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牛乳菌落总数的测定国标法与仪器法比对的探讨
牛乳是从符合国家有关要求的健康牛乳房中挤出的无任何成分改变的常乳.食品安全国家标准GB 19301-2010规定,新鲜牛乳的酸度范围是120 T到180 T之间,菌落总数应小于或等于200万cfu/ml.目前,牛乳菌落总数的测定方法,一种是国标法,即平板计数法;另一种是快速测定技术,包括疏水网膜技术、直接荧光过滤膜技术、流式细胞技术.流式细胞技术的代表是福斯公司的细菌分析仪,它可以用来快速测量生乳中的单个细菌总数,高可达200个样品每小时.本文主要是通过三个实验来比对国标法和仪器法之间的符合性与差异性,以及仪器法在以质论价方面的可行性.
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γH2AX的检测方法简介
DNA损伤有许多不同的形式,如碱基修饰,DNA单链断裂(DNA single stranded breaks,SSBs),DNA链内和链间交联以及DNA双链断裂(DNA double stranded breaks,DSBs)等,其中DSBs被认为是DNA严重的损伤.
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细胞与分子生物学新技术在我国毒理学研究中的应用
近年来,随着一些先进的细胞和分子生物学技术的引进与建立,我国毒理学研究整体水平得以大大的提高.现介绍几种我国已开展的细胞和分子生物学新技术的原理及其在毒理学领域中的应用,包括:差异显示技术、单细胞凝胶电泳技术、穿梭质粒pZ189和pSp189转染技术、转基因动物和转基因细胞、荧光原位杂交和流式细胞技术.这些技术具有终点明确,敏感性高等特点,在检测各种不同类型的DNA损伤和基因突变,以及研究细胞毒性和致癌的分子机理方面具有重要的价值.
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浅谈UF-100仪器使用与维护
由日本SYSMEX公司生产的UF-100是一台使用流式细胞技术的尿液有形成份分析仪.
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SYSMEXXT-4000i全自动血液分析仪常见故障排除及维护保养
SYSMEX XT-4000 i 血液分析仪运用了SYS-MEX的核酸荧光染色流式细胞技术来进行血液细胞和体液细胞的分析,能有效排除电阻抗法计数时常见的干扰:如血小板聚集、大血小板和细胞碎片等,保证了白细胞计数和五分类结果的准确;能提供幼稚粒细胞( IG )的定量报告参数,网织红细胞平均血红蛋白含量( RET-HE )定量报告;双方法进行血小板的检测,更好的解决地址血小板计数和血小板检测中的常见干扰;检测模式包括CBC、 CBC DIFF、 CBC DIFF RET、 CBC RET及手工、末梢血稀释、封闭、 BodyFluid四种进样方式,是一款真正拥有体液分析功能的仪器。在仪器日常使用过程中,为了保证测定结果的准确性,更好地为临床服务,应对仪器进行必要的维护保养。在长时间使用过程中,我们发现了几种常见故障,现报告如下。
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SysmexUF-1000i全自动尿沉渣分析仪故障检修一例
日本Sysmex公司生产的UF-1000i全自动尿沉渣分析仪采用流式细胞技术和核酸荧光染色技术,检测尿液中的各种有形成分,使得尿中有形成分的定量测定进入新的时期.该仪器具有快速、稳定、准确、重复性好等特点.该机在使用过程中,主要出现过一例典型故障:报"样本量不足"错误,现介绍如下:分析原因:查看标本架上的尿液标本,发现尿液量并不少,从而排除了尿液标本量太少造成仪器报警的可能;而后打开仪器前盖,发现导管支座上的过滤器装置有液体渗出,执行抽吸程序后,发现导管内有气泡流动,究其原因可能是长时间使用仪器,尿液中的杂质把过滤器堵塞造成的.
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Sysmex XT-2000i五分类血球仪压力异常维修一例
我院新购进一台Sysmex XT-2000i五分类细胞分析仪,该仪器采用流式细胞技术,对每个通过检测的细胞或颗粒进行逐个分析,鞘流机制使细胞计数的准确性和重复性得到提高.
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ABX Pentra 60血液分析仪的应用评价
五分类血液分析仪在各级医院越来越普及.法国生产的ABX Pentra60五分类血液分析仪可报告26项参数.该仪器采用光电比色法测定Hb;电阻抗法原理对WBC、RBC和PLT计数;WBC分类则经DI FF和WBC/BASO两个通道,采用流式细胞技术进行检测;并能对异形淋巴细胞(ALY)和巨大不成熟细胞(LIC)进行分析.为评估该仪器的性能,我们按照ICSH的有关规定对常用血液指标进行测试和分析.结果报告如下.
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流式细胞技术在毒理学研究中的应用
流式细胞仪(FCM)是在上世纪70年代发展起来的一种测量细胞荧光染色强度,定量测定细胞和亚细胞成分(微粒)的细胞分析仪.它也是在单细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质进行快速测量并可分选高纯度细胞亚群的一项新技术[1].近年来,随着细胞和分子生物学技术尤其是单克隆抗体技术的发展和分子探针的开发,流式细胞技术日见成熟,它以快速、灵活、灵敏和定量的特点,在国内外被广泛应用于医学基础研究和临床实践多方面.目前,流式细胞技术在毒理学多个分支研究领域已得到广泛应用,在研究外源化合物的细胞毒性和致癌分子机理方面显现出重要价值.笔者就目前FCM技术在免疫毒理、生殖和遗传毒理、发育毒理、环境以及神经毒理学方面的应用作一综述.
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液态芯片技术及其应用
液态芯片(liquid array)或液相芯片(liquid chip)也称悬浮芯片(suspension array),是20世纪70年代美国Luminex公司研制出的新一代生物芯片技术,利用带编码的微球体作为载体,流式细胞技术作为检测平台,对核酸、蛋白质等生物分子进行大规模测定.
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肺结核患者T细胞亚群测定分析
结核分枝杆菌引起的结核病是一种严重危害人类健康的慢性传染病,在历史上曾经夺去数以万计的生命.现在全球每年约有800万新感染病例,每年死亡人数将超过400万[1].我国结核病流行情况十分严峻,据文献资料全国结核杆菌感染人数超过4亿,活动性肺结核患者超过600万,在全球22个结核病高流行国家中居第二位,仅次于印度[2].结核分枝杆菌是一种细胞内寄生菌,引起的免疫反应主要是细胞免疫,本研究用流式细胞技术检测分析了2011年4~9月我院42例结核患者CD3、CD4和CD8的表达,来了解细胞免疫功能在结核病人中的变化,探讨免疫功能在结核病人中所发挥的作用.现将结果报道如下.
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流式细胞术三种染色方法检测体外纯化扩增的NK细胞的细胞毒作用比较
目的:比较流式细胞术3种不同染色方法检测体外诱导扩增后NK细胞的细胞毒活性效果.方法:收集健康志愿者外周血,体外诱导扩增NK细胞,在培养第17天后分为3组,每组按10∶1、20∶1、40∶1 3个效靶比混合,共同培养4h,并分组用3种不同方法染色后经流式细胞术检测.A组:CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法;B组:Annectin-V/PI双色荧光染色法;C组:CFSE/PI双色荧光染色法.结果:培养17 d后,NK细胞(CD3-CD56+)由培养第O天(16.34±10.51)%增加到(83.63±10.63)% (P <0.05).3种染色方法检测结果均显示,扩增后NK细胞对K562细胞具有显著细胞毒活性:A组NK细胞对K562细胞的细胞毒活性均明显高于B和C组(P<0.05),当效靶比为10∶1时,A、B和C3个组细胞毒活性分别为(36.56±3.69)%、(22.35±2.71)%和(10.85±2.09)%;当效靶比为20∶1时细胞毒活性分别为(47.83±5.52)%、(39.07±5.55)%和(29.61±4.81)%;当效靶比为40∶1时细胞毒活性则分别为(67.7±4.77)%、(51.51±4.43)%和(44.12±5.62)%,差异均有显著统计学意义(P<0.05).结论:健康者外周血经体外分离培养,可得到高纯度NK细胞;流式细胞检测技术CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法能特异性地和灵敏地检测NK细胞的细胞毒活性.
关键词: 流式细胞技术 细胞毒作用 NK细胞 CFSE Annexin-V/7-AAD -
组织因子微颗粒的检测及其在出凝血异常中的临床意义
本研究应用流式细胞术(FCM)建立组织因子微颗粒的检测方法,并探讨其在出凝血异常中的临床意义.应用特异性荧光抗体CD142-PE标记组织因子,采用FCM建立组织因子微颗粒的检测方法.测定20例血栓性疾病患者及25例初治急性早幼粒细胞白血病(APL)患者治疗前后的组织因子微颗粒,观察组织因子微颗粒在各组患者中的变化.结果表明,20例血栓性疾病患者组织因子微颗粒[(123.28±197.03)/μl]明显高于20例健康对照组[ (33.27±16.14)/μl,P<0.05];25例APL患者治疗前组织因子微颗粒为(75.24±104.58)/μl,亦高于正常对照组(P<0.05),经过诱导治疗缓解后组织因子微颗粒水平明显下降至(34.24±25.20)/μl(P<0.01).在这25例APL患者中,18例合并弥散性血管内凝血(DIC)患者的组织因子微颗粒在治疗前后有明显差异(P<0.05),7例未合并DIC患者治疗前后的组织因子微颗粒水平未见明显变化.结论:采用流式细胞术检测组织因子微颗粒可对血栓性疾病的诊断提供帮助,并对APL的DIC状况与疾病预后做出评估.
关键词: 组织因子微颗粒 急性早幼粒细胞白血病 血栓性疾病 流式细胞技术 -
流式细胞术检测再生障碍性贫血患者淋巴细胞胞浆内IFN-γ水平及其与治疗效果之间的关系
为了探讨淋巴细胞胞浆内IFN-γ水平在再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者治疗方案选择及预后判断中的作用及其临床意义,采用流式细胞技术动态监测免疫抑制治疗前后淋巴细胞胞浆内IFN-γ水平变化,同时记录患者血常规指标的变化及用药情况等.结果发现:在50例患者中有28例T淋巴细胞内IFN-γ水平高于正常值,占56%,24例IFN-γ水平增高患者的免疫抑制治疗有效率达85.7%,其IFN-γ水平下降与血象恢复基本呈正相关,并且明显早于血液学缓解.结论:IFN-γ水平升高的AA患者用免疫抑制剂治疗效果好,IFN-γ水平变化明显早于血常规指标的变化,这对于提示疗效及复发有重要意义.
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流式细胞分析在淋巴瘤和白血病诊断及鉴别诊断中的应用
淋巴瘤和白血病诊断和分类经历了许多修改,与原来的纯形态学分类不同,现在的REAL(Revised European and American Lymphoma Classification) 和世界卫生组织(WHO)的分类是综合了临床表现,形态学,免疫学和分子生物学的特征发展来的[1-4].形态学是病理诊断的基础,但是免疫学分类起着非常重要的作用.它可以通过流式细胞技术或免疫组织化学来实现.
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人巨细胞病毒感染诱导宿主细胞凋亡的实验研究
人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染可以通过胎盘垂直传播,导致流产、畸形、死胎、新生儿神经系统及其他脏器的损害,已成为影响胎儿及新生儿生长发育的常见病原.现已证实,许多病毒性疾病的发生与凋亡失常有关[1].我们采用流式细胞技术对HCMV感染细胞进行细胞周期和凋亡分析,以探讨HCMV对宿主细胞的影响及机理.
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人巨细胞病毒感染诱导宿主细胞凋亡的实验研究
人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染可以通过胎盘垂直传播,导致流产、畸形、死胎、新生儿神经系统及其他脏器的损害,已成为影响胎儿及新生儿生长发育的常见病原.现已证实,许多病毒性疾病(如病毒性肝炎和艾滋病等)的发生与凋亡失常有关[1].但目前有关HCMV与细胞凋亡的关系报道尚少.我们采用流式细胞技术对HCMV感染细胞进行细胞周期和凋亡分析,以探讨HCMV对宿主细胞的影响及机理.
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人类B细胞转化为抗体分泌浆细胞的体外研究
目的 体外示踪不同刺激条件下人类B细胞转化为抗体分泌浆细胞的能力.方法 对5名健康自愿者采用B细胞阴性选择磁珠分离法分离和体外培养B细胞,观察4种培养条件下(培养液对照组、PWM组、细胞因子组及PWM+细胞因子组)、不同时间点B细胞转化为抗体分泌浆细胞的能力.采用双荧光标记(FTTC-CD27、PE-CD38)流式细胞技术监测B细胞4种表面标志物的动态变化;采用酶联免疫法(ELISA)测定不同时间点培养上清液中Ig浓度;采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)测定不同时间点抗体分泌B细胞数.结果 B细胞产生抗体浓度明显与培养条件有关.PWM刺激的B细胞培养上清液中Ig浓度高(P=0.003);PWM+细胞因子组次之;细胞因子组与对照组差异无统计学意义.流式细胞分析结果显示,培养第7天浆细胞前体达峰,第10天浆细胞百分率达峰.活细胞数以细胞因子组多,培养10 d后仍呈增殖状态;而PWM组很快下降.ELISPOT法测定的Ig分泌B细胞数也以PWM组佳,:PWM+细胞因子组次之.结论 从Ig产生能力看,以PWM组佳;从细胞增殖和浆细胞的存活来看,以细胞因子组佳.表明体外诱导B细胞产生抗体不仅需要有效的刺激原,同时还需要必需的细胞因子信号促使细胞增殖和维持细胞的存活.
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T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期调节的研究
目的 探讨T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期的影响.方法 应用脂质体LipofectamineTM2000将构建的pEGFP-N1-T-钙黏蛋白以及pEGFP-N1空载体转染至B16F10 细胞,OPTI-MEM培养基体外培养6 h 后RPMI-1640继续培养24 h,应用碘化丙啶标记,流式细胞仪检测T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期的影响.结果 转染T-钙黏蛋白组G0/G1期和G2/M期细胞比率分别为(60.917±1.897)%、(8.513±0.651)%,明显高于未转染组的(53.563±1.856)%、(2.627±0.434)%和pEGFP-N1空载体组的(53.880±2.164)%、(2.770±0.466)%,差异有显著性(P<0.05);转染T-钙黏蛋白组S期细胞比率为(30.570±1.368)%,低于未转染组的(43.810±2.003)%及pEGFP-N1空载体组的(43.350±2.629)%,差异有统计学意义(P<0.05).未转染组与转染pEGFP-N1空载体组各期差异均无统计学意义(P>0.05).结论 T-钙黏蛋白使B16F10细胞G0/G1期和G2/M期比率增高,S期比率降低.
关键词: T-钙黏蛋白 B16F10黑素瘤细胞 pEGFP-N1 细胞周期 流式细胞技术 -
系统性红斑狼疮患者外周血中淋巴细胞亚群变化
目的 探讨淋巴细胞亚群在系统性红斑狼疮(SLE)发病机制中的作用.方法 采用标记免疫荧光染色和流式细胞技术,对15例活动期SLE患者,11例缓解期SLE患者及10例正常人的外周血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞(NK细胞)进行检测.结果 活动期SLE患者下正常对照组比较CD4+细胞数明显降低(P<0.05),CD4+/CD8+比值明显降低(P<0.05),B(CD19+)细胞数明显增高(P<0.05)、NK(CD3-CD16+CD56+)细胞数明显降低(P<0.05),CD3+、CD8+T淋巴细胞无统计学差异(P>0.05).缓解期SLE患者各亚群与正常对照组比较无统计学差异(P>0.05).结论 SLE患者活动期淋巴细胞亚群存在异常,细胞免疫功能异常,这种变化是导致SLE发病的重要机制之一,淋巴细胞亚群的测定可作为诊断活动期与缓解期SLE患者的一项有价值的参考指标.