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SOX2与上皮间质转化在结肠直肠癌细胞系SW620中的相关性分析
目的:通过基因沉默干细胞转录因子SOX2,研究其与结肠直肠癌细胞系SW620上皮间质转化相关因子表达的相关性.方法:设计SOX2 ShRNA病毒颗粒并转染至SW620中,RT-PCR和Western Blot检测细胞中SOX2、β-catenin、E-cadherin、vimentin的表达情况.结果:SOX2沉默细胞株中SOX2、β-catenin、Vimentin mRNA及蛋白表达减弱,E-cadherin mRNA及蛋白表达增强,差异显著(P<0.05).结论:沉默SW620结肠直肠癌细胞系SOX2基因的表达可以降低Wnt/β-catenin信号通路活性,减少EMT过程从而有效抑制肿瘤细胞体外侵袭及迁移能力.
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结直肠癌CD44+/ki-67-癌干细胞特征及其与临床病理关系
目的 观察CD44+/ki-67-结直肠癌干细胞的特摘要征及其与临床病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学染色、免疫组织化学双重染色和苏木精-伊红(HE) 染色,检测10 例正常肠黏膜,15 例腺瘤,59 例结直肠癌标本和人结肠癌细胞株SW620 中CD44 和ki-67 的表达,定位CD44+/ki-67-肿瘤细胞,观察、计数并与对应的HE 染色切片进行形态学比较,讨论CD44+/ki-67-癌干细胞与其临床病理特征的关系.结果 CD44+/ki-67-肿瘤细胞的数量占肿瘤细胞0.1%-25.0%,平均5.82%,这种细胞主要分布在腺体基底膜侧或者在共壁腺体的共壁侧,呈散在分布,核的形态较一致,呈圆形或卵圆形,染色质较深,胞浆较少,与正常肠黏膜隐窝底部干细胞形态较一致,与肿瘤浸润深度(χ2=1.851,P <0.05) 和是否有淋巴结转移相关(χ2= -4.113,P<0.01).结论 CD44+/ki-67-可以作为肿瘤干细胞的标志,这为肿瘤干细胞的分离、靶向治疗和个体化治疗提供了可靠的分子生物学指标,也是预测肿瘤转移和判断患者预后的可靠指标.
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miRNA-95-3p在人结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖、迁移能力的影响
目的 探讨miRNA-95-3p在结肠癌患者中的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖、迁移能力的影响.方法 收集10例结肠癌患者的结肠癌组织和对应的癌旁正常肠黏膜组织,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测不同组织中miRNA-95-3p的表达情况,CCK-8实验检测转染后SW620细胞的增殖能力,划痕实验检测转染后SW620细胞的体外迁移能力,蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后SW620细胞中p21蛋白的表达情况,双荧光素酶实验检测转染后SW620细胞的荧光素酶活性.结果 miRNA-95-3p在结肠癌组织中的相对表达量明显高于癌旁正常肠黏膜组织,差异有统计学意义(P﹤0.01);过表达组SW620细胞的增殖能力、划痕区域相对宽度均明显高于对照组(P﹤0.01);过表达组SW620细胞中p21蛋白的相对表达量低于对照组(P﹤0.05);4组SW620细胞的荧光素酶活性比较,差异有统计学意义(F=183.16,P﹤0.01).结论 miRNA-95-3p在结肠癌组织中的高表达与结肠癌的发生、发展有关.miRNA-95-3p通过抑制p21蛋白的表达,促进结肠癌细胞SW620的增殖和迁移,有望成为结肠癌分子治疗的新靶点.
关键词： 结肠癌 miRNA-95-3p 实时荧光定量聚合酶链反应 SW620 -
抑制Claudin-1表达对SW620细胞侵袭性和转移性的影响研究
目的：通过抑制SW620中Claundin-1的表达量来观察Claudin-1对SW620细胞侵袭性和转移性的影响。方法：构建稳定的低表达Claudin-1的SW620细胞，同时比较低表达的SW620细胞和转染空载体的SW620细胞对基质胶的穿透力以及在裸鼠身上的转移能力。结果：低表达Claudin-1抑制了 SW620细胞对基质胶的穿透力和肿瘤在裸鼠身上的转移能力。结论：抑制Claudin-1的表达可以在一定程度上抑制SW620的侵袭性和转移性。
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RNAi下调FAK基因对大肠癌细胞SW620侵袭及转移能力的影响
目的：观察应用RNAi技术下调局部粘着斑激酶(FAK)基因表达对SW620细胞侵袭及转移能力的影响。方法利用前期构建的针对FAK基因有效的短发夹RNA (shRNA )序列的慢病毒表达载体，包装慢病毒并感染人结肠癌细胞SW620。运用免疫印记(Western-blot)从蛋白水平检测FAK基因的表达， Transwell小室模型分别检测敲减FAK基因表达对SW620细胞的侵袭及转移能力的影响。结果用慢病毒敲减FAK后的大肠癌细胞，蛋白水平FAK表达明显下调， SW60细胞的侵袭及转移能力均受到明显抑制。结论下调FAK的表达水平，能明显抑制大肠癌SW620细胞的侵袭及转移能力。
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Western blotting检测survivin封闭载体转染大肠癌SW620细胞的实验研究
[目的]探讨KNA interferenece (RNAi)对survivin在大肠癌细胞SW620表达的影响及siRNA干扰后诱导survivin蛋白表达降低的机制.[方法]构建survivin特异性的RNA封闭性载体survivin,通过培养大肠癌细胞SW620,survivin封闭性载体转染SW620细胞;Hoechest染色大肠癌细胞,通过荧光显微镜观察细胞形态变化;Western blotting分析肿瘤细胞的蛋白表达情况.[结果]DNA测序证实表达质粒构建成功;免疫荧光显微镜可见细胞凋亡小体;Western blotting显示:大肠癌survivin的蛋白表达明显弱于对照组.[结论]Survivin与大肠癌的发生存在一定的关系,RNAi能够下调survivin的表达.
关键词： survivin 大肠癌 Western-blotting SW620 -
加味四君子汤诱导SW620细胞凋亡活性部位的筛选
目的:筛选加味四君子汤诱导结肠癌SW620细胞凋亡的有效部位.方法:比较加味四君子汤乙醇提取物和水提取物的诱导SW620细胞凋亡作用,然后将加味四君子汤醇提取物采用系统溶剂萃取法分成氯仿层、乙酸乙酯层、正丁醇层和水层,CCK-8法筛选出加味四君子汤诱导SW620细胞凋亡的有效部位,并对有效部位诱导SW620细胞凋亡的作用进行初步研究.结果:加味四君子汤醇提取物诱导SW620细胞凋亡的作用优于水提物;其氯仿层和正丁醇层均能诱导SW620细胞凋亡,IC50分别为135.15mg/L和85.65 mg/L;加味四君子汤正丁醇萃取物对SW620细胞诱导凋亡作用出现在细胞培养12 ～ 24h,病理形态学观察呈现相同结果.结论:氯仿层和正丁醇层是加味四君子汤诱导SW620细胞凋亡的活性部位,正丁醇层作用更佳.
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土槿皮乙酸B对结直肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响
结直肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一,发病率有上升趋势,现已位居恶性肿瘤的第四位[1].目前,结直肠癌的首选治疗方法为手术切除,辅助治疗方法包括5-氟尿嘧啶(5-FU)结合四氢叶酸、奥沙利铂等的化学治疗[2],单抗药物靶向治疗,基因治疗和中药治疗.
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MiR-192对结直肠癌细胞ZEB2表达及迁移和侵袭的影响
目的:探讨miR-192对结直肠癌SW480和SW620细胞ZEB2(zinc-finger E-box binding homeobox 2)表达及迁移和侵袭能力的影响.方法:将miR-192模拟物(miR-192 mimics)分别转染SW480和SW620细胞,应用实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染后SW480和SW620细胞中miR-192、ZEB2 mRNA和ZEB2蛋白的表达,细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测转染后SW480和SW620细胞迁移和侵袭能力的改变.将重组载体pmiR-ZEB2-wt和miR-192 mimics共转染入SW480细胞,应用双荧光素酶报告基因验证ZEB2基因3’端非翻译区(3’-untranslated region,3’-UTR)是否有miR-192的结合位点.结果:与转染miR-192模拟物阴性对照组比较,miR-192 mimics转染后SW480和SW620细胞中miR-192的表达水平上调(P＜0.05),ZEB2mRNA及其蛋白的表达水平明显下调(P＜0.05),细胞的迁移和侵袭能力下降(P＜0.05).双荧光素酶报告基因验证结果显示,pmiR-ZEB2-wt和miR-192 mimics共转染后,SW480细胞中荧光素酶活性下降(P＜0.05),ZEB2基因3’-UTR存在miR-192的结合位点.结论:ZEB2可能是miR-192的靶基因之一,上调SW480和SW620细胞中miR-192的表达可抑制ZEB2的表达,发挥抑制细胞迁移和侵袭的作用.
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结肠癌淋巴结转移基因谱表达差异分析
目的 探讨人结肠癌细胞系SW480、SW620基因谱的表达差异.方法 针对NCBI的GEO数据库中编号为GDS756的基因芯片表达数据,用GSEA软件进行基因集富集分析及领头亚群分析,利用FunRich分析软件针对SW480、SW620细胞领头亚群基因进行验证性功能注释,STRING在线分析系统对显著性富集基因集领头亚群基因进行生物网络分析,获得SW480、SW620细胞中心节点基因,并将中心节点基因与高重叠领头亚群基因进行联合分析,以获得参与多功能的中心节点基因.结果 GSEA软件分析筛选出SW480细胞显著性富集基因集12个,领头亚群基因491个,高重叠基因7个;SW620细胞显著性富集基因集80个,领头亚群基因870个,高重叠基因6个.对显著性富集基因集领头亚群基因进行生物网络分析筛选出SW480、SW620细胞相关中心基因数目分别为5个及8个;结合GSEA及生物网络分析结果,获得SW620细胞2个参与多功能调控的核心基因TOP2A、CDK1.结论 遗传背景相同的结肠癌SW620细胞与SW480细胞具有不同的基因功能分布特点,SW620细胞多功能中心节点基因TOP2A、CDK1与结肠癌发展相关信号通路高度相关.
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紫草素诱导人结肠癌细胞SW620凋亡及机制研究
目的：探讨紫草素诱导人结肠癌细胞株SW620凋亡及分子机制。方法体外培养人结肠癌细胞株SW620，加入终浓度分别为2.5~15滋mol/L的紫草素。采用MTT法测定紫草素对肿瘤细胞的增殖抑制率，Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率，Western blot方法测定对bcl-2、bax蛋白表达水平。结果紫草素随时间和浓度的增加对SW620细胞增殖抑制率增加，细胞凋亡率增加（P<0.05）。Western blot法检测发现bax蛋白表达升高同时bcl-2蛋白表达下降。结论紫草素有抑制结肠癌细胞增殖和诱导凋亡的作用，可以通过调控bax和bcl-2蛋白的表达经线粒体途径诱导细胞凋亡。
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稳定沉默黏着斑激酶结肠癌细胞株SW620的构建
目的:构建稳定沉默黏着斑激酶(FAK)结肠癌细胞株SW620.方法:用构建好的FAK RNA干扰(RNAi)慢病毒载体pLL3.7 FAK及插入无沉默功能序列的阴性对照慢病毒载体pLL3.7,在293FT细胞中包装成慢病毒,感染体外培养结肠癌SW620细胞,作为实验组和阴性对照组,未感染病毒的SW620细胞作为未处理组,通过荧光倒置显微镜检测SW620细胞的感染效率,运用RT-PCR、Western blot方法测定FAK的表达情况,建立稳定转染细胞株.结果:成功包装了靶向FAK的RNAi慢病毒,感染效率＞90％,稳定转染细胞株构建成功.RT-PCR及Western blot方法检测发现实验组与阴性对照组及未处理组相比,FAK的表达明显降低.结论:稳定沉默FAK的RNAi SW620细胞构建成功.
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结直肠癌及人结肠癌细胞系SW620中CD44+/Ki-67-癌细胞的表达及意义
目的 探讨结直肠癌及人结肠癌细胞系SW620中CD44+/Ki-67-癌细胞的形态特点、数量及分布特征.方法 利用组织芯片技术、免疫组化染色、免疫组化双重染色和HE染色,连续切片,同部位观察.结果 正常肠黏膜中CD44蛋白不表达,Ki-67蛋白低表达;腺瘤中CD44蛋白低表达,Ki-67蛋白表达率为5.06%,CD44+/Ki-67-细胞数为0.58%.结直肠癌中CD44+/Ki-67-癌细胞数平均为5.82%,主要分布在腺体基膜缘或腺体共壁侧,分布有统计学意义(P<0.05).癌细胞主要有两种形态,一种是大核细胞,另一种细胞核较小,形似淋巴细胞;在SW620中CD44+/Ki-67-主要表达在小圆细胞和单极细胞中,其它细胞中表达少;细胞数比率与组织学相比,差异无显著性(P>0.05)且比值接近;Ki-67-的癌细胞中,CD44+癌细胞占67%,CD44-癌细胞占33%,两者差异有显著性(P<0.05),说明大多CD44+癌细胞处于G0期或静息期,只有少数细胞处于细胞G1、S、G2、M期.结论 CD44+/Ki-67-癌细胞特征和从癌干细胞理论方面考虑,更适合作为癌干细胞的标记,为癌干细胞的分离、靶向治疗和个体化治疗提供可靠的分子生物学指标.
关键词： 结直肠肿瘤 癌干细胞 SW620 CD44+/Ki-67- 免疫组化双重染色 -
具有相同遗传背景的人结肠癌细胞系生物学特性的鉴定
目的 对三种取自不同转移部位的结肠癌细胞系进行生物学特性的鉴定.方法 从体内成瘤性、原位移植后的自发性转移能力,以及体外生长、克隆形成率、粘附、运动、侵袭能力等方面,探讨具有相同遗传背景的SW480、SW620以及SW480/M5三种细胞系生物学特性的差异.结果 体内实验证明SW480具有多器官转移的潜能,SW620只具有淋巴结转移的能力,SW480/M5只具有肝脏转移的能力,SW480/M5的皮下瘤生长速度快,其次是SW620细胞;体外实验证明W48/M5和SW620的体外生长、克隆形成能力均强于SW480细胞,而两者对纤维黏连蛋白的粘附能力较SW480细胞弱,SW480/M5的运动及侵袭能力强于SW480及SW620细胞.结论 与SW480细胞相比,SW480/M5和SW620细胞具有一定的器官亲和力,三者的遗传背景一致,是研究结肠癌晚期演进的遗传改变的重要资源.
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槐定碱对人结肠腺癌细胞株SW620增殖和凋亡的影响
目的 考察槐定碱对人结肠癌SW620细胞的增殖影响及探讨其诱导凋亡作用.方法 MTT法测定槐定碱对SW620细胞的半数抑制浓度;光学显微镜、荧光显微镜及电镜观察细胞凋亡形态变化;流式细胞仪分析细胞周期变化及细胞凋亡率.结果 实验结果显示槐定碱对体外培养的SW620细胞增殖具有明显抑制作用,并可诱导其发生凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性,48 h IC50=2.8 mmol ·L-1.凋亡细胞表现为细胞固缩、变圆、核染色质聚集或碎裂、胞质空泡化.DNA ladder结果显示有凋亡引起的"梯状"条带出现.流式细胞仪细胞周期分析结果表明,随着槐定碱作用时间的延长,G0-G1期细胞增多,同时S期细胞比例也相应增高.结论 槐定碱对体外培养SW620细胞生长增殖有明显抑制作用,其作用机与阻滞细胞周期的进程,诱导细胞凋亡相关.
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片仔癀对人结肠癌细胞株干细胞的影响
目的 观察片仔癀(PZH)对结肠癌细胞株HT-29、SW620干细胞的抑制作用.方法 采用人结肠癌细胞株HT-29、SW620常规体外培养,随机设定对照组和不同浓度片仔癀组(0.25、0.5、1mg/mL),干预24h后,MTT法测定细胞活力;倒置显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪分析片仔癀对HT-29、SW620细胞株干细胞数量的影响.结果 MTT显示,不同浓度片仔癀干预HT-29、SW620细胞后,细胞活力均下降且具有剂量依赖性;倒置显微镜观察,PZH 1 mg干预24h后,HT-29及SW620细胞数量减少,细胞变小,折光性差,细胞悬浮、脱落而死亡;流式分析HT-29、SW620细胞株SP细胞的比例分别为10.87%、8.46%,片仔癀1 mg/mL干预24 h后,SP细胞比例分别下降为1.69%、1.18%.结论 片仔癀具有抑制HT-29、SW620结肠癌细胞增殖的作用,并且能够减少这2种细胞株干细胞的数量.
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TLR4/ NF-κB在人结肠癌细胞SW620中的表达及CRX-526的抑制作用
目的:利用脂多糖(LPS)刺激人结肠癌SW620细胞,观察Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)(p65) mRNA和蛋白表达,探讨TLR4拮抗剂CRX-526对肿瘤的抑制作用.方法:用LPS刺激培养的人结肠癌SW620细胞(LPS刺激组),检测其与未经刺激的SW620细胞(无刺激组)TLR4和NF-κB(p65)的mRNA和蛋白表达水平差异,以及两组炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和IL-8的表达变化.同时利用SW620细胞皮下注射建立裸鼠移植瘤,并用TLR4拮抗剂CRX-526进行多点注射,观察移植瘤的体积及肿瘤组织中TLR4、NF-κB (p65)表达变化.结果:与无刺激组相比,LPS刺激组SW620细胞中TLR4、NF-κB (p65)、IL-6和IL-8表达明显上调 (P<0.05).抑制组肿瘤体积(271.25±49.44)mm3明显小于非抑制组 (423.32±31.28)mm3,抑制组TRL4和NF-κB (p65)mRNA和蛋白的表达显著低于非抑制组(P均<0.05).结论:研究TLR4/NF-κB信号通路在结肠癌中的作用及作为治疗靶点,对结肠癌临床干预有重要价值.
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半边旗提取物5F对人结肠腺癌细胞株SW620埃兹蛋白表达及活性影响
目的 观察半边旗提取物5F对人结肠腺癌细胞株SW620的埃兹(Ezrin)蛋白表达及活性影响.方法 采用四氮甲唑蓝[3-(4,5-dimethyhhiazol-2-yl)-2,5-diphenyhetrazolium bromide,MTT]检测5F对SW620细胞的增殖抑制作用,采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测Ezrin mRNA,采用Western blot法检测Ezrin和磷酸化Ezrin蛋白的表达.结果 5F抑制SW620细胞增殖作用呈剂量和时间依赖性,其48 h半数抑制量(50%concentrction of inhibition,IC<,50>)为0.968 mg/ml.随着5F干预浓度增加,Ezrin的表达被抑制;2.0mg/ml 5F干预后,Ezrin和磷酸化Ezrin蛋白表达的抑制作用明显增强,与对照组比较差异均有统计学意义.结论 半边旗提取物5F在体外能抑制SW620细胞的增殖,通过抑制Ezrin的表达,抑制大肠癌侵袭转移.
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参七黄抗结肠癌细胞株SW620作用筛选研究
目的:对参七黄中的苦参碱等9种组分进行抗结肠癌活性的体外初步筛选.方法:应用MTT法测定各组分对SW620细胞株增殖活性的影响,检测其抑制SW620的剂量效应关系;应用光学显微镜、荧光显微镜进行细胞形态学观察.结果:芦荟大黄素、大黄素、大黄酸、人参皂苷Rh2、槐定碱、苦参碱各浓度均显示出抑制SW620结肠癌细胞增殖的作用,且量效关系明显.结论:此6个单体成分可组成新配伍进行抗癌活性研究,为研发中药治疗结肠癌的靶向新药提供实验依据.
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参七黄抗结肠癌有效组分配伍体外筛选研究
目的:对参七黄复方中的抗癌活性组分芦荟大黄素、大黄素、大黄酸、人参皂苷Rh2、槐定碱、苦参碱配伍后进行抗结肠癌的体外筛选实验,以优选佳组分配伍.方法:采用均匀设计法设计各组分的配伍剂量,应用MTT法测定各配方对SW620细胞株增殖活性的影响,应用光学显微镜、荧光显微镜进行细胞形态学观察.结果:优选出的佳组分配方为大黄素100μg/mL、槐定碱2000 μg/mL、苦参碱2500 μg/mL,对SW620结肠癌细胞抑制率达95.4％.结论:此组分配方可对结肠腺癌细胞株SW620的增殖显著抑制并诱导细胞凋亡,为进一步研发治疗结肠癌的靶向新药提供实验依据.
