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MiR-200b及miR-200c在三阴性乳腺癌中的表达及意义
目的 探讨miR-200b和miR-200c在三阴性乳腺癌细胞中的表达及意义.方法 分别提取三阴性乳腺癌、LuminalA型乳腺癌及其周围正常乳腺中的miRNA,用实时荧光定量PCR法检测miR-200b、miR-200c的表达,并复习相关文献.结果 miR-200b在LuminalA型及三阴性乳腺癌中的表达均降低(P＜0.05).miR-200c在LuminalA型乳腺癌中的表达未见明显下降(P＞0.05),而在三阴性乳腺癌中的表达明显下降(P＜0.05).结论 miR-200b及miR-200c均可能参与了三阴性乳腺癌的侵袭、转移的过程,但miR-200c起着更主要的作用.
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胃癌组织TGF-β对miR-200c/141表达影响的研究
目的 TGF-β能够诱导肿瘤细胞发生上皮间质转化,促进肿瘤发生侵袭转移.miR-200c/141能够抑制上皮间质转化的发生.但TGF-β在胃癌中的表达情况及其对miR-200c/141表达影响尚不清楚.本研究旨在探讨胃癌组织中TGF-β表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系,及对miR-200c和miR-141表达影响.方法 收集河北医科大学第四医院普外科2012-05-01-2013-01-01胃癌根治性手术切除标本64例,采用qRT-PCR技术检测TGF-β、miR-200c及miR-141在胃癌组织和配对癌旁非癌组织中的表达.分析TGF-β表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系及与miR-200c和miR-141水平的相关性.TGF-β处理胃癌细胞株SGC-7901,观察其对miR-200c和miR-141表达的影响.结果 TGF-β在胃癌组织中的表达上调率为66.67%,其在胃癌组织中的表达显著高于癌旁非癌组织[Median,Interquartile Range(2.50,2.43:0.84,0.42);P=0.005].miR-200a、miR-200b、miR-429、miR-200c和miR-141在胃癌组织中的表达下调率分别为53.13%、48.44%、50.00%、78.13%和76.19.miR-200c和miR-141在胃癌组织中的表达显著低于癌旁非癌组织,均P<0.001.miR-200c和miR-141的表达存在正相关关系,r=0.840,P<0.001.TGF-β表达水平与miR-200c和miR-141的表达水平呈显著负相关关系,均P<0.001.TGF-β能够诱导胃癌细胞株SGC-7901中miR-200c和miR-141表达显著降低.TGF-β的表达水平与淋巴结转移情况及脉管瘤栓情况存在显著相关性,与患者性别、年龄、组织学分级、TNM分期、肿瘤侵袭深度和肿瘤远处转移情况无相关性,均P>0.05.
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miRNA-200c对卵巢癌细胞侵袭能力影响观察
目的:探讨miRNA-200c的表达对卵巢癌细胞侵袭能力的影响,并初步分析其可能的作用机制.方法:应用Lipofectamine 2000瞬时上调ES-2细胞中miR-200c的表达,并通过荧光定量PCR验证;Transwll侵袭小室检测细胞侵袭能力的变化;生物信息学的方法预测miR-200c的靶基因,同时荧光素酶报告基因实验验证E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box bingding homeobox 2,ZEB2)是miR-200c的靶基因;蛋白印迹法检测E-钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平.结果:pre-miR-200c转柒ES-2细胞后,转染组miR-200c的表达(4.82±1.73)较对照组(1.00±0.16)明显升高,t=67.28,P＜0.001;上调miR-200c后,转染组(27.70±1.19)与对照组(57.30±2.01)相比,细胞的侵袭能力明显减弱,t=11.17,P＜0.001;蛋白印迹法的结果显示,转染组ZEB2的表达水平为0.38±0.015,较对照组的0.66±0.024明显下降,t=94.67,P＜0.001.采用生物信息学的方法预测ZEB2是miR-200c的靶基因;且荧光素酶报告实验结果证实,共转染野生型荧光素酶质粒和pre-miR-200c,与其他各组相比,荧光素酶活性明显降低,差异有统计学意义,P＜0.001;转染pre-miR-200c后,转染组E-钙黏蛋白的表达(0.75±0.023)较对照组(0.32±0.014)明显增加,t=-97.77,P＜0.001,波形蛋白的表达为0.28±0.010,较对照组0.67±0.129明显降低,t=71.64,P＜0.001.结论:miR-200c能通过靶向ZEB2抑制人卵巢癌细胞的侵袭能力,其异常表达与卵巢癌细胞的生物学行为密切相关.
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miR-200c过表达对OVCAR-3卵巢癌细胞生物学行为的影响
目的：探讨miR-200c过表达对上皮性卵巢癌细胞OVCAR-3增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：构建逆转录病毒表达质粒pMSCVpuro-miR-200c，转染OVCAR-3卵巢癌细胞株，分别用细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8， CCK8）和Transwell小室法检测过表达miR-200c的OVCAR-3细胞的增殖、迁移以及侵袭力改变，同时采用基因芯片检测转染前后OVCAR-3细胞的差异基因表达情况。结果：与未转染细胞相比，pMSCVpuro-miR-200c-OVCAR-3细胞的增殖、迁移及侵袭力下降（均P＜0.01）。通过基因芯片的检测，miR-200c过表达可引起OVCAR-3细胞中上调表达的基因有190个，下调表达的基因有166个。结论：miR-200c作为抑癌基因参与抑制上皮卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭力。
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胃癌中DNA甲基化对miR-200c 141表达影响的研究
目的：探讨胃癌组织中miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c/141表达水平和临床病理特征的相关性。方法：运用实时定量PCR（qRT-PCR）和BS-MSP方法检测胃癌组织和癌旁组织中miR-200c/141CpG岛的表达与其基因甲基化水平。统计学分析miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c/141水平和临床病理特征的关系。结果：miR-200c/141CpG岛的甲基化水平在胃癌组织中显著升高，miR-200c和miR-141的水平显著降低，miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c和miR-141的水平呈负相关。结论：胃癌组织中升高的miR-200c/141CpG岛的甲基化水平诱导miR-200c和miR-141表达降低。
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上调 miR －200c 表达对人肝癌干细胞化疗耐药性的影响
目的：观察人肝癌干细胞中miR－200 c的表达改变对化疗药物敏感性的影响。方法利用流式细胞分选技术从MHCC97人肝癌细胞系中分离出肝癌干细胞。应用脂质体介导转染miR－200 c mimics到肝癌干细胞；采用实时荧光定量RT－PCR对转染miR－200 c mimics前后肝癌干细胞中miR－200c表达水平进行检测；通过噻唑蓝（MTT ）法检测miR－200 c对肝癌干细胞药物敏感性的影响。结果肝癌干细胞中miR－200 c的相对表达量为0．17±0．02，转染miR－200c mimics 后肝癌干细胞中miR－200c的相对表达量为1．24±0．28，转染前后比较差异有统计学意义（P＜0．05）。转染前5－氟尿嘧啶（5－Fu）和阿霉素（ADM）对肝癌干细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为22．74 mg／L和9．56 mg／L，转染miR －200 c mimics后5－Fu和 ADM对肝癌干细胞的IC50分别为126．3 mg／L和3．51 mg／L，转染前后比较差异均有统计学意义（P均＜0．05）。结论上调人肝癌干细胞中miR－200c的表达可以增强肝癌干细胞的化疗敏感性，具有逆转其化疗耐药的作用。
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miR -200 c增加 H2228细胞对克唑替尼和紫杉醇及顺铂敏感性的研究
背景 miR-200c可以增加肿瘤细胞对紫杉醇、顺铂的敏感性及表皮生长因子受体( EGFR）阳性肺癌细胞对分子靶向药物厄洛替尼、吉非替尼及阿法替尼的敏感性，但其是否可以增加棘皮动物微管相关样蛋白4(EML4）-间变性淋巴瘤激酶(ALK）融合基因阳性肺腺癌细胞(ALK阳性肺癌细胞）对克唑替尼、紫杉醇和顺铂的敏感性尚无相关研究。目的观察miR-200c是否可以增加H2228细胞对克唑替尼、紫杉醇及顺铂的敏感性，并探讨其机制。方法2014年2月—2015年5月，培养H2228细胞并进行转染，根据转染物的不同，将细胞分为增强转染组(转染miR-200c mimics）、增强对照组(转染miR-200c mimics阴性对照）、抑制转染组(转染miR-200c inhibitor）、抑制对照组(转染miR-200c inhibitor阴性对照）。采用实时荧光定量PCR法( Real-time PCR法）检测H2228细胞中miR-200c基因表达水平， MTT法检测不同浓度抗肿瘤药物〔克唑替尼(50、100、200 nmol／L）、紫杉醇(6.25、12.50、25.00 nmol／L）、顺铂(25、50、100 nmol／L）〕作用下H2228细胞增殖水平， Transwell法检测H2228细胞迁移率， Real-time PCR法检测增强转染组、增强对照组H2228细胞中E-钙黏蛋白、 N-钙黏蛋白、波状蛋白、 CD24 mRNA表达水平， Western blotting法检测增强转染组、增强对照组H2228细胞中E-钙黏蛋白、 N-钙黏蛋白、波状蛋白、 CD24表达水平。结果增强转染组H2228细胞中miR-200c基因表达水平高于增强对照组(P＜0.05）。抑制转染组H2228细胞中miR-200c基因表达水平低于抑制对照组(P＜0.05）。增强转染组各浓度抗肿瘤药物作用下H2228细胞增殖水平均低于增强对照组( P＜0.05）。抑制转染组各浓度抗肿瘤药物作用下H2228细胞增殖水平均高于抑制对照组(P＜0.05）。增强转染组H2228细胞迁移率小于增强对照组(P＜0.05）。抑制转染组H2228细胞迁移率大于抑制对照组(P＜0.05）。增强转染组H2228细胞中E-钙黏蛋白及其mRNA表达水平高于增强对照组， N-钙黏蛋白、波状蛋白、 CD24及其mRNA表达水平低于增强对照组( P＜0.05）。结论 miR-200c可以通过使肺癌细胞发生间质-上皮转变( MET）而增加H2228细胞对克唑替尼、紫杉醇及顺铂的敏感性。
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miR-200C与miR-16在哮喘患儿血清及哮喘小鼠肺组织中的表达上调
目的 探讨miR-200C与miR-16在支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞及支气管哮喘小鼠模型肺组织中的表达.方法 应用real-time PCR方法检测支气管哮喘患儿与正常儿童外周血淋巴细胞miR-200C与miR-16的表达,卵蛋白致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型,肺泡灌洗液(BALF)细胞计数,HE染色观察气道炎症.应用real-time PCR法检测哮喘组小鼠与对照组小鼠肺组织miR-200C与miR-16的表达.结果 与正常儿童相比,支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞miR-200C与miR-16表达水平显著升高(P＜0.01).哮喘小鼠模型组BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞数,炎症细胞浸润,肺组织miR-200C与miR-16表达水平显著高于正常对照组(P＜0.01).结论 miR-200C与miR-16在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中高表达.
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miR-200c调控RhoA基因表达介导RMP7增加血肿瘤屏障通透性机制的研究
目的：研究miR?200c调控Ras基因家族成员A（RhoA）表达介导RMP7增加血肿瘤屏障（BTB）通透性的机制。方法应用real?time PCR检测RMP7作用BTB后人脑微血管内皮细（ECs）miR?200c的表达；应用miR?200c模拟物和miR?200c抑制物分别转染GECs（ECs和U87脑胶质瘤细胞共培养的细胞），测量跨内皮阻抗值（TEER）、辣根过氧化物酶（HRP）渗漏量，分析BTB通透性；应用Western blotting检测RhoA的表达；应用免疫荧光方法观察GECs中RhoA表达和分布；应用双荧光素酶报告基因检测miR?200c转录后水平调控RhoA机制。结果 RMP7作用GECs后，使GECs内源性miR?200c表达显著降低；miR?200c模拟物和miR?200c抑制物成功转染到GECs中；miR?200c模拟物显著抑制RMP7诱导TEER值的降低、HRP的升高；miR?200c模拟物显著减少RhoA的表达，促使RhoA在GECs细胞质和细胞核分布减少；miR?200c模拟物转录后水平负性调控RhoA基因表达。miR?200c抑制物与miR?200c模拟物实验结果相反。结论 miR?200c转录后水平负性调控RhoA表达，介导RMP7增加血肿瘤屏障通透性机制。
关键词： miR-200c Ras基因家族成员A RMP7 血肿瘤屏障 基因表达调控 -
miR-200c阻滞转化生长因子-β1在腹膜后成纤维细胞增殖和迁移侵袭中的作用
目的:阐明miR-200c对腹膜后成纤维细胞增殖的影响,并分析其分子机制,为抑制腹膜后纤维化提供理论依据.方法:收集36例人腹膜后组织,原代培养成纤维细胞,以5 ng/ml TGF-β1刺激者为TGF-β1组,pcDNA3.1-miR-200c转染成纤维细胞,再给予5 ng/ml TGF-β1刺激者为miR-200c组,仅以pcDNA3.1质粒转染者为pcDNA3.1质粒组,正常培养的成纤维细胞为对照组.分别以噻唑蓝(MTT)细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell细胞小室迁移实验检测成纤维细胞增殖和迁移能力,并以ELISA实验检测各组细胞裂解液中Akt蛋白的含量.结果:miR-200c组成纤维细胞的增殖OD值明显比TGF-β1组降低(P<0.01);与TGF-β1组相比,miR-200c组细胞迁移率明显降低(P<0.01);miR-200c组Akt蛋白的含量比TGF-β1组明显降低(P<0.01).结论:miR-200c下调Akt通路而抑制TGF-β1对成纤维细胞的增殖或迁移效果,对抑制腹膜纤维化具有重要意义.
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miR-200 c对乳腺癌BT549细胞迁移及Slug表达的作用
目的：结合对乳腺癌细胞系BT549迁移能力的研究，探讨转染miR-200c对Slug表达的作用。方法：设计miR-200c模拟物，转染具有高转移性的乳腺癌细胞系BT549，通过Transwell迁移试验、划痕实验，观察转染miR-200c后对乳腺癌细胞系BT549迁移能力的影响；利用Real-time PCR检测Slug和E-钙黏连蛋白 mRNA的表达水平；利用Western blot 检测Slug蛋白的表达水平。结果：Real-time PCR和Western blot结果显示，miR-200c转染组Slug表达水平被有效抑制（ P＜0.05）。与对照组相比，miR-200c转染组的BT549细胞迁移能力明显下降（P＜0.05）。结论：在乳腺癌细胞系BT549中，miR-200c可以通过抑制Slug的表达进而抑制上皮间质转化，终导致细胞迁移能力下降。
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miR-200c对三阴性乳腺癌上皮间质转化的抑制作用及其机制
目的:研究miR-200c对乳腺癌MDA-MB-231细胞和BT-549细胞迁移能力及增殖能力的影响,阐明miR-200c抑制三阴性乳腺癌上皮间质转化(EMT)的相关机制.方法:选取三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231和BT-549,对其进行瞬时转染,分为空白对照组、阴性对照组(转染negative control/Lipo2000)、试剂对照组(转染Lipo2000)和实验组(转染miR-200c mimic/Lipo2000);利用RT-PCR和Western blotting法分别检测vimentin及β-catenin mRNA和蛋白表达水平;采用CCK8实验和划痕实验分别检测细胞增殖能力和迁移能力.结果:RT-PCR法和Western blotting法检测,实验组细胞中vimentin和p-catenin mRNA和蛋白表达水平降低,与空白对照组、阴性对照组和试剂对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).CCK8法检测,实验组细胞增殖低于阴性对照组和试剂对照组(P＜0.05).划痕实验,实验组细胞划痕宽度恢复率低于阴性对照组和试剂对照组(P＜0.05).结论:miR-200c通过调节MDA-MB-231和BT-549中β-catenin、vimentin的mRNA和蛋白表达量、降低细胞的迁移和增殖能力,进而抑制三阴性乳腺癌EMT.
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miRNA-200c在Ⅲc期卵巢浆液性囊腺癌中的表达及其参与癌转移中的作用
研究miR-200c在Ⅲc期卵巢浆液性囊腺癌中的表达格局,探索其参与转移癌形成的相关机制.选取2010年1月至2013年12月上海交通大学医学院附属仁济医院妇科卵巢肿瘤组织标本(Ⅲc期卵巢浆液性囊腺癌40例(其中选择自身配对的原发灶40例、转移灶40例)、卵巢浆液性囊腺瘤30例为对照),采用real time-qPCR法检测miR-200c的表达;采用CCK8法、Transwell小室分别检测细胞过表达miR-200c后增殖、迁移和侵袭能力的改变;采用western blot法检测相关蛋白表达量.结果发现:(1)Ⅲc期卵巢浆液性囊腺癌转移灶肿瘤与原发灶肿瘤相比,miR-200c表达是升高的(490.37±78.32cf.157.46±17.21),P＜0.01;而且这两者均高于对照组(卵巢浆液性囊腺瘤)的表达(25.32±10.17),P＜0.01.SKOV3细胞过表达miRNA-200c后(2)细胞迁移能力降低(35.6±4.3 cf.18.6±1.9),P＜0.05;侵袭能力降低(26.7±3.1 cf.15.4±2.4) P＜0.05;但是增殖能力不改变.(3)在蛋白水平检测ZEB1蛋白表达下降(0.3023±0.0251 cf.0.6753±0.0262)P＜0.05、E-cad蛋白表达升高(1.274±0.0331 cf.0.6140±0.0460) P＜0.05、Vimentin蛋白表达降低(0.0957±0.0049 cf.0.1767±0.0158)P＜0.05.可见,miR-200c在Ⅲc期卵巢浆液性囊腺癌组织样本中表达增高,检测miR-200c的表达格局对于临床上监测上皮性卵巢癌的临床进展和转移有重要意义;也为开拓过表达miR-200c作为卵巢癌治疗手段,提供了理论与实验依据.
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5-氮杂胞苷增强人非小细胞肺癌细胞对吉非替尼的敏感性及其机制
目的:探讨DNA甲基化抑制剂5-氮杂胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)在增强人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞对吉非替尼敏感性中的作用及其机制.方法:选取EGFR突变型NSCLC细胞株H1650及EGFR野生型NSCLC细胞株H1299,5-Aza-CdR处理后,CCK-8法检测H1650及H1299细胞对吉非替尼敏感性的变化,real-time PCR检测细胞中miR-200c及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA的表达水平.结果:EGFR突变型及野生型NSCLC细胞株H1650、H1299对吉非替尼有一定程度的耐药性,5-Aza-CdR处理后H1650及H1299细胞对吉非替尼的敏感性显著增强,表现为吉非替尼对细胞的IC50明显降低[(1.04±0.35) vs(159.37±17.48) μmol/L,(6.28±1.02)vs(223.76±23.63) μmol/L；均P＜0.01].Real-time PCR检测结果显示,5-Aza-CdR处理后EGFR突变型或野生型H1650、H1299细胞中miR-200c [(0.009±0.003)vs(0.002±0.001),(0.004±0.001)vs 0；均P＜0.01]和EGFR mRNA[(0.286±0.037)vs (0.015±0.012),(0.057±0.014) vs(0.01±0.01)；均P＜0.01]的表达水平均显著增高.结论:DNA甲基化抑制剂5-Aza-CdR可上调NSCLC细胞中miR-200c及EGFR mRNA的表达,增强其对吉非替尼的敏感性.
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miR-200c与肿瘤进展关系的研究进展
microRNA(miRNA)是内源性非编码单链小RNA,参与细胞增殖、凋亡与分化等多种重要生命活动的调控.近年来研究发现,miRNAs参与多种恶性肿瘤的演进,起抑癌基因或原癌基因的作用.miR-200c是上皮-间质转化(epithelial-mesen-chymal,EMT)过程中的重要调节基因,除了在正常细胞的表型转换中起作用,还在多种类型癌细胞的表型转换中起调节作用,能促进或者抑制肿瘤的侵袭转移能力.此外,关于miR-200c的研究还涉及肿瘤的耐药性和凋亡抗性.研究证实,miR-200c能够促进或抑制肿瘤的侵袭转移,逆转肿瘤细胞的耐药性和凋亡抗性.本文主要对不同肿瘤中miR-200c对肿瘤进展的影响进行综述.
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miR-200c在胃癌中的表达水平与患者临床病理特征的关系
目的:探讨miR-200c在胃癌组织中的表达水平与胃癌患者临床病理特征及无病生存期(diease free survial,DFS)的关系.方法:收集河北医科大学第四医院普外科2012年5月至2013年1月64例胃癌手术切除的标本及相关临床资料,采用实时荧光定量PCR技术检测miR-200c在胃癌组织和配对癌旁非癌组织中的表达.回顾性分析miR-200c表达水平与胃癌患者的临床病理特征及DFS相关性.结果:胃癌组织中miR-200c的表达水平显著低于癌旁非癌组织(3.29vs5.91,P＜0.01).miR-200c的表达水平与肿瘤TNM分期、浸润深度、转移和脉管瘤栓呈显著负相关(均P＜0.01).miR-200c高表达组患者中位DFS明显长于低表达组患者(22.0 vs 13.5个月,P＜0.01),其表达水平与患者DFS呈正相关(P＜0.01).结论:miR-200c在胃癌组织中低表达,其表达水平与肿瘤TNM分期、肿瘤浸润深度和脉管瘤栓呈负相关,与DFS呈正相关,在胃癌的发生发展及预后中具有重要作用.
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DZNep通过上调miR-200c表达延缓MGC-803胃癌细胞侵袭和迁移过程
本文旨在研究组蛋白甲基化修饰调控对胃癌细胞miR-200c的表达调节以及对癌细胞的侵袭和迁移的作用.组蛋白甲基转移酶抑制剂DZNep (2.5 μmol/L)处理MGC-803胃癌细胞系,用实时定量PCR (qRT-PCR)检测细胞miR-200c的表达变化,用Western blot检测上皮间质转化相关蛋白、EZH2、EED、SUZ12、H3K27me3及MMP9的蛋白表达变化,用细胞划痕实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭.结果显示,与对照(DMSO处理)组相比,DZNep (2.5 μmol/L)处理的MGC-803肿瘤细胞miR-200c基因的表达显著提高,ZEB1、ZEB2、N-cadherin的表达显著下调,E-cadherin的表达上调,EZH2、EED、SUZ12、H3K27me3及MMP9的表达均显著降低,细胞迁移、侵袭能力均减弱.以上结果提示,DZNep通过上调miR-200c的表达延缓胃癌细胞侵袭、迁移过程,其机制涉及对上皮间质转化相关蛋白和PRC2 (polycomb repressive complex 2)的表达调节.
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miR-200c抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的研究
目的:探讨miR-200c对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(human keloid fibroblasts,HKFs)增殖和胶原合成的影响及阐明其机制.方法:将miR-200c mimics用oligofectami脂质体转染经转化生长因子(TGF)-β1诱导的HKFs,CCK-8法测细胞增殖变化;3H-脯氨酸掺入法测胶原蛋白水平的变化.Western blot检测细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)及磷酸化ERK1/2蛋白表达变化.结果:在有或无TGF-β1刺激下,miR-200c均能明显抑制HKFs的增殖能力及胶原合成,并且能明显减低磷酸化ERK1/2蛋白表达水平,但对非磷酸化ERK表达无影响.结论:miR-200c能抑制HKFs增殖和胶原合成,并起拮抗TGF-β1的作用,其机制可能是通过降低ERK通路活性介导实现的.
关键词： miR-200c 人瘢痕疙瘩成纤维细胞 细胞外信号调节激酶 -
胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平变化及临床意义
目的 观察胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平变化特点,探讨其临床意义.方法 回顾性分析浙江省舟山医院自2012年1月～2014年6月消化内科及胃肠外科收治的84例胃癌患者为研究对象(观察组),选择30例健康人为对照组.采用qRT-PCR检测所有研究对象血清miR-200b和miR-200c水平,比较2组间血清miR-200b和miR-200c水平差异,探讨胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平与其临床及病理特点之间的关系.结果 胃癌组血清miR-200b和miR-200c水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).胃癌患者不同年龄、性别、分化程度和浸润深度之间血清miR-200b和miR-200c水平差异无统计学意义;较高临床分期及合并淋巴结转移的患者血清miR-200b和miR-200c水平明显低于较低临床分期和无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).血清miR-200b和miR-200c水平诊断胃癌的AUC分别为0.826(95％ CI:0.741 ～ 0.911,P＜0.001)和0.856(95％CI:0.778 ～0.935,P＜0.001).结论 胃癌患者血清miR-200b和miR-200c水平明显降低,并且与临床分期和淋巴结转移密切相关,检测血清miR-200b和miR-200c水平有助于判断胃癌并判断预后.
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miR-200c通过靶向调节AHNAK抑制胰腺癌细胞的侵袭
目的:探讨miRNA-200c(miR-200c)对胰腺癌细胞AHNAK基因的表达及细胞侵袭能力的影响.方法:在胰腺癌细胞SW1990和PANC-1中转染miR-200c类似物(miR-200c mimics)及其阴性对照(Scramble),利用实时定量PCR检测miR-200c的表达;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭;利用生物信息学方法预测miR-200c与AHNAK的3'非翻译区(3'UTR)结合位点;双荧光素酶报告实验验证结合能力;蛋白免疫印迹实验检测AHNAK的蛋白表达.结果:与阴性对照组相比,SW1990和PANC-1细胞转染miR-200c类似物后miR-200c的表达水平显著升高.过表达miR-200c后,显著抑制了胰腺癌细胞的侵袭能力.双荧光素酶报告实验结果显示,miR-200c能够与AHNAK的3'UTR结合;过表达miR-200c显著下调了AHNAK的蛋白表达.结论:miR-200c可以通过靶向调节AHNAK基因从而发挥抑制胰腺癌细胞侵袭的作用.
