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超声微泡造影剂促进GFP质粒转染喉癌细胞的效果
目的:观察超声微泡造影剂促进GFP质粒转染喉癌细胞的可行性及有效性.方法:将喉癌细胞随机分成4组,分别为A组:空白对照组(PBS);B组:GFP+微泡组;C组:GFP+超声组;D组:GFP+超声+微泡组,转染48h后,采用Western blot和RT-PCR检测喉癌细胞中GFP蛋白和mRNA的表达.结果:通过超声照射微泡造影剂促进GFP质粒转染喉癌细胞,D组中GFP蛋白和mRNA的表达量明显高于其他3组(P＜0.05),这说明D组的转染效率明显高于其余3组.结论:微泡在一定频率和强度的超声作用下能够安全、有效地将GFP质粒转染喉癌细胞.
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超声空化技术在临床中的应用
基于空化物理效应及空化泡辐射声信号光谱分析的超声空化是一种新兴的技术,它与相关造影剂的联合使用在临床中具有安全、高效和可再生的优势,特别是在计划治疗和监控治疗中存在着巨大潜力.本文对超声空化技术在临床诊断、溶栓、治疗和止血等方面做一综述,并对其在临床医学中的发展进行了展望.
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超声靶向微泡破坏联合核因子κB结合基序促进SDF-1α质粒转染血管内皮细胞
目的 应用超声靶向微泡破坏技术(UTMD)和核因子κB(NF-κB)结合基序分别促进人基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)质粒进入细胞质和细胞核,提高对血管内皮细胞的转染效率.方法 构建含NF-κB结合基序的人SDF-1α质粒(phSDF-1α-NF-κB)和不含NF-κB结合基序的人SDF-1α质粒(phSDF-1α),用核酸染料Cy3标记后在优化的UTMD条件下分别转染人脐静脉血管内皮细胞.流式细胞仪检测质粒入胞效率；荧光显微镜观察质粒入核情况；RT-PCR、Western印迹和ELISA分别从基因水平和蛋白水平检测SDF-1α质粒的表达.比较两种质粒的入胞率、入核率以及表达率以评价UTMD和NF-κB结合基序对转染的作用.结果 UTMD能显著提高质粒的入胞效率(81％±7％),同时保持较高细胞存活率(86％±6％).含NF-κB结合基序组的质粒入核效率和蛋白表达效率均较不含NF-κB结合基序组显著提高[65％±12％比10％±3％,(63±10)比(15±5)μg/g蛋白,均P＜0.01].结论 UTMD联合NF-1κB结合基序转染系统通过提高质粒的人胞和入核效率能显著提高SDF-1α质粒对血管内皮细胞的转染效率.
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超声微泡介导基因治疗在骨科领域的应用进展
基因治疗为骨科疾病的防治工作开辟了一个新途径,成功的基因治疗关键在于安全高效易用的基因载体和转基因技术,这也是传统基因治疗方法一直未予解决的难题.靶向超声微泡是一种很有潜力的基因递送治疗方法,目前已经运用于缺血性心肌病、抗肿瘤、抗血栓、促骨折愈合等领域.文章主要对超声微泡介导的基因治疗在骨科领域的应用进展作简要综述.
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载多西紫杉醇脂质超声微泡造影剂对兔VX2肝癌增殖和凋亡的作用
目的 研究载多西紫杉醇脂质超声微泡造影剂对兔VX2肝癌的作用.方法 建立兔VX2肝癌动物模型,将实验兔30只随机分为6组,比较各组的肿瘤生长率、TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡、免疫组化法检测PCNA的表达情况.结果 治疗后载药微泡+超声组肿瘤生长速度明显减慢,其肿瘤生长率与其他各组相比差异有显著性(P<0.01);载药微泡+超声组的凋亡指数显著高于其他各组(P<0.01);载药微泡+超声组的肿瘤增殖受到明显抑制,其增殖指数明显低于其他各组(P<0.01).结论 载多西紫杉醇脂质超声微泡造影剂在超声作用下能延缓兔VX2肝癌的增殖、促进其凋亡,对VX2肝癌具有显著的生长抑制作用.
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超声微泡造影剂联合survivin反义寡核苷酸对CHG-5细胞的阻断作用
目的 探讨超声微泡造影剂联合survivin反义寡核苷酸对人胶质瘤细胞系CHG-5的阻断作用.方法 针对survivin基因序列设计合成survivin反义寡核苷酸,将实验分为4组.A组:survivin反义寡核苷酸(ASOND)并超声微泡造影剂联合超声照射;B组:survivin反义寡核苷酸(ASOND)并脂质体转染联合超声照射;C组:survivin反义寡核苷酸(ASOND)并脂质体转染;D组:空白对照组.利用免疫细胞化学及Western blotting检测survivin蛋白的表达变化,MTT法检测细胞增殖的变化.结果 采用超声微泡造影剂联合超声照射介导的survivin反义寡核苷酸基因组,CHG-5细胞中survivin蛋白表达无论是免疫组化检测结果还是Western blotting检测结果都较其他组明显降低(P＜0.05),CHG-5细胞生长率也明显受到抑制(P＜0.05).结论 超声微泡造影剂介导的survivin反义寡核苷酸转染是一种无创、新型、高效的基因转染方法.
关键词： Survivin基因 反义寡核苷酸 造影剂 超声微泡 细胞转染 -
超声微泡介导野生型P53联合RB94基因转染HXO-Rb44细胞的实验研究
目的 探讨超声微泡介导抑癌基因wtp53和Rb94基因转染对视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞的生长抑制作用.方法 以一定能量的超声介导wtp53、Rb94单独或联合转入视网膜母细胞瘤细胞株HXO-Rb44中,RT-PCR证实外源目的基因的表达后,MTT法检测不同基因转染后细胞的生长情况；转染48 h后流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞bax蛋白表达.结果 RT-PCR结果显示单独或联合转染两基因的细胞,转入的外源性基因均被表达.与未转染的空白组HXO-Rb44细胞相比,联合转染wtpP53及Rb94基因的细胞生长速率明显降低,细胞增殖受抑制明显,细胞凋亡率高,凋亡相关蛋白bax表达量多.结论 超声微泡联合转染wtp53及Rb94基因比单独转染wtp53或Rb94基因在抑制HXO-Rb44细胞生长效应方面效果更强.
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L-S靶向超声造影微泡淋巴结造影的实验研究
目的 探讨自制L-S (lymph-selectin)靶向微泡用于淋巴结造影的效果.方法 雌性兔5只外阴埋置VX2鳞癌组织块制作兔外阴鳞癌及腹股沟转移淋巴结动物模型.A组先经兔耳缘静脉注入L-S靶向微泡(0.3 ml/kg),1h后再注入普通脂质微泡(0.3ml/kg);B组相反.以低机械指数超声检测两组中L-S靶向微泡和普通脂质微泡对腹股沟转移淋巴结的造影效果并进行对比分析.结果 L-S靶向微泡淋巴结造影表现为淋巴结整体回声明显增强,其灰阶值在A、B两组分别为:(97.18±8.38) dB和(92.36±9.45) dB;普通脂质微泡淋巴造影主要表现为淋巴结边缘部位回声增强,其灰阶值在A、B两组分别为:(83.12±2.81) dB和(80.27±3.56) dB.两组中,L-S靶向微泡与普通脂质微泡淋巴结造影的灰阶值比较,差异具有显著性(P＜0.05).结论 L-S靶向微泡具有明显增强淋巴结显影的作用.
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计算机图像识别技术在超声微泡粒径分析中的应用
目的 探讨计算机图像识别技术在超声微泡粒径分析中的应用价值.方法 通过喷雾干燥法制备粉末状脂质超声微泡造影剂,溶于水后在数码显微镜下取不同部位摄像,同时用Malvern粒径分析仪进行微泡粒径测定.应用DFY超声图像定量分析诊断仪的微泡定量功能对所获图像中的微泡进行自动计数与粒径计算.结果 DFY型超声图像定量分析诊断仪对微泡的计数与粒径分析结果与Malvern粒径分析仪分析的结果高度吻合;分析结果准确、重复性好.结论 DFY型超声图像定量分析诊断仪是国内用于超声微泡计数与粒径分析的一款软件,能够满足科研工作者对微泡粒径分析的需要.
关键词： DFY超声图像定量分析诊断仪 计算机图像识别 超声微泡 粒径分析 -
超声微泡促进TDL复合物介导基因转染的体外实验
目的 研究超声微泡促进TDL复合物介导的肝细胞生长因子(HGF)基因在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的转染效果.方法 将HUVEC接种在24孔板中,随机分为以下5组:(1) 空白对照组;(2) TDL复合物组;(3) TDL复合物+微泡组;(4) TDL复合物+超声组;(5) TDL复合物+微泡+超声组.荧光显微镜及流式细胞仪检测pIRES2-EGFP/HGF在细胞内的表达及转染效率.MTT法检测该方法对HUVEC生长活性的影响.RT-PCR及Western Blot检测HGF的mRNA及蛋白的表达.结果 TDL复合物+超声+微泡组的绿色荧光强度及转染率均高于其它各组,并对细胞活性无明显影响.TDL复合物+超声+微泡组的HGF mRNA及HGF蛋白的表达也均高于各组.结论 超声微泡可提高TDL复合物介导的基因在体外培养HUVEC的转染效率,并对细胞活性无明显影响,该方法为提高非病毒载体的转染效率提供一个新策略,可能成为缺血性心脏病基因治疗的有效手段之一.
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包裹紫杉醇的高分子纳米粒与超声脂质微泡复合体的制备研究
目的 制备一种利用生物素-亲和素技术耦联的新型包裹紫杉醇的微泡,并对其连接效果、理化性质进行检测.方法 采用单乳化法制备包裹紫杉醇的PLGA-COOH纳米粒(Pac-PLGA),检测其包封率,并用碳二亚胺法将其与链霉亲和素(SA)耦联,免疫荧光法检测Pac-PLGA与SA的连接情况.采用机械振荡法制备生物素化的超声微泡(BIO-MB)及超声微泡(MB).分2组用激光共聚焦不同时间点观察超声微泡与Pac-PLGA的连接效果.结果 Pac-PLGA平均粒径为131.1 nm,包封率为(85±2.1)％,电镜观察呈球形,大小均匀,分散度好.荧光检测SA成功的连接在Pac-PLGA上.激光共聚焦观察生物素-亲和素组Pac-PLGA较多地连接在BIO-MB的表面.而对照组MB表面未见Pac-PLGA的聚集.结论 本实验成功地制备出包裹紫杉醇的新型载药微泡,有望为乳腺癌治疗提供一种理想的药物载体和靶向给药系统.
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DFY-Ⅱ超声图像定量分析仪评价兔VX2肝癌治疗效果
目的 探讨DFY-Ⅱ型超声定量分析仪在评价肝癌治疗效果中的临床应用价值.方法 60只VX2肝癌兔随机分为6组,对处理前后的声像图做定量分析,免疫组化法检测处理后CD34的表达并计数微血管密度(MVD),分析处理后灰阶值与MVD的相关性,比较各组处理前后的灰阶值并分析治疗效果与灰阶值变化的关系.结果 处理后载多西紫杉醇脂质微泡+超声(LMLD+ US)组的灰阶值和MVD明显低于其他组(P＜0.01),LMLD+US组的效果佳;处理后各组灰阶值与MVD呈显著正相关(相关系数0.907).结论 定量分析仪所测得的灰阶值越高效果越差,灰阶值越低效果越好,定量分析的结果能反映治疗效果,定量仪在评价肝癌治疗效果中具有潜在的临床应用价值.
关键词： DFY-Ⅱ型超声定量仪 肝癌 超声微泡 微血管密度 -
载5-氟尿嘧啶肿瘤靶向超声微泡的制备及其初步评价
目的 制备载5-FU肿瘤靶向超声微泡并对其特性做出初步评估.方法 复乳化-溶剂挥发法联合碳二亚胺法制备载5-FU肿瘤靶向PLGA超声微泡,并检测该微泡一般特性及体外寻靶、造影能力.结果 制备出载5-FU VEGFR-2抗体PLGA超声微泡.微泡为薄壁中空结构,粒径(374.5±79.1) nm,zeta电位-5.05mV,载药量0.5％,在体外能与高表达VEGFR-2的脐静脉内皮细胞特异性结合,且具备造影能力.结论 制备出载5-FU肿瘤靶向超声微泡,为下一步研究载药靶向超声微泡增强HIFU的消融效应打下研究基础.
关键词： 5-氟尿嘧啶 肿瘤靶向 乳酸-羟基乙酸共聚物 超声微泡 -
超声微泡联合穿膜肽促基因转染治疗急性心肌梗死的动物实验研究
目的 探讨超声微泡联合穿膜肽介导HGF基因治疗大鼠急性心肌梗死的可行性.方法 将40只SD大鼠建成心肌梗死模型后随机分为5组,即①空白对照组(C),②超声+空白微泡组(US+ MB),③超声+载穿膜肽微泡组(US+ MBTAT),④超声+载基因微泡组(US+MBHGF),⑤超声+载基因及穿膜肽微泡组(US+MBHGF+ TAT).于基因转染后7d处死各组大鼠,激光共聚焦显微镜观察pIRES2-EGFP-HGF在大鼠心肌内的表达情况.偏振光显微镜观察Ⅰ、Ⅲ型胶原在大鼠梗死心肌周边区的分布情况.免疫组织化学法(IHC)检测梗死心肌周边区CD34的表达,并在显微镜下计数心肌内新生微血管密度(MVD).RT-PCR及Western Blot检测HGF的mRNA及蛋白的表达.结果 US+MBHGF+TAT组的绿色荧光强度高于其他各组,Ⅰ、Ⅲ型胶原明显少于其他各组,HGF mRNA及HGF蛋白的表达均高于各组,IHC结果显示新生的微血管被染成棕黄色,US+ MBHGF+TAT组的MVD高,与其他各组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 超声微泡联合穿膜肽能够介导HGF基因在缺血心肌内的高效转染,并促进血管新生和改善纤维化,为缺血性心脏病的基因治疗提供一种新的基因转移途径.
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超声微泡介导miR-34a联合DOX治疗小鼠U14皮下移植瘤的实验研究
目的 研究超声介导载miR-34a、DOX微泡对小鼠U14宫颈癌皮下移植瘤联合治疗效果.方法 制备载miR-34a、DOX高分子微泡,检测一般性质;建立小鼠皮下移植瘤模型,随机分为:模型组、空微泡组、DOX微泡组、miR-34a微泡组、miR-34a联合DOX微泡组;超声微泡治疗小鼠皮下移植瘤,绘制肿瘤生长曲线图,计算抑瘤率;RT-PCR检测各组小鼠肿瘤组织miR 34a基因表达情况;免疫组织化学染色法检测肿瘤微血管密度(MVD)和凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达情况.结果 自制高分子微泡呈球形,分布均一,平均粒径1.87 μm,包封率为46.24％,载药量为10.58％;与模型组相比,各治疗组肿瘤生长减慢,肿瘤质量体积显著下降,联合治疗效果更佳并与单一作用比较具有显著差异(P＜0.05);聚合酶链式反应(RT-PCR)结果显示,miR-34a组和联合组肿瘤组织中miR-34a高表达;DOX组、miR-34a组和联合组免疫组织化学染色检测肿瘤微血管密度(MVD)降低,凋亡蛋白Bcl-2表达下调,Bax高表达,联合组更加明显(P＜0.05).结论 超声微泡介导的miR-34a和DOX的共同递送可以实现肿瘤抑制的协同效应.
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超声微泡介导尼卡地平对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响
目的 探讨超声破坏微泡介导尼卡地平对大鼠急性缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2,Bax表达的影响.方法 60只SD大鼠随机分空白对照、假手术、缺血再灌注、尼卡地平、超声微泡、超声微泡介导尼卡地平六组.阻断左冠状动脉前降支40 min,再灌注120 min,建立在体急性心肌缺血再灌注模型.TUNEL法检测凋亡心肌细胞,SABC免疫组化法检测Bcl-2、Bax基因表达.结果 缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡,尼卡地平可减少其发生,上调Bcl-2基因表达,下调Bax基因表达,超声微泡介导可进一步减少凋亡发生.结论 尼卡地平可上调Bcl-2并下调Bax基因表达,升高Bcl-2/Bax比值,显著减少缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡,通过超声微泡介导,可增强尼卡地平抗凋亡作用.
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结合链霉亲和素的高分子造影剂的制备及其初步应用
目的 制备一种结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,并与生物素化抗体结合,考察其体外寻靶能力.方法 采用双乳化法制备高分子材料PLGA-COOH超声造影剂;并用碳二亚胺法将造影剂与亲和素耦联,制备出结合链霉亲和素的高分子超声造影剂.检测该造影剂一般特性;采用红外与免疫荧光检测亲和素与PLGA-COOH超声造影剂连接的情况.检测生物素-亲和素技术使该造影剂与生物素化抗体结合后其体外寻靶能力.结果 红外检测与免疫荧光检测显示亲和素被成功地连接在高分子造影剂上,并存在活性.体外寻靶实验显示,与生物素化单抗结合后的靶向高分子造影剂较多并牢固地聚集到肝癌细胞表面.结论 成功制备了结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,该造影剂与生物素化抗体结合后于体外对肝癌细胞具有较强的亲和力.
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超声联合微泡对正常兔角膜组织的生物学效应
目的 观察不同声强和辐照时间的超声破坏微泡对兔正常角膜组织的生物学效应.方法 采用不同声强(0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、2.0 w/cm2)和辐照时间(30 s、60 s、120 s)的超声作用于微泡干预的兔眼角膜,并对角膜进行定量分析和病理组织观察.结果 超声声强1.0 W/cm2、2.0 W/cm2与0.5 W/cm2组比较,角膜组织损害严重,内皮细胞密度和六角形细胞比例差异有统计学意义(P<0.05);超声辐照时间120 s与30 s、60 s比较,内皮细胞密度和六角形细胞比例有差异有统计学意义(P<0.05).结论 超声联合微泡能明显增强角膜组织的空化效应,且超声能量越大,角膜组织损害越严重.
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载长春新碱长循环聚合物超声微泡造影剂的制备及性能评价
目的 制备载硫酸长春新碱的聚乳酸-乙醇酸-聚乙二醇共聚物(PLGA-PEG)超声微泡造影剂,观察微泡的一般特性及体内、外显影效果.方法 采用W/O/W复乳-溶剂挥干法制备超声微泡造影剂,正交实验设计获得佳制备工艺,采用紫外分光光度法测定微泡的包封率和载药量,光学显微镜观察微泡形态,以马尔文激光粒径测量仪测定微泡造影剂的粒径、Zeta电位,并观察微泡在兔心腔的显影效果.结果 获得的微泡造影剂为球形,平均粒径约为1.27 μm,包封率为(37.63±0.61)%,Zeta电位为-24.88 mV,静脉注射载药微泡后,能增强兔心腔超声显影效果.结论 采用复乳-溶剂挥干法成功制备超声微泡造影剂,能增强体内外超声显影效果.
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超声破坏微泡联合粒细胞集落刺激因子促进大鼠心肌血管新生的实验研究
目的 探讨超声破坏微泡联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)促进大鼠心肌血管新生的有效性.方法 40只健康成年Wistar大鼠随机分为4组.A组在超声微泡治疗前一天行G-CSF皮下注射预处理;B组仅行超声微泡治疗;C组仅行G-CSF皮下注射;D组为对照.于治疗后2周取材,HE染色光镜观察心肌结构变化,免疫组化法检测心肌组织中VEGF及CD34表达,评定心肌血管新生疗效.结果 A组心肌中有大量VEGF和CD34表达,新生血管较多;B组心肌中有部分VEGF和CD34表达,新生血管相对较少;C组及D组仅有极少量VEGF和CD34表达,未见明显新生血管.结论 超声微泡可刺激心肌内源性VEGF分泌,促进心肌血管新生,G-CSF能明显增强其血管新生作用.
