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术中腹腔内植入氟尿嘧啶对结直肠癌患者免疫功能及miR-34a、ZEB2表达的影响
目的 探讨术中腹腔内植入氟尿嘧啶(5-Fu)对结直肠癌患者免疫功能及miR-34a、ZEB2表达的改变以及生存影响.方法 选择2014年1月至2016年12月在延安大学咸阳医院接受根治性手术治疗的结直肠癌患者92例,采用随机数字表法分为2组,各46例.对照组患者行腹腔镜下结直肠癌根治性切除术,观察组在关腹前给予5-Fu植入剂,术后两组均给予营养支持及预防性使用抗生素.对比两组患者1年生存率、复发率、免疫功能及miR-34a、ZEB2血清表达情况.结果 (1)两组术后住院时间差异无统计学意义(t=0.251、P=0.401).观察组无病生存时间为(10.26±1.29)个月,显著长于对照组的(8.92±1.02)个月,差异有统计学意义(t=-5.526,P<0.01).对照组1年生存率为78.26％(95％CI=72.13％～84.39％),观察组1年生存率为95.65％(95％CI=93.91％～97.39％),两组比较,差异有统计学意义(χ2=5.896,P=0.015).(2)治疗后两组各免疫指标均呈明显下降后升高的趋势(P<0.05),术后2 d时观察组IgM明显高于对照组(P<0.05),术后7 d时观察组IgA与CD4+明显低于对照组(P<0.05).(3)治疗前两组血清miR-34a及ZEB2蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(t=-1.097、1.392,P=0.259、0.138).治疗后7 d时,观察组和对照组miR-34a蛋白表达均明显升高(t=3.975、-3.718,P=0.001、0.005),ZEB2蛋白表达明显下降(t=6.279、4.183,均P<0.001),但观察组miR-34a及ZEB2蛋白表达水平的变化幅度较对照组更为明显(t=-2.813、4.118,P=0.029、<0.001).结论 结直肠癌患者术中腹腔内植入5-Fu对患者1年生存率及复发率均无明显影响,但对患者免疫功能有一定抑制作用,可改善miR-34a低表达,抑制ZEB2高表达.
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miRNA-200c对卵巢癌细胞侵袭能力影响观察
目的:探讨miRNA-200c的表达对卵巢癌细胞侵袭能力的影响,并初步分析其可能的作用机制.方法:应用Lipofectamine 2000瞬时上调ES-2细胞中miR-200c的表达,并通过荧光定量PCR验证;Transwll侵袭小室检测细胞侵袭能力的变化;生物信息学的方法预测miR-200c的靶基因,同时荧光素酶报告基因实验验证E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box bingding homeobox 2,ZEB2)是miR-200c的靶基因;蛋白印迹法检测E-钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平.结果:pre-miR-200c转柒ES-2细胞后,转染组miR-200c的表达(4.82±1.73)较对照组(1.00±0.16)明显升高,t=67.28,P＜0.001;上调miR-200c后,转染组(27.70±1.19)与对照组(57.30±2.01)相比,细胞的侵袭能力明显减弱,t=11.17,P＜0.001;蛋白印迹法的结果显示,转染组ZEB2的表达水平为0.38±0.015,较对照组的0.66±0.024明显下降,t=94.67,P＜0.001.采用生物信息学的方法预测ZEB2是miR-200c的靶基因;且荧光素酶报告实验结果证实,共转染野生型荧光素酶质粒和pre-miR-200c,与其他各组相比,荧光素酶活性明显降低,差异有统计学意义,P＜0.001;转染pre-miR-200c后,转染组E-钙黏蛋白的表达(0.75±0.023)较对照组(0.32±0.014)明显增加,t=-97.77,P＜0.001,波形蛋白的表达为0.28±0.010,较对照组0.67±0.129明显降低,t=71.64,P＜0.001.结论:miR-200c能通过靶向ZEB2抑制人卵巢癌细胞的侵袭能力,其异常表达与卵巢癌细胞的生物学行为密切相关.
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miRNA-200a通过下调ZEB2抑制鼻咽癌细胞的迁移和侵袭行为
目的 探讨miRNA-200a通过下调ZEB2抑制鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞的迁移和侵袭行为的作用及机制.方法 qPCR检测miRNA-200a在不同鼻咽癌细胞株中的表达情况;双荧光素酶报告基因检测miRNA-200a与ZEB2之间的相互作用;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测miRNA-200a对鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测miRNA-200a对ZEB2蛋白表达水平的影响.结果 与其他鼻咽癌细胞株相比,CNE-1细胞中miRNA-200a的表达水平明显较高;双荧光素酶实验证实miRNA-200a可以调控ZEB2的表达及活性,抑制miRNA-200a的表达可以减弱鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力;抑制miRNA-200a的表达后ZEB2的表达水平受到相应的抑制.结论 miRNA-200a可以靶向调节ZEB2的表达影响鼻咽癌细胞的迁移和侵袭行为.
关键词： miRNA-200a ZEB2 鼻咽癌 侵袭行为 -
试析宫颈癌组织中E－cad蛋白、ZEB2的表达
目的：研究宫颈癌组织中 E －cad 蛋白、ZEB2的表达。方法：选取该校附属医院2014年6月至2015年12月50例宫颈癌患者为研究对象，归为观察组，然后再选取同时期50名正常宫颈黏膜组织者为研究对象，归为对照组，采用免疫组化 SP 法对其进行检测，研究宫颈癌组织中 E －cad 蛋白、ZEB2的表达。结果：宫颈癌组织中 E －cad 蛋白和 ZEB2蛋白表达之间具有相关性（r ＝0．411，P ＜0．05）；E －cad 表达水平、ZEB2表达水平、淋巴结转移以及 FIGO 等均属于独立的预后因素。结论：E －cad 蛋白与 ZEB2能够促进宫颈癌的发展、转移以及浸润，可以将其用来对宫颈癌进行预测。
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MiR-192对结直肠癌细胞ZEB2表达及迁移和侵袭的影响
目的:探讨miR-192对结直肠癌SW480和SW620细胞ZEB2(zinc-finger E-box binding homeobox 2)表达及迁移和侵袭能力的影响.方法:将miR-192模拟物(miR-192 mimics)分别转染SW480和SW620细胞,应用实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染后SW480和SW620细胞中miR-192、ZEB2 mRNA和ZEB2蛋白的表达,细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测转染后SW480和SW620细胞迁移和侵袭能力的改变.将重组载体pmiR-ZEB2-wt和miR-192 mimics共转染入SW480细胞,应用双荧光素酶报告基因验证ZEB2基因3’端非翻译区(3’-untranslated region,3’-UTR)是否有miR-192的结合位点.结果:与转染miR-192模拟物阴性对照组比较,miR-192 mimics转染后SW480和SW620细胞中miR-192的表达水平上调(P＜0.05),ZEB2mRNA及其蛋白的表达水平明显下调(P＜0.05),细胞的迁移和侵袭能力下降(P＜0.05).双荧光素酶报告基因验证结果显示,pmiR-ZEB2-wt和miR-192 mimics共转染后,SW480细胞中荧光素酶活性下降(P＜0.05),ZEB2基因3’-UTR存在miR-192的结合位点.结论:ZEB2可能是miR-192的靶基因之一,上调SW480和SW620细胞中miR-192的表达可抑制ZEB2的表达,发挥抑制细胞迁移和侵袭的作用.
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ZEB2、E-cad在鳞状宫颈癌细胞的表达与疾病分期的关系
目的：探讨宫颈癌细胞中E盒结合锌指蛋白2（ZEB2）、E-钙黏附蛋白（E-cad）表达和疾病分期的关系。方法：选取2007年6月至2011年11月期间我院病理科确诊的鳞状宫颈癌组织62例，采用免疫组织化学法（IHC）检测ZEB2、E-cad蛋白的表达情况，回顾性分析患者临床报告资料，采用单因素和多因素（logistic回归分析法）对ZEB2、E-cad蛋白表达与疾病分期的关系进行分析。且另选癌旁正常组织10例作为对照。结果：鳞状宫颈癌组织中ZEB2蛋白表达阳性率高于癌旁癌黏膜组织，E-cad蛋白表达阳性率低于后者（P＜0.05）；单因素结果分析显示，ZEB2、E-cad蛋白表达与宫颈癌FIGO分期、分化程度及淋巴结转移均有关（P均＜0.05）；logistic回归分析结果显示，FIGO分期、淋巴结转移、E-cad表达及ZEB2表达均可作为宫颈癌疾病分期的因素。结论：ZEB2、E-cad蛋白表达有助于判断宫颈癌发展、浸润和转移情况，利于患者预后方案制定，有望成为宫颈癌疾病分期的指标。
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胆管细胞癌中CtBP1、Zeb1、Zeb2与E-cadherin蛋白的表达及临床意义
目的 探讨转录抑制因子Zeb1、Zeb2、转录辅抑制因子CtBP1及其靶基因E-cadherin在胆管细胞癌中的表达及CtBP1、E-cadherin的临床意义.方法 采用免疫组化法检测胆管细胞癌及癌旁组织芯片中CtBP1、Zeb1、Zeb2和E-cadherin的表达.结果 CtBP1在胆管细胞癌及癌旁组织中的阳性率分别为44.44％和17.86％,Zeb2分别为34.92％和10.71％,E-cadherin分别为50.79％和100％,组间差异均有统计学意义(P均＜0.05).Zeb1在胆管细胞癌仅1例表达,而在癌旁组织中不表达.CtBP1与胆管细胞癌的分化程度相关(P＜0.05),E-cadherin与胆管细胞癌的分化程度及远处转移有关(P均＜0.05).E-cadherin和CtBP1及Zeb2表达呈负相关(r=-0.034、-0.029,P均＜0.001),CtBP1和Zeb2表达呈正相关(r=0.228,P=0.005).结论 胆管细胞癌中CtBP1、Zeb2与E-cadherin均表达异常,CtBP1、Zeb2可能共同参与E-cadherin表达调控.联合检测CtBP1和E-cadherin有望成为评估胆管细胞癌恶性生物学行为的参考指标.
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乳腺癌中BCL-6和ZEB2的表达及其意义
目的 探讨BCL-6和ZEB2在乳腺癌侵袭、转移及预后中的生物学意义.方法 分别采用免疫组化SP两步法与原位杂交法检测228例乳腺癌和80例乳腺良性病变组织中BCL-6、ZEB2蛋白及mRNA的表达.结果 乳腺癌组织中BCL-6、ZEB2蛋白及mRNA表达水平均显著高于乳腺良性病变组织(P ＜0.05);BCL-6表达与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级、TNM分期及HER-2表达均呈正相关(P ＜0.05);ZEB2表达与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期及HER-2表达均呈正相关(P＜0.05);乳腺癌中BCL-6、ZEB2阳性者总生存期及无复发生存期均显著低于阴性者(P＜0.01).结论 BCL-6、ZEB2与乳腺癌演进过程密切相关,检测BCL-6和ZEB2的表达,有望成为监测与预警乳腺癌侵袭、转移及预后的重要手段.
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ZEB2和PTEN在先天性巨结肠发生中的意义分析
目的：研究ZEB2和PTEN在先天性巨结肠中的表达情况，探讨两者在先天性巨结肠发生中可能的调控关系。方法采用实时定量PCR和蛋白电泳技术检测64例先天性巨结肠狭窄段和扩张段中ZEB2和PTEN mRNA及蛋白表达情况。采用Pearson相关性检验分析ZEB2和PTEN在先天性巨结肠狭窄段和扩张段中表达的相关性。在体外细胞SH—SY5Y中应用ZEB2 siRNA干扰技术降低ZEB2表达，检测其对PTEN表达的影响，利用Transwell实验、CCK—8实验和流式细胞仪技术检测ZEB2对细胞迁移、增殖、周期和凋亡功能。结果 ZEB2和PTEN mRNA在先天性巨结肠狭窄段的表达均比扩张段显著增高（ZEB2：1.2823±0.1323 vs 0.9877±0.1249，P＝0.0073；PTEN：0.1132±0.0109 vs 0.0459±0.0058，P＜0.001）。ZEB2和PTEN在先天性巨结肠狭窄段和扩张段组织中蛋白表达与mRNA表达一致（ZEB2：0.709±0.035 vs 0.531±0.027，P＝0.0166；PTEN：0.466±0.047 vs 0.234±0.052，P＝0.0293）。ZEB2与PTEN mRNA表达在巨结肠狭窄段（r＝0.48，P＜0.001）和扩张段（r＝0.54，P＜0.001）中均呈显著正相关。干扰ZEB2 mRNA表达后，体外细胞SH—SY5 Y的PTEN mRNA和蛋白表达显著下降，细胞增殖和迁移能力受到显著抑制。结论 ZEB2和PTEN在先天性巨结肠狭窄段中表达显著增加；ZEB2表达增加可能是PTEN通过竞争性内源性RNA机制调控后的继发性的改变。
关键词： ZEB2 PTEN ceRNA Hirschsprung病 -
子宫内膜异位症患者病变部位ZEB1和ZEB2表达水平
目的 探讨E-盒结合锌指蛋白1(ZEB1)、ZEB2在子宫内膜异位症患者中的表达水平.方法 收集2017年10月至2018年3月于本院就诊的46例子宫内膜异位症患者作为观察组,另选取30例因卵巢良性肿瘤行手术治疗且病理证实非子宫内膜异位症患者作为对照组,采用RT-PCR法、Western-blot法测定子宫内膜中ZEB1、ZEB2的相对表达量,进一步分析ZEB1、ZEB2表达水平与子宫内膜异位症美国生殖医学学会修订本评分(rASRM)分期的关系.结果 RT-PCR法测得观察组ZEB1、ZEB2的mRNA相对表达量分别为(0.675±0.070)、(0.620±0.080),对照组ZEB1、ZEB2的mRNA相对表达量分别为(0.065±0.007)、(0.080±0.008),观察组ZEB1、ZEB2 mRNA表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);Western-blot法测得观察组ZEB1、ZEB2的蛋白相对表达量分别为(16.40±1.30)、(18.04±1.52),对照组中ZEB1、ZEB2的蛋白相对表达量分别为(1.50±0.70)、(1.79±0.75),观察组ZEB1、ZEB2蛋白表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).ZEB1、ZEB2表达水平与内异症rASRM分值无明显关系(P＞0.05).结论 ZEB1、ZEB2在子宫内膜异位症患者中高表达,可考虑作为子宫内膜异位症患者治疗效果的指标.
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miR-200c在子宫内膜癌组织中的表达及与ZEB2蛋白的相关性
目的：探讨miR-200c在子宫内膜癌组织中的表达及与ZEB2的相关性。方法：选取113例子宫内膜癌组织和癌旁组织标本，40例正常子宫内膜癌组织作为对照组，检测组织中 miR-200c 表达量，以及ZEB2基因和蛋白表达量，利用反义寡核苷酸技术抑制子宫内膜癌RL95-2细胞株中miR-200c表达，检测其对细胞侵袭力的影响，以及细胞中ZEB2基因和蛋白表达。结果：子宫内膜癌组织中miR-200c表达量、ZEB2基因和蛋白表达量均高于癌旁组织和对照组（P＜0．05）；反义miR-200c转染组穿膜细胞数少于阴性对照组和脂质体组（P＜0．05）；反义miR-200c转染组细胞中ZEB2基因和蛋白表达量均低于阴性对照组和脂质体组（P＜0．05）。结论：miR-200c在子宫内膜癌组织中呈高表达，可能是通过调控ZEB2而促进肿瘤细胞的浸润和转移。
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鼻咽癌组织中ZEB2、AnnexinA2、LMP2A的表达及其与预后情况 、恶性分子的相关性
目的:研究鼻咽癌组织中ZEB2、膜联蛋白A2(AnnexinA2)、潜伏膜蛋白2A(LM P2A)的表达及其与预后情况 、恶性分子的相关性.方法:选择2015年3月 ～2018年2月期间在徐汇区大华医院进行纤维鼻咽镜下局部组织活检的患者作为研究对象,根据活检后的病理学结果将符合鼻咽癌诊断的患者纳入鼻咽癌组 、符合鼻黏膜炎症的患者纳入研究的对照组.收集活检组织并检测ZEB2、AnnexinA2、LMP2A以及增殖 、侵袭相关恶性分子的mRNA表达量.结果:鼻咽癌组肿瘤组织中ZEB2、Annexi-nA2、LMP2A、β-catenin、CyclinD1、iASPP、N-cadherin、PARP-1、MM P9的mRNA表达量显著高于对照组的鼻炎黏膜组织,RASSF1A、p21WAF1、E-cadherin、IFR5、TIMP1的mRNA表达量显著低于对照组的鼻炎黏膜组织;鼻咽癌组肿瘤组织中ZEB2、AnnexinA2、LMP2A的mRNA表达量与 β-catenin、CyclinD1、iASPP、N-cadherin、PARP-1、MM P9呈正相关,与RASSF1A、p21WAF1、E-cadherin、IFR5、TIM P1呈负相关.结论:鼻咽癌组织中ZEB2、AnnexinA2、LMP2A的高表达与肿瘤分期及恶性分子表达的改变密切相关.
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shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性的实验研究
目的:研究shRNA靶向沉默E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox,ZEB2)表达对肺癌细胞增殖活性的影响.方法:用shRNA-ZEB2慢病毒和shRNA阴性对照慢病毒感染肺癌细胞,Real time PCR和Western blot检测沉默效果.MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、C-myc蛋白水平.用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理沉默ZEB2的肺癌细胞,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白水平.结果:shRNA-ZEB2慢病毒可以明显沉默肺癌细胞中ZEB2的表达和转录,shRNA阴性对照慢病毒对肺癌细胞中ZEB2的表达没有影响.沉默ZEB2后的肺癌细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中激活型Caspase-3蛋白水平升高,β-catenin、C-myc蛋白水平降低.Wnt/β-catenin信号通路抑制剂下调沉默ZEB2的肺癌细胞株中Wnt/β-catenin信号通路的激活水平,同时可以降低细胞存活率,诱导细胞凋亡,促进细胞中激活型Caspase-3的表达.结论:shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性.
关键词： 肺癌 ZEB2 Wnt/β-catenin信号通路 增殖 凋亡 -
肾透明细胞癌中 miR －200c 负性调控 ZEB2基因表达的机制研究
目的：探讨肾透明细胞癌中 miR －200c 调控 ZEB2基因表达的分子机制。方法：实时定量 PCR 法检测肾透明细胞癌及癌旁组织中 miR －200c 及 ZEB2基因的表达水平。培养肾透明细胞癌 Caki －1细胞，将miR －200c 的前体转染 Caki －1细胞，Western blot 法检测 ZEB2蛋白的表达改变，荧光素酶报告基因表达分析实验验证 miR －200c 与 ZEB2基因的3＇非翻译区（3＇UTR）的结合及调控作用。结果：实时定量 PCR 表达检测显示，与癌旁组织相比，miR －200c 在肾透明细胞癌组织中的表达显著下调，而 ZEB2 mRNA 在肾透明细胞癌组织中的表达则呈现明显上调。Pearson 相关性分析结果表明，在肾透明细胞癌及癌旁组织中 miR －200c 与ZEB2基因的表达均显示负性相关。荧光素酶报告基因表达分析实验明确 miR －200c 能够与 ZEB2基因的3＇UTR 特异性地结合，并抑制荧光素酶的表达。miR －200c 前体能够显著下调 Caki －1细胞中 ZEB2蛋白的表达。结论：miR －200c 与 ZEB2基因的表达异常与肾透明细胞癌相关，在肾透明细胞癌细胞中 miR －200c 能够负性调节其靶基因 ZEB2的表达。
关键词： 肾透明细胞癌 miR -200c ZEB2 Caki -1 细胞
