替吉奥联合草酸铂对白细胞介素-6诱导的胃癌细胞侵袭机制影响

目的 观察替吉奥联合草酸铂对白细胞介素-6(IL-6)诱导的胃癌细胞侵袭的影响,并探究其机制.方法 选取人胃癌SGC7901细胞,设对照组、IL-6组、IL-6+替吉奥组、IL-6+草酸铂组和IL-6+替吉奥+草酸铂组;IL-6组滴入50 ng/ml IL-6,IL-6+替吉奥组滴入50 ng/ml+替吉奥20 mg/L,IL-6+草酸铂组滴入50 ng/ml IL-6+ 20 mg/L草酸铂,IL-6+替吉奥+草酸铂组滴入50 ng/ml IL-6+ 20 mg/L替吉奥+20 mg/L草酸铂,对照组未接受任何药物干预.用MTT方法测定其对细胞生长抑制作用,Transwell法测定细胞侵袭能力,ELISA法测定细胞上清液中MMP-2、VEGF水平,Western blotting方法检测细胞中AKT、p-AKT蛋白的表达水平,并对结果进行比较.结果 在24、48和72 h时IL-6+替吉奥+草酸铂组胃癌细胞的生长抑制率明显的高于IL-6+替吉奥组和IL-6+草酸铂组,差异具有统计学意义(P＜0.01);替吉奥+草酸铂对IL-6作用的胃癌细胞侵袭率明显的高于单一的替吉奥或草酸铂,差异具有统计学意义(P＜0.01);IL-6+替吉奥+草酸铂组上层细胞液中的MMP-2、VEGF水平明显的低于IL-6+替吉奥组和IL-6+草酸铂组;IL-6+替吉奥+草酸铂组中AKT的表达量明显高于IL-6+替吉奥组和IL-6+草酸铂组,p-AKT的表达量明显的低于IL-6+替吉奥组和IL-6+草酸铂组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 替吉奥联合草酸铂可以抑制胃癌SGC7901细胞侵袭,其机制可能与调控ATK信号通路有关.

下调miR-155表达抑制鼻咽癌CNE2细胞侵袭的研究

目的:本研究探讨干扰miR-155表达对鼻咽癌细胞CNE2迁移和侵袭的影响.方法:使用脂质体将miR-155抑制物 (miR-155 inhibitor)转染鼻咽癌细胞CNE2,以无关序列(NC inhibitor)作为阴性对照.通过细胞划痕、transwell侵袭实验观察干扰miR-155表达对CNE2细胞迁移和侵袭能力的影响.结果:细胞划痕实验结果显示干扰miR-155表达的 CNE2细胞迁移能力明显低于对照细胞(P<0.05).transwell侵袭实验结果显示,干扰miR-155后CNE2细胞的侵袭能力较对照组细胞明显下降(P<0.01).结论:干扰miR-155能抑制鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力,miR-155可能在鼻咽癌的发生和进展中发挥重要作用.

下调MTDH表达抑制胶质瘤U87细胞增殖、迁移与侵袭

目的:探讨下调异黏蛋白(MTDH)的表达对胶质瘤细胞U87增殖、迁移和侵袭的影响.方法:使用脂质体将MTDH干扰小RNA(MTDH siRNA)转染U87细胞(处理组),同时用si-NC转染U87细胞作为阴性对照(对照组).利用qRT-PCR验证转染后U87细胞的MTDH表达水平.通过MTT法、细胞划痕、transwell侵袭实验观察下调MTDH的表达对U87细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结果:处理组细胞的MTDH表达量明显下调,表明转染MTDH siRNA能有效下调U87细胞的MTDH表达.MTT实验表明,与对照组细胞相比,处理组的细胞增殖速度明显下降.细胞划痕实验显示下调MTDH的表达抑制了细胞的迁移能力.Transwell侵袭实验显示,处理组的细胞侵袭能力较对照组细胞明显下降.结论:下调MTDH的表达能抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,MTDH可成为治疗胶质瘤的潜在靶点.

231印度尼西亚药用植物暗紫梨果寄生中的化学成分对癌细胞侵袭的抑制作用

川楝素对人结肠癌细胞LoVo生物行为学的影响

目的 探讨川楝素对人结肠癌细胞LoVo生物行为学的影响.方法 采用MTT法、黏附实验、Transwell小室侵袭实验,观察川楝素对人结肠癌细胞LoVo增殖、黏附和侵袭能力的影响.结果 川楝素能有效抑制人结肠癌细胞LoVo增殖(P＜0.01).川楝素作用人结肠癌细胞LoVo 24 h后,细胞的黏附能力明显降低(P＜0.01),侵袭的细胞数与对照组比较明显减少(P＜0.01).结论 川楝素有抑制人结肠癌细胞LoVo的增殖、黏附及侵袭的能力.

GSK-3β过表达促进人胶质瘤细胞增殖及侵袭

目的 分析糖原合酶激酶-3(Glycogen Synthase Kinase-3β,GSK-3β)在胶质瘤细胞中的表达水平,探讨GSK-3β对胶质瘤细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制.方法 RT-PCR及Western blot分析GSK-3β在人正常星形胶质细胞1800及A172、T98G、U87和U251 4种胶质瘤细胞中的表达水平;将构建的pcDNA3.1(+)-GSK-3β(rGSK-3β)重组表达载体及PAX3 siRNA转染人胶质瘤细U87,MTT法检细胞活力,Transwell小室检测细胞侵袭能力.结果 与1800细胞相比,4种胶质瘤细胞中GSK-3β的表达水平明显增高(P＜0.05).GSK-3β过表达促进了U87细胞的增殖,同时加强了侵袭细胞的数目(P＜0.05).分析表明,GSK-3β重组体转染显著加强细胞中PAX3的水平(P＜0.05);当用PAX3 siRNA转染沉默细胞中PAX3的水平后,GSK-3β过表达诱导的细胞的增殖及侵袭能力明显降低(P＜0.05).结论 GSK-3β在胶质瘤细胞中过表达,且有可能通过PAX3来调控胶质瘤细胞的增殖及侵袭.

miR-143靶向调控ER-α36影响胃癌细胞系SGC7901的侵袭

目的 探讨miR-143通过靶向雌激素受体ER-α36介导人胃癌细胞系SGC7901的侵袭.方法 通过慢病毒载体的构建及包装生成上调/下调miR-143的慢病毒LV-miR-143 up和LV-miR-143 down并感染人胃癌细胞系SGC7901,用Western blot检测ER-α36的蛋白表达水平和细胞的侵袭能力;生物信息学软件预测miR-143的靶基因;荧光素酶报告基因实验验证靶基因.结果 LV-miR-143 up 与 LV-miR-143 down 慢病毒病毒颗粒分别感染人胃癌细胞系SGC7901,感染效率均在80%以上;上调miR-143,人胃癌细胞系SGC7901的ER-α36表达水平明显下降,侵袭能力明显降低(P<0.05),反之则增加.结论 miR-143通过靶向雌激素受体ER-α36负向调控胃癌细胞SGC7901的侵袭.

高表达ITGB1促进人乳腺上皮MCF10A细胞EMT及迁移

目的 探讨ITGB1基因过表达对人乳腺上皮MCF10A细胞迁移和侵袭的影响.方法 构建重组质粒pBABEpuro-myc-ITGB1,在人胚肾上皮细胞系293T细胞中包装反转录病毒,转染人乳腺上皮MCF10A细胞系,构建ITGB1基因过表达的稳定细胞系;实验设空白对照组(MCF10A)、阴性对照组(MCF10A-vector)和ITGB1基因过表达组(MCF10A-ITGB1);经嘌呤霉素筛选后,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测ITGB1 mRNA及蛋白的表达;Tran-swell迁移和侵袭实验分别检测细胞株迁移和侵袭能力;蛋白质印迹法进一步检测上皮间质转换(EMT)相关蛋白E-cadhefin、vimentin、fibronectin、N-cadherin以及ITGB1下游ILK、p-FAK和FAK蛋白的表达.结果 成功构建ITGB1基因稳定过表达人乳腺上皮MCF10A细胞系;ITGB1基因过表达组(MCF10A-ITGB1)与空白对照组(MCF10A)和阴性对照组(MCF10A-vector)细胞相比,迁移能力(P＜0.05)和侵袭能力(P＜0.01)显著增强;EMT相关蛋白E-cadherin显著下调(P＜0.05),vimentin、fibronectin、N-cadherin以及ITGB1下游ILK,p-FAK蛋白显著上调(P＜0.05).结论 在人乳腺上皮MCF10A细胞中,过表达ITGB1基因诱导细胞EMT并促进其迁移和侵袭.

Twist促进人三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭

目的 研究Twist基因沉默对人三阴性乳腺癌细胞Hs578T迁移和侵袭的影响及其潜在机制.方法 构建靶向Twist基因的慢病毒载体(shTwist)及其阴性对照病毒(shNC),转染人三阴性乳腺癌细胞Hs578T,建立Twist基因沉默的稳定细胞系;实验设对照组(blank)、阴性对照组(shNC)以及Twist基因沉默组(shTwist);经嘌呤霉素筛选后,倒置荧光显微镜观察各组细胞的荧光表达和感染效率,用RT-qPCR和Western blot检测Twist mRNA和蛋白的表达水平;Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot进一步检测Twist下游p-AKT、AKT、p-ERK1/2和ERK1/2蛋白水平.结果 成功构建Twist基因稳定沉默人三阴性乳腺癌细胞系Hs578T;与blank组和shNC组细胞相比,shTwist组细胞迁移和侵袭能力明显减弱(P<0.05,P<0.05);Twist下游p-AKT和p-ERK1/2蛋白水平显著下调(P<0.05,P<0.05).结论 在人三阴性乳腺癌细胞Hs578T中,Twist可能通过AKT和ERK信号通路促进细胞迁移和侵袭.

NPM1基因突变调控THP-1细胞体外增殖和侵袭及其机制

目的 探讨NPM1基因突变对THP-1细胞体外增殖和侵袭的影响及其机制.方法 将THP-1细胞分为THP-1-mA组、空载体转染组和未处理组,THP-1-mA组使用携带人NPM1-mA的重组质粒pEGFPC1-NPM 1-mA转染THP-1细胞,建立稳定表达NPM1-mA的白血病细胞系(THP-1-mA)；空载体转染组使用空载体质粒pEGFPC1转染THP-1细胞；未处理组不进行质粒转染.采用反转录PCR、免疫细胞化学检测3组细胞NPM1-mA基因和蛋白的表达；使用细胞生长曲线观察细胞体外增殖能力；流式细胞术检测细胞周期分布；细胞体外侵袭实验观察细胞体外侵袭能力；实时荧光定量PCR检测血管生成素1 (Ang-1)、Ang-2 mRNA的表达.结果 成功构建了稳定表达NPM1-mA的白血病细胞株.与空载体转染组和未处理组比较,稳定表达NPM1-mA蛋白的THP-1-mA细胞体外增殖能力明显增强,G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加(均P＜0.01).与空载体转染组和未处理组比较,细胞体外侵袭实验显示THP-1-mA组细胞体外侵袭能力增强,实时荧光定量PCR显示THP-1-mA组细胞Ang-1 mRNA表达增高(均P＜0.01).结论 NPM1突变基因的表达能够促进THP-1细胞体外增殖和侵袭,而Ang-1可能在其中发挥重要作用.

TRAM-34对白血病细胞株HL-60细胞增殖及侵袭的影响

目的:探讨KCa3.1通道抑制剂TRAM-34对白血病细胞株HL-60细胞增殖及侵袭的影响.方法:取对数生长期HL-60细胞,给予实验组分别加入终浓度25、50、75、100 nmol/L TRAM-34的培养液,给予对照组加入含10％胎牛血清RPMI 1640培养液,同步培养24、48和72 h后加入MTT溶液以检测TRAM-34对HL-60细胞的增殖抑制率;在TRAM-34处理后的每个浓度收集细胞l×106个,采用膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素(Annexin Ⅴ-FITC)/碘化丙啶(PI)双染或PI单染流式细胞术分别检测TRAM-34处理后的细胞凋亡率和细胞周期时相分布情况,采用Transwell检测TRAM-34各浓度24、48 h处理后的穿膜细胞数,采用实时定量PCR检测TRAM-34对CDK6、P53及MMP-2mRNA水平的影响.结果:与对照组相比(0 nmol/L),除低浓度(25 nmol/L) TRAM-34处理24 h对HL-60细胞增殖无影响外,其余浓度和作用时间的增殖抑制率、凋亡率、G0/G1期细胞比例及p53 mRNA水平均升高,S期细胞比例、穿膜细胞数及CDK6、MMP-2 mRNA水平均降低,而且以上差异均有统计学意义(P＜0.05).TRAM-34对HL-60以上指标的作用效果随浓度的升高和作用时间的延长而增强,各浓度间的差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:TRAM-34可抑制HL-60细胞的增殖及侵袭能力,同时可诱导细胞凋亡及G0/G1期阻滞,且TRAM-34作用的时间和浓度均对HL-60细胞恶性行为有影响.

CCL2通过白血病细胞THP-1自分泌多种炎性趋化因子调控其迁移和侵袭

目的:探讨细胞因子CC配体2(CCL-2)对急性白血病细胞THP-1迁移和侵袭的影响及机制.方法:采用慢病毒包装的方法将表达质粒PLVX-CCL2转染THP-1细胞,用RT-PCR检测CCL-2 RNA水平的表达,Western blot及ELISA法验证蛋白水平的变化,应用Transwell迁移和侵袭实验方法分别检测CCL2重组蛋白及THP-1自身高表达CCL2对THP-1细胞迁移和侵袭能力的影响,应用迁移相关细胞因子的PCR array法探讨可能的机制.结果:RT-PCR和Western blot方法证实成功构建过表达CCL2的THP-1-CCL2细胞.ELISA法检测显示,THP-1-CCL2培养上清中CCL2蛋白水平显著增高;高表达CCL2的转染组细胞在Trans-Matrigel实验中,其上室CCL2蛋白浓度显著高于下室(P＜0.001),同时穿膜能力下降,但迁移能力没有明显改变,与对照组比较,分别为(1.702±0.537 vs0.520±0.255)(P=0.026)和(9.293±0.302 vs 9.187±0.526) (P=0.77),增加Trans-Matrigel下室的CCL2浓度,可以增强THP-1细胞的迁移能力和侵袭能力.迁移RT2 profiler PCR array显示,CCL2重组蛋白处理THP-1细胞后,与对照组相比CCL2、EPX、SPP1、CX3CL1和CXCL13的表达上调(＞2倍).结论:CCL2通过白血病细胞THP-1的自分泌多种炎性趋化因子而调控其迁移和侵袭.

过表达SHIP-1对白血病细胞侵袭、迁移及PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探讨含有SH2结构的5'肌醇磷酸酶-1(SHIP-1)对白血病细胞增殖、侵袭和迁移能力以及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响.方法:采用脂质体Lipofectamine 2000将过表达载体pCDNA3.1-SHIP1转染白血病THP-1细胞,实验分为3组:对照组(未做处理的细胞),空载体组(转染空载体pCDNA3.1-NC)和过表达组(转染过表达载体pCDNA3.1-SHIP1);应用CCK-8法检测细胞的增殖情况,Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力,免疫印迹实验(Westem blot)检测细胞中SHIP-1、AKT、磷酸化AKT (pAKT)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达量.结果:细胞转染过表达载体后SHIP-1的表达量显著高于对照组(P＜0.05);与对照组相比,空载体组细胞的吸光值没有明显差异(P＞0.05),过表达组细胞的吸光值显著降低(P＜0.05);空载体组细胞的侵袭、迁移数与对照组无明显差异(P＞0.05),过表达组细胞的侵袭、迁移数显著低于对照组(P＜0.05);与对照组相比,空载体组细胞中AKT、pAKT和MMP-9的表达量没有显著差异(P＞0.05),过表达组细胞中AKT蛋白的表达量无显著差异(P＞0.05),但pAKT、MMP-9的表达量均显著降低(P＜0.05).结论:SHIP-1抑制白血病细胞的增殖,且降低其侵袭、迁移能力,其机理可能与通过影响PI3 K/A KT信号转导通路的活化从而下调MMP-9的表达有关.

过表达C3AR1基因促进HL-60细胞迁移和侵袭

目的:探讨C3AR1基因对人早幼粒细胞白血病细胞株(Human promyelocytic leukemia cells,HL-60)迁移及侵袭的作用和机制.方法:构建HL-60-C3AR1过度表达的细胞株并使其稳转表达.利用transwell小室进行迁移及侵袭实验,应用PCR array和流式细胞术探讨其可能的机制.结果:合适C3AR1的HL-60细胞在C3a和SDF-1的作用下,其细胞迁移及侵袭能力较转染空载体细胞明显增强.PCR array检测发现,包括CCL2在内的16个基因显著上调,而4个基因显著性下调,但与CXCR4基因的表达无关.结论:C3a和SDF-1促进过表达的C3AR1细胞迁移和侵袭,其机制与调控CCL2等相关基因有关.

CXCR7在急性单核细胞白血病中的表达及对THP-1细胞功能的影响

目的:探讨基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)受体CXCR7在急性单核细胞白血病(AML-M5)中的表达,及其对急性单核细胞白血病细胞系THP-1增殖、凋亡和侵袭能力的影响.方法:应用流式细胞术、Western blot、RT-PCR分别检测初诊AML-M5患者和正常人外周血单个核细胞(PBMNC)及THP-1细胞CXCR7蛋白和mRNA表达.CCK8法、Annexin V/PI标记法和Transwell法观察CXCR7对THP-1细胞体外增殖、凋亡和侵袭的作用.结果:在初诊AML-M5患者PBMNC幼稚细胞表面CXCR7表达高于正常对照(P＜0.05),在THP-1细胞表面CXCR7也有高表达;THP-1细胞和AML-M5患者PBMNC中CXCR7蛋白和mRNA水平均明显高于正常对照(P ＜0.05);SDF-1α刺激可增高THP-1细胞增殖活性,但这种增殖活性可被CXCR7抗体抑制(P ＜0.01);CXCR7抗体不影响THP-1细胞凋亡(P＞0.05);CXCR7抗体可明显抑制SDF-1α诱导的THP-1细胞侵袭能力(P＜0.01).结论:CXCR7在急性单核细胞白血病患者及THP-1细胞中均有高表达,并参与细胞增殖和侵袭,阻断CXCR7表达有可能降低急性单核细胞白血病的浸润风险.

多发性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞中miRNA-19a的表达水平及其对骨髓瘤细胞相关特性的影响

目的:检测miR-19a在人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞株LP-1和U266中的表达水平,研究miR-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266细胞增殖、侵袭、凋亡的影响.方法:应用RT-PCR检测miR-19a在多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266中的表达水平;CCK8检测miR-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266增殖的影响;Transwell方法检测miR-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266细胞侵袭影响;流式细胞术检测miR-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266细胞凋亡的影响.结果:miR-19a在多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266中表达;miR-19a促进多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266的增殖,促进多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266的侵袭,抑制多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266的凋亡.结论:miR-19a在多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266中表达明显增加,且促进骨髓瘤细胞的增殖、侵袭及抑制骨髓瘤细胞的凋亡.

选择素及其配体与肿瘤转移关系的研究进展

肿瘤转移是复杂且多步骤的肿瘤细胞与宿主相互作用的连续过程,包括肿瘤细胞侵袭周围组织、从原发灶脱离进入循环系统、逃避免疫监视以及在远隔器官形成与原发瘤同样类型的转移灶.黏附分子与肿瘤的侵袭、转移密切相关,其中选择素(selectin)家族在肿瘤转移中的作用日益受到人们关注.

骨髓微环境与肿瘤转移的关系

侵袭和转移是恶性肿瘤致患者死亡的主要原因.肿瘤的侵袭和转移是复杂多步骤的肿瘤细胞与宿主相互作用的连续过程,包括肿瘤细胞侵袭周围组织、从原发灶脱离进入循环系统、逃避免疫监视以及在远隔器官形成与原发瘤同样类型的转移灶[1].既往的研究大多是从肿瘤细胞本身的侵袭性来研究肿瘤转移,近年来肿瘤微环境在肿瘤转移中的作用越来越受到重视,尤其发现了骨髓与肿瘤转移关系密切.

葡萄糖6磷酸脱氢酶表达下调对皮肤鳞癌细胞系A431细胞凋亡和侵袭能力的影响

皮肤鳞癌是世界范围内第二大常见的皮肤癌［1］。具有侵袭表型的皮肤鳞癌能增加转移的风险，导致患者的存活率显著下降，具有淋巴结转移的皮肤鳞癌患者的5年生存率仅为26％～34％［2］。因此寻找新的分子靶点治疗皮肤鳞癌显得极为重要。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（ G6PD）是磷酸戊糖途径的第一个和关键的限速酶，定位于人染色体Xq28，由13个外显子和12个内含子组成，编码515个氨基酸。研究表明，G6PD在调节细胞的生长、存活、转化、衰老及凋亡中发挥重要的作用。目前，研究表明，许多肿瘤中均发现G6 PD的高表达，包括宫颈癌、胃癌、白血病等。重要的是，G6PD可能成为肿瘤潜在的分子治疗靶点。我们采用G6PD siRNA转染皮肤鳞癌A431细胞，研究G6PD表达下调对皮肤鳞癌细胞凋亡和细胞侵袭的影响，并初步探讨其可能的分子机制。该研究有望为以G6PD为靶点的皮肤鳞癌的分子靶向治疗提供理论依据。

Mfn-2沉默对肝癌细胞侵袭及PITPNM3表达的影响

目的 探究Mfn-2沉默对肝癌细胞侵袭的影响及其潜在的分子机制.方法 用Mfn-2-siRNA和siRNA转染SMMC-7721细胞,为Mfn-2-siRNA组和siRNA组,以未经转染的细胞作为对照组.转染48h后,采用荧光倒置显微镜检测转染效率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SMMC-7721细胞中Mfn-2的表达情况,Transwell小室检测SMMC-7721细胞侵袭能力,免疫组化和Western blot检测SMMC-7721细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和磷脂酰肌醇转移蛋白3(PITPNM3)蛋白表达情况.结果 荧光倒置显微镜检测结果显示,转染效率约85％;siRNA组 SMMC-7721细胞中Mfn-2mRNA的表达水平与对照组相比无显著差异(P＞0.05),Mfn-2-siRNA组SMMC-7721细胞中Mfn-2mRNA的表达水平显著低于对照组(P＜0.05);siRNA组SMMC-7721细胞侵袭能力、以及MMP-2和 PITPNM3的表达水平与对照组相比无显著差异(P＞0.05),Mfn-2-siRNA 组 SMMC-7721细胞侵袭能力、以及MMP-2和PITPNM3的表达水平显著高于对照组(P＜0.05).结论 Mfn-2沉默能够增强肝癌细胞SMMC-7721的侵袭能力,推测这一作用是通过上调MMP-2和PITPNM3的表达水平实现的,上述结果为肝癌的治疗和靶向药物的开发提供了一定理论基础.