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Wnt/β-catenin信号通路与肺纤维化的调控机制
Wnt/β-catenin信号转导通路是一条在进化中高度保守的信号通路,在哺乳动物发育、代谢、干细胞维持和肿瘤发生等基本生物学过程中,发挥重要作用.近期研究发现,Wnt/β-catenin信号通路在肺纤维化的发生发展过程中,起着不可替代的调控作用.现就有关Wnt/β-catenin信号通路调控肺纤维化的研究进展进行总结,为寻找肺纤维化的研究新方向与治疗新靶点提供支持.
关键词： Wnt/β-catenin信号通路 肺纤维化 抗纤维化治疗 -
大黄酸对高糖所致肾小球系膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响探讨
目的 观察高糖对人肾小球系膜细胞(HMC) Wnt/β-catenin信号通路的影响及大黄酸的干预作用.方法 体外培养人肾小球系膜细胞,同步化后采用加有高浓度葡萄糖(30 mmol/l)联合不同浓度大黄酸的无血清培养基培养.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)测量高糖(HG组)及大黄酸高浓度组(高糖十大黄酸10-4 mol/L,HG+R1组)、大黄酸中浓度组(高糖+大黄酸10-5 mol/L,HG+R2组)、大黄酸低浓度组(高糖十大黄酸10-6 mol/L,HG+R3组)干预后肾小球系膜细胞增殖活力.应用RT-PCR法检测正常培养及高糖作用后人肾小球系膜细胞Wnt/β-catenin基因的表达及大黄酸对其表达的影响.结果 ①对系膜细胞的抑制作用:与正常对照组(NG)组24h、48 h、72 h (OD值分别为0.169±0.051、0.228±0.074、0.285±0.075)比较,HG组(OD值分别为0.307±0.074、0.507±0.038、0.711±0.075)、HG+R1组(OD值分别为0.241±0.027、0334±0.015、0.499±0.063)、HG+R2组(OD值分别为0.244±0.081、0.386±0.033、0.531±0.011)、HG+R3组(OD值分别为0.277±0.036、0.407±0.057、0.594±0.042)细胞增殖均明显上升,差异均有统计学意义(P＜0.05、P＜0.01)；与HG组各时点相比,HG+R1组、HG+R2组、HG+R3组在24 h呈下降趋势,48 h、72 h下降趋势显著,表现为时间、浓度依赖性(P＜0.05、P＜0.01).②在基础状态下,系膜细胞表达一定量的Wnt/β-catenin经高糖刺激后,Wnt/β-catenin基因表达上调(P＜0.05),HG+R1组、HG+R2组、HG+R3组均可明显下调高糖刺激引起的系膜细胞Wnt/β-catenin基因表达(P＜0.05).结论 大黄酸可能通过下调Wnt/β-catenin基因的表达抑制高糖引起的HMC增殖.
关键词： 高糖 人肾小球系膜细胞 Wnt/β-catenin信号通路 大黄酸 -
活血化瘀法对鼠颈动脉粥样硬化损伤血管wnt/β-catenin信号通路的影响
目的:观察活血化瘀法对颈动脉粥样硬化血管内皮损伤模型大鼠wnt/β-catenin信号通路的影响,探讨其可能的作用机制.方法:32只SD大鼠高脂喂养1个月后,随机取8只作为假手术组(仅切开皮肤),其余大鼠均行颈总动脉球囊损伤术,成膜后再随机分为模型组(n=8只)、活血化瘀中药方中剂量(临床等效量)组(n=8只)和高剂量(临床2倍量)组(n=8只).从术后第4天开始予以相应药物灌胃治疗(模型组、假手术组灌等量生理盐水),2周后取术侧颈总动脉段,采用实时荧光定量PCR法捡测wnt、FzD1、AXIN1、GSK-3β、β-catenin、VEGF mRNA基因表达水平.结果:与假手术组比较,模型组wnt、FzD1、AXIN1、β-catenin、VEGF等mRNA水平降低,差异有统计学意义(P＜0.01),经活血化瘀中药方干预后,上述各基因mRNA水平均有不同程度升高,尤其是高剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P ＜0.05 ～0.01);只有GSK-3βmRNA水平各组无明显差异.结论:活血化瘀法可通过上调wnt/β-catenin信号通路表达,使损伤血管VEGFmRNA基因表达水平上升,提示该法可保护颈动脉粥样硬化血管内皮损伤.
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黄芪解毒方对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及C-myc基因表达的影响
目的:探讨黄芪解毒方对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及C-myc基因表达的影响.方法:胃癌细胞SGC7901分别用黄芪解毒汤浓缩液(实验组)及阿霉素溶液(阳性对照组)干预,无任何药物处理的胃癌细胞SGC7901细胞为对照组.应用MTT法及流式细胞法分别检测胃癌细胞SGC7901的增殖及凋亡情况,RT-PCR法检测细胞中C-myc基因表达.结果:实验组和阳性对照组随培养时间的延长细胞增殖抑制率均升高(P＜0.01),且实验组细胞培养48 h、72 h细胞增殖抑制率高于阳性对照组(P＜0.05).实验组和阳性对照组细胞凋亡率明显高于对照组(P＜0.01),实验组和阳性对照组2组间细胞凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05).对照组、实验组和阳性对照组C-myc mRNA相对表达量分别为(1.69±0.63)、(0.68±0.37)、(0.86±0.28),实验组和阳性对照组C-myc mRNA相对表达量低于对照组(P＜0.01),且实验组低于阳性对照组(P＜0.05).结论:黄芪解毒方可有效抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,并促其凋亡,其作用机制可能与下调C-myc基因表达相关.
关键词： 胃癌 黄芪解毒方 SGC-7901细胞 增殖 凋亡 c-myc基因 阿霉素 表达 恶性肿瘤 Wnt/β-catenin信号通路 -
Wnt/β-catenin信号通路在类风湿关节炎中的表达
类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是以滑膜炎为主要病理表现的系统性疾病,目前已有研究证实,Wnt/β-catenin信号通路是类风湿关节炎发生发展的关键环节.一方面Wnt/β-catenin信号通路活化促进成骨细胞增殖分化,促进骨组织修复;另一方面,成纤维样滑膜细胞中Wnt/β-caten in通路上调,促进成纤维样滑膜细胞增殖,加重软组织增生,破坏骨关节.因此如何通过调节Wnt/β-catenin通路抑制成纤维样滑膜细胞增殖的同时促进骨修复对RA治疗具有重要研究意义.
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Wnt/β-catenin信号通路调节软骨代谢作用于骨坏死疾病的研究进展
越来越多的学者认为骨坏死疾病的发生与软骨细胞代谢异常有关,而Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin 的激活能促进软骨细胞分化,同时也能促进软骨分化中的细胞死亡.因此暗示该通路能够通过调节软骨代谢影响骨坏死疾病的发生发展.其次,软骨细胞特异性β-catenin基因条件敲除小鼠模型的成功建立,有助于阐明Wnt/β-catenin 信号通路调节软骨代谢的作用机制,为骨坏死疾病的病机阐述以及针对性治疗提供支持.本文就Wnt/β-catenin信号通路、软骨代谢与骨坏死三者间的关系展开综述.
关键词： 软骨细胞 代谢 骨坏死 Wnt/β-catenin信号通路 综述文献 -
Wnt/β-catenin信号通路在肝癌转移侵袭中的调控机制
Wnt信号传导途径与肿瘤有着密切的关系,其通路的异常活化参与人类多种癌症的发病过程.转移和侵袭是肝癌的基本特征,也是影响肝癌治疗效果的重要因素.肝细胞癌的转移侵袭与Wnt/β-catenin信号通路密切相关.β-catenin是Wn叩-catenin信号传导途径中的关键调控因子,其表达程度与患者淋巴结转移及肝内转移呈正相关.此外,W nt/β-catenin信号通路下游转录因子T细胞因子4 (Tcf-4)基因表达与肝癌的转移密切相关.因此,Wnt/R-catenin信号通路成员基因突变和(或)异常表达奠定了肝癌细胞转移和侵袭的分子学基础.以Wnt/β-catenin信号通路为切人点,深入探讨肝细胞癌转移的作用机理和分子机制,对筛选肝细胞癌的预后指标和寻找新的治疗靶点、深化和完善肝细胞癌转移侵袭的基础理论研究具有十分重要的意义.
关键词： 肝细胞癌 Wnt/β-catenin信号通路 转移侵袭 -
芪玉三龙汤对肺癌小鼠肿瘤组织Wnt系列蛋白表达的影响
目的:探讨中药复方芪玉三龙汤对荷肺癌小鼠的抑瘤效应.方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组,化疗组,芪玉三龙汤高、中、低剂量组,联合组,每组8只;造模第2天开始芪玉三龙汤低、中、高剂量组小鼠分别按20.12、40.24、80.48g·kg-1·d-1灌胃给药,化疗组按照0.4mL顺铂腹腔注射给药,联合组以芪玉三龙汤高剂量灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组按照等量0.9％氯化钠溶液给药,1次/d,连续给药21d;称取瘤质量,计算抑瘤率;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织Wntl、Wnt2、Wnt5a蛋白水平.结果:与模型组比较,各用药组Wntl、Wnt2、Wnt5a蛋白水平均显著降低(P＜0.01);与化疗组比较,芪玉三龙汤中、高剂量组Wntl、Wnt2、Wnt5a蛋白水平均显著降低(P＜0.01).芪玉三龙汤高剂量组、联合组生存状态优于化疗组;其高剂量抑制肿瘤生长作用较优,但量效关系不明显,其与顺铂联用有一定增效作用.芪玉三龙汤对肺癌移植瘤具有温和的抑制作用,其高剂量抑瘤效应较优.结论:芪玉三龙汤和化疗药联用具有协同效应,对肺肿瘤具有一定的抑制作用.
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补肾舒脊颗粒对hBMSC软骨内成骨过程中Wnt/β-catenin信号通路的影响
目的:探讨补肾舒脊颗粒对hBMSC软骨内成骨过程中Wnt/β-catenin信号通路的作用.方法:原代hBMSC传至第3代后分为5组:补肾舒脊颗粒高、中、低剂量组,西药组,空白对照组,进行软骨细胞诱导分化,运用ELISA法检测细胞上清液中DKK-1表达,Western Blot和荧光定量PCR检测SOST、Wnt5a和p-catenin蛋白和基因表达.结果:与空白对照组比较,中药中、高剂量组DKK-1、SOST蛋白水平显著增高(P＜0.05,P＜0.01);与西药组比较,中药中、高剂量β-catenin蛋白降低(P＜0.05).与空白对照组比较,中药低、中、高剂量组及西药组SOST mRNA水平升高(P＜0.05),中药中、高剂量组及西药组Wnt5a mRNA水平下降(P＜0.05),中药低、中、高剂量组β-cateninmRNA水平下降(P＜0.05);与西药组比较,中药高剂量组SOST mRNA水平升高(P＜0.05),β-catenin mRNA水平降低(P＜0.05).结论:补肾舒脊颗粒可能能够抑制hBMSC软骨内成骨过程中的Wnt/β-catenin信号通路.
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丹参酮ⅡA对COX-2激活Wnt/β-catenin信号通路介导的人肠癌细胞VEGF表达的调控作用
目的:探讨丹参酮ⅡA通过环氧化酶-2 (COX-2)-Wnt/β-catenin信号通路调控人肠癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的作用机制.方法:分别采用PGE2和COX-2选择性抑制剂NS-398上调及抑制LoVo细胞COX-2表达,Western Blot检测COX-2对β-catenin蛋白表达的影响；分别采用丹参酮ⅡA、PGE2和/或GSK-3β选择性抑制剂SB-216763作用人肠癌HCT-116细胞24h,Western Blot法检测丹参酮ⅡA对COX-2和β-catenin蛋白表达的影响；ELISA法检测丹参酮ⅡA对VEGF表达的影响.结果:与对照组比较,PGE2能够显著上调LoVo细胞中COX-2蛋白表达,同时显著上调β-catenin在细胞总蛋白、浆蛋白和核蛋白中的表达水平；反之,COX-2抑制剂NS-398能够显著下调COX-2和β-catenin蛋白表达水平.丹参酮ⅡA能够显著下调COX-2和β-catenin蛋白在人肠癌LoVo细胞中表达水平,并且能够显著下调PGE2诱导的COX-2和β-catenin蛋白的高表达；同时,丹参酮ⅡA能够显著下调人肠癌LoVo细胞VEGF表达水平,并且能够下调PGE2和GSK-3 β抑制剂SB-216763诱导的VEGF高表达.结论:丹参酮ⅡA通过抑制人肠癌细胞中COX-2的表达,阻止细胞中β-catenin的累积,从而阻断Wnt/β-catenin信号通路,下调VEGF表达,这可能是丹参酮ⅡA抗大肠癌血管新生的作用机制之一.
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补肾活血方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用
目的:观察补肾活血方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用.方法:采用GSK-3 β选择性抑制剂SB-216763作用于正常人滑膜细胞,然后提取和检测胞核蛋白β-catenin的表达,确定激活正常人滑膜细胞的Wnt/β-catenin信号通路的佳时间点,然后给予补肾活血方含药血清干预,采用Western Blot检测人滑膜细胞胞核蛋白β-catenin及其下游基因MMP-7和Cyclin D1的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测滑膜细胞上清液中MMP-7和Cyclin D1的表达.结果:Western Blot结果显示:成功激活正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,与正常组比较,SB-216763干预组的人滑膜细胞核蛋白β-catenin、MMP-7和Cyclin D1的表达明显升高(P＜0.05);补肾活血方含药血清干预后,滑膜细胞胞核蛋白β-catenin及其下游基因MMP-7和Cyclin D1有显著下调(P＜0.05).ELISA结果显示:与正常组滑膜细胞比较,SB-216763干预的滑膜细胞上清液中MMP-7和Cyclin D1的表达明显升高(P＜0.05).而补肾活血方干预后较SB-216763干预组明显下调(P＜0.05).结论:补肾活血方具有调控人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的作用,其结果有助于从单一通路阐释补肾活血法中药治疗膝骨关节炎的作用机制.
关键词： 补肾活血方 人滑膜细胞 Wnt/β-catenin信号通路 实验研究 -
右归饮通过Wnt/ERK信号通路交叉串扰影响成骨细胞相关蛋白的表达
目的:观察细胞外信号调节激酶(ERK)、Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白在右归饮含药血清影响成骨细胞过程中的作用,明确右归饮含药血清对ERK、Wnt通路和ERK/Wnt交叉串扰的作用.方法:体外培养成骨细胞,分组,加药干预.培养3d后,应用ELISA检测Wnt/β-catenin及ERK通路相关蛋白β-catenin、Runx2、ERK蛋白表达情况.结果:右归饮含药血清能显著上调3种蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).联合阻断ERK、Wnt通路,3种蛋白表达水平较含药血清组有明显降低(P＜0.05,P＜0.01);与单独阻断其中一条通路比较,有明显下降(P＜0.01).单独阻断某一条通路,仅Runx2较右归饮含药血清组有明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:右归饮含药血清能显著增加成骨细胞活性,该作用与ERK、Wnt信号通路密切相关,且两条通路之间存在一定的交叉串扰作用.
关键词： Wnt/β-catenin信号通路 ERK信号通路 交叉串扰 右归饮 成骨细胞 -
骨质疏松肾阳虚、肾阴虚证型下右归丸含药血清对大鼠成骨细胞ERK1/2、Wnt/β-catenin信号通路的影响
目的:研究骨质疏松症(0P)肾阳虚和肾阴虚证型下右归丸含药血清对大鼠成骨细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)表达的作用,及对成骨细胞ERK1/2、Wnt/β-catenin信号通路相关因子β-catenin、ERK1、ERK2mRNA及蛋白表达的作用.方法:分别用OP肾阳虚、OP肾阴虚及OP组(对照组)所得的右归丸含药血清及空白血清干预成骨细胞,采用MTS法检测细胞增殖情况,ELISA法检测ALP表达,RT-PCR法检测ERK1、ERK2、β-catenin mRNA的表达,Western Blot法检测ERK1、ERK2、β-catenin蛋白的表达.结果:OP肾阳虚证型下右归丸含药血清在促进成骨细胞增殖、ALP表达以及对成骨细胞ERK1/2、Wnt/β-catenin信号通路相关因子β-catenin、ERK1、ERK2 mRNA及蛋白表达方面比OP肾阴虚证型下右归丸含药血清的作用更强.结论:与“右归丸补肾阳”的中医理论相吻合,为临床辨证治疗OP提供科学依据.
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鳖甲煎丸对肝癌细胞周期及Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、COX-2蛋白表达水平的影响
目的:研究鳖甲煎丸对肝癌细胞HepG2细胞周期、Wnt信号通路中β-catenin蛋白及其磷酸化水平、靶基因COX-2蛋白表达水平的影响,探讨鳖甲煎丸抗HepG2细胞增殖、黏附与侵袭的作用机制.方法:运用血清药理学方法,以鳖甲煎丸含药血清、空白血清及索拉菲尼含药血清分别培养HepG2细胞,采用流式细胞术、WesternBlot检测药物对细胞周期、Wnt信号通路中β-catenin、phospho-β-catenin(Ser675)、COX-2蛋白表达水平的影响.结果:鳖甲煎丸高中剂量组、索拉菲尼可使HepG2细胞发生C1期阻滞,下调HepG2细胞中β-catenin、COX-2、phospho-β-catenin(Ser675)蛋白表达水平.结论:鳖甲煎丸可抑制HepG2细胞增殖、黏附与侵袭,其机制可能与其使细胞发生G1期阻滞、减少β-catenin在细胞中的积聚、干预phospho-β-catenin(Ser675)的促转录作用、抑制靶基因COX-2表达具有相关.
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肾纤维化中医病机与Wnt/β-catenin信号通路的关系
肾纤维化是各类肾系疾病进展至终末肾衰竭的共同病理改变.大量的研究表明,Wnt/β-catenin信号通路参与肾纤维化的发生发展,可通过干预Wnt/β-catenin信号通路延缓肾纤维化的进展.中医药在延缓肾纤维化的治疗中取得了一定效果,但中医药通过干预Wnt/β-catenin信号通路延缓肾纤维化进展尚缺乏理论探讨.我们认为肾纤维化的中医病机为“虚、湿、瘀、毒”,虚、湿、瘀、毒形成的中医微型瘢积与现代医学认为Wnt/β-catenin信号通路激活后导致细胞外基质沉积引起肾纤维化形成的病理过程极其相似,并通过现代中药分子研究进一步佐证肾纤维化中医病机与Wnt/β-catenin信号通路的关系.
关键词： Wnt/β-catenin信号通路 肾纤维化 中医 -
健脾消癌方对人结肠癌HCT116细胞周期、凋亡及Wnt/β-catenin信号通路相关因子的影响
目的 观察健脾消癌方对Wnt/β-catenin信号通路相关因子及人结肠癌HCT116细胞周期、凋亡的影响,探讨其抗大肠癌复发转移的作用机制.方法 将对数生长期的HCT116细胞分为空白组、生理盐水组、5-Fu组及健脾消癌方低、中、高剂量组,分别干预48 h,收集细胞,采用流式细胞术检测细胞周期、凋亡, Western blot检测细胞核内β-catenin蛋白表达,PCR检测c-myc、cyclinD1 mRNA表达.结果 与空白组及生理盐水组比较,健脾消癌方各剂量组HCT116细胞凋亡比例、G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低,且其细胞核内β-catenin蛋白表达降低,c-myc、cyclinD1 mRNA表达降低,尤以健脾消癌方高剂量组明显,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 健脾消癌方可促进人结肠癌HCT116细胞凋亡并将其细胞周期阻滞,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路有关.
关键词： 健脾消癌方 大肠癌 Wnt/β-catenin信号通路 细胞凋亡 细胞周期 -
知母皂苷AⅢ抑制人脑胶质瘤增殖生长的机制研究
考察知母皂苷AⅢ抑制人脑胶质瘤U87MG细胞增殖的作用及机制 分析.在裸鼠皮下荷瘤模型中,知母皂苷AⅢ组与模型组相比,显著降低瘤重.知母皂苷AⅢ呈剂量 依赖性抑制U87MG细胞的体外增殖;呈剂量依赖性降低β-Catenin,Cyclin D1,Bcl-2的蛋 白表达,同时升高p21在蛋白和基因水平的表达;降低ERK磷酸化水平,抑制β-Catenin的核 转移,同时提高p38和JNK蛋白的磷酸化水平.联用JNK抑制剂SP600125和p38抑制剂SB203580后可逆 转知母皂苷AⅢ处理而提高的p21和降低的β-Catenin的蛋白表达.知母皂苷AⅢ部分通过干预 MAPK及Wnt/β-Catenin信号通路而抑制脑胶质瘤U87MG的增殖.
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丹参酮ⅡA抑制主动脉瓣成肌纤维细胞向成骨细胞样表型转化的机制
心脏瓣膜钙化是与多种病因有关、由心脏瓣膜细胞主动调节的病理生理过程.该研究以体外培养的猪主动脉瓣成肌纤维细胞作为研究对象,用与心脏瓣膜钙化有关的病理因素肿瘤坏死因子α(TNF-α) 50 μg·L-1处理细胞,将50 mg·L-1丹参酮ⅡA磺酸钠(TSN)与TNF-α共同孵育细胞72 h(3 d),120 h(5 d).采用Western blotting技术和Real-time PCR技术分别检测细胞中的平滑肌α肌动蛋白(α-SMA)、骨样表型相关的骨形成蛋白2(BMP2)、碱性磷酸酶(ALP)和Wnt/β-catenin信号通路上的关键效应蛋白GSK-3β,β-eatenin基因表达的变化.研究发现,TNF-α能使成肌纤维细胞α-SMA的表达明显增加而成为有转化活性的细胞;骨相关蛋白BMP2,ALP的蛋白和mRNA在对照组和TSN组几乎没有表达,而在TNF-α组表达显著增加(P＜0.01),呈现出成骨细胞样表型;Wnt/β-catenin信号通路中的上游调节蛋白GSK-3β的蛋白及mRNA表达在TNF-α组显著下调(P＜0.01),关键效应蛋白β-catenin的蛋白表达显著增加,但mRNA与对照组、TSN组比较没有明显差异;TSN对TNF-α的这种病理性影响可以起到一定的抑制作用(P＜0.05),并且存在时间依赖性效应(P＜0.05).炎性因子TNF-α可能通过激活心脏瓣膜成肌纤维细胞中的Wnt/β-catenin信号通路,促使心脏瓣膜成肌纤维细胞向成骨细胞样表型转化,进而导致心脏瓣膜的钙化.丹参酮ⅡA能够通过影响GSK-3β蛋白的活性,调控Wnt/β-catenin通路的信号传导,对由炎症所致的瓣膜钙化性疾病起到防治作用.
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骨质疏松肾阳虚和肾阴虚证型下左归丸含药血清干预成骨细胞ERK1/2,Wnt/β-catenin 信号通路的研究
该文研究骨质疏松(OP)肾阳虚和肾阴虚证型下左归丸含药血清对成骨细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)表达及对成骨细胞ERK1/2,Wnt/β-catenin信号通路相关因子β-catenin,ERK1,ERK2 mRNA及蛋白表达的作用.采用手术去卵巢法造成大鼠骨质疏松模型,并在手术10周后,分别注射氢化可的松、灌胃甲状腺素造成大鼠OP肾阳虚及OP肾阴虚模型;用新生24h乳鼠颅骨体外培养得成骨细胞,以碱性磷酸酶和茜素红染色进行鉴定,分别用OP肾阳虚、OP肾阴虚及OP组(对照组)所得的左归丸含药血清、空白血清干预成骨细胞,采用MTS法检测细胞增殖情况,ELISA法检测ALP表达,RT-PCR法检测ERK1/2,β-catenin mRNA的表达,Western blot法检测ERK1/2,β-catenin蛋白表达.结果表明:OP肾阴虚证型下左归丸含药血清在促进成骨细胞增殖、ALP表达、成骨细胞ERK1/2,Wnt/β-catenin信号通路相关因子β-catenin,ERK1,ERK2 mRNA及蛋白表达方面比OP肾阳虚证型下左归丸含药血清的作用更强.这与“左归丸滋肾阴”的中医理论相吻合,为临床辩证治疗骨质疏松症提供科学依据.左归丸通过ERK1/2和Wnt/β-catenin信号通路调控成骨细胞的增殖与分化,可能是左归丸防治骨质疏松肾阴虚证的机制之一.
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Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白在补肾活血颗粒含药血清影响成骨细胞过程中的表达及意义
目的 观察Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白在补肾活血颗粒含药血清影响成骨细胞过程中的作用,为补肾活血颗粒含药血清治疗骨质疏松症作用机制的阐明提供实验依据.方法 体外分离培养乳鼠颅骨来源成骨细胞,分为空白血清对照组和补肾活血颗粒含药血清组.连续培养6天后,定量检测各组成骨细胞的碱性磷酸酶活性,并进行碱性磷酸酶染色;18天后进行茜素红染色;同时应用酶联免疫法检测各组成骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白--β-连环蛋白(β-catenin)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP 5)和T细胞因子(TCF)的表达情况.结果 补肾活血颗粒含药血清能显著增加成骨细胞碱性磷酸酶的表达和促进矿化结节的形成.同时补肾活血颗粒含药血清也显著上调β-catenin、LRP 5和TCF的蛋白表达.结论 补肾活血颗粒含药血清能显著增加成骨细胞的成骨活性和矿化能力,这种作用与Wnt/β-catenin信号通路密切相关.提示Wnt/β-catenin信号通路在补肾活血颗粒治疗骨质疏松症的过程中发挥着重要作用.
关键词： Wnt/β-catenin信号通路 补肾活血颗粒 成骨细胞
