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手霉素通过反应性氧基诱导甲状腺未分化癌KAT-4细胞凋亡
目的 研究手霉素对甲状腺未分化癌KAT-4细胞的作用,探讨其作用机制.方法 使用人的甲状腺未分化癌KAT-4细胞,MTT细胞毒性测定评价手霉素对KAT-4细胞的作用,使用annexin v和一氧化氮(nitric oxide, NO)染料标记细胞,应用流式细胞仪术检测细胞内NO生成和细胞凋亡;细胞内超氧阴离子通过二氢乙啶(dihydroethidium, DHE)测定;采用荧光法测定谷胱甘肽(glutathione, GSH).结果 手霉素降低KAT-4细胞活性,且呈剂量依赖性.手霉素诱导KAT-4细胞凋亡和反应性氧基(reactive oxygen species, ROS)产生包括NO和超氧阴离子增加和GSH降低.手霉素诱导细胞凋亡与ROS的增加有关,N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)可抑制ROS产生,保护KAT-4细胞逃避手霉素的细胞毒作用和避免手霉素诱导的凋亡.结论 细胞内ROS的产生对手霉素的细胞毒作用起非常重要的作用.手霉素通过增加ROS产生诱导甲状腺癌细胞凋亡.
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手霉素通过线粒体凋亡途径诱导U937和HL-60细胞凋亡
目的 研究法尼酰基转移酶抑制剂手霉素(Manumycin)诱导白血病细胞凋亡的机制.方法 用2μmol/L手霉素处理白血病细胞系U937和HL-60细胞不同时间,用流式细胞术检测细胞凋亡.免疫印迹技术检测细胞色素C、caspase9、caspase8、caspase3的表达.用荧光染料JC-1检测法测定线粒体膜电位(Δψm),并用caspase抑制剂Z-VAD-fmk阻断caspase的活化,探讨caspase在手霉素诱导白血病细胞凋亡中的作用.结果 2μmol/L手霉素处理U937和HL-60细胞16 h,Δψm显著下降,相对值分别是0.51±0.07和0.41±0.06(P＜0.01).手霉素诱导细胞色素C从线粒体释放到细胞质,激活caspase-9、caspase8和caspase-3.50 μmol/L的Z-VAD-fmk可完全阻断caspase激活,但仅部分阻断手霉素诱导的U937和HL-60细胞凋亡,细胞凋亡率分别减少51.69%和56.47%.结论 手霉素通过线粒体途径诱导U937和HL-60细胞凋亡.
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法尼酰基转移酶抑制剂手霉素诱导急性白血病细胞凋亡的研究
法尼酰基转移酶抑制剂(farnesyl transferase inhibitors,FTI)是一类新的信号传导抑制剂,国内外的研究表明FTI对甲状腺癌、胰腺癌、肺癌、肠癌、肝癌等肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用[1,2].手霉素(manumycin)从链丝菌培养液中发现,其酰胺侧链与法尼基焦磷酸酯(FPP)竞争性结合法尼酰基转移酶(FTase),具有抑制法尼酰基转移酶的作用[3,4],且特异性强,有可能成为治疗急性白血病(AL)的新药.我们观察了手霉素对AL细胞系HL-60和U937细胞的作用及其机制.
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手霉素抗肿瘤及诱导细胞凋亡作用的实验研究
目的 研究手霉素(manumycin)的体外抗肿瘤及其诱导肿瘤细胞凋亡的作用,初步探讨手霉素抗肿瘤作用机制,为将来这种新型药物的抗肿瘤作用开发提供理论基础和临床应用提供试验依据.方法 MTT法检测药效动力学特征;采用Gimsa染色技术、透射电镜技术、流式细胞技术、DNA提取及琼脂糖凝胶电泳技术测定和观察癌细胞凋亡的情况;流式细胞技术检测凋亡相关基因bcl-2、bax表达水平.结果 手霉素抑制细胞生长呈时效和量效关系;Gimsa染色、透射电镜结果 显示手霉素诱导人乳腺癌细胞株MCF-7出现较典型的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变;流式细胞分析的DNA直方图上可见G1期峰出现细胞凋亡峰亚G1期峰,乳腺癌细胞的周期也发生了改变,多数细胞被阻滞在G2/M期;琼脂糖凝胶电泳可观察到具有凋亡特征的梯形条带;流式细胞仪分析的实验结果 显示手霉素作用MCF-7细胞前后bcl-2和bax蛋白表达水平无明显改变.结论 (1)手霉素体外具有很强的抗肿瘤作用,可以抑制多种细胞增殖.(2)诱导肿瘤细胞凋亡是手霉素发挥抗肿瘤作用的一条重要途径.经手霉素作用后,肿瘤细胞bcl-2和bax蛋白表达水平无明显变化,手霉素诱导肿瘤细胞凋亡作用并非通过调控bcl-2和bax的表达水平实现.
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手霉素抗肿瘤作用的研究现状
手霉素(Manumycin)及其相关化合物是从链丝菌培养液中发现的,理化性质和光谱数据表明分子中含有共轭多烯链,酰胺基团和环戊醇酮等手霉素族抗生素共用的结构特征.人们研究发现Manumycin有抗肿瘤作用,正在进行临床前研究.本文将对此领域的研究进展作一综述.
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手霉素联合顺铂对人卵巢癌细胞3A0的增殖抑制作用
目的:研究手霉素联合顺铂对人卵巢癌细胞3AO体外增殖及裸鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其机制.方法:MTT法检测手霉素及手霉素联合顺铂对3AO细胞的体外增殖抑制作用:建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,采用免疫组织化学SP法检测手霉素及手霉素联合顺铂对移植瘤组织survivin,NF-KB、血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)和caspase-3蛋白的表达,FCM检测移植瘤细胞周期和细胞凋亡率的变化.结果:手霉素对3AO细胞的增殖有明显抑制作用,且呈时间和剂量依赖效应(P<0.05).手霉素可增强顺铂对3AO细胞的增殖抑制作用,随着手霉素浓度的增加(10～40 pmol/L),对3AO细胞的增殖抑制作用增强.手霉素或顺铂单药组以及联合用药组的裸鼠移植瘤体积均明显小于对照组,其中联合用药组裸鼠移植瘤体积明显小于手霉素或顺铂单药组(P<0.05).各给药组裸鼠移植瘤组织中survivin、NF-KB和VEGF蛋白的表达水平均低于对照组(P<0.05),其中联合用药组又明显低于各单药组(P<0.05):各给药组caspase-3蛋白的表达水平均明显高于对照组(P<0.05).手霉素单药组、顺铂单药组和手霉素联合顺铂组的细胞凋亡率依次升高,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,G,/G,期细胞依次减少(P<0.05),G2/M期细胞依次增多(P<0.05),S期细胞变化不明显.结论:手霉素联合顺铂可明显抑制3AO细胞的体内外增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调survivin、NF-κB和VEGF以及上调caspase-3蛋白的表达有关.
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氧化还原状态的改变控制手霉素诱导HL-60白血病细胞凋亡
目的 研究手霉素对HL-60白血病细胞的作用,探讨其作用机制,主要是线粒体的改变.方法 使用人的白血病细胞株HL-60细胞.MTT细胞毒性测定评价对白血病细胞的作用,使用Annexin V和一氧化氮(nitric oxide,NO)染料标记细胞,应用流式细胞仪术检测细胞内NO生成和细胞凋亡.细胞内超氧阴离子通过二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)测定.应用化学发光法测定超氧歧化酶 (superoxide dismutase,SOD)活性.采用荧光法测定谷胱甘肽(glutathione,GSH),萤光素-萤光素酶发光法测定ATP含量.免疫印迹技术检测细胞色素C和Mn-SOD的表达.结果 手霉素引起HL-60细胞活性的下降,且呈剂量依赖性.手霉素诱导产生反应性氧基(reactive oxygen species,ROS):NO和超氧阴离子,降低GSH,但不影响SOD.手霉素诱导线粒体降低细胞ATP的含量,线粒体肿胀和细胞色素C从线粒体释放到细胞质.手霉素诱导的凋亡与ROS的增加有关.用N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)抑制ROS可保护HL-60细胞逃避手霉素的细胞毒作用和避免手霉素诱导的凋亡.结论 细胞内ROS的产生对手霉素的细胞毒作用起非常重要的作用.手霉素通过包括上游ROS产生,线粒体形态改变和细胞色素C释放的线粒体途径,诱导白血病细胞凋亡.
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甲氧胺联合手霉素对白血病U937细胞凋亡的影响
背景与目的:DNA损伤修复对细胞生存很重要.我们既往的研究发现手霉素可诱导肿瘤细胞出现DNA损害反应.因此,碱基切除修复抑制剂甲氧胺(methoxyamine)有可能增强手霉素(manumycin)的抗肿瘤作用.为此,本实验研究甲氧胺对手霉素诱导白血病细胞凋亡的影响,探讨联合甲氧胺和手霉素诱导白血病细胞凋亡过程中线粒体凋亡途径的变化.方法:不同浓度手霉素和甲氧胺处理U937细胞48 h后,MTT细胞毒性测定U937细胞存活率,软琼脂法检测细胞的克隆形成.应用流式细胞术检测细胞凋亡.免疫印迹技术检测细胞色素C、Caspase-9、聚腺苷核糖聚合酶(poly-adenosyl ribose polymerase,PARP)的表达.中位效应方法评价两药的相互作用.结果:甲氧胺使手霉素的剂量反应曲线向左边移动,结合指数(CI)<1(P<0.05).1 μmol/L手霉素、5 mmol/L甲氧胺和联合两药处理U937细胞,相对于对照组的克隆形成分别是0.3641±0.0463,0.7541±0.0379,0.0473±0.0024(联合用药组与对照组、手霉素组或甲氧胺组相比,P<0.05);进一步发现,联合两药协同诱导细胞凋亡,引起Annexin V荧光值增加,阳性细胞增加,分别是(2.34±0.30)%、(8.80±0.95)%、(2.21±0.19)%、(13.37±0.91)%,联合用药组与对照组、手霉素组或甲氧胺组相比,差异有统计学意义(P<0.05).联合甲氧胺和手霉素增强细胞色素C从线粒体释放到细胞浆.Caspase-9激活,PARP特异性裂解.结论:甲氧胺增强手霉素通过线粒体凋亡途径诱导U937细胞凋亡,提示甲氧胺联合FTIs和DNA修复抑制剂治疗白血病的可能性.
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手霉素通过上调P53诱导22Rv1前列腺癌细胞凋亡
目的 探讨手霉素对前列腺癌(prostate cancer,PC)细胞株22Rv1细胞的作用及其机制.方法 使用MTT细胞毒性测定法评价人22Rv1细胞的活性,使用Annexin v和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染料标记细胞,应用流式细胞术检测细胞凋亡.采用免疫印迹技术检测Caspase-3、H2AX和P53蛋白的表达.结果 手霉素有效杀伤前列腺癌22Rv1细胞,随着手霉素剂量的增加,细胞活性逐渐下降.手霉素能诱导22Rv1细胞凋亡,早期凋亡率和晚期凋亡率均增加.手霉素通过caspase途径有效诱导22Rv1细胞凋亡.同时手霉素快速增加22Rv1细胞H2AX磷酸化和上调P53的表达.结论 手霉素通过上调P53的表达和激活H2AX诱导前列腺癌细胞凋亡,杀伤前列腺癌细胞.
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手霉素通过阻断PI3K/Akt信号通路诱导U937白血病细胞凋亡
目的:探讨手霉素对U937白血病细胞的作用及其机制.方法:2μmol/L的手霉素处理U937白血病细胞不同时间,分别使用Annexin V/PI试剂及ROS检测试剂标记细胞后,应用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞内ROS生成,免疫印迹术检测PI3K、P-Akt、Akt等蛋白的表达.结果:与0h对照组相比,随着处理时间的延长,手霉素诱导的U937细胞凋亡(P＜0.05)及ROS生成逐渐增加(P＜0.05),对PI3K/Akt信号通路活化的抑制逐渐增强.N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)(能有效抑制ROS产生的物质)可以阻断手霉素对U937细胞内PI3K/Akt信号通路的抑制及手霉素诱导的U937细胞凋亡.结论:手霉素通过诱导ROS产生进而抑制PI3K/Akt信号通路活化来诱导U937细胞凋亡.
关键词： 手霉素 U937细胞 ROS 凋亡 PI3K/Akt信号通路 -
手霉素对甲状腺癌KAT-18细胞的作用及其机制
目的：探讨手霉素对甲状腺未分化癌KAT-18细胞株的作用及其机制。方法：使用SRB细胞毒性测定法评价KAT-18细胞的活性，使用 Annexin v 和一氧化氮（NO）染料标记细胞，应用流式细胞术检测细胞内NO生成和细胞凋亡，二氢乙啶（DHE）方法测定细胞内超氧阴离子。应用化学发光法测定超氧歧化酶（SOD）活性，Mn-SOD的表达采用免疫印迹技术检测。谷胱甘肽（GSH）含量采用荧光法测定。结果：手霉素有效杀伤KAT-18细胞，随着手霉素剂量的增加，细胞活性逐渐下降。手霉素诱导产生NO和超氧阴离子，降低GSH ，但不影响Mn-SOD的蛋白表达和6 h的SOD活性，但24 h的SOD活性代偿性增加。手霉素诱导的凋亡与NO和超氧阴离子增加及GSH下降有关。用N-乙酰基-L-半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine， NAC）抑制NO和超氧阴离子产生，提高GSH可减少手霉素诱导KAT-18细胞凋亡，从而逃避细胞被手霉素杀伤。结论：手霉素通过细胞内NO和超氧阴离子的产生诱导甲状腺癌细胞凋亡，杀伤甲状腺癌细胞。
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手霉素对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨手霉素对食管癌细胞Eca109体外增殖活性的影响及其作用机制.方法:用不同浓度的手霉素(10、20、40、80、120μmol/L)处理Eca109细胞24、48和72 h后,采用MTT方法测定肿瘤细胞生长抑制率；吉姆萨染色和透射电镜技术观察手霉素对食管癌细胞Eca109形态变化的影响；流式细胞分析技术检测手霉素对Eca109细胞周期和凋亡的影响.结果:不同浓度的手霉素对Eca109细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05)；Giemsa染色及透射电镜结果显示手霉素诱导Eca109细胞出现较典型的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变；流式细胞分析结果显示,10、20、40、80和120μmol/L的手霉素作用Eca109细胞48 h后的细胞凋亡率分别为4.520％±1.035％、14.490％±1.707％、28.883％±4.299％、35.107％±2.276％、47.940％±8.126％,与对照组凋亡率(1.370％±0.028％)相比,差异均具有统计学意义(P均＜0.05)；且凋亡率呈明显的剂量依赖关系；而细胞周期分布显示G2/M期细胞显著增多.结论:手霉素体外可显著抑制人食管癌细胞Eca109增殖,诱导细胞凋亡可能是其重要途径.
