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土槿皮乙酸抗肿瘤作用的研究进展
土槿皮乙酸是中药土槿皮的主要活性成分之一,国内外文献资料报道土槿皮乙酸具有抗肿瘤、抗菌、抗早孕、抗血管生成等作用.本文对近年来土槿皮乙酸的抗癌作用及机制研究进行综述,以期促进其更广泛的临床应用.
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土槿皮乙酸体外诱导A375-S2细胞凋亡
目的:研究土槿皮乙酸(pseudolaric acid B)诱导A375-S2细胞凋亡的作用,探讨其抗癌作用机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)法、形态学观察、DNA凝胶电泳及Western blot检测法.结果:土槿皮乙酸可剂量-时间依赖性的诱导A375-S2细胞凋亡,5μmol·L-1土槿皮乙酸处理36h的细胞,Hoechst 33258荧光染色后有明显的凋亡小体出现;凝胶电泳法显示有明显的DNA ladder出现.细胞内抑制凋亡蛋白Bcl2,Bcl-xL和caspase激活的DNA酶抑制物(ICAD)表达量时间依赖性地减少,而促凋亡蛋白Bax表达量增加.结论:土槿皮乙酸对A375-S2细胞的杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡,降低Bcl2,Bcl-xL和ICAD蛋白的表达,增加Bax蛋白表达为其诱发A375-S2细胞凋亡的机制之一.
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土槿皮乙酸对BEL-7402细胞凋亡、线粒体膜电位及COX-2蛋白表达的影响
目的:探讨土槿皮乙酸(PAB)对人肝癌细胞株BEL-7402增殖和凋亡的影响及其影响机制.方法:体外培养肝癌BEL-7402级胞,用不同浓度PAB作用不同时间后,MTT比色法检测PAB对细胞增殖的影响;流式细胞仪分析PAB对细胞周期和凋亡的影响:吖啶橙染色荧光显微镜下观察PAB引起的肝癌细胞株BEL-7402形态学变化;JC-1检测线粒体膜电位的变化:Western blot方法检测PAB对COX-2表达的影响.结果:PAB作用细胞24,48,72h,细胞增殖受到抑制,且表现为剂量依赖性和时间依赖性;PAB使肝癌细胞细胞周期阻滞于G2/M期;与对照组相比,2.O,4.0 μmol/L PAB作用24h后,细胞凋亡率明显增加,差异显著(19.06%±3.87%,31.19%±1.46% vs 0.10%±0.08%,P<0.05);吖啶橙染色发现1.0μmol/L PAB作用24h,细胞内即有凋亡小体出现:与对照组相比,0.5μmol/L PAB作用24h即可降低BEL-7402线粒体膜电位(P<0.05);不同浓度PAB作用24h后,随PAB浓度增加COX-2蛋白表达递减.结论:PAB通过降低BEL-7402线粒体膜电位、减少COX-2的表达抑制细胞生长,诱导细胞凋亡.
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土槿皮乙酸抗人宫颈癌Siha细胞及其机制研究
目的 探讨土槿皮乙酸(PAB)对人宫颈鳞癌Siha细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用及其相关机制.方法 根据不同PAB浓度和作用时间,将Siha细胞分为对照组(0mol/L)及1、2、4、8、16 μmol/L PAB组和24、48、72 h组.采用CCK-8试剂盒检测不同浓度(0、l、2、4、8、16 μmol/L)PAB作用不同时间(24、48、72 h)后对Siha细胞的增殖抑制率.采用免疫印迹法检测不同浓度PAB(0、2、4、8μmol/L)作用48 h后Siha细胞PI3K/Akt/GSK-3β信号通路及凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达变化.结果 1、2、4、8、16 μmol/L PAB对Siha细胞增殖均有抑制作用,且呈剂量-时间依赖效应关系.与0μmol/L PAB对照组比较,2、4、8μmol/L PAB组Siha细胞PI3K、p-Akt、p-GSK-3β和抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达明显下调,促凋亡蛋白Bax表达明显增加(P＜0.05).结论 PAB具有抗人宫颈鳞癌Siha细胞作用,且可能与PI3K/AkffGSK-3β信号通路抑制及上调Bax和下调Bcl-2表达有关.
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土槿皮乙酸微乳的制备及体外经皮渗透性研究
目的 制备O/W型土槿皮乙酸(PAB)微乳,并进行体外经皮渗透性能研究.方法 通过绘制伪三元相图确定PAB微乳形成的区域,以微乳的体外经皮渗透速率为指标进一步优化筛选PAB微乳的处方,并对微乳的外观、形态、粒径分布等进行表征；以大鼠皮肤为渗透屏障,利用V-C扩散池比较了PAB微乳和PAB过饱和水溶液的体外经皮累积渗透量及皮肤滞留量.结果 优选的PAB微乳处方为IPM-Cremophor EL-Transcutol P-水(0.2∶0.97∶1.83∶7),所制备的微乳澄清透明,透射电镜(TEM)观察结果为均匀的球形或近球形,平均粒径为(18.7±1.9) nm.PAB微乳与PAB过饱和水溶液24 h累积渗透量分别为(50.31±4.63)、(6.27±1.33) μg/cm2,皮肤滞留量分别为( 6.28±0.31)、(0.51±0.13) μg/cm2,差异均具有显著性(P＜0.05).结论 PAB微乳新型给药系统可有效促进PAB的经皮渗透及提高其皮肤滞留量,为PAB皮肤给药抗真菌新制剂的设计提供了实验基础.
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土槿皮乙酸对人肺癌A146细胞的自噬作用以及凋亡与自噬的关系
目的 土槿皮乙酸是从松科植物金钱松的根皮或近根树皮中分离的二萜酸,具有抗肿瘤、抗生育等作用.本研究主要阐述了土槿皮乙酸能够诱导人肺癌细胞(A146)发生自噬从而抑制细胞生长的机制及在A146细胞中自噬与凋亡的关系.方法 采用了形态学观察、四甲基偶氮唑蓝(MTT)分析法、MDC流式细胞术分析、MDC荧光染色法、乳酸脱氢酶LDH活力测试法、免疫沉淀法、蛋白质印迹法等方法考察了土槿皮乙酸通过自噬抑制A146细胞生长以及该细胞中自噬与凋亡的关系.结果 研究发现,4μmol/L土槿皮乙酸作用A146细胞0、12、24、36、48 h后,细胞数目减少,MDC染色有荧光亮绿色颗粒出现,流式细胞仪分析显示土槿皮乙酸增加MDC阳性率.而且4μmol/L土槿皮乙酸作用后自噬相关蛋白Beclin 1的表达增高,LC3从Ⅰ型转化为Ⅱ型,说明土槿皮乙酸诱导A146细胞自噬,自噬在抑制A146细胞生长中起到了关键的作用.另外,加入自噬抑制剂3-MA与土槿皮乙酸联用之后,凋亡小体明显增加,凋亡率上升,自噬率下降,自噬相关蛋白Beclin 1和LC3表达降低,说明在A146细胞中,自噬是对抗凋亡的.结论 土槿皮乙酸诱导A146细胞自噬,自噬在抑制A146细胞生长中起到了关键的作用.
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土槿皮乙酸通过DNA损伤反应诱导细胞自噬来抑制凋亡
目的 本课题在人肺成纤维细胞MRC5中研究土槿皮乙酸(PAB)诱导的DNA损伤反应、自噬及其与凋亡的关系.方法 以4 mmol/L PAB分别处理12、24、36、48 h后,Western blot分析DNA损伤反应标志蛋白g-H2AX表达;通过酰尸胺染色法、Western blot法确定PAB是否诱导细胞自噬;通过抑制DNA损伤反应的发生确定DNA损伤反应对自噬和凋亡的影响.结果 PAB诱导DNA损伤反应;PAB诱导细胞自噬;抑制DNA损伤反应抑制细胞自噬并促进细胞凋亡.结论 PAB通过诱导DNA损伤反应诱导细胞自噬,抑制自噬促进细胞凋亡并增加PAB的抑制率.
关键词： 土槿皮乙酸 人肺成纤维细胞MRC5 DNA损伤反应 细胞自噬 凋亡 -
土槿皮乙酸B对结直肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响
结直肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一,发病率有上升趋势,现已位居恶性肿瘤的第四位[1].目前,结直肠癌的首选治疗方法为手术切除,辅助治疗方法包括5-氟尿嘧啶(5-FU)结合四氢叶酸、奥沙利铂等的化学治疗[2],单抗药物靶向治疗,基因治疗和中药治疗.
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土槿皮乙酸对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖的抑制作用
目的 研究土槿皮乙酸(pseudolaric acid B,PAB)对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖的抑制作用.方法 采用MTT法检测0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、8、16 μg/ml PAB对C6细胞增殖能力的影响；流式细胞术检测碘化丙啶(PI)染色后细胞周期的变化;皮下注射C6细胞建立C6种植瘤大鼠模型并测量种植瘤体积；免疫组化法测定大鼠脑胶质瘤C6细胞种植瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达变化.结果 体外实验结果表明,PAB呈剂量依赖性地抑制胶质瘤C6细胞生长,半数致死剂量(IC50)为0.03 μg/ml,同时,可使C6细胞周期阻滞于G2/M期；体内实验结果表明,PAB给药后大鼠种植瘤体积有所降低,种植瘤组织中PCNA表达呈下降趋势.结论 PAB可抑制大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖,阻滞细胞周期中G2/M期、下调PCNA表达为其可能的作用机制.
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土槿皮乙酸对胶质瘤C6细胞生长的抑制作用
目的 研究土槿皮乙酸(PAB)对大鼠胶质瘤C6细胞生长的抑制作用及其分子机制.方法 采用MTT法测定不同质量浓度(0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、8.0、16.0 μg/mL)PAB对C6细胞增殖能力的影响.以0(对照组)、0.15、0.3、0 6μg/mL PAB处理后,采用Annexin V-FITC/PI双染色法经流式细胞仪检测C6细胞的凋亡情况,RT-PCR和Western blotting法检测凋亡抑制蛋白Survivin、自噬标志性分子微管相关蛋白I轻链3-β(LC3)和凋亡剪切产物聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Cleaved-PARP)的表达.结果 MTT法测定结果显示,PAB呈时间剂量依赖性抑制C6细胞的生长,PAB处理12、24、36、72 h后,PAB对C6细胞的半数致死剂量( IC50)分别为1.23、1.05、0.30、0.09 μg/mL.流式细胞仪检测结果显示,0.15、0.30、0.60 μg/mL PAB作用C6细胞36 h后细胞出现凋亡,并且随着PAB浓度的升高,细胞凋亡率呈上升趋势,分别为(24.89±0.92)％、(31.38±0.36)％和(62.84±2.22)％,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR和Western blotting检测结果显示:PAB处理后的C6细胞内Survivin表达下降,LC3和Cleaved-PARP表达升高,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)；且随着PAB浓度的升高,细胞内Survivin、LC3、Cleaved-PARP的表达变化呈剂量依赖性.结论 PAB可抑制大鼠胺质瘤G6细胞增殖,并促进其凋亡；下调Survivin的表达,上调LC3和Cleaved-PARP的表达为PAB可能的作用机制.
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土槿皮乙酸诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡及机制
目的 研究土槿皮乙酸(pseudolaric acid B,PAB)诱导人胃癌SGC7901细胞株凋亡及其分子机制.方法 MTT法检测细胞增殖的抑制作用,电镜观察细胞的形态学变化,AnnexinV/PI双染法检测细胞早期凋亡率,罗丹明染色流式细胞仪检测线粒体膜电位,Western blot检测PAB对caspase-3、caspase-9剪切片断,bcl-2、bax蛋白表达,及对MAPKs通路相关蛋白,包括p-ERK、ERK、p-JNK、JNK、p-p38、p38表达的影响.结果 PAB对人胃癌SGC7901细胞株生长具有明显的抑制作用,并呈时间和浓度依赖性.电镜结果 显示0.5 μmol·L-1 PAB作用24 h后,核染色体聚集、边集,72 h凋亡小体形成.用0.5 μmol·L-1 PAB处理SGC7901细胞12、24、48、72 h,AnnexinV/PI双染检测细胞的早期凋亡,其早期凋亡率分别为10.06%、15.98%,23.12%,29.06% ,而对照组的早期凋亡率仅为0.9%(P<0.05) .罗丹明染色检测线粒体膜电位,0.5 μmol·L-1浓度的PAB作用于SGC7901细胞12 h后,线粒体膜电位开始下降并随时间延长而逐渐增加,12、24、48、72 h线粒体膜电位下降分别为26.36%、33.26%、41.28%、52.13%(P<0.05或0.01).0.5 μmol·L-1浓度的PAB作用于SGC7901细胞24 h后,Western blot法检测发现caspase-3、 caspase-9 2种蛋白均出现断裂片断,并随着时间的增加断裂更明显.进一步研究发现,PAB处理SGC7901细胞后,bax蛋白表达升高,bcl-2蛋白表达下降,同时JNK、p38的磷酸化水平明显升高,ERK表达水平下降.结论 PAB具有明显的细胞毒作用,能诱导SGC7901细胞凋亡,JNK和p38途径激活后通过对bax 和bcl-2表达的调控,导致线粒体膜电位的下降,进而激活caspase终导致细胞死亡,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的分子机制之一.
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土槿皮乙酸抗肿瘤机制的研究进展
土槿皮乙酸(Pseudolaric acid B,PAB)是从松科植物金钱松根皮--土槿皮中分离得到的一种二萜酸化合物.具有抗真菌、抗生育、抗肿瘤、止血及胆囊自截等作用.
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土槿皮乙酸的抗肿瘤作用及其分子机制
土槿皮乙酸(pseudolaric acid B,PAB)是松科植物金钱松的近根树皮或根皮中提取出来的一种新型二萜类酸,分子式为C23H28O8,因其具有杀真菌、抗生育、止血等疗效应用于中医治疗.近年来研究发现,PAB还能抑制肿瘤生长、阻滞细胞周期及诱导肿瘤凋亡,而且能够逆转肿瘤细胞的多药耐药.
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土槿皮乙酸作用PI3K/Akt通路诱导HeLa细胞凋亡
[目的]探讨土槿皮乙酸对宫颈癌HeLa细胞凋亡和增殖的作用.[方法]通过Hoechst 33342荧光染色等观察细胞核固缩和染色体碎片等形态学变化,MTT法测定土槿皮乙酸对HeLa细胞的生长抑制作用.采用流式细胞仪和免疫印迹实验检测HeLa细胞的生长凋亡情况及其相关蛋白的表达变化.[结果]土槿皮乙酸对宫颈癌HeLa细胞具有明显的生长抑制作用,并能诱导细胞发生凋亡,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高.土槿皮乙酸抑制细胞生长及诱导细胞发生凋亡的过程中,细胞磷脂酰肌醇-3激酶(P13K)、蛋白激酶B(Akt)、糖原合酶激酶3(GSK3)、FKHRL(Forkhead likefamily)表达水平及活性显著降低,导致抑制凋亡抑制因子bcl-2受到表达抑制,同时Bax表达增加.[结论]土槿皮乙酸能够通过多条信号途径促进人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡,通过抑制P13K/Akt的活性是其体外诱导人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡和抑制增值的重要作用机制.
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土槿皮乙酸的药理学作用及其毒性反应
对土槿皮乙酸的抗肿瘤、抗生育、抗血管生成、抗真菌等药理学作用进行综述.
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土槿皮乙酸体外对前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用及机制
目的:研究土槿皮乙酸(PAB)对人雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)PC-3细胞系增殖的抑制作用及其可能机制.方法:体外培养AIPC PC-3细胞,以不同浓度PAB进行处理一段时间后.再用MTT法测定PAB对PC-3细胞的生长抑制情况;用台盼蓝染色计数活细胞,用吉姆萨染色法检测凋亡细胞,进一步用Hoechst33342染色进行凋亡确认;用PI染色法检测PAB对PC-3细胞周期的影响;用考马斯亮兰G-250染色法检测PAB对细胞质蛋白的影响;用荧光双染法检测细胞微管蛋白表达.结果:PAB明显抑制体外培养的PC-3细胞生长.其抑制率在一定浓度和时间范围内呈依赖关系,作用36h的IC50值为6.20μM.PAB可以通过诱导PC-3细胞凋亡而抑制期增殖,凋亡细胞的数量随PAB浓度的增加而增加.PAB能明显增加PC-3细胞时G2期细胞的比例,G1期和S期细胞数减少,细胞周期的变化与PAB浓度相关.PAB可以减少PC-3细胞胞质内蛋白含量,抑制微管蛋白形成.结论:PAB可以抑制AIPC PC-3细胞增殖,阻滞细胞于G2/M期(M晚期),呈浓度依赖性;机制可能与PAB降低胞质蛋白量,抑制微管蛋白形成有关.
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土槿皮乙酸诱导大鼠神经胶质瘤C6细胞株凋亡
目的:研究土槿皮乙酸诱导大鼠神经胶质瘤C6细胞株凋亡及其机制.方法:采用MTT法检测0、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80 μmol/L不同终浓度PAB对C6细胞增殖能力的影响,激光扫描共聚焦显微镜观察AO/EB荧光染色后细胞的凋亡情况,流式细胞术检测碘化丙啶(PI)染色后细胞周期的变化,免疫组化法测定C6细胞的凋亡相关蛋白Bcl-2的表达.结果:MTT结果显示,PAB呈时间剂量依赖性抑制C6细胞的生长.PAB处理24、48和72 h后,对C6细胞的半效致死剂量(IC50)分别为39.811、23.306和7.360 μmol/L.5.0、10.0、20.0 μmol/L PAB作用C6细胞72 h后的凋亡率分别为(50.5±0.7)%、(63.5±2.3)%和(80.0±1.2)%,与对照组(12.0±1.6)%比较均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).流式细胞仪检测结果显示5.0、10.0、20.0 μmol/L不同浓度PAB作用C6细胞72小时后,随着浓度的增加,G2/M期细胞逐渐增多,分别为(29.84±6.215)%,(34.58±1.187)%和(70.23±6.325)%,与对照组(7.79±0.570)%相比,后两组差异有统计学意义(P<0.05).C6细胞中Bcl-2蛋白阳性表达率随药物剂量的增大而减小.结论:PAB可抑制大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖,阻滞细胞周期于G2/M期、下调Bcl-2表达为其可能的作用机制.
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土槿皮乙酸对胰腺癌 AsPC -1细胞增殖和凋亡的影响
目的：观察土槿皮乙酸（pseudolaric acid B，PAB）对胰腺癌 AsPC -1细胞增殖和凋亡的影响。方法：体外培养胰腺癌 AsPC -1细胞，用不同浓度 PAB 作用不同时间后，MTT 法检测 PAB 对 AsPC -1细胞增殖的影响，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：MTT 结果表明 PAB 以时间和剂量依赖的方式抑制 AsPC -1细胞生长，流式结果显示8.0μmol/ L PAB 处理 AsPC -124小时后，凋亡率由对照组的8.19%升高至30.86%，差异有统计学意义（P <0.05），表明 PAB 可诱导胰腺癌细胞凋亡，呈剂量依赖性。结论：土槿皮乙酸以时间和剂量依赖的方式抑制胰腺癌 AsPC -1细胞增殖并诱导其凋亡。
