灸6壮组、隔姜灸9壮组,每组15只.200%大黄浓缩液4 ℃灌胃制作脾虚证大鼠模型.造模成功后,隔姜灸组选取"足三里""中脘"予不同灸量治疗,连续8 d.HE染色镜下观察大鼠胃组织病理学改变,免疫组化检测大鼠胃组织MEK1/2及ERK1/2的蛋白表达.结果 与空白对照组比较,模型组大鼠胃黏膜损伤明显,可见较大的破损、脱落;与模型组比较,隔姜灸3壮组大鼠胃黏膜表面有部分脱落、破损情况改善,隔姜灸6壮组和隔姜灸9壮组大鼠胃黏膜表面较完整、脱落及破损明显改善.与空白对照组比较,模型组胃组织MEK1/2及ERK1/2蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,隔姜灸各组胃组织MEK1/2及ERK1/2蛋白明显表达升高(P<0.01);与隔姜灸3壮组比较,隔姜灸6壮组和隔姜灸9壮组胃组织MEK1/2及ERK1/2蛋白表达明显升高(P<0.01),但二者作用效果相当,差异无统计学意义(P>0.05).结论 隔姜灸通过提高胃组织MEK1/2及ERK1/2的蛋白表达,激活MEK/ERK信号转导通路,进而促进脾虚证大鼠胃黏膜的修复.
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冠脉通片对脑缺血再灌注大鼠TLR2通路ERK与p38蛋白表达的影响
目的 探讨脑缺血再灌注后炎症级联反应中Toll样受体2(TLR2)通路的作用机理和冠脉通片对脑组织损伤保护作用的分子机制.方法 采用栓线法阻断/放开大脑中动脉法制备脑缺血再灌注损伤模型.灌胃给药,分为冠脉通片高剂量组(1 200 mg/kg)、中剂量组(600 mg/kg)和低剂量组(300 mg/kg),阳性对照药用达纳康(20 mg/kg).各组取右侧大脑组织,10％中性甲醛固定,免疫荧光染色法检测TLR2的表达;另取右侧大脑组织超声破碎提取总蛋白,用Western blot法检测细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(phospho-extracellular regulated protein kinases,p-ERK)、p38丝裂原活化蛋白激酶[p38-mitogen activated protein kinases,p38-MAPKs(p38)]、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶[phospho-p38-mitogen activated protein kinases,p-p38-MAPKs (p-p38)]的表达;腹主动脉取血,用ELISA法检测白细胞介素-6 (interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-1 β(interleukin-1β,IL-1β)在脑组织和血清中的含量.结果 与假手术组比较,模型组TLR2的表达增高,ERK、p-ERK、p38、p-p38蛋白表达上调(P ＜0.05,P＜0.01),脑组织和血清中IL-6和IL-1β的含量均增加(P＜0.01);冠脉通片中、高剂量组均下调了TLR2、ERK、p-ERK、p38、p-p38的表达(P ＜0.05,P＜0.01);降低了脑组织和血清中IL-6和IL-1β的含量(P ＜0.05,P＜0.01).结论 TLR2通路参与了脑缺血再灌注损伤,冠脉通片通过下调TLR2通路ERK、p-ERK、p38、p-p38蛋白及细胞因子IL-1β和IL-6含量实现了对神经元的保护作用.
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养血活血解毒方及其拆方药物血清对佛波酯诱导的血管内皮细胞ERK/NF-κB通路的影响
目的 探讨养血活血解毒方治疗银屑病的可能作用机制.方法 将养血活血解毒方拆分为养血活血类药物和解毒类药物.80只Wistar大鼠随机分为空白组、全方组、养血活血方组、解毒方组,每组20只.全方组、养血活血方组、解毒方组分别给予相应药物10.18、6.17、4.01g/(kg·d)剂量灌胃,空白组予4 ml的蒸馏水灌胃,连续4天,制备含药血清.人真皮微血管内皮细胞(HDMEC)分为空白组、模型组、全方组、养血活血组、解毒组.除空白组外,其余各组采用佛波酯诱导细胞活化.同时加入相应药物的10％含药血清作用24h.检测各组内皮细胞增殖情况、迁移情况、管腔形成情况,以及血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)、细胞外调节蛋白激酶1(ERK1)、细胞外调节蛋白激酶2 (ERK2) mRNA表达,检测VEGF/VEGFR通路及细胞外调节蛋白激酶/核因子κB (ERK/NF-κB)通路蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组细胞增殖,迁移细胞数量,管腔形成数量,VEGF、VEGFR、ERK2 mRNA及VEGF/VEGFR通路、EKR/NF-κB通路相关蛋白表达升高(P＜0.01);与模型组比较,全方组和解毒组细胞增殖,迁移细胞数量,VEGF、VEGFR mRNA表达和p-ERK1、p-EKR2、p-NF-κB p65蛋白表达水平均降低,全方组VEGF、p-VEGFR蛋白表达降低,且全方组细胞增殖、ERK2mRNA表达低于解毒组(P＜0.05或P＜0.01). 结论 养血活血解毒方可通过干预ERK/NF-κB通路,调控促血管新生因子VEGF及其受体的表达,从而对银屑病血管新生的病理环节发挥治疗作用,且全方药效佳,其养血活血组分未对内皮细胞增生环节有影响.
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细胞外调节蛋白激酶信号通路参与机械牵张诱导肺泡上皮细胞高迁移率族蛋白B1的表达调控
目的 探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在机械牵张诱导肺泡上皮细胞(A549)表达高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的作用. 方法 肺泡上皮细胞A549分为A、B、C 3组,A组为对照组;B组A549细胞施加14%牵张应变,牵张时间为4 h;C组细胞的牵张模式与B组相同,只是于施加牵张前用ERK的特异性抑制剂PD98059预处理A549细胞2h.分别用免疫细胞化学染色和RT-PCR检测细胞HMGB1蛋白和mRNA的表达,用Western blotting检测ERK激酶的活性. 结果 A549细胞施加14 %牵张应变后,HMGB1蛋白和mRNA表达明显增加,ERK激酶活性明显增高(P＜0.05);该诱导激活作用可被PD98059阻断. 结论 机械牵张通过ERK信号通路,调节A549细胞的HMGB1基因和蛋白表达
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神经调节素1β对慢性氧乐果中毒大鼠学习记忆障碍的治疗作用
目的 观察神经调节素1β(NRG1β)对慢性氧乐果中毒大鼠细胞外调节蛋白激酶(ERK) 1/2磷酸化(p-ERK1/2)水平的影响,探索其改善慢性氧乐果中毒认知障碍的作用机制.方法 应用Y型电迷宫筛选出有学习记忆能力的大鼠,给予氧乐果5mg/(kg·d)皮下注射4周建立慢性氧乐果中毒认知障碍模型,模型制作成功后治疗组大鼠经侧脑室注射给予NRG1β干预治疗.Y型电迷宫检测大鼠的学习、记忆能力;HE染色观察海马组织的形态学变化;透射电子显微镜观察海马组织超微结构;免疫组织化学和免疫蛋白印迹法检测p-ERK1/2在海马组织内的分布和表达水平.结果 Y型电迷宫结果显示,染毒大鼠学习记忆能力较对照组明显降低,经NRG1β干预治疗后较模型组明显提高;模型组大鼠海马组织损伤明显,ERK1/2磷酸化水平明显下降;NRG1β治疗后海马组织损伤较模型组轻微,ERK1/2磷酸化水平升高.结论 NRG1β可以上调慢性氧乐果中毒大鼠海马组织内ERK1/2的磷酸化(p-ERK1/2)水平,对慢性氧乐果中毒认知障碍有一定的改善作用.
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藏红花素对人脐静脉内皮细胞增殖及细胞外调节蛋白激酶信号通路的影响
目的 观察藏红花素(crocin)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外增殖、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2表达及活性的影响.方法 用藏红花素及MAPK/ERK激酶(MEK)抑制剂PD98059分别处理HUVECs,EdU细胞增殖法检测细胞体外增殖活力,Western blotting法检测crocin对磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)和总ERK1/2表达的影响,激光扫描共焦显微镜检测细胞内Ca2浓度.结果 在1 μmol/L和10 μmol/L浓度水平,藏红花素可明显促进细胞的增殖能力,提高磷酸化ERK1/2和总ERK1/2蛋白的表达水平,并增加细胞内Ca2浓度;给予MEK抑制剂PD98059后,细胞的增殖能力下降,磷酸化ERK1/2和总ERK1/2的表达减弱,细胞内Ca2浓度降低.结论 藏红花素通过活化ERK1/2信号途径,提高细胞内Ca2浓度,促进入脐静脉内皮细胞的体外增殖能力.
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细胞外调节蛋白激酶与端粒酶对肝癌和白血病细胞系凋亡的调控作用
为了观察化疗药物三尖杉酯碱(HRT)、长春新碱(VCR)和依托泊苷(VP-16)抑制肝癌细胞系SMMC7721和白血病细胞系K562细胞增殖、促进细胞凋亡过程中端粒酶活性及细胞外调节蛋白激醇(ERK)磷酸化蛋白表达水平的变化,应用MTT、流式细胞术、端粒重复序列扩增法(TRAP)、生物发光分析及Western印迹等方法进行了检测和分析.研究结果发现,一定浓度的化疗药物作用24小时后,可以抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡;在同样作用条件下,端粒酶活性和磷酸化ERK1/2的表达也受到一定程度的抑制,其中以HRT的作用明显.结论:HRT,VCR和VP-16可能是通过抑制Ras/Raf/MEK/ERK1/2信号传导通路、降低ERK活性、减少ERK1/2靶基因的转录活化、间接下调端粒酶活性这一共同的作用机制而发挥作用的;细胞凋亡是端粒持续缺失的的结果.
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抑制ERK增强白血病和卵巢癌耐药细胞系化疗敏感性
为了研究细胞外调节蛋白激酶(extracelluar regulated protein kinases,ERK)和端粒酶在白血病和卵巢癌细胞耐药中的作用,应用流式细胞术检测细胞凋亡率,应用端粒重复序列扩增法(TRAP)和生物发光分析法去除检测端粒酶活性,应用Western blot法检测磷酸化ERK1/2蛋白(ERK1和ERK2)表达水平.结果表明:ERK激酶1(MEKi)特异性抑制剂PD98059能增强HL-60/E6细胞对三尖杉酯碱(HRT)的敏感性,PD98059也能增强COC1/DDP细胞对顺铂(DDP)的敏感性.PD98059与化疗药物HRT和DDP均可以降低细胞内磷酸化ERK表达,抑制端粒酶活性,但PD98059与化疗药物的联合作用明显强于其各自的单独作用.结论:通过阻抑ERK通路,降低磷酸化ERK1/2蛋白表达水平,进而下调端粒酶活性,可以达到增强白血病和卵巢癌耐药细胞对HRT或DDP敏感性的目的.
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白血病和卵巢癌亲代及耐药细胞系细胞外调节蛋白激酶与端粒酶活性的变化
本研究观察白血病和卵巢癌亲代及耐药细胞系中端粒酶活性及细胞外调节蛋白激酶(extracelluar regulated protein kinases ERK)磷酸化蛋白表达水平的变化,探讨端粒酶与ERK在白血病及卵巢癌耐药中的作用.采用MTT法评价白血病和卵巢癌亲代和耐药细胞系对HRT或DDP的敏感性,用流式细胞术分析这两种细胞系间细胞周期分布的差别,用端粒酶重复扩增技术(TRAP)、生物发光分析法定量和定性检测端粒酶活性及用Westernblot检测法检测磷酸化ERK1和ERK2蛋白的表达水平.结果表明:白血病和卵巢癌耐药细胞系处于G0/G1期的细胞比例增加,端粒酶活性和磷酸化ERK1/2蛋白表达水平耐药细胞系较亲代细胞系高.结论:耐药细胞系G0/G1期细胞比例增加可能是细胞产生耐药的一种标志.白血病和卵巢癌细胞系耐药的产生可能与端粒酶活性和磷酸化ERK1/2蛋白表达水平的增高有关.
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广藿香油治疗皮肤光老化大鼠的效果研究及对p38 MAPK/ERK通路蛋白的调控作用分析
目的：对广藿香油治疗皮肤光老化大鼠的效果及对p38MAPK通路蛋白的调控作用进行分析，为临床治疗提供参考。方法48只清洁级SD大鼠随机分为6组：对照组、模型组、PD98059组和广藿香油低、中、高剂量治疗组，每组8只。对照组大鼠给予正常光照射，其余各组采用长波段紫外线+中波紫外线（ UVA+VUB）光源照射制备大鼠皮肤光老化模型。PD98059组和广藿香油组大鼠分别给予对应药物治疗，对照组给予生理盐水灌胃。分析各组大鼠血清中氧化还原酶、细胞凋亡蛋白及p38MAPK/ERK通路蛋白的表达。结果对照组皮肤无明显异常。模型组大鼠皮毛光泽度下降，皮肤颜色变深，且表皮干燥、粗糙、增厚、纹理增宽加深，弹性丧失；模型组大鼠血清中MDA、p38MAPK、Ras、Raf、MEK、ERK1/2、Bax、Caspase9及C-Fos和C-Jun水平明显升高而Bcl2、SOD、GSHPX和CAT蛋白水平明显降低（ P﹤0.01），而广藿香油治疗后上述蛋白异常得到明显的恢复，且与治疗前比较差异有统计学意义（ P ﹤0.01）；同时，广藿香油治疗具有剂量依从性，低剂量组、中剂量组和高剂量组之前差异有统计学意义（ P ﹤0.01）。结论藿香油治疗皮肤光老化大鼠的效果与其调控p38MAPK/ERK通路相关蛋白及Bax、Bcl2、C-Fos和C-Jun表达有关。
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细胞外调节蛋白激酶信号通路对蛛网膜下腔出血大鼠神经元自噬及早期脑损伤的影响
目的：探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤及海马区神经细胞自噬中的作用。方法成年雄性Sprague-Dawley大鼠48只，随机数字表法分为假手术组(Sham组)、SAH组、SAH+二甲基亚砜(DMSO)组和SAH+U0126组，每组各12只。采用血管内穿刺法制作SAH模型。造模前30 min，SAH+U0126组经尾静脉注射U01260.05 mg/kg，Sham组和SAH组注射等体积生理盐水，SAH+DMSO组注射等体积DMSO，24 h后处死。干湿重法测量脑组织水含量，HE染色观察海马CA1区神经细胞形态结构，免疫组化及Western blotting检测海马区磷酸化ERK(p-ERK)及Beclin-1和LC3-Ⅱ表达水平。结果与Sham组比较，SAH组脑组织含水量增加(P<0.05)，大鼠海马CA1区神经元数量明显减少(P<0.05)，p-ERK及Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达升高(P<0.05)。与SAH组相比较，SAH+U0126组脑组织含水量升高(P<0.05)，海马CA1区神经元数量减少(P<0.05)， p-ERK及Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达降低(P<0.05)；SAH+DMSO组各项无显著性差异(P>0.05)。结论 ERK信号通路的激活可能通过对自噬的调控减轻SAH后的早期脑损伤。
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石杉碱甲对电休克模型大鼠海马磷酸化细胞外调节蛋白激酶及活性调节的细胞骨架联合基因活性的影响
目的 观察石杉碱甲对电休克模型大鼠海马磷酸化细胞外调节蛋白激酶(P-ERK)、活性调节的细胞骨架联合基因(ARC)活性的影响.方法 大鼠随机分为假电休克对照组和电休克组,再随机分为生理盐水对照组(CS组、ES组)和石杉碱甲组(CH组、EH组).第1～17天行生理盐水或石杉碱甲灌胃;第8～l7天给予假电痉挛刺激或电痉挛刺激;第18天行水迷宫定位航行实验;然后各组大鼠随机取6只处死取海马用Western blot法检测P-ERK蛋白、ARC活性.结果 CS组与CH组的潜伏期无显著性差异(P＞0.05).ES组的潜伏期显著长于CS组(P＜0.01).EH组潜伏期与CH组无显著性差异(P＞0.05),ES组潜伏期长于EH组(P＜0.05).CS组与CH组的P-ERK1/2、ARC蛋白表达水平达水平无显著性差异(P＞0.05).ES组的P-ERK1/2、ARC蛋白表达水平显著低于CS组(P＜0.01).EH组P-ERK1/2、ARC蛋白表达水平与CH组无显著性差异(P＞0.05);ES组P-ERK1/2、ARC蛋白表达水平低于EH组,差异有显著性(P＜0.05).结论 石杉碱甲能减轻电休克模型大鼠记忆损害,其机制可能与海马P-ERK、ARC的活性增加有关.
关键词： 电休克 石杉碱甲 细胞外调节蛋白激酶 活性调节的细胞骨架联合基因 -
细胞外调节蛋白激酶通路对胃癌细胞化疗效果的影响
目的:观察细胞外调节蛋白激酶(extraeelluar regulated protein kinase,ERK)信号通路对胃癌细胞化疗效果的影响并探讨其机制.方法:足叶乙甙作用于胃癌SGC7901和BGC823细胞,采用MTT比色法检测细胞的生存率,采用流式细胞仪和Hoechst33258荧光染色检测细胞周期分布和凋亡,Western杂交法检测ERK1/2的磷酸化以及c-Myc和P53蛋白表达水平.同时采用PD98059抑制ERK信号通路后观察足叶乙甙对细胞增殖、凋亡、c-Myc和P53表达的影响.结果:足叶乙甙呈时间-剂量依赖性抑制SGC7901和BGC823细胞的生长并明显诱导细胞的凋亡,同时上调ERK1/2的活性(磷酸化水平),并增强c-Myc和P53的表达,与对照组比较,足叶乙甙组凋亡率明显增高(19.48%±1.57% vs 5.67%±0.81%.17.38%±1.49% vs4.97%±0.73%,均P<0.01),PD98059可明显增强足叶乙甙的细胞生长抑制作用并提高细胞的凋亡水平,与足叶乙甙组比较,足叶乙甙组+PD98059组凋亡率(34.35%±2.84%,32.11%±3.25%)明显增加(P<0.01);同时上调足叶乙甙诱导的P53表达,并抑制c-Myc表达的上升趋势.结论:足叶乙甙可活化胃癌细胞ERK信号通路而影响胃癌细胞的化疗效果,其机制可能是通过抑制P53并上调c-Myc的表达,从而抑制细胞的凋亡实现.
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晚期糖基化终产物对结肠癌干细胞增殖及凋亡的影响研究
目的 探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对结肠癌干细胞 AGEs受体(RAGE)表达及增殖和凋亡的影响.方法 以人SW480结肠癌干细胞为研究对象,不同浓度AGEs及50 μmol/L PD98059 、40 mmol/L二甲双胍(MET)干预结肠癌干细胞后,分别应用 RT-PCR和Western blot 检测24 h细胞RAGE mRNA和RAGE 、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达;CCK-8检测24 h细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡.结果 应用不同浓度(100 、200 、300 μg/ml) AGEs干预后,与Con组(未加 AGEs )比较,200 μg/ml AGEs 组 RAGE mRNA 和蛋白表达均增加,(p-ERK1/2 )/(ERK1/2)也升高(P＜0.05).PD98059干预后,RAGE蛋白表达及(p-ERK1/2)/(ERK1/2)均降低.与不同浓度(100 、200 、300 、500 μg/ml)BSA组比较,相应浓度(100 、200 、300 、500 μg/ml)AGEs组细胞吸光度(OD)升高(P＜ 0.05),细胞活力分别增加 11.6%、16.3%、13.8%、13.9%.200 μg/ml AGEs 组PD98059干预,细胞OD值下降(P＜0.05) .24 h后,200 μg/ml AGEs组细胞凋亡率与Con组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),MET组细胞凋亡率升高(P＜0.05);与MET 组比较,MET+ AGEs组凋亡率降低(P＜0.05);与MET+AGEs组比较,MET+AGEs +PD组凋亡率升高(P＜0.05).结论 AGEs可促进结肠癌干细胞增殖,抑制其凋亡,作用机制可能是通过作用于RAGE,上调其表达量,激活ERK1/2通路来实现.
