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T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期调节的研究
目的 探讨T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期的影响.方法 应用脂质体LipofectamineTM2000将构建的pEGFP-N1-T-钙黏蛋白以及pEGFP-N1空载体转染至B16F10 细胞,OPTI-MEM培养基体外培养6 h 后RPMI-1640继续培养24 h,应用碘化丙啶标记,流式细胞仪检测T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期的影响.结果 转染T-钙黏蛋白组G0/G1期和G2/M期细胞比率分别为(60.917±1.897)%、(8.513±0.651)%,明显高于未转染组的(53.563±1.856)%、(2.627±0.434)%和pEGFP-N1空载体组的(53.880±2.164)%、(2.770±0.466)%,差异有显著性(P<0.05);转染T-钙黏蛋白组S期细胞比率为(30.570±1.368)%,低于未转染组的(43.810±2.003)%及pEGFP-N1空载体组的(43.350±2.629)%,差异有统计学意义(P<0.05).未转染组与转染pEGFP-N1空载体组各期差异均无统计学意义(P>0.05).结论 T-钙黏蛋白使B16F10细胞G0/G1期和G2/M期比率增高,S期比率降低.
关键词： T-钙黏蛋白 B16F10黑素瘤细胞 pEGFP-N1 细胞周期 流式细胞技术 -
脂联素及T-钙黏蛋白与大鼠糖尿病心肌病的关系
观察糖尿病(DM)大鼠心肌细胞形态学变化,测定血清脂联素(APN)及受体T-钙黏蛋白(T-cad)在心肌的表达水平.DM大鼠心肌细胞超微结构出现符合糖尿病心肌病改变,血清APN及T-cad的表达随着病变发展而升高.血清APN及T-cad的表达均随时间延长增多,从而发挥其保护作用.
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T-钙黏蛋白、血管内皮钙黏蛋白与子宫腺肌病及子宫内膜异位症关系的研究
目的 探讨T-钙黏蛋白(T-cad)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cad)与子宫腺肌病(AM)及子宫内膜异位症(EM)的关系.方法 采用免疫组化SP二步法检测子宫腺肌病(腺肌病组,45例)、卵巢子宫内膜异位囊肿(异位囊肿组,45例)、子宫腺肌病合并卵巢子宫内膜异位囊肿(合并组,45例)及正常子宫内膜(对照组,45例)T-cad与VE-cad表达,并行两者的相关性分析.结果 ①腺肌病组、异位囊肿组和合并组在位内膜T-cad的表达率分别是11.11％ (5/45)、4.44％ (2/45)和11.11％ (5/45),与对照组(37.78％,17/45)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);②腺肌病组、异位囊肿组、合并组腺肌病异位内膜、合并组卵巢异位内膜VE-cad的表达率分别为71.11％ (32/45)、64.44％ (29/45)、42.22％ (19/45)和33.33％ (15/45),4组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);③异位囊肿组Ⅰ～Ⅱ期T-cad的表达率(71.43％,10/14)高于Ⅲ～Ⅳ期(3.23％,1/31; P＜0.05),而合并组Ⅰ～Ⅱ期T-cad的表达率(25.00％,3/12)高于Ⅲ～Ⅳ期(0,0/33; P＜0.05);④T-cad与VE-cad在各组子宫内膜的表达无相关性(|r|＜0.3,P＞0.05).结论 T-钙黏蛋白在AM及EM内膜上表达低于正常内膜,而血管内皮钙黏蛋白在AM及EM内膜上表达较正常内膜升高,可能与AM及EM发病相关.
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脂联素受体 T-钙黏蛋白在香烟烟雾暴露所致大鼠肺气肿中的作用
目的：通过观察香烟烟雾暴露大鼠血清脂联素（adiponectin ， APN ）、支气管上皮和肺血管内皮细胞A PN受体T‐钙黏蛋白（T‐cadherin ， T‐cad ）的表达水平，以及二者与肺气肿严重程度的相关性，探讨T‐cad在香烟烟雾暴露所致大鼠肺气肿中的作用。方法选取6周龄健康雄性SD大鼠，体质量约为（190±10） g ，共16只，按有无香烟烟雾暴露随机分为香烟烟雾暴露组和对照组，每组8只，饲养6个月。显微镜下计算肺组织平均肺泡数（mean alveoli number ， M AN ）及平均内衬间隔（mean linear intercept ， MLI）， ELISA法测定血清总APN水平，免疫组织化学分析法对支气管上皮和肺血管内皮细胞 T‐cad进行半定量分析。结果①香烟烟雾暴露组MAN [（163.72±31.04）个／mm2]较对照组[（203.66±8.51）个／mm2]降低，MLI [（76.33±10.98）μm]较对照组[（65.57±5.72）μm]升高，差异有统计学意义（ t值分别为－3.51，2.46，P值均＜0.05）；MAN与MLI呈负相关（ r ＝－0.791，P＜0.01）。②香烟烟雾暴露组APN [（8.14±1.17） mg／L]较对照组[（6.57±1.15） mg／L]升高，差异有统计学意义（ t ＝2.71，P ＜0.05）；APN与MAN呈负相关，与MLI呈正相关（ r分别＝－0.673和0.751，P值均＜0.05）。③香烟烟雾暴露组肺血管内皮细胞 T‐cad [（30.79±1.22）×10‐4]较对照组[（47.32±3.42）×10‐4]降低，差异有统计学意义（t ＝－12.85，P ＜0.05）；T‐cad与M A N呈正相关，与M L I呈负相关（ r ＝0.674，－0.615， P值均＜0.05）。④香烟烟雾暴露组支气管上皮细胞T‐cad [（308.01±16.82）×10‐4]与对照组[（293.14±19.60）×10‐4]比较差异无统计学意义， T‐cad与MAN、MLI均无相关性。⑤血清APN与肺血管内皮细胞 T‐cad表达水平呈负相关（ r ＝－0.677， P ＜0.05），与支气管上皮细胞T‐cad无相关性。结论香烟烟雾暴露可以降低肺血管内皮细胞T‐cad的表达，使其对血管内皮的保护作用减弱，同时升高血清A PN水平，进一步促进肺气肿的形成。
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脂联素受体在正常SD大鼠乳鼠心肌细胞的分布和表达
目的 通过体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,研究脂联素受体1(AdipoR1)、脂联素受体2(AdipoR2)及T-钙黏蛋白(T-cadherin)三种脂联素受体在大鼠乳鼠心肌细胞上的分布和表达.方法 采用酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞,通过α-肌动蛋白免疫荧光法对原代培养的心肌细胞进行鉴定,并在倒置相差显微镜下观察细胞生长状态.选用原代培养96 h的单层心肌细胞进行实验,使用RT-PCR和细胞免疫组织化学方法 检测AdipoR1、AdipoR2、T-cadherin的mRNA和蛋白在心肌细胞中的表达情况.结果 在SD大鼠乳鼠心肌细胞上均检测到了AdipoR1、AdipoR2、T-cadherin的mRNA和蛋白表达,其中以AdipoR1和T-cadherin的mRNA和蛋白表达量高,与AdipoR2的表达量相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 脂联素受体1、脂联素受体2和T-钙黏蛋白,三种脂联素受体在SD大鼠乳鼠心肌细胞上均有表达,并以脂联素受体1和T-钙黏蛋白的表达为主,脂联素受体2表达量较少.
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T-cad、VE-cad与子宫腺肌病及子宫内膜异位症的相关性研究
目的:探讨T-钙黏蛋白(T-cad)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cad)与子宫腺肌病(AM)及子宫内膜异位症(EM)的关系.方法:收集中国人民解放军第一七五医院2010～ 2013年162例AM及EM住院手术患者的石蜡块,分为腺肌病组、异位囊肿组、子宫腺肌病合并卵巢子宫内膜异位囊肿组(合并组)各54例,另选择同期正常子宫内膜(对照组)54例,采用免疫组化SP二步法检测子宫腺肌病、卵巢子宫内膜异位囊肿、子宫腺肌病合并卵巢子宫内膜异位囊肿及正常子宫内膜T-cad与VE-cad表达,并进行相关性分析.结果:①腺肌病组、异位囊肿组和合并组在位内膜T-cad的表达率分别为11.11％(6/54)、3.70％ (2/54)和11.11％ (6/54),与对照组37.04％ (20/54)比较差异有统计学意义(P＜0.05);②腺肌病组、异位囊肿组、合并组腺肌病异位内膜、合并组卵巢异位内膜VE-cad的表达率分别为70.38％ (38/54)、64.48％ (35/54)、42.26％ (23/54)和33.33％ (18/54),差异有统计学意义(P＜0.05);③异位囊肿组Ⅰ～Ⅱ期T-cad的表达率70.59％(12/17)高于Ⅲ～Ⅳ期的2.70％ (1/37),差异有统计学意义(P＜0.05),而合并组Ⅰ～Ⅱ期T-cad的表达率28.57％ (4/14)高于Ⅲ～Ⅳ期的0.00％ (0/40),差异有统计学意义(P＜0.05);④T-cad与VE-cad在各组子宫内膜的表达无相关性(P＞0.05).结论:T-cad在AM及EM内膜上表达低于正常内膜,而VE-cad在AM及EM内膜上表达较正常内膜升高,证明两者可能与AM及EM发病相关.
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T-钙黏蛋白基因对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖以及凋亡的影响
目的 探讨T-钙黏蛋白(T-cadherin)因子水平对人鼻咽癌(NPC)细胞株CNE-2增殖及凋亡的影响.方法 采用RT PCR检测T-cadherin基因含量,采用Western印迹方法检测T-cadherin蛋白表达水平,并构建T-cadherin过表达载体用于转染NPC细胞株,使CNE-2细胞株高表达T-cadherin,运用RT PCR 和Western印迹方法进行验证.后采用MTT法及流式细胞技术检测T-cadherin因子水平与CNE-2细胞增殖及凋亡是否具有相关性.结果 RT PCR和Western印迹结果显示NPC组织中T-cadherin基因含量和蛋白表达水平显著降低(P<0.05);转染T-cadherin基因过表达质粒的CNE-2细胞增殖水平显著降低(P<0.05);转染T-cadherin基因过表达质粒的CNE-2细胞凋亡水平显著升高(P<0.05);对照组和正常组以上指标的差异无统计学意义(P>0.05).结论 T-cadherin基因具有抑制NPC细胞增殖和促进NPC细胞凋亡的作用,在NPC靶向治疗上有一定应用前景.
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脂联素上调心肌细胞缺氧/复氧损伤后T-钙黏蛋白的表达
本文旨在研究脂联素(adiponectin,APN)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的心肌细胞T-钙黏蛋白(T-cadherin,T-cad)表达的影响.采用酶消化法原代培养Sprague-Dawley (SD)乳鼠心肌细胞,随机分为:正常对照组、H/R组、H/R+脂联素(3,10,20,30 μg/mL)组.H/R组置缺氧环境(高浓度N2饱和过的缺氧液)中培养3h后,再置于复氧环境(纯氧饱和过的复氧液)中培养1h.APN处理组先用不同浓度APN预处理24 h后中随后处理同H/R组.用化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)的释放,通过流式细胞术和脱氧核糖核苷酸缺口末端标记(TUNEL)法来检测心肌细胞的凋亡,用RT-PCR和Western blotting方法检测T-cad的表达.结果显示,与正常对照组相比,H/R组心肌细胞凋亡率显著升高,心肌细胞LDH的释放量明显增加,T-cad mRNA和蛋白水平表达均明显下降;而和H/R组相比,APN预处理可剂量依赖性地降低心肌细胞凋亡率,减少LDH释放量,并上调T-cad mRNA和蛋白水平.以上结果提示,脂联素可能通过上调T-cad的表达逆转H/R所致的心肌细胞损伤及凋亡,对心肌细胞有保护作用.
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T-钙黏蛋白在喉鳞癌中的表达及意义
目的 检测喉鳞癌组织中T-钙黏蛋白(T-cadherin)的表达情况,探讨T-cadherin与喉鳞癌临床病理特征的关系.方法 采用免疫组化检测55例喉鳞癌组织和55例癌旁组织中T-cadherin的表达,并结合临床病理特征进行分析.结果 T-cadherin在癌旁组织阳性表达率为87.27％,而在喉鳞癌组织中的阳性表达率仅为30.91％,经x2检验,差异有统计学意义(P＜0.01).T-cadherin在喉鳞癌组织中的表达情况与肿瘤分化和颈淋巴结转移、TNM分期呈负相关.结论 在喉鳞癌组织中存在T-cadherin的表达缺失或低水平表达,提示T-cadherin在喉鳞癌的发生、发展和转移中起着重要的作用.
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乙肝病毒X蛋白对E-cadherin和T-cadherin表达的调节作用
目的 体外研究乙肝病毒X蛋白(HBx)对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和T-钙黏蛋白(T-cadherin)表达的调节作用.方法 建立稳定表达HBx基因的HepG2细胞系(HepG2-HBx),稳定转染空质粒pcDNA3.1的HepG2细胞系作为对照(HepG2-pcDNA3.1),分别用荧光实时定量(Real-time)PCR和Western-blot技术检测转染前后E-cadherin和T-cadherin在mRNA及蛋白水平表达变化.结果 以HepG2-pcDNA3.1细胞为参照,转染HBx基因后的HepG2-HBx细胞E-cadherin mRNA和蛋白水平分别为其(42.28±8.73)%和(35.28±4.33)%,而T-cadherin则分别为其(4.47±0.78)和(5.11±0.83)倍,差异有统计学意义(P<0.05).结论 HBx下调E-cadherin的表达,上调T-cadherin的表达,其机制可能为HBx促进E-cadherin向T-cadherin转换.
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T-钙黏蛋白基因甲基化在肺癌发生中的作用
目的 探讨T-钙黏蛋白(CDH13)基因甲基化在肺癌发生中的作用及其影响因素.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测CDH13基因在肺癌组织中异常甲基化的水平,探讨CDH13基因在56例肺癌组织、56例癌旁组织标本和20例非肺癌良性肺切除组织标本中的表达及临床意义,研究CDH13基因异常甲基化与肺癌的相关性.结果 在肺癌组织中CDH13基因甲基化率明显高于癌旁组织和非肺癌良性肺切除组织,甲基化率分别为33.9％、8.9％、5.0％,差异有统计学意义(P＜0.05).CDH13基因异常甲基化与CDH13的表达水平呈负相关(r=-0.490,P＜0.05).CDH13基因启动子区5'端CpG岛甲基化导致了CDH13的表达下调.结论CDH13基因甲基化的发生具有肿瘤特异性,并且与肺癌患者的病理生理改变密切相关.
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新型脂联素受体T-cadherin在非酒精性脂肪性肝病大鼠中的表达
目的:探讨新型脂联素受体T-钙黏蛋白(T-cadherin)在非酒精性脂肪性肝病SD大鼠肝及血液中的表达及其与肝组织病理改变的关系.方法:将60只SD大鼠随机均分为2组:模型组(高脂饲料喂养)及正常组(普通饲料喂养).分别于第0,6,8,12及16周各组处死6只SD大鼠.监测大鼠体质量和肝指数变化,利用肝组织病理切片观察肝脂肪沉积情况,进行NAFLD活动度积分(NAFLD activity score,NAS).以RT-PCR法检测肝及血液T-cadherin mRNA表达及其动态变化,免疫组织化学检测肝T-cadherin蛋白表达及其动态变化.结果:模型组大鼠肝及血液中T-cadherin mRNA表达均逐步上升,在造模6周后即与正常组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).肝T-cadherin mRNA水平与肝指数(r=0.900,P＜0.01)、肝NAS (r=0.933,P＜0.01)均显著正相关.血液中存在可溶性的T-cadherin成分,其水平与肝指数(r=0.805,P＜0.01)、肝NAS评分(r=0.889,P＜0.01)亦呈正相关.模型组大鼠肝中T-cadherin蛋白表达逐步上升,在造模6周后即与正常组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).肝T-cadherin蛋白水平与肝指数(r=0.879,P＜0.01)、肝脏NAS评分(r=0.912,P＜0.01)均显著正相关.结论:非酒精性脂肪性肝病大鼠肝及血液中可溶性T-cadherin mRNA及蛋白的表达与肝脂肪性炎症程度呈正相关,提示T-cadherin与非酒精性脂肪性肝病的发病密切相关.
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T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞增殖凋亡的影响
目的 探讨T-钙黏蛋白(T-cadherin)对B16F10黑素瘤细胞增殖凋亡的影响.方法 体外培养转染T-cadherin的黑素瘤细胞株B16F10(转染T-cadherin组),以及转染pEGFP-N1空载体(转染空载体组)和未转染的黑素瘤细胞株B16F10(未转染组),采用MTT法和流式细胞技术检测黑素瘤B16F10细胞株的增殖凋亡情况.结果 MTT结果显示,转染T-cadherin组细胞吸光度(OD)值(0.383±0.116)明显低于未转染组(1.142±0.053)和转染空载体组(1.250±0.055),差异有统计学意义(P<0.05),未转染组与转染空载体组间差异无统计学意义(P>0.05);流式细胞仪检测结果显示,转染T-cadherin组细胞的凋亡率[(28.157±3.692)%]远远高于未转染组[(2.893±0.454)%]和转染空载体组[(2.350±0.578)%],差异有统计学意义(P<0.05);未转染组与转染空载体组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 T-cadherin对B16F10黑素瘤细胞的增殖有抑制作用,对其凋亡有促进作用.
关键词： T-钙黏蛋白 B16F10黑素瘤细胞 增殖 凋亡 -
T-cadherin 蛋白与基因在混合细胞型霍奇金淋巴瘤中表达和临床意义
目的：探讨 T‐cadherin 蛋白与基因在混合细胞型霍奇金淋巴瘤患者中的表达情况及其临床意义。方法分别采用免疫组化法和 RT‐PCR 同时检测45例混合细胞型霍奇金淋巴瘤和20例淋巴结反应性增生淋巴结组织及其骨髓 mRNA 中 T‐cadherin 的表达情况，分析其与患者临床病理特征和预后的关系。结果 T‐cadherin 蛋白在混合细胞型霍奇金淋巴瘤阳性表达率31．1％（14／45）显著低于淋巴结反应性增生90．0％（18／20）；T‐cadherin mRNA 的相对表达量在混合细胞型霍奇金淋巴瘤患者显著少于淋巴结反应性增生患者（P＜0．05）。混合细胞型霍奇金淋巴瘤中 T‐cadherin 表达与患者 TNM 分期和结外累及有关（P＜0．05），与患者年龄、性别、WBC 、PLT 、Hb 、LDH 和 IPS 评分无相关（P ＞0．05）。多因素 Logistic 回归分析显示，TNM 分期和 T‐cadherin 阴性表达是混合细胞型霍奇金淋巴瘤患者结外累及的独立危险因素。经过 Log‐rank 检验显示，混合细胞型霍奇金淋巴瘤患者 T‐cadherin 阴性表达和 T‐cadherin 阳性表达的2年生存率分别是83．9％和92．9％（P＞0．05）；3年生存率分别是71．0％和85．7％（P＞0．05）；5年生存率分别是41．9％和78．6％（P＜0．05），Kaplan‐Meier 生存分析显示 T‐cadherin 阴性表达5年生存率明显低于 T‐cadherin 阳性表达组（P＜0．05）。结论 T‐cadherin 表达减少和混合细胞型霍奇金淋巴瘤患者 TNM 分期和结外累及有相关性，T‐cadherin 可能成为评价混合细胞型霍奇金淋巴瘤预后相关的一种新型分子标记物。
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T-cadherin启动子甲基化与胃癌恶性生物学行为及预后关系的研究
目的:探讨T-cadherin基因表达及启动子甲基化与胃癌恶性生物学行为及预后的相关性.方法:采用免疫组织化学法(IHC)和甲基化特异性PCR法(MSP)检测80例临床手术切除的胃癌标本及40例相应癌旁组织标本中T-cadherin表达及启动子甲基化情况,并与临床病理资料进行对照分析,每例患者随访24个月.结果:80例胃癌标本中,T-cadherin阳性表达率仅为45.0％(36/80),与相应癌旁组织相比明显减低.T-cadherin表达与组织分型(P=0.032)、肿瘤分化程度(P=0.037)、是否存在淋巴结转移(P=O.O1O)及TNM分期有关(P=0.000),与患者年龄、性别及肿瘤大小无关(P＞0.05).80例胃癌标本中有38例存在T-cadherin启动子甲基化现象(47.5％),癌旁组织标本则全部呈非甲基化状态(100.0％).T-cadherin启动子甲基化与组织分型(P=O.O12)、肿瘤分化程度(P=0.020)、是否存在淋巴结转移(P=0.020)及TNM分期有关(P =0.007),与患者年龄、性别及肿瘤大小无关(P＞0.050).24个月的随访结果显示:T-cadherin启动子甲基化组的平均生存时间和中位生存时间均较非甲基化组缩短,两组差异有统计学意义(P=0.029).通过Cox比例风险模型评估,胃癌的分化程度(P=0.030)、是否存在淋巴结转移(P=0.010)及TNM分期(P=0.010)均可影响患者的生存时间,分化程度低、发生淋巴结转移、TNM分期Ⅲ-Ⅳ期的胃癌患者死亡风险增加.结论:T-cadherin启动子甲基化是导致该蛋白表达下调的原因之一,与胃癌恶性生物学行为及预后密切相关,可作为胃癌恶性程度判断及预后评估的参考指标,对指导临床诊治有重要意义.
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T-钙黏蛋白对黑素瘤侵袭力的影响
目的 探讨T-钙黏蛋白(T-cadherin)对黑素瘤侵袭力的影响.方法 体外培养黑素瘤细胞株B16F10,将pEGFP-N1空载体和构建的pEGFP-N1-T-cadherin转染B16F10细胞,采用RT-PCR和免疫组化SP法检测T-cadherin基因及蛋白水平的表达情况;应用transwell细胞侵袭实验测定转染T-cadherin后肿瘤细胞的侵袭力.结果 RT-PCR和免疫组化SP法检测结果表明,细胞可转录和表达T-cadherin;转染T-cadherin组穿过transwell小室膜的细胞数目(2.20±0.49)明显少于未转染组(16.80±1.39)和转染pEGFP-Nl空载体组(15.00±1.26),差异有统计学意义(P<0.05),未转染组与转染pEGPF-N1空载体组差异无统计学意义(P>0.05);MTT法结果显示,转染T-cadherin组穿过小室膜细胞的吸光度(OD)值(0.124±0.003)明显低于未转染组(0.263±0.006)和转染pEGFP-N1空载体组(0.247±0.012),差异有统计学意义(P<0.05),未转染组与转染pEGFP-N1空载体组的差异无统计学意义(P>0.05).结论 T-cadherin对黑素瘤细胞的体外侵袭能力有抑制作用.
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T-cadherin分子在鼻咽癌中表达异常及意义
目的 探讨T-钙黏蛋白(T-cadherin)的表达与鼻咽癌临床病理的关系.方法 采用免疫组织化学SP法分别检测21例鼻咽癌组织、10例鼻咽部炎症组织中T-cadherin的表达情况,分析各组鼻咽组织中T-cadherin的表达差异.结果 本组中10例正常或炎症鼻咽部组织中T-cadherin表达阳性率为100％ (10/10),21例鼻咽癌组织中T-cadherin分子表达阳性率为23.8(5/21),两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在鼻咽癌组织中存在T-cadherin分子表达的缺失或低水平表达,而且随着肿瘤的恶性进展,T-cadherin分子的表达进行性下降.
