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晚期糖基化终产物对结肠癌干细胞增殖及凋亡的影响研究
目的 探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对结肠癌干细胞 AGEs受体(RAGE)表达及增殖和凋亡的影响.方法 以人SW480结肠癌干细胞为研究对象,不同浓度AGEs及50 μmol/L PD98059 、40 mmol/L二甲双胍(MET)干预结肠癌干细胞后,分别应用 RT-PCR和Western blot 检测24 h细胞RAGE mRNA和RAGE 、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达;CCK-8检测24 h细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡.结果 应用不同浓度(100 、200 、300 μg/ml) AGEs干预后,与Con组(未加 AGEs )比较,200 μg/ml AGEs 组 RAGE mRNA 和蛋白表达均增加,(p-ERK1/2 )/(ERK1/2)也升高(P＜0.05).PD98059干预后,RAGE蛋白表达及(p-ERK1/2)/(ERK1/2)均降低.与不同浓度(100 、200 、300 、500 μg/ml)BSA组比较,相应浓度(100 、200 、300 、500 μg/ml)AGEs组细胞吸光度(OD)升高(P＜ 0.05),细胞活力分别增加 11.6%、16.3%、13.8%、13.9%.200 μg/ml AGEs 组PD98059干预,细胞OD值下降(P＜0.05) .24 h后,200 μg/ml AGEs组细胞凋亡率与Con组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),MET组细胞凋亡率升高(P＜0.05);与MET 组比较,MET+ AGEs组凋亡率降低(P＜0.05);与MET+AGEs组比较,MET+AGEs +PD组凋亡率升高(P＜0.05).结论 AGEs可促进结肠癌干细胞增殖,抑制其凋亡,作用机制可能是通过作用于RAGE,上调其表达量,激活ERK1/2通路来实现.
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马齿苋醇提取物对结肠癌细胞及其干细胞体外增殖作用的机理研究
目的 探讨马齿苋醇提取物对结肠癌细胞及其干细胞体外增殖能力的影响及其作用机制.方法 对结肠癌干细胞进行无血清培养,CCK-8法测定不同浓度马齿苋醇提取物对结肠癌HT-29细胞及HT-29干细胞的生长抑制情况,流式细胞仪检测其对HT-29细胞及其干细胞的凋亡情况及对细胞周期的影响.RT-PCR法以及Western blot 分析马齿苋醇提取物对HT-29细胞及其干细胞Notch、Wnt双信号通路中Notch1、Notch2及β-catenin基因及蛋白表达的影响.结果 马齿苋醇提取物对HT-29细胞及HT-29干细胞增殖有抑制作用,其作用时间、剂量与细胞增殖抑制率呈正相关,且对HT-29细胞增殖的抑制作用及凋亡率的影响较HT-29干细胞显著(P<0.05).马齿苋醇提取物可下调HT-29细胞及其干细胞Notch1、β-catenin基因表达,并下调Notch1、Notch2及β-cate-nin蛋白表达(P<0.05).结论 马齿苋醇提取物可以通过下调Notch-1、Notch-2、β-catenin蛋白的表达发挥体外抑制结肠癌细胞及其干细胞增殖的作用.
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负载结肠癌干细胞热休克蛋白96的树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞对同源肿瘤干细胞的杀伤研究
目的 研究结肠癌干细胞来源的gp96冲击树突细胞(Dendritic cell,DC),与细胞因子诱导的杀伤细胞(Cy-tokine killer cell,CIK)共培养,探讨其对结肠癌干细胞的杀伤效果.方法 用无血清悬浮培养法从结肠癌细胞HT29中富集结肠癌干细胞,肿瘤干细胞可以通过其表面的特异性标记分子进行鉴定,结肠癌肿瘤通常选用人类白细胞分化抗原44(CD44)、人类白细胞分化抗原133(CD133)、乙醛脱氢酶-1(ALDH1)等分子.本研究选取CD133对HT29肿瘤细胞球进行肿瘤干细胞的鉴定.然后,将从结肠癌细胞HT29微球中提取的总蛋白通过硫酸铵分级盐析、ConA亲和层析、DEAE离子交换层析纯化出热休克蛋白96(gp96),所得蛋白经10%聚丙烯酰胺凝胶电泳(10%SDS-PAGE)和蛋白质印记(Western Blot)进行分子量及纯度的鉴定,并用二喹啉甲酸(BCA)法测其蛋白浓度.然后用gp96-肽复合物冲击DC,与CIK共培养,采用乳酸脱氢酶(LDH)法检测gp96冲击DC-CIK细胞对结肠癌干细胞(CSCs)的杀伤活性.结果 流式细胞术检测第5代左右HT29微球中CD133+阳性的细胞比例为(73.92±2.76)%,明显高于HT29细胞(30.45±4.50)%.每克(湿重)肿瘤细胞可纯化出30μg左右的gp96.负载结肠癌干细胞gp96的DC-CIK对结肠癌干细胞的杀伤率高于DC-CIK组的杀伤率,差异有统计学意义(P<0.05).结论 负载结肠癌干细胞gp96的DC-CIK可以更有效地杀伤结肠癌干细胞,临床应用的可能性尚需深入研究.
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结肠癌干细胞表面标志的研究和信号传导
背景:近年来研究表明,结肠癌干细胞参与肿瘤的复发和转移,为恶性肿瘤靶向治疗带来新的希望.目的:探讨结肠癌干细胞特异表面标志的分离和鉴定方法,以及与结肠癌干细胞研究紧密相关的信号通路.方法:以"结肠癌干细胞,肿瘤干细胞,细胞表面标志,信号传导"为中文关键词,以"colon cancer stem cell,cancer stem cell,cell surface sign,signal transduction"为英文关键词,采用计算机检索Medline和CNKI数据库2000-01/2011-06有关结肠癌干细胞表面标志和信号传导的相关文章,排除重复研究或Meta分析类文章,筛选纳入40篇文献进行评价.结果与结论:CD133+与CD44+可作结肠癌干细胞的表面标志.与结肠癌干细胞紧密相关的信号通路有Wnt和Notch等,Wnt信号通路在干细胞内环境稳定中起重要作用,Notch信号通路是干细胞信号网络的重要通路.通过研究结肠癌干细胞的表面标志,可以及早地检测出肿瘤的存在;掌握结肠癌干细胞的生物学特性和信号转导路径,可减少肿瘤的复发,为结肠癌的诊断和治疗降低难度.
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miR-1231对结肠癌干细胞增殖、凋亡和侵袭的影响
背景：前期研究发现miR-1231在结肠癌干细胞中表达明显下调，但是其具体的作用机制尚不明确。
目的：探讨miR-1231对结肠癌干细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。
方法：采用免疫磁珠分选技术从结肠癌细胞株SW1116中分选出结肠癌干细胞(CD133+CD44+)和双阴性细胞(CD133-CD44-)。qRT-PCR检测miR-1231在这2种细胞中的表达水平。将CD133+CD44+细胞通过脂质体转染miR-1231模拟物(miR-1231 mimics)或miRNA模拟物对照(miR-control)。采用MTT、流式细胞仪、Transwell小室实验检测miR-1231对CD133+CD44+细胞增殖、凋亡、侵袭的影响；免疫印迹法检测miR-1231对CD133+CD44+细胞中Ki67、Bax、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响。
结果与结论：①采用免疫磁珠分选技术得到CD133+CD44+和CD133-CD44-细胞；②miR-1231在CD133+CD44+细胞中的表达水平显著低于CD133-CD44-细胞；③miR-1231抑制CD133+CD44+细胞增殖和侵袭，促进其凋亡；④相对于转染miRNA模拟物对照组，miR-1231高表达的CD133+CD44+细胞具有较低的Ki67、Bcl-2，MMP-2和MMP-9蛋白表达和较高的Bax蛋白表达，进一步证实miR-1231抑制CD133+CD44+细胞增殖和侵袭，促进其凋亡。 -
结肠癌发生发展过程中结肠癌干细胞的作用
目的:在结肠癌这种疾病的发生、发展、浸润、转移过程中,结肠癌干细胞在各个阶段都有参与并扮演了重要的角色.本文梳理近十年来国内外发表的相关论文,总结证据以表明两者的相关性;以及对结肠癌干细胞的鉴定和其增殖分化的机制等方面,进行了一次系统回顾和对相关文献的汇总分析.
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结肠癌干细胞标志分子及其功能研究现状
结肠癌干细胞是一小部分存在于结肠癌中具有自我更新、无限增殖和多项分化潜能的肿瘤干细胞,它与结肠癌的复发、转移和治疗耐受有着密切的联系.通过结肠癌细胞表面表达的标志分子如CD133、CD44、CD29、ALDH1和Wnt等从结肠癌中分离得到少部分具有干细胞特性的结肠癌细胞即结肠癌干细胞,以这部分肿瘤干细胞作为肿瘤治疗靶点将为肿瘤治疗带来新的治疗方向.此文就标志分子在结肠癌干细胞筛选及生物学中的功能研究作一回顾,并探讨其作为肿瘤干细胞治疗靶点的可能性.
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表皮生长因子及其受体对结肠癌干细胞的增殖调控
背景:肿瘤干细胞是肿瘤组织中—小部分具有自我更新、多向分化以及高度增殖能力的肿瘤细胞.研究发现表皮生长因子(EGF)可促进肿瘤干细胞增殖.目的:探讨EGF及其受体(EGFR)在结肠癌干细胞增殖调控中的作用.方法:结肠癌细胞株HT29、HCT116培养于无血清培养基中,以EGF、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子(IGF)分别干预细胞.MTT法检测EGFR抑制剂吉非替尼对结肠癌细胞球细胞的增殖抑制作用,体外实验检测EGFR抑制剂吉非替尼、PD153035对细胞球形成的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡.体内实验检测结肠癌细胞球和细胞株的成瘤能力,real-time PCR检测两者干细胞标记LGR5、Musashi-1和分化标记CK20表达.结果:EGF组HCT116细胞形成的细胞球数量显著高于空白对照、bFGF、IGF组(P＜0.05).吉非替尼能抑制HCT116细胞球细胞增殖和细胞球形成,并诱导细胞凋亡,作用呈浓度依赖性.HCT116细胞球成瘤时间较细胞株显著缩短,移植瘤体积显著增大(P＜0.05).LGR5、Musashi-1在细胞球中的表达显著高于细胞株,而CK20在细胞株中的表达显著高于细胞球(P＜0.05).结论:EGF对结肠癌细胞株HCT116、HT29形成细胞球具有促进作用.EGFR抑制剂可抑制结肠癌细胞球增殖并诱导细胞凋亡,相关作用可能与调控LGR5、Musashi-1和CK20表达有关.
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一种结肠癌干细胞上皮-间质转化分层模型的建立和验证
背景与目的:肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSC)是肿瘤中具有干细胞特性的一类细胞,同时具有自我更新能力及多向分化潜能.CSC在肿瘤转移过程中起着重要作用.上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)与恶性肿瘤浸润、转移及与肿瘤患者预后紧密联系.本研究以CSC是否经EMT为标准,建立一种新型结肠癌干细胞EMT分层模型,以评价不同活性物质对不同分型的结肠癌干细胞表型的影响.并用当下研究成熟的抑癌基因miR-139-5p及其靶向抑制的转录因子4(transcription factor 4,TCF4)蛋白验证上述模型的可行性,为临床研究提供理论依据.方法:以CD44和细胞上皮黏附分子/上皮特异性抗原(epithelial cell adhesion molecule/epithelial specific antigen,EpCAM/ESA)为结肠癌干细胞标志物,采用流式细胞术分选皮下移植瘤中CD44+ESA+、CD44+ESA-细胞亚群和转移瘤中CD44+ESA+、CD44+ESA-细胞亚群,分别命名为Epi-S、Epi-P、pEMT-S和pEMT-P,亲本细胞株HCT116作为后续实验的阴性对照;验证分选后不同细胞亚群的多药耐药性、克隆形成能力以及干性转录因子SOX2、OCT4和EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、vimentin的表达情况;检测miR-139-5p过表达、TCF4敲低对Epi-P和pEMT-P以及TCF4过表达对Epi-S和pEMT-S CSC侵袭能力与EMT标志分子E-cadherin、N-cadherin和vimentin蛋白的影响.结果:相较于HCT116亲本细胞株,Epi-S、Epi-P、pEMT-S和pEMT-P共4种CSC分型均对奥沙利铂(oxaliplatin,LOHP)和氟尿嘧啶(fluorouracil,5-FU)产生了不同程度的抗性;干性相关转录因子OCT4和SOX2在4种CSC分型中表达均升高,与亲本细胞株相比,差异有统计学意义(P<0.05);上皮相关标志物E-cadherin、N-cadherin和vimentin在4种CSC分型中表达均升高,与亲本细胞株相比,差异有统计学意义(P<0.05);过表达miR-139-5p或敲低TCF4均能抑制Epi-P和pEMT-P结肠癌干细胞亚型的侵袭能力(P<0.01);在表型稳定未经历EMT的上皮亚系Epi-S中,过表达TCF4能够显著促进其侵袭能力(P<0.01);Epi-P和pEMT-P中过表达miR-139-5p和敲低TCF4,上皮标志物E-cadherin表达增加,间充质标志物N-cadherin和vimentin表达下降.结论:以CD44和ESA为结肠癌干细胞标志物分选出的4种分型具有不同表型可塑性,该模型可用来评价不同生物活性物质对结肠癌干细胞上皮-间质转化的影响.
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胃肠安及四藤方对人结肠癌细胞株干细胞CD133+的影响
目的 观察胃肠安和四藤方对结肠癌细胞株HCT-116、SW480、HT-29及其于细胞CD133+的抑制作用.方法 人结肠癌细胞株(HCT-116、SW480、HT-29)随机分为对照组和不同浓度胃肠安(500 mg/L和1 000mg/L)、四藤方(100 mg/L和200 mg/L)干预组,干预24 h后,CCK-8法测定细胞活力,倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞仪分析胃肠安和四藤方对HCT-116、SW480、HT-29中CD133+表达的影响.结果 CCK-8法检测结果显示,胃肠安及四藤方干预HCT-116、SW480、HT-29细胞后,细胞活力均下降且呈剂量依赖性;倒置显微镜观察发现:胃肠安及四藤方干预24 h,HCT-116、SW480、HT-29的细胞数量减少,细胞体积缩小,遮光性差,细胞悬浮、脱落而死亡.流式细胞术分析结果显示:对照组HCT-116、SW480、HT-29中CD133+细胞的比例分别为12.52％、10.98％、2.33％;胃肠安方1 000 mg/L干预24 h后,CD133+细胞比例分别下降为7.49％、5.36％、0.11％;四藤方组200 mg/L干预24 h后,CD133+细胞比例分别下降为7.83％、6.45％、0.18％.结论 不同结肠癌细胞株中CD133+细胞比例有差异.胃肠安及四藤方均具有抑制结肠癌细胞株HCT-116、SW480、HT-29增殖的作用;但在同样的干预时间内,较高浓度胃肠安(1 000 mg/L)及四藤方(200 mg/L)才具有抑制3种细胞株干细胞CD133+表达的作用.
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蟾毒灵白蛋白纳米粒对结肠癌干细胞端粒酶活性的影响
目的 观察蟾毒灵白蛋白纳米粒对SW480结肠癌干细胞增殖及端粒酶活性的影响.方法 流式细胞仪分选SW480结肠癌细胞CD133+/CD44+亚群(SW480结肠癌干细胞),以不同浓度(1、10、50、100 nmol/L)的蟾毒灵及蟾毒灵白蛋白纳米粒进行干预,MTT法观察细胞增殖,采用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定法(TRAP-ELISA)检测结肠癌干细胞端粒酶活性的变化.结果 与对照组比较,低浓度(1、10 nmol/L)蟾毒灵及蟾毒灵白蛋白纳米粒干预对SW480结肠癌干细胞的增殖及端粒酶活性均无明显影响(P＞0.05);与对照组和中、高浓度(50、100 nmol/L)蟾毒灵组比较,相应浓度的蟾毒灵白蛋白纳米粒组SW480结肠癌干细胞的增殖及端粒酶活性明显受到抑制(P＜0.05).结论 50 nmol/L和100 nmol/L的蟾毒灵白蛋白纳米粒能显著抑制结肠癌干细胞的增殖和端粒酶活性,且效果优于蟾毒灵.
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藤黄酸颗粒对结肠癌干细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨藤黄酸(GA)颗粒对结肠癌干细胞增殖和凋亡的影响.方法 通过体外培养结肠癌HCT116细胞,采用免疫磁珠标记分选技术从HCT116细胞中分选出ALDH1+/CD133+结肠癌干细胞;经不同浓度(0、0.5、1和2 mg/ml) GA颗粒处理结肠癌干细胞后,采用克隆形成实验观察细胞的克隆能力,CCK-8法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Western blotting及实时定量PCR(QPCR)检测干细胞中Sox2和Oct4蛋白及mRNA的表达.结果 免疫磁珠标记分选技术成功分选出符合要求的ALDH1+/CD133+结肠癌干细胞;克隆形成实验结果 显示,不同浓度GA颗粒处理后细胞克隆形成率显著降低,且呈剂量依赖性;CCK-8检测发现,GA颗粒能够呈剂量-时间依赖性地抑制结肠癌干细胞的增殖;流式细胞仪检测结果 表明,GA颗粒能够呈剂量依赖性地诱导结肠癌干细胞的凋亡;Western blotting及QPCR检测结果 显示,GA颗粒能够呈剂量依赖性地降低Oct4和Sox2蛋白及mRNA水平.结论 GA颗粒能够明显抑制结肠癌干细胞的克隆、增殖及Oct4和SoX2的表达并诱导细胞凋亡.
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片仔癀对人结肠癌细胞株干细胞的影响
目的 观察片仔癀(PZH)对结肠癌细胞株HT-29、SW620干细胞的抑制作用.方法 采用人结肠癌细胞株HT-29、SW620常规体外培养,随机设定对照组和不同浓度片仔癀组(0.25、0.5、1mg/mL),干预24h后,MTT法测定细胞活力;倒置显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪分析片仔癀对HT-29、SW620细胞株干细胞数量的影响.结果 MTT显示,不同浓度片仔癀干预HT-29、SW620细胞后,细胞活力均下降且具有剂量依赖性;倒置显微镜观察,PZH 1 mg干预24h后,HT-29及SW620细胞数量减少,细胞变小,折光性差,细胞悬浮、脱落而死亡;流式分析HT-29、SW620细胞株SP细胞的比例分别为10.87%、8.46%,片仔癀1 mg/mL干预24 h后,SP细胞比例分别下降为1.69%、1.18%.结论 片仔癀具有抑制HT-29、SW620结肠癌细胞增殖的作用,并且能够减少这2种细胞株干细胞的数量.
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盐霉素对结肠癌干细胞特性的抑制作用
目的 探讨盐霉素对结肠癌干细胞(cCSC)的作用.方法 通过无血清培养基(SFM)成球法筛选cCSC.检测盐霉素对cCSC的靶向性,并进一步研究盐霉素对cCSC的增殖能力、耐药性、克隆球形成能力、干细胞相关蛋白表达水平的作用.结果 通过SFM成球法成功筛选出了cCSC,建立了理想的cCSC模型,cCSC对盐霉素的敏感性是HCT116+/+细胞的3倍.经盐霉素处理后,cCSC倍增时间从(1.21±0.15)d延长到了(1.54±0.04)d;对氟尿嘧啶(5-FU)的IC50从(40.21±3.02) μmol/L降到了(20.28±2.15) μmol/L,对奥沙利铂的IC50从(14.23±1.08) μmol/L降到(7.64 ±0.53) μmol/L;克隆球形成率由从(0.42±0.01)％下降到了(0.08±0.01)％;干细胞相关蛋白ABCG2、SOX2和OCT4表达水平明显降低.结论 盐霉素对cCSC具有明显的靶向性,明显抑制了cCSC的增殖能力、耐药性、克隆球形成能力及干细胞相关蛋白的表达,为cCSC治疗提供了新的理论基础.
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干细胞培养基成球培养法筛选结肠癌干细胞的生物学特性
目的 探讨干细胞培养基成球培养法筛选结肠癌干细胞的相关蛋白表达及生物学特性.方法 用干细胞培养基成球培养法筛选结肠癌干细胞,Western blot检测干细胞相关蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期；同时检测干细胞增殖、黏附、耐药及侵袭能力,并摸索结肠癌干细胞佳冻存条件.结果 用干细胞培养基成球培养法成功培养出了结肠癌细胞球,检测发现干细胞相关蛋白表达增强,静止期细胞比例明显升高,细胞增殖速度慢,黏附性、耐药性、侵袭性均强于亲本细胞.结论 干细胞培养基成球培养法筛选的细胞球中富集了肿瘤干细胞,为结肠癌干细胞的研究提供了良好的细胞模型.
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沉默人高迁移率族蛋白A1抑制结肠癌干细胞自更新能力的作用
目的 研究高迁移率蛋白A1(HMGA1)在人结肠癌干细胞维持中的表达与功能.方法 利用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测HMGA1在结肠癌干细胞(CTSC)、普通结肠癌细胞株HCT116、HT29和对照结肠黏膜(NM)中的表达;利用小干扰RNA(siRNA)抑制HMGA1的表达,进行干细胞增殖、克隆形成能力分析,研究HMGA1在结肠癌干细胞自更新能力中的作用.结果 HMGA1 mRNA在NM组织中相对表达量分别为1.00±0.09,而在HCT1 16、HT29细胞中HMGA1 mRNA相对表达量为1.56 ±0.13、1.62±0.10,显著高于NM组(t=5.949,P=0.005;t =8.124,P=0.001).在CTSC中,HMGA1 mRNA表达量为2.37±0.15,明显高于NM组(t=12.330,P=0.001);HMGA1沉默的CTSC细胞增殖显著削弱(3.60±0.14比2.71±0.30,t=4.649,P=0.010).HMGA1沉默的CTSC细胞克隆的个数和直径分别为55 710±11 007(t=5.957,P=0.004)和(0.50±0.04) mm(t=3.499,P=0.025),均显著下降,差异具有统计学意义.结论 靶向HMGA1的siRNA可抑制结肠癌干细胞的增殖和克隆形成,提示HMGA1参与促进结肠癌干细胞的自更新能力.
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对结肠癌中CD133相关基因及通路的生物信息学筛选
目的:寻找与结肠癌干细胞表面标志物CD133表达密切相关的基因及其参与的生物过程.方法:通过生物信息学方法,利用GEO数据库中结肠癌基因芯片数据,结合R2平台,筛选出与CD133表达显著相关的基因,分析相关基因在不同性别、肿瘤原发部位及分期中的表达差异.同时,利用GO及KEGG工具对与CD133表达显著相关基因进行基因本体和KEGG通路分析.结果:130例结肠癌标本中126例检测出CD133表达,与CD133表达显著相关基因共598个(正相关504个,负相关94个),且正负相关性前7位基因的表达与患者性别、肿瘤原发部位及分期无明显关系(P＞0.05).对基因本体及KEGG通路分析后发现,598个相关基因参与O聚糖合成、鞘糖脂合成等多个肿瘤相关生物过程.结论:CD133在结肠癌中普遍表达,CD133表达相关的基因参与了多个肿瘤生物过程,为深入研究结肠癌干细胞分子标志物相关基因及其参与的生物过程提供了一定参考.
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人HCT116结肠癌细胞系中CD133+结肠癌干细胞分离及鉴定
目的 从人结肠癌细胞系(HCT116)中分离鉴定结肠癌干细胞,并观察其体外生物学特性.方法 利用RT-PCR、免疫荧光、流式细胞等技术检测HCT116细胞中CD133的表达情况;利用免疫磁珠分选技术分选CD133+细胞;采用无血清培养基培养分选后的CD133+细胞鉴定其体外增殖特性;采用含血清培养基诱导干细胞克隆球分化并采用免疫组化检测CK20表达情况鉴定其分化特性.结果 HCT116细胞系中存住CD133+细胞,免疫磁珠能有效的分选CD133+细胞,分选后的阳性含量为91.92%,分选后的阳性细胞具有典型干细胞的体外增殖、分化特性.结论 CD133+结肠癌干细胞在体外具有和普通干细胞类似的无限增殖、自我更新和分化能力,同时它们也表达ABCG2等耐药相火蛋白.
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结肠癌干细胞的研究进展与在临床治疗中的意义
结肠癌作为常见的恶性肿瘤之一，在全世界男性的发病率排名第3位，病死率第4位，女性的发病率排名第2位，病死率第3位［1］。在过去的30多年里，包括中国在内的许多国家或地区结肠癌发病率呈上升的趋势［2］。而针对结肠癌的治疗，仍然是以手术为主、放化疗等为辅的综合治疗方法，这样尽可能多地杀死肿瘤细胞，以减少肿瘤细胞数量来达到治疗效果。但是，结肠癌术后5年生存率低、复发转移率高及耐药率高。随着研究的深入，肿瘤干细胞（cancer stem cell ，CSC）假说的提出。在结肠癌中通过CD133、CD44、EpCAM 等细胞表面标志物成功分离到具有干细胞特征的一群细胞，结肠癌干细胞在结肠癌复发转移中的作用得到肯定。肿瘤干细胞是位于肿瘤组织中的一小部分细胞（0．1％～2．5％），这部分细胞具有引起肿瘤发生、维持肿瘤生长、保持肿瘤异质性、甚至具有转移与耐药的能力［3］。而在传统治疗中却忽略了这部分细胞，虽然其他大部分肿瘤细胞都被杀灭，但肿瘤仍然会面临着复发的可能。深入了解这些肿瘤干细胞的生物学特性、发展相应的鉴别方法以及特殊的治疗手段对肿瘤研究领域与癌症的临床治疗都有着极其重要的意义。
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TNF-α激活Wnt信号通路促进人结肠癌干细胞侵袭
目的 探讨炎症环境下Wnt信号通路对人结肠癌干细胞侵袭的影响.方法 以人结肠癌细胞系HT29细胞为材料,用流式细胞荧光分选技术(FACS)分选CD44+ CD133+的人结肠癌干细胞;流式细胞术及单细胞克隆形成实验对分选出的干细胞进行鉴定;肿瘤坏死因子α(TNF-α)处理CD44+ CD133+ HT29细胞建立炎症细胞模型,噻唑蓝(MTT)实验筛选TNF-α作用的适剂量及佳作用时间;Wnt信号通路抑制剂Dickkopf相关蛋白1(DKK1)作用于CD44+ CD133+ HT29炎症细胞,实验分为空白组、TNF-α处理组、加DKK1的TNF-α处理组.MTT实验检测各组细胞增殖情况,Western blot法检测Wnt信号通路中相关蛋白β联蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、c-Myc及上皮间质转化(EMT)相关蛋白上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达情况,TranswellTM侵袭实验检测各组细胞侵袭情况.结果 流式细胞分选术成功分选出结肠癌CD44+CD133+ HT29干细胞.MTT实验筛选出TNF-α作用的适剂量为10 ng/mL,佳作用时间为48h.与空白组相比,TNF-α处理组中CD44+ CD133+ HT29细胞的相对存活率增加,TranswellTM穿膜的细胞数增加,β-catenin、cyclin D1、c-Myc表达升高,E-cadherin表达降低、vimentin表达升高;与TNF-α处理组相比,加DKK1的TNF-α处理组CD44+ CD133+ HT29细胞的相对存活率降低,TranswellTM穿膜细胞数减少,β-catenin、cyclin D1、c-Myc表达降低,E-cadherin表达升高、vimentin表达降低.结论 TNF-α通过激活Wnt信号通路促进结肠癌干细胞的侵袭能力.
