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miR-34a在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义
目的 研究miR-34a在甲状腺乳头状癌中的表达与临床病理特征的相关性.方法 采用PCR法检测20例甲状腺乳头状癌及癌旁组织中miR-34a定量.结果 甲状腺乳头状癌中miR-34a表达水平明显高于癌旁正常组织,其差异具有统计学意义(P<0.05);miR-34a的表达与甲状腺乳头状癌的年龄、性别、肿块大小、TNM分期、淋巴结转移及病灶数目无关(P>0.05).结论 miR-34a可能在与甲状腺乳头状癌的发生发展有相关性,有望成为甲状腺乳头状癌的肿瘤标记物和预后因子.
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手术去势、电切术联合间断性内分泌治疗晚期前列腺癌对患者血清VEGF、miR-34a及IGF-1水平的影响分析
目的:探讨手术去势、电切术联合间断性内分泌治疗晚期前列腺癌对患者血清VEGF、miR-34a及IGF-1水平的影响.方法:收集2012年1月至2014年6月来我院就诊的患者220例,随机分为试验组和对照组,各110例.对照组仅给予间断性内分泌治疗,试验组额外给予手术去势、电切术联合治疗,观察两组患者治疗前后血清VEGF、miR-34a及IGF-1水平变化.结果:治疗后试验组患者血清VEGF和IGF-1水平低于对照组,而miR-34a水平高于对照组,分别经t检验,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:手术去势、电切术联合间断性内分泌治疗晚期前列腺癌可显著降低患者血清VEGF和IGF-1,升高miR-34a水平.
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MiR-34a参与食管癌EMT的研究
目的:探讨miR-34a在食管癌上皮间质转化中的作用.方法:向食管癌细胞EC109转染miR-34a模拟物,以qRT-PCR检测效率.以Western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达.结果:伴随miR-34a表达升高,E-cadherin相应升高,Vimentin则下降(P<0.05).结论:miR-34a可促进食管癌EMT的发生.
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microRNA-34a在肺癌患者血清中的表达及可能的临床意义
目的:探寻肺癌患者血清中miR-34a的表达水平,探讨miR-34a的表达特征,及与肺癌诊断、发病机制的关系.方法:收集111例肺癌患者和101例正常人血清标本,提取血清中的小片段RNA,通过Real-time PCR法检测两组血清中miR-34a的表达水平,以探寻miR-34a与肺癌发病机制的相关性.结果:miR-34a在肺癌患者血清中表达上调,与正常对照组比较,miR-34a的表达水平均显著升高,具有统计学意义(P<0.05).结论:通过Real-time PCR技术检测miR-34a在肺癌患者血清中表达均上调,进一步分析得出,与正常对照组相比,miR-34a在肺癌患者血清中呈现异常高表达,可能与肺癌的发生密切相关.
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新加良附方抑制人胃癌细胞增殖的分子机制
目的:探讨新加良附方及其主要成分薯蓣皂苷药物血清对人胃癌细胞BGC-823的增殖抑制作用及可能的作用机制.方法:制备新加良附方及薯蓣皂苷药物血清,并作用于胃癌细胞株BGC-823,使用MTS方法检测细胞增殖抑制率;采取实时PCR方法观察新加良附方及薯蓣皂苷药物血清对人胃癌细胞BGC-823中caspase-3及p53表达的影响;采取实时PCR方法检测胃癌细胞中miR-34a表达水平.结果:新加良附方药物血清及薯蓣皂苷药物血清对胃癌细胞BGC-823有明显的增殖抑制作用,并且其作用与时间正相关.新加良附方对胃癌细胞的增殖抑制作用在48 h、72 h高于其主要成分薯蓣皂苷;人胃癌BGC-823细胞中caspase-3的表达明显低于其在正常胃黏膜上皮细胞GES-1中的水平,p53基因表达水平高于正常GES-1细胞中的p53表达水平.新加良附方药物血清及薯蓣皂苷药物血清作用于BGC-823细胞后其caspase-3表达水平均明显上升,且随着时间增加其表达量升高;p53基因表达水平下降,并且与时间负相关.新加良附方与其主要成分薯蓣皂苷相比较,两者对caspase-3、p53的调控作用无明显差畀;胃癌细胞中miR-34a表达水平高于正常胃黏膜上皮细胞GES-1.结论:新加良附方及其主要成分薯蓣皂苷可以显著抑制胃癌BGC-823细胞的生长,新加良附方对胃癌细胞的抑制作用高于其主要成分薯蓣皂苷.新加良附方及薯蓣皂苷抑制胃癌细胞增殖作用可能与增加凋亡相关蛋白caspase-3表达,抑制突变型p53表达相关.miR-34a可能发挥癌基因的作用,应明确其作用并进行下一步研究.
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miR-34a通过MMP2抑制脑胶质瘤细胞侵袭和转移
目的 探讨miR-34a通过其靶基因基质金属蛋白酶2(MMP2)对脑胶质瘤细胞侵袭和转移的影响.方法 选取U87和A172脑胶质瘤细胞,分组转染miR-34a摸拟物和抑制剂;利用RT-qPCR及Western blot观察脑胶质瘤细胞中miR-34a和MMP2的表达;经过microRNA数据库预测miR-34a与MMP2结合区域;构建MMP23′UTR野生型与突变型的荧光素酶质粒和miR-34a质粒,进行荧光素酶报告基因实验;Transwell侵袭和划痕实验观察U87细胞侵袭和迁移能力.结果 经筛选选用MMP2高表达细胞株U87和A172,过表达miR-34a后发现MMP2表达水平降低(P<0.05),降低miR-34a则MMP2表达升高(P<0.05);miR-34a结合MMP2 mRNA 3′UTR的特定序列降低MMP2水平(P<0.05);miR-34a通过MMP2抑制细胞侵袭和迁移(P<0.05).结论 在胶质瘤细胞中miR-34a下调MMP2,进而抑制细胞侵袭和迁移能力.
关键词： miR-34a 基质金属蛋白酶2(MMP2) 胶质瘤 侵袭和转移 -
成人急性淋巴细胞白血病骨髓中miR-34a的表达及其在细胞耐药中的意义
目的:探讨miR-34a在成人急性淋巴细胞白血病(ALL)骨髓中的表达及其与耐药性的关系.方法:47例初诊ALL患者,分别于初诊和复发或完全缓解时留取骨髓样品,初诊-完全缓解组标本26对,初诊-复发组标本21对.利用实时荧光定量PCR对患者骨髓样品、人CCRF-CEM细胞株及其耐药株CEM-C1细胞中miR-34a表达水平进行检测.利用电穿孔转染法抑制CCRF-CEM细胞并上调CEM-C1细胞中miR-34a表达,分别用不同浓度喜树碱进行培养,利用CCK-8法对细胞存活情况进行分析,计算细胞增殖抑制率(％)和耐药指数(RI).结果:初诊-完全缓解组中,初诊时患者骨髓样品中miR-34a表达水平显著低于完全缓解时和对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05),初诊-复发组中,初诊时和复发时患者骨髓样品中miR-34a相对表达量均低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);miR-34a在CEM-C1细胞中表达水平为(2.64±1.37),显著低于CCRF-CEM细胞中的(5.14±2.06) (P＜0.05);转染miR-34a抑制物的CCRF-CEM细胞中miR-34a表达水平为(3.14±1.15),显著低于miR-NA抑制剂阴性对照CCRF-CEM细胞(P＜0.05),转染miR-34a抑制物的CCRF-CEM细胞增殖抑制率显著高于转染阴性对照细胞(P＜0.05),IC50分别为28.73和2167.00 ng/ml,RI =75.43;转染miR-34a模拟物的CEM-C1细胞中miR-34a表达水平(5.06±1.73),显著高于miRNA模拟物阴性对照CEM-C1细胞(P＜0.05),转染miR-34a模拟物的CCRF-C1细胞增殖抑制率显著低于转染阴性对照细胞(P＜0.05),IC50分别为112.57 ng/mL和1.27 ng/mL,RI=88.64.结论:miR-34a在成人ALL骨髓样品中呈低表达,可能与ALL复发及耐药性的发生有关.
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miR-34a在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达与临床预后的关系
目的:探讨miR-34a在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)患者血清中的表达,分析其与BCL-2蛋白表达及临床预后的相关性.方法:收集患者临床资料并筛选出临床资料完整的DLBCL患者65例和淋巴结反应性增生(reactive lymphoid hyperplasia,RH)患者22例,利用实时荧光定量PCR方法检测两类患者中miR-34a和BCL-2的表达情况,分析miR-34a表达水平与DLBCL患者免疫亚型,临床病理特征及预后的关系.结果:实时荧光定量PCR检测发现,miR-34a在DLBCL中呈低表达,BCL-2在DLBCL中呈高表达,miR-34a表达水平与BCL-2的表达水平呈负相关(P＜0.001).miR-34a高表达的患者生存时间明显长于miR-34a低表达者.多因素Cox回归分析显示,miR-34a表达(P=0.002),分期(P=0.001)和BCL-2表达(P =0.001)是影响DLBCL预后的独立因素.结论:miR-34a在DLBCL中低表达,miR-34a表达可能参与了DLBCL的发生发展过程.miR-34a的表达与患者的预后相关.
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miR-34a调控Notch-1/NF-κB信号通路对脓毒症小鼠脑功能的保护作用
目的 观察脓毒症小鼠脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10及其Notch-1、NF-κBmRNA及其蛋白表达的动态变化,通过构建miR-34a过表达慢病毒载体及包装,并进行鞘内注射,研究其调控Notch-1/NF-κB信号通路对脓毒症小鼠脑组织各指标的影响.方法 将清洁级小鼠54只随机(随机数字法)分为假手术组(sham组,n=9,仅行腹腔开关术),模型组(CLP组,n=15,采用盲肠结扎穿孔模型),阴性对照组[NC组,n=15,鞘内注射阴性对照慢病毒(滴度为5×108 TU/mL)5μL/d,共3d,第7天行CLP术],干预组[n=15,鞘内注射miR-34a慢病毒(滴度为5×108 TU/mL)5μL共3d,第7天行CLP术],各组小鼠均于术后24h,麻醉后处死,留取脑组织标本.观察小鼠行为学变化,术后24 h进行神经功能评分;用EHSA法分别测定脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的水平;用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR)法测定脑组织Notch-1、NF-κB mRNA表达;用Western Blot法测定脑组织Notch-1、NF-κB蛋白表达;并观察脑组织病理学改变.结果 与sham组比较,CLP组在术后24h点神经功能评分、TNF-α、IL-6水平、NF-κB mRNA及其蛋白表达(P＜0.01)、IL-1β显著升高(P＜0.05),IL-10水平、Notch-1 mRNA及其蛋白表达显著下降(P＜0.01),NC组在术后24h点神经功能评分、TNF-α、IL-1β水平、NF-κB蛋白表达(P＜0.01)、IL-6水平显著升高(P＜0.05),IL-10水平、Notch-1 mRNA及其蛋白表达显著下降(P＜0.01),NF-κB mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05);与CLP组比较,干预组在术后24h点TNF-α水平(P＜0.01)、NF-κB mRNA(P＜0.05)及其蛋白表达(P＜0.01)显著下降,神经功能评分、IL-1β、IL-6水平差异无统计学意义(P＞0.05),IL-10、Notch-1 mRNA(P＜0.05)及其蛋白表达(P＜0.01)显著升高,NC组各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).光镜下见CLP术后24h脑组织损伤,干预组脑损伤有所减轻.结论 miR-34a调控Notch-1/NF-κB信号通路对脓毒症小鼠脑功能有一定保护作用.
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超声微泡介导miR-34a联合DOX治疗小鼠U14皮下移植瘤的实验研究
目的 研究超声介导载miR-34a、DOX微泡对小鼠U14宫颈癌皮下移植瘤联合治疗效果.方法 制备载miR-34a、DOX高分子微泡,检测一般性质;建立小鼠皮下移植瘤模型,随机分为:模型组、空微泡组、DOX微泡组、miR-34a微泡组、miR-34a联合DOX微泡组;超声微泡治疗小鼠皮下移植瘤,绘制肿瘤生长曲线图,计算抑瘤率;RT-PCR检测各组小鼠肿瘤组织miR 34a基因表达情况;免疫组织化学染色法检测肿瘤微血管密度(MVD)和凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达情况.结果 自制高分子微泡呈球形,分布均一,平均粒径1.87 μm,包封率为46.24％,载药量为10.58％;与模型组相比,各治疗组肿瘤生长减慢,肿瘤质量体积显著下降,联合治疗效果更佳并与单一作用比较具有显著差异(P＜0.05);聚合酶链式反应(RT-PCR)结果显示,miR-34a组和联合组肿瘤组织中miR-34a高表达;DOX组、miR-34a组和联合组免疫组织化学染色检测肿瘤微血管密度(MVD)降低,凋亡蛋白Bcl-2表达下调,Bax高表达,联合组更加明显(P＜0.05).结论 超声微泡介导的miR-34a和DOX的共同递送可以实现肿瘤抑制的协同效应.
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miR-34a靶向调控c-MET促进胰腺癌发展的分子机制及临床意义
目的 检测胰腺癌组织及BxPC3细胞的miR-34a表达,明确其靶基因,分析miR-34a及其靶基因的表达与胰腺癌临床病理参数的关系以及对BxPC3细胞增殖和转移能力的影响.方法 通过c-MET-3'UTR双荧光素酶报告载体分别克隆c-MET野生型及突变型的3’-UTR,以验证c-MET是miR-34a的靶基因.采用脂质体方法建立过表达miR-34a(miR-34a组)及抑制c-MET表达(c-METsi组)的BxPC3细胞,采用荧光定量PCR、蛋白质印迹法及免疫组织化学法分别检测miR-34a、c-MET mRNA及蛋白表达.应用CCK-8法及Transwell小室实验检测各组BxPC3细胞增殖及转移能力的变化.结果 miR-34a组细胞c-MET野生型的3’-UTR荧光素酶活性较对照组显著下调[(65.00±4.04)％比100％,P=0.00131)],而c-MET突变型两组间差异无统计学意义,证实c-MET是miR-34a的靶基因.胰腺癌组织miR-34a表达较癌旁正常组织平均下调1.92倍,差异有统计学意义(P =0.003).与对照组比较,miR-34a组细胞c-MET mRNA及蛋白表达显著下降(0.045 ±0.003比0.085±0.001、0.400±0.058比1.133±0.120).培养4d后,miR-34a组和c-METsi组细胞增殖活力较对照组显著下降(P值分别为0.0012、0.0001);穿膜细胞数显著减少(231±12比351±16,P=0.0039;259±7比351±16,P=0.0066),差异均有统计学意义.胰腺癌组织miR-34a高表达、c-MET阳性表达与TNM分期、肿瘤分化程度相关,而与其他临床病理参数无显著相关性,且miR-34a表达与c-MET表达呈负相关(P＜0.001).结论 miR-34a在胰腺癌组织中低表达,其抑癌活性部分可能通过抑制c-MET表达得以实现;过表达miR-34a或抑制c-MET表达有望成为胰腺癌新的诊治靶点.
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联合使用miR-34a及miR-let7对胰腺癌细胞生物学特性的影响
目的 探讨联合使用两种具有抑癌作用的microRNA (miRNA)同时转染人胰腺癌细胞对其生物学特性的影响.方法 采用脂质体法将miR-34a及miR-let7单独或同时转染胰腺癌PANC1、SW1990细胞及正常胰腺腺泡AR42J细胞,以转染阴性对照miRNA(miR-NC)组及未转染组作为对照.应用qRT-PCR法检测各组细胞miR-34a及miR-let7的表达,MTT法检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 MiR-34a转染组、miR-let7转染组、双转染组细胞的miR-34a、miR-let7表达水平均较miR-NC转染组及未转染组显著上调,差异有统计学意义(P值均＜0.05),表明miRNA成功转染了细胞.双转染组的PANC1、SW1990细胞增殖活性分别为(0.665±0.010)％、(0.638±0.030)％,较miR-NC转染组的(0.974 ±0.030)％、(0.971±0.050)％,miR-let7转染组的(0.888±0.050)％、(0.863±0.060)％显著被抑制,差异有统计学意义(P值均＜0.05),较miR-34a转染组的(0.795±0.060)％、(0.793±0.060)％下降,但差异无统计学意义.AR42J细胞的增殖活性无显著变化,差异无统计学意义.PANC1细胞miR-34a转染组、miR-let7转染组的穿膜细胞数分别为(103.70±3.28)、(100.70±1.76)个/200倍视野,较miR-NC转染组的(231.30±2.60)个/200倍视野及未转染组的(153.70±2.60)个/200倍视野显著减少,双转染组穿膜细胞数为(61.67±3.18)个/200倍视野,又较两个单转染组显著减少,差异均有统计学意义(P值均＜0.01).细胞迁移实验与侵袭实验的结果一致.SW1990细胞侵袭及迁移能力的变化与PANC1一致.PANC1细胞的miR-34a转染组、miR-let7转染组、双转染组、miR-NC转染组、未转染组的细胞凋亡率分别为(16.66±1.27)％、(15.46±0.33)％、(23.35±1.80)％、(9.33±0.31)％、(8.83±0.36)％.两单转染组的细胞凋亡率较miR-NC转染组、未转染组显著增加;双转染组又较miR-let7组显著增加,差异有统计学意义(P值均＜0.05),而双转染组与miR-34a转染组的差异无统计学意义.结论 双转染的胰腺癌细胞增殖活性、细胞迁移和侵袭力均较单转染细胞显著下降,而细胞凋亡率较单转染细胞显著增加,双转染能够发挥更加显著的协同抗肿瘤作用.
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MiR-34a对人脐静脉内皮细胞端粒酶活性的影响
目的 研究miR-34a对脐静脉内皮细胞端粒酶活性及细胞衰老的影响.方法 原代培养人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),通过传代培养,计算细胞群体倍增水平(Population doublings,PDL),得到年轻的内皮细胞(PDL8)及衰老细胞模型(PDL44),检测两组细胞SIRT1、hTERT、c-myc、p53及miR-34a表达水平的差异.并在PDL8细胞中过表达miR-34a,PDL44细胞中抑制miR-34a的表达,qPCR检测以上基因表达水平、TRAP-qPCR法检测端粒酶活性、SA-β-gal法显示细胞衰老状态的变化.结果 SIRT1、hTERT、c-myc基因在PDL44的HUVECs细胞中表达下调,p53及miR-34a表达上调.PDL8 HUVECs过表达miR-34a 48h后,SIRT1和hTERT表达分别下调43％和25％,TRAP-qPCR显示端粒酶活性降低21％,SA-β-gal法染色阳性细胞百分比由5.1％上升至8.7％;PDL44 HUVECs抑制miR-34a的表达,SIRT1和hTERT表达水平分别上调63％和30％,端粒酶活性上升20％,SA-p-gal法染色显示衰老细胞数量未见显著性变化.结论 MiR-34a可以抑制内皮细胞SIRT1、hTERT基因表达及端粒酶活性,加速细胞衰老;抑制miR-34a可以上调SIRT1及hTERT表达,端粒酶活性升高;因此miR-34a可能通过抑制SIRT1表达和端粒酶活性的共同作用,参与内皮细胞衰老的调节.
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松果菊苷通过上调miR-34a减轻心肌细胞缺血再灌注损伤
目的 探究松果菊苷对心肌细胞缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用及microRNA-34a(miR-34a)表达的影响.方法 培养鼠胚胎H9c2心肌细胞,建立IRI模型,并随机分为对照组、模型组、阳性药物(盐酸地尔硫卓)组及松果菊苷低、中、高剂量组.阳性药物组造模时用含10％盐酸地尔硫卓血清处理;松果菊苷(ECH)各处理组造模时用含10％对应浓度的ECH血清处理.MTT法检测各组细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;试剂盒检测细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;qRT-PCR检测细胞miRNA-34a水平.结果 ①心肌细胞IRI后细胞存活率较对照组显著降低(P<0.05);阳性药物组和ECH中、高剂量组心肌细胞存活率较模型组显著升高(P<0.05);ECH中、高剂量组心肌细胞存活率与阳性药物组间的差异无统计学意义(P>0.05).②流式细胞仪结果显示,心肌细胞IRI后细胞凋亡率较对照组显著升高(P<0.05);阳性药物组和ECH中、高剂量组心肌细胞凋亡率较模型组显著降低(P<0.05);ECH高剂量组心肌细胞凋亡率较阳性药物组显著降低(P<0.05).③心肌细胞IRI后生成LDH、CK、MDA量较对照组显著升高(P<0.05),SOD活力较对照组显著降低(P<0.05);阳性药物组和ECH中、高剂量组心肌细胞生成LDH、CK、MDA量较模型组显著降低(P<0.05),SOD活力较对照组显著升高(P<0.05).④qRT-PCR结果显示,心肌细胞IRI后细胞miRNA-34a水平较对照组显著升高(P<0.05);阳性药物组和ECH各剂量组心肌细胞miRNA-34a水平较模型组显著升高(P<0.05).结论 松果菊苷对心肌细胞IRI后具有显著保护作用,其机制可能与miR-34a表达上调有关.
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Microrna-34a靶向Sirt1调控IL-1β诱导的软骨细胞凋亡研究
背景:骨关节炎以软骨细胞凋亡为主要病理改变,miR-34a在软骨细胞凋亡中起重要作用,研究miR-34a调控软骨细胞凋亡的机制可为预防、治疗骨关节炎提供重要依据.目的:研究miR-34a靶向Sirt1调控IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的作用机制.方法:建立IL-1β诱导的软骨细胞模型,DAPI染色及流式细胞术观察软骨细胞凋亡,双荧光素酶报告基因实验验证miR-34a靶向Sirt1,RT-PCR检测miR-34a及Sirt1 mRNA表达,Western Blot检测Sirt1及Bcl-2的蛋白表达.结果:IL-1β干预细胞后,软骨细胞发生凋亡,miR-34a的表达升高,Sirt1及Bcl-2的表达降低;同时双荧光素酶报告基因实验证实在软骨细胞中miR-34a靶向Sirt1.结论:在IL-1β诱导的软骨细胞凋亡模型中,miR-34a可以靶向Sirt1调控软骨细胞凋亡,过表达miR-34a,导致Sirt1及Bcl-2表达降低,从而促进软骨细胞凋亡.沉默miR-34a可能成为治疗骨关节炎的新方法.
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miR－34a调节骨稳态在骨质疏松中的应用前景
miR－34a是一个非编码蛋白的单链小分子RNA，在转录水平上通过碱基配对3’－端非翻译区域抑制靶基因表达，多用于肿瘤学的研究中，可通过下调原癌基因的表达抑制肿瘤细胞生长，近年发现其参与骨代谢过程中骨稳态的调节。 Tgif2通过与DNA结合或与TGFβ激活的Smads相互作用抑制TGFβ基因表达而抑制成骨细胞的增殖，且Tgif2与RNAKL通路形成一个正反馈循环，RNAKL通路诱导的转录因子增加Tgif2活性，Tgif2又反过来促进RNAKL通路中转导因子的活性，从而促进破骨细胞的生长分化，miR－34a主要通过下调Tgif2基因的表达，促进成骨细胞增殖，且miR－34a下调Tgif2表达时，也间接抑制了OPG／RANK／RANKL通路的转导，抑制破骨细胞增殖、分化。同时MiR－34a是肿瘤抑制基因P53常见的转录靶点，P53不仅在转录水平对miR－34a进行调节，而且影响miR－34a前体形成和成熟。 P53、miR－34a及Tgif2三者相互作用，直接影响成骨破骨细胞的增殖与分化，且与多个经典信号通路均有交叉，如OPG／RANK／RANKL 通路、 Wnt／β－catenin经典信号通路，参与经典通路中相关因子的调节，间接影响骨稳态。因此，研究miR－34a如何调节成骨破骨分化及协调细胞内其他调节通路共同维持骨稳态将会成为防治骨质疏松症的重要研究方向。
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microRNA-34a靶向抑制Notch-1基因对膀胱癌J82细胞增殖和迁移的影响
目的 探讨microRN A-34a( miR-34a)通过靶向抑制Notch-1基因表达对人膀胱癌J82细胞增殖和迁移的影响. 方法 查询基因组数据库,应用基因预测软件进行生物信息学分析,预测miR-34a可能靶向调控Notch1基因；实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹法分别检测16例浸润性膀胱癌组织及质粒转染的膀胱癌J82细胞的miR-34a和Notch1表达情况；萤光素酶实验检测miR34a与Notch1基因的结合位点；将miR-34a表达质粒转染J82细胞,新型四唑氮盐化合物比色法和迁移实验评估miR-34a对细胞增殖和迁移的影响. 结果 浸润性膀胱癌组织miR-34a的表达中位数为0.016,四分位数间距0.018；Notch1基因表达中位数为2.765,四分位数间距2.156；癌旁组织miR34a表达中位数为0.042,四分位数间距0.059；Notch1基因表达中位数为2.312,四分位数间距1.365,组间差异均有统计学意义(P＜0.01)；浸润性膀胱癌组织的Notch1蛋白表达量为0.857±0.197,癌旁组织为0.648 ±0.171,组间差异有统计学意义(P＜0.01).质粒转染J82细胞,miR-34a表达质粒组miR-34a的表达量为(2.408±0.789)×10-4,对照质粒组为(0.153±0.029)×10-4(P=0.0026)；miR-34a表达质粒组Notch1基因表达量为3.001±0.106,对照组为4.998±1.053 (P=0.0308)；miR-34a表达质粒组Notch1蛋白表达量为0.747±0.050,对照组为0.988±0.102(P=0.0215)；miR-34a表达质粒组细胞萤光素酶活性为0.422±0.028,对照组为2.392±0.148(P＜0.0001),组间差异均有统计学意义；miR-34a表达质粒组细胞增殖受到抑制,细胞迁移数量为179.3±21.02,对照组为269.7±23.71,组间差异有统计学意义(P=0.0078). 结论 miR-34a可与Notch1基因的3’非翻译区(3'UTR)结合靶向抑制Notch1基因表达,进而抑制了膀胱癌J82细胞的增殖和迁移.
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微小核糖核酸-34a在膀胱癌组织中表达的临床意义
目的 探讨微小核糖核酸-34a(miR-34a)在膀胱癌组织中表达的临床意义. 方法 膀胱癌手术切除标本42例,按照UICC 2002 TNM临床分期系统,非肌层浸润性癌17例,肌层浸润性癌25例；按照WHO 1973分级系统,低级别18例,高级别24例.癌旁5 cm正常膀胱黏膜标本42例作为对照组.采用荧光实时定量PCR法检测组织中miR-34a的基因表达水平.应用化学方法合成成熟miR-34a瞬时转染膀胱癌T24细胞,流式细胞术检测miR-34a对T24细胞凋亡和生长增殖的影响. 结果 42例膀胱癌组织标本中miR-34a显著低表达26例(61.9％),不表达11例(26.5％),高表达5例(11.6％),且miR-34a的低表达与肿瘤大小及恶性程度相关,肿瘤越大,恶性程度越高,miR-34a表达量越低.转染miR-34a模拟物后T24细胞生长增殖明显受抑,细胞凋亡率为(9.11±0.41)％,与阴性对照组(3.05±0.29)％和空白对照组(3.73±0.55)％相比差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 低表达miR-34a可能是膀胱癌组织重要的生物学特征,并参与膀胱癌的生物学进程.
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miR-34a与乳腺癌复发及预后的相关性研究
目的 探讨miR-34a在乳腺癌复发及预后中的作用.方法 88例乳腺癌患者均施行改良根治术,并有完整的随访资料.采用实时定量PCR(real-time qPCR)对原发肿瘤蜡块提取的microRNA进行miR-34a表达水平的测定,配对t检验比较癌组织和正常组织中miR-34a的水平差异,Mann Whitney-U非参数检验比较miR-34a表达水平和乳腺癌临床病理参数的关系,预后分析采用Kaplan-Meier生存分析和Log-rank计算,多因素统计分析采用Cox回归.结果 相比癌旁正常组织,在癌组织中miR-34a表达明显下调(P＜0.001),在组织学高分级的乳腺癌中miR-34a表达水平明显低于中低分级的乳腺癌(P=0.024)；在随访中复发的乳腺癌患者中,miR-34a表达水平明显低于无复发的乳腺癌(P =0.008).miR-34a表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、激素受体ER/PR表达、HER2状态、脉管瘤栓、组织学类型、肿瘤病理分期及月经状态等未见明显关联(P＞0.05).以中位值2-△Ct =0.117为截断值,Kaplan-Meier生存分析表明,miR-34a高表达患者其乳腺癌无复发生存率(P =0.026)及总生存率(P=0.019)均高于miR-34a低表达患者.结论 miR-34a可促进组织分化,其表达下调增加肿瘤复发,可做为乳腺癌侵袭潜能的预测指标.
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术中腹腔内植入氟尿嘧啶对结直肠癌患者免疫功能及miR-34a、ZEB2表达的影响
目的 探讨术中腹腔内植入氟尿嘧啶(5-Fu)对结直肠癌患者免疫功能及miR-34a、ZEB2表达的改变以及生存影响.方法 选择2014年1月至2016年12月在延安大学咸阳医院接受根治性手术治疗的结直肠癌患者92例,采用随机数字表法分为2组,各46例.对照组患者行腹腔镜下结直肠癌根治性切除术,观察组在关腹前给予5-Fu植入剂,术后两组均给予营养支持及预防性使用抗生素.对比两组患者1年生存率、复发率、免疫功能及miR-34a、ZEB2血清表达情况.结果 (1)两组术后住院时间差异无统计学意义(t=0.251、P=0.401).观察组无病生存时间为(10.26±1.29)个月,显著长于对照组的(8.92±1.02)个月,差异有统计学意义(t=-5.526,P<0.01).对照组1年生存率为78.26％(95％CI=72.13％～84.39％),观察组1年生存率为95.65％(95％CI=93.91％～97.39％),两组比较,差异有统计学意义(χ2=5.896,P=0.015).(2)治疗后两组各免疫指标均呈明显下降后升高的趋势(P<0.05),术后2 d时观察组IgM明显高于对照组(P<0.05),术后7 d时观察组IgA与CD4+明显低于对照组(P<0.05).(3)治疗前两组血清miR-34a及ZEB2蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(t=-1.097、1.392,P=0.259、0.138).治疗后7 d时,观察组和对照组miR-34a蛋白表达均明显升高(t=3.975、-3.718,P=0.001、0.005),ZEB2蛋白表达明显下降(t=6.279、4.183,均P<0.001),但观察组miR-34a及ZEB2蛋白表达水平的变化幅度较对照组更为明显(t=-2.813、4.118,P=0.029、<0.001).结论 结直肠癌患者术中腹腔内植入5-Fu对患者1年生存率及复发率均无明显影响,但对患者免疫功能有一定抑制作用,可改善miR-34a低表达,抑制ZEB2高表达.
