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桦木酮酸体外抗肿瘤实验的初步研究
研究桦木酮酸(betulomov acid)对人胃癌细胞(SGC-7901)和人肝癌细胞(HepG-2)的作用.采用噻唑蓝(MTT)比色法考察上述两种肿瘤细胞株对桦木酮酸及常用抗癌药VP-16的敏感性.实验可知,SGC-7901细胞对桦木酮酸较HepG-2敏感,其中,两种肿瘤细胞的IC50分别为68.14μmol/L和110.77μmol/L.因此,桦木酮酸可一定程度地抑制肿瘤细胞增殖,可作为一种特异性的细胞增殖抑制剂.
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MTT比色法中两种比色波长的比较
目的:探讨MTT比色法在492 nm和550 nm两组比色波长条件下的准确性.方法:配制6组细胞培养液,比较其在492 nm和550 nm两种比色波长下所测得的MTT试验结果.结果:492 nm波长测得的A值的组间比较的可信度不如550 nm,550 nm波长的A值明显高于492 nm(P ＜0.01),可以更加准确的反映所测样品.结论:550nm的比色波长相对于492 nm的比色波长为更靠近目标物的大吸收峰的波长,采用550nm波长进行MTT比色试验的准确性更为可信.
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避孕套的体外细胞毒性检测实验
目的:通过两种避孕套的体外细胞毒性实验,探讨适合避孕套的细胞毒性检测方法.方法:按照GB/T16886.5的体外细胞毒性评价方法要求,用琼脂覆盖法和MTT比色法检测两种避孕套的细胞毒性.结果:用琼脂覆盖法检测出两种避孕套的细胞毒性均为2级;用MTT比色法检测时,在浸提液浓度为50%时,相对增值率(RGR)避孕套A为5%,避孕套B为7%,两者差异无统计学意义(P>0.05);在浸提液浓度为10%时,避孕套A的RGR为87%,避孕套B为99%,两者差异无统计学意义(P>0.05);在浸提液浓度为20%时,避孕套A的RGR为42%,避孕套B为77%,两者有统计学差异(P<0.05).结论:由于MTT比色法具有定量评价的优点,更适合避孕套的细胞毒性检测.
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TCu220C与TCu380AIVD体外细胞毒性研究
目的:评价两种含铜宫内节育器体外细胞毒性.方法:采用TCu220C和TCu380A,10%FBS-DMEM浸提后,与L929细胞接触培养,通过倒置相差显微镜观察其形态,采取MTT(四唑盐)比色法量化细胞毒性,计算相对增值率(RGR),并进行毒性评价.结果:TCu220C表现出轻度的细胞毒性(1～2级),TCu380A表现出明显的细胞毒性(4级).结论:相同形状的两种含铜宫内节育器因含铜面积不同,其表现出来的细胞毒性也不同,含铜面积越大,细胞毒性越大.
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改良MTT法检测胃肠癌体外化疗药物敏感性
目的探讨胃肠癌对常用化疗药物的敏感性.方法应用改良MTT法进行了化疗药物的体外药敏试验.结果不同病例对同一药物的敏感性不同,有其各自的耐药谱.结论根据体外药敏试验实行个体化用药方案,可提高临床化疗疗效.
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孕激素对人卵巢癌细胞株HO-8910体外生长的影响
目的：探讨孕激素对人卵巢癌细胞株HO-8910体外生长的影响。方法：传代培养人卵巢癌细胞HO-8910，应用MTT比色法检测对照组(未加孕激素组)和加入含有不同浓度孕激素培养液处理组，作用48小时及72小时后对人卵巢癌细胞HO-8910的影响。结果：MTT试验结果表明孕激素对人卵巢癌细胞HO-8910有抑制作用，呈浓度依赖性，并且随着时间的延长，抑制作用也增强。结论：孕激素对卵巢癌细胞有抑制作用。
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不同浸提介质对医用护理垫体外细胞毒性评价的影响
目的：研究不同浸提介质对医用护理垫体外细胞毒性评价的影响。方法：根据ISO 10993-5：2009的试验原则和评价标准，采用不同的浸提介质制备医用护理垫浸提液，小鼠成纤维细胞L929与浸提液共培养24h，MTT 法评价浸提液对细胞生长的影响，并计算细胞存活率(Viab.%)。结果：医用护理垫不同浸提液的细胞毒性结果有统计学差异，含血清浸提介质使细胞生长抑制，Viab.%值为68.6%，而其余三种浸提介质细胞生长状态良好， Viab.%均＞80%。结论：不同的浸提介质对医用护理垫细胞毒性结果有直接影响，因此在评价医用材料的细胞毒性时，必须明确所使用的浸提介质。
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中药筋脉通对高糖培养雪旺细胞增殖及NGF表达的影响
目的:从细胞生物学水平观察筋脉通含药血清对高糖培养雪旺细胞(SC)的增殖及其分泌神经生长因子(NGF)的影响.方法:体外培养大鼠SC,采用血清药理学方法制备筋脉通含药血清,观察筋脉通含药血清对高糖培养SC增殖活性的影响,检测筋脉通含药血清对高糖培养SC分泌NGF的影响.结果:高糖培养条件下,SC增殖及分泌NGF的能力明显减弱,筋脉通含药血清可增强高糖培养SC的增殖能力,上调NGF的表达水平,作用与神经妥乐平含药血清相似.结论:中药筋脉通可有效促进高糖环境培养的SC的增殖能力及其分泌NGF的水平.
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注射用鹿茸多肽生物活性测定方法研究
目的:建立注射用鹿茸多肽生物活性测定方法.方法:采用Wistar乳鼠颅盖骨成骨细胞原代培养和成骨样细胞株MG63(人骨肉瘤细胞)培养的方法,通过MTT比色法检测.结果:成功地分离、纯化并培养了Wistar乳鼠颅骨成骨细胞,采用稳定的人成骨样细胞株MG-63(人骨肉瘤细胞)进行生物活性检测,确定5×104的细胞密度,0.1 mg/ml的给药剂量,培养72h为佳培养时间.结论:MTT比色法准确、可靠,可用于注射用鹿茸多肽的质量控制.
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穿山龙粗提物抗肿瘤体外实验研究
目的观察穿山龙粗提物是否具有抗癌活性,为穿山龙有效组方或单体成分抗肿瘤应用基础研究奠定基础.方法采用细胞体外培育技术,以Mosmann法略加改进的MTT实验检测药物细胞毒效应.结果穿山龙粗提物对人口腔上皮鳞癌KB细胞株有明显的细胞毒作用,IC50为(4.13±0.40)μg/mL,对其相应的多药耐药株KBv200细胞也很敏感,IC50为(4.20±0.63)μg/mL,且不表现交叉耐药.结论穿山龙粗提物具有明显的抗肿瘤作用.
关键词： 肿瘤细胞培养 MTT比色法 KB/KBv200细胞 穿山龙 -
不同来源生脉注射液体外细胞毒性的比较及原因分析
目的:比较不同来源生脉注射液体外细胞毒性的差别,寻找造成差别的主要原因.方法:将不同来源生脉注射液原液以及不同浓度的稀释液分别与L929细胞接触培养,通过倒置相差显微镜观察其形态,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)量化细胞毒性,计算相对增殖率,并进行细胞毒性评价.结果:8个厂家生产的生脉注射液原液的细胞毒性分级均为4级,为重度毒性.样品A的EC50高,说明其细胞毒性较其他样品高.在生脉注射液所添加的辅料中,当聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温80)浓度为处方量的0.5％时,其细胞毒性分级为3～4级.将吐温80稀释至0.0625％时,其细胞毒性分级为1级,基本无细胞毒性.8个厂家生产的生脉注射液原液中吐温80的含量不一致,有些厂家的含量大于0.5％.结论:不同厂家生产的生脉注射液由于原料产地、生产条件不同等原因,其细胞毒性存在较大的差别.吐温80作为中药注射剂的辅料,在高于0.062 5％的浓度下存在细胞毒性.生脉注射液中吐温80的含量与细胞毒性可能呈一定的正相关性.
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不同粒径银粒子的体外细胞毒性比较
目的 比较纳米银粉末与微米银粉末体外细胞毒性的差异,并初步探讨毒性机制与粒径大小的相关性.方法 四种不同粒径银粒子通过扫描电镜确定其粒径分布后,制备成不同浓度的含银培养液与L929细胞接触培养,通过倒置相差显微镜观察其形态,采取MTT(四唑盐)比色法量化细胞毒性,计算相对增值率(RGR),并进行毒性评价.结果 当银浓度在一定范围内(2.5～25)μg//mL,纳米银粒子呈现轻微细胞毒性(0～1)级,RGR与含银量呈量-效关系;随着浓度增高到大于50μg/mL时,与之共培养的细胞,形态上发生较大改变,显示明显的细胞毒性,量-效相关性也随之消失.粒径较小的微米银在银浓度达到250μg/mL时显示明显的细胞毒性.而粒径较大的两组微米银粒子在所有试验浓度下,共培养的细胞生长良好,未见明显的细胞毒性.结论 粒径不同的银粒子的体外细胞毒性有较大差异.同等剂量下,纳米级的银粒子和粒径较小的微米级银粒子,比粒径较大的微米级银粒子的体外细胞毒性更大.
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新疆蜂胶挥发油对结直肠癌HCT-116细胞增生、周期及凋亡的影响
目的:探讨新疆蜂胶挥发油对体外培养的大肠癌细胞HCT-116细胞增生、细胞周期和凋亡的影响.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)显色法,检测不同浓度蜂胶挥发油作用不同时间对HCT-116细胞生长所产生的不同影响;倒置显微镜观察凋亡细胞的形态特点:PI染色、流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V-FITC/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:蜂胶挥发油能抑制HCT-116细胞生长,其抑制活性与5-氟尿嘧啶(5-FU)一致,在一定剂量和时间范围内,可见凋亡细胞明显增多,给予5、10、20 mg/L蜂胶挥发油处理HCT-116细胞24 h后,较对照组G0/G1期细胞(%)增多(57.57±2.31,67.94±1.90,86.09±1.72 vs 44.60±3.43,均P<0.01),S期细胞(%)减少(33.51±3.40,27.30±4.65,7.30±4.76 vs47.78±4.54,均P<0.01),G2/M期细胞无明显变化,细胞凋亡率明显上升,呈剂量依赖性(58.33%±2.44%,44.53%±2.59%,35.40%±0.42% vs 4.38%±0.92%,均P<0.01).结论:新疆蜂胶挥发油对HCT-116细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制与其阻滞细胞周期和诱导凋亡有关.
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RNA干扰阻断cyclin D1表达抑制结肠癌细胞增殖
目的:使用RNA干扰技术阻断人结肠癌细胞cyclin D1的表达,检测其对细胞生长增殖的影响和机制.方法:将人结肠癌细胞株HT-29分成3组,antisense组(转染反义链组)、sense组(转染正义链组)和对照组.免疫沉淀和蛋白质印迹法观察cyclin D1 siRNA对细胞cyclin D1蛋白质表达的影响,并对蛋白质电泳图像进行分析,MTT比色法绘制细胞生长曲线,3H-TdR技术和流式细胞技术观测细胞周期变化.结果:反义siRNA有效抑制了cyclin D1蛋白质表达,MTT实验显示,转染反义siRNA的细胞,生长代谢减慢,与对照组细胞差异显著(P＜0.01).而antisense组细胞24 h的3H-TdR渗入量,G0/G1期和S期细胞较对照组和sense组明显减少(3H-TdR:1181.8±117.97 vs 1798.4±55.36,1851.4±83.46;P＜0.01;G0/G1期:79.31%vs 60.87%,59.14%;S期:13.67% vs 26.42%,27.93%;P＜0.01).结论:RNA干扰技术能有效减弱cyclin D1蛋白质表达,使细胞周期受阻,并抑制结肠癌细胞的生长增殖.
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土槿皮乙酸对BEL-7402细胞凋亡、线粒体膜电位及COX-2蛋白表达的影响
目的:探讨土槿皮乙酸(PAB)对人肝癌细胞株BEL-7402增殖和凋亡的影响及其影响机制.方法:体外培养肝癌BEL-7402级胞,用不同浓度PAB作用不同时间后,MTT比色法检测PAB对细胞增殖的影响;流式细胞仪分析PAB对细胞周期和凋亡的影响:吖啶橙染色荧光显微镜下观察PAB引起的肝癌细胞株BEL-7402形态学变化;JC-1检测线粒体膜电位的变化:Western blot方法检测PAB对COX-2表达的影响.结果:PAB作用细胞24,48,72h,细胞增殖受到抑制,且表现为剂量依赖性和时间依赖性;PAB使肝癌细胞细胞周期阻滞于G2/M期;与对照组相比,2.O,4.0 μmol/L PAB作用24h后,细胞凋亡率明显增加,差异显著(19.06%±3.87%,31.19%±1.46% vs 0.10%±0.08%,P<0.05);吖啶橙染色发现1.0μmol/L PAB作用24h,细胞内即有凋亡小体出现:与对照组相比,0.5μmol/L PAB作用24h即可降低BEL-7402线粒体膜电位(P<0.05);不同浓度PAB作用24h后,随PAB浓度增加COX-2蛋白表达递减.结论:PAB通过降低BEL-7402线粒体膜电位、减少COX-2的表达抑制细胞生长,诱导细胞凋亡.
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MTT法观察补肾健骨汤对大鼠成骨细胞增殖的影响
目的采用MTT法观察中药补肾健骨汤载药血清对大鼠成骨细胞增殖的影响.方法将补肾健骨汤口饲大鼠,每日1次,连续7 d,于末次给药后2 h采血,分离获得含药血清,加入成骨细胞培养液中,连续培养10 d,从第2天开始用MTT法测定光密度值,探讨该方剂对成骨细胞增殖的影响.结果大鼠成骨细胞体外培养在对数生长期第3天至第9天载药血清组明显高于对照组.结论用MTT法观察补肾健骨汤载药血清对大鼠成骨细胞增殖有明显促进作用.
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VM26及10-HCPT对人肝癌细胞株的体外联合杀伤作用
目的:研究VM26及10-HCPT等化疗药物对人肝癌细胞的体外联合杀伤作用.方法:采用MTT比色分析法测定不同组合的化疗药物对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制率.结果:以VM26加10-HCPT对人肝癌细胞株的抑制率高,呈明显的协同作用,且抑制率随药物浓度的增加而增加.结论:VM26加10-HCPT对人肝癌细胞株具有明显的抑制作用,可作为临床用药的参考.
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MTT比色法检测苦参碱对兔晶状体上皮细胞增生的影响
目的 研究苦参碱对体外培养的兔晶状体上皮细胞增生的影响,探索白内障术后晶状体后囊浑浊的治疗药物.方法 取第2代对数生长期的兔晶状体上皮细胞,培养24 h后,加入不同浓度的苦参碱(0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mg/mL)作用24 h后,采用MTT法观察苦参碱对兔晶状体上皮细胞增生的影响.结果 苦参碱随着浓度的增加.其抑制兔晶状体上皮细胞增生的作用逐渐增强,增生抑制率的升高呈现明显的剂量依赖性.结论 苦参碱能有效抑制体外培养的兔晶状体上皮细胞增生,在防止白内障术后晶状体后囊浑浊方面有一定的应用前景.
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茶多酚对高糖条件下大鼠晶状体上皮细胞影响的研究
目的 探讨茶多酚对高糖条件下大鼠晶状体上皮细胞形态及生长情况的影响. 方法 取第2代对数生长期的大鼠晶状体上皮细胞,给予不同浓度的葡萄糖、茶多酚进行培育24小时,观察高糖条件下及茶多酚干预后大鼠晶状体上皮细胞形态的变化,MTT法检测0.1μM、0.3μM浓度的茶多酚对高糖培养的大鼠晶状体上皮细胞生长情况的影响.结果 在高葡萄糖浓度的培养条件下,大鼠晶状体上皮细胞死亡率增加.生长受到抑制.而用茶多酚干预的高糖条件的大鼠晶状体上皮细胞则较好的保持了上皮细胞的形态,细胞死亡较少,生长良好.大鼠晶状体上皮细胞的存活率和抑制率两两比较差异有统计学意义(P<0.05),不同浓度的茶多酚两组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 茶多酚对高糖损伤的晶状体上皮细胞具有保护作用.
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天然生物膜的细胞毒性的实验研究
目的:研究多糖及胶原蛋白天然生物膜的细胞毒性.方法:采用MTT比色法,检测生物膜对小鼠成纤维细胞L929细胞相对增殖率的影响,评价其细胞毒性.结果:该生物膜表现出较高的细胞相对增殖率,2 d时为99.10%±0.052%,4 d时为92.20%±0.027%,7 d时为86.26%±0.026%,其细胞毒性为1级,结论:生物膜无明显细胞毒性,可作为一种安全的生物盖髓剂应用于临床.
