首页 > 文献资料
-
蜕膜自然杀伤细胞与不明原因反复自然流产的关系
目的通过测定子宫蜕膜自然杀伤(NK)细胞亚群及其杀伤活性,探讨其在不明原因反复自然流产(URSA)发病中的作用.方法随机选取确定URSA的患者10例为实验组,选取15例正常妊娠(NP组)为对照,采用流式细胞仪检测两组蜕膜组织NK细胞亚群,MTT还原法测定NK细胞杀伤活性.结果URSA组蜕膜中CD56+NK细胞含量显著高于NP组(P＜0.01),且URSA组CD56+CD16+细胞亚群含量及CD56+CD16+/CD56+CD16-比值也较NP组显著升高(P均＜0.01),而CD56+CD16-细胞亚群含量两组比较无差异(P＞0.05).蜕膜NK细胞活性URSA组为(31.60±2.62)%,而NP组仅为(15.65±2.02)%,两组蜕膜NK细胞活性有显著差异(P＜0.01).结论URSA的发生可能与NK细胞亚群失衡及杀伤活性异常增高而导致母胎间的免疫耐受平衡被打破有关.
-
流式细胞分析在SARS临床研究中的应用
介绍流式细胞绝对计数血液淋巴细胞亚群、T淋巴细胞体外活化功能测定、活化免疫细胞内细胞因子分析、定量分析淋巴细胞亚群表达某些活化抗原在SARS临床研究中的应用及流式细胞分析SARS标本应注意的问题,并提供了一例SARS病例的分析结果供参考.
-
丙肝宁颗粒对小鼠免疫性肝损伤的保护作用
目的:观察丙肝宁颗粒对卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)所致小鼠免疫性肝损伤模型的肝保护作用,并初步探讨其机制.方法:小鼠尾iv BCG 2.5mg/只,对照组给予等量NS.给药自造模之日开始,每日1次,持续1 0d.末次给药后再次尾ivLPS1 0 μ g/只进行攻击,1 6h后小鼠眶后静脉取血,进行指标检测.结果:丙肝宁1.2 5、2.5、5.0g/kg3个剂量组均可不同程度地抑制BCG和LPS诱导的小鼠肝、脾指数及血清ALT、AST水平的升高,抑制ConA、LPS诱导的淋巴细胞增殖反应降低和T细胞亚群CD4+/CD8+比值升高,阻止小鼠肝脏病变的发生,且有显著性差异.结论:丙肝宁颗粒对小鼠免疫性肝损伤具有保护作用,且可调节免疫功能的变化.
-
人CD23基因的扩增及其在HEK 293T细胞的高效表达
目的 建立一个有效表达CD23的系统.方法 采用RT-PCR方法,从外周血淋巴细胞中扩增人的CD23 cDNA基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1B上,构建成pcDNA3.1/CD23 质粒表达载体;将pcDNA3.1/CD23质粒转染HEK293T细胞,通过流式细胞仪和Western blot检测CD23在细胞中的表达情况.结果 扩增的CD23 cDNA序列与文献报道的一致;通过构建表达载体和转染细胞实现了CD23 cDNA在293T细胞膜上的表达.转染效率达80%以上,并获得了较高水平的表达.结论 扩增CD23 cDNA基因,经过转染HEK293T细胞,实现了CD23在HEK293T细胞的高效表达.
关键词： CD23 HEK293T细胞 表达 Western blot 流式细胞分析 -
流式细胞术联合检测骨髓细胞CD271、CDl33、CD34的表达与分析
本研究检测骨髓细胞的CD271、CD133和CD34的表达,分析细胞表达CD271与CD133及CD133与CD34的相关性.根据不同设计组合用CD45-PerCP、CD271-PITC、CD133-PE和CD34-FITC标记骨髓细胞,获得细胞后以FSC、SSC和CD45反复对细胞群进行定位和筛选,然后用流式细胞术检测骨髓细胞和骨髓单个核细胞(MNC)的上述表达.结果表明,骨髓细胞CD271+、CD133+和CD34+表达率分别为0.16%、0.20%和0.43%,骨髓单个核细胞分离后CD271+、CD133+和CD34+表达率分别0.49%、0.47%和1.07%;骨髓细胞的CD271+ CD133+共表达率为0.02%,单个核细胞分离后的CD271+ CD133+的共表达率为0.03%.90%CD133+细胞表达CD34,40%CD34+细胞表达CD133.结论:建立的三色荧光联合检测方法可作为检测骨髓中CD271+,CD133+和CD34+细胞的方法.CD271阳性细胞与CD133和/或CD34阳性细胞是不同的细胞群,CD271可能在评价和指导骨髓间充质干细胞的临床治疗中有重要意义.
-
流式细胞分析在淋巴瘤和白血病诊断及鉴别诊断中的应用
淋巴瘤和白血病诊断和分类经历了许多修改,与原来的纯形态学分类不同,现在的REAL(Revised European and American Lymphoma Classification) 和世界卫生组织(WHO)的分类是综合了临床表现,形态学,免疫学和分子生物学的特征发展来的[1-4].形态学是病理诊断的基础,但是免疫学分类起着非常重要的作用.它可以通过流式细胞技术或免疫组织化学来实现.
-
流式细胞分析在淋巴瘤诊断中的作用
从1957年Dr. Rappaport 奠定了淋巴瘤的分型后,其分类经历了多次大的修改[1-5].其修改次数之频繁,使病理学家,临床医生有时感到不适应.修改的原因在于免疫学(immunology), 细胞遗传学(cytogenetics) 和分子生物学(molecular biology) 的飞速发展.作为基础医学研究和临床前沿的血液淋巴学科受冲击大,同时亦受益大.到目前为止,新的亦是被广泛采纳的是WHO分类[5].
-
卡介苗对哮喘小鼠TH1/TH2平衡的影响
目的探讨卡介苗(BCG)对哮喘小鼠TH1/TH2平衡的影响.方法 C57BL/6小鼠以卵白蛋白(OVA)致敏激发建立哮喘模型.于第一次抗原激发前2周以BCG皮内注射干预,在后1次抗原激发后48 h收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血,ELISA方法测定外周血清及BALF中IL-5与IFN-γ水平,并采用三色光流式细胞分析法测定外周血TH1/TH2细胞比.结果与阴性对照组相比,OVA致敏激发组外周血清及BALF中IL-5水平升高而IFN-γ水平降低,BCG干预组外周血清及BALF中IL-5较OVA致敏激发组低而IFN-γ较后者升高,与阴性对照组水平相近.此外,OVA致敏激发组外周血中TH2/TH1比值(1.57±0.56)较阴性对照组(0.37±0.05)明显增高(P＜0.01),BCG干预后TH2/TH1比值(0.59±0.11)较OVA致敏激发组下降(P<0.05),同时Tc2/Tc1比值(0.62±0.07)也较OVA致敏激发组(1.15±0.18)降低(P＜0.05).结论哮喘小鼠中TH2型免疫应答占优势,BCG干预不仅在细胞因子水平,也在细胞数量上校正了TH1/TH2失平衡.
-
呼吸道合胞病毒对致敏小鼠气道炎症和CD8+ T细胞功能的影响
目的观察呼吸道合胞病毒(RSV)对致敏小鼠气道炎症和CD8+T细胞功能的影响.方法BALB/c小鼠40只,随机分成4组,分别为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、鸡卵白蛋白(OVA)组、RSV组、OVA/RSV组;应用OVA腹腔注射致敏、OVA气道雾化结合RSV滴鼻激发哮喘;支气管肺泡灌洗液(BALF)作细胞分类计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BALF上清中白细胞介素(IL)-4、IL-5、干扰素(IFN)-γ含量;苏木精-依红(HE)染色观察肺病理变化;采用三色光流式细胞分析法测定气管旁淋巴结(PBLN)中CD4+、CD8+T细胞及细胞内细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5表达与TH2/TH1、Tc2/Tc1比值变化.结果(1)BALF中细胞总数及分类:与OVA组比较,OVA/RSV组细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞均明显增加(分别P＜0.01);与RSV组比较,OVA/RSV组细胞总数、嗜酸性粒细胞明显增加(分别P＜0.01).(2)BALF上清中细胞因子含量:与OVA组比较,OVA/RSV组IFN-γ、IL-4、IL-5含量均明显升高(分别P＜0.01);与RSV组比较,OVA/RSV组IFN-γ无明显变化,而IL-4、IL-5显著上升(分别P＜0.01).(3)肺组织病理:OVA/RSV组与其他各组比较气道黏膜增厚,管腔狭窄、收缩,上皮破坏,管壁周围炎症细胞浸润明显加重.(4)PBLN中CD4+(WN-γ+、IL-4+、IL-5+)、CD8+(IFN-γ+、IL-4+、IL-5+)T细胞各占CD3+T细胞百分比及TH2/TH1、Tc2/Tc1比值变化:与OVA组比较,OVA/RSV组CD8+(IFN-γ+、IL-4+、IL-05+)T细胞百分比、Tc2/Tc1比值增加(分别P＜0.01),TH2/TH1比值无明显变化.与RSV组比较,OVA/RSV组CD4+(IL-4+、IL-5+)T细胞、TH2/TH1比值、CD8+(IL-4+、IL-5+)T细胞、Tc2/Tc1比值均明显上升(分别P＜0.01).结论(1)OVA致敏小鼠RSV感染后可明显加重气道炎症,TH2、TH1型炎症均加强,且以TH2型炎症加重为主.(2)OVA致敏小鼠RSV感染后可引起CD8+T细胞数量及功能改变,即由产生IFN-γ+为特征的Tc1细胞向产生IL-4+、IL-5+为特征Tc2细胞转化,并可能与气道内IL-4、IL-5升高及嗜酸性粒细胞的大量募集有关.
-
BALB/c小鼠滴鼻免疫灭活SARS病毒对全身性免疫的影响
目的了解灭活SARS病毒滴鼻免疫小鼠对全身性免疫的影响.方法将5周龄雌性BALB/c小鼠随机分为两组,每组10只,免疫组小鼠每只免疫50μg的灭活病毒悬液,对照组注射等体积PBS.分别在免疫的8 d和14 d处死小鼠,分离脾细胞和外周血淋巴细胞,流式细胞仪观察其淋巴细胞表型;间接ELISA法测定其血清中抗SARS病毒特异性抗体IgM和IgG.结果第8天脾脏的CD4+ T细胞的构成比增加 (P＝0.027).外周血淋巴细胞表型在第8天即开始发生改变,在第14天变化明显,与对照组差异有显著性,CD4+,CD8+,CD3+ T细胞构成比和T/B比值显著降低 (P＜0.05、0.01、0.01、0.01),同时CD45R/B220+细胞(B细胞)构成比显著增加 (P＝0.000).但是此时血清中特异性抗体未能被检测到.结论在未应用佐剂的情况下,小鼠滴鼻接种灭活SARS病毒虽然可以导致诱导机体免疫细胞表型的变化,却未能诱导抗体的产生.
-
以小鼠子宫内膜干细胞为种子细胞构建工程化子宫内膜用于小鼠子宫内膜损伤修复的研究
目的 以小鼠子宫内膜干细胞为种子细胞构建工程化子宫内膜在小鼠子宫内膜损伤修复中的应用价值.方法 选择SPF级昆明小鼠,分离子宫内膜干细胞并进行流式细胞仪分选检测;建立小鼠子宫内膜损伤模型,并在损伤后进行子宫内膜干细胞移植治疗、模型组织形态学表现与免疫组化分析.结果 子宫内膜干细胞传代培养后生长状态好,呈梭形贴壁生长,分选的干细胞细胞占总细胞数的2.17%左右.子宫内膜损伤部位可见大量有核细胞的聚集,失去了正常的上皮及腺体结构,组织间隙水肿.子宫内膜干细胞移植治疗14 d后子宫内膜能够发现生成有新的上皮细胞和基质细胞,对正常自动内膜以及侧子共内膜细胞的结构没有显著区别.病灶标本HE染色异位病灶呈囊状,囊壁由多层细胞构成,囊壁外覆盖纤维结缔组织.结论 小鼠子宫内膜组织中干细胞的比例为2.17%左右,采用100℃生理盐水处理可以构建小鼠子宫内膜损伤模型,此种移植子宫内膜干细胞的方法对于子宫内膜损伤的修复具有一定帮助.
-
运动训练对大鼠试验性脑出血后血肿周围组织细胞凋亡的影响
目的:观察运动训练对血肿周罔组织细胞凋亡的影响.方法:120只SD大鼠被随机分为3组,实验组(40只,出血并运动)、对照组(40只,出血不运动)和假手术组(40只,无出血,不运动),前两组又分为术后24h,7d,14d,21d,28d,5个时相点,每个时相点3只用于TUNEL.5只用于流式细胞仪检测.结果:TUNEL阳性细胞数在脑出血(ICH)24h时实验组和对照组无区别,但与假手术组相比差异有非常显著性(P＜0.01),凋亡于ICH术后7-14d一度下降,21d后回升,28d又下降,但实验组表达明显低于对照组(P＜0.05).凋亡不仅存在于血肿周围组织和皮质,海马区也可见明显凋亡现象.流式细胞分析:不同时间细胞凋亡率的变化趋势与TUNEL阳性细胞数一致,而且实验组凋亡率明显低于对照组,差异有显著意义 (P＜0.05),但双参数分析较单参数灵敏性更高,差异有非常显著意义 (P＜0.01).结论:运动训练可以通过抑制脑出血后血肿周围的神经细胞凋亡,从而改善神经功能.
-
当前临床流式细胞分析的发展趋势
流式细胞分析,又称流式细胞术(Flow cytometry,FCM),是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术,它具有如下几个特点:①标本只要是单细胞即可用于分析,如血液、骨髓、体液中的细胞、培养细胞等,实体组织只要经处理后制成单细胞悬液也能分析,因此,实际上所有组织细胞均可用于分析.②极短时间内可分析大量细胞,只要标本中的细胞数量足够,流式细胞仪(Flow cytometer)可以每秒钟数十、数百、数千个细胞的速率进行测量,测量的细胞总数可达数千、数万乃至数百万个.③可同时分析单个细胞的多种特征,当同时用多种分子探针,如用不同荧光素标记的不同单克隆抗体进行多色荧光染色,通过流式细胞分析,即可获得单细胞的多种信息,使细胞亚群的识别、计数更为准确.④定性或定量分析细胞:通过荧光染色对单细胞的某些成分如DNA含量、抗原或受体表达量、Ca2+浓度等均可进行单细胞水平的定性与定量分析.
-
脑脊液DNA含量的流式细胞分析脑膜转移癌患者一例
流式细胞术(FCM)测定细胞DNA含量已逐渐应用于肿瘤诊断、治疗及预后判定.我们用流式细胞仪测定1例肺癌脑膜转移患者脑脊液标本中细胞的DNA含量,并检测到肿瘤细胞的DNA异倍体.
-
流式细胞分析中细胞预处理方法的改进
流式细胞仪的应用,使淋巴细亚群分析结果的准确性、稳定性得到极大地提高,为淋巴细亚群分析的临床应用起了良好地推进作用;同时也提高了临床检测水平.
-
DMSO促进HepG2细胞感染乙型肝炎病毒后核心蛋白入核
目的:探讨DMSO诱导处理的HepG2细胞被HBV感染的作用机制.方法:将HepG2分为DMSO处理组和对照组,分别用添加或不添加2%DMSO的DMEM培养基培养4d.将HBV病毒颗粒(1000拷贝/细胞)加入培养基中于37℃感染12h.以蛋白免疫印迹,免疫荧光染色及共聚焦显微镜观察HBcAg在细胞内的定位.选择性PCR检测HBV cccDNA,流式细胞分析仪检测细胞周期.结果:对照组HepG2细胞在感染HBV阳性血清后,HBcAg在细胞质内分布,核内呈阴性,至感染后2d细胞内核心蛋白消失,未检出明显的cccDNA信号.2%DMSO处理后的HepG2细胞感染后12h细胞质内HBcAg水平明显高于对照组,感染后24h HBcAg在核周浓集.在感染后24h和48h核内HBcAg明显增高,且cccDNA结果阳性.流式分析结果显示DMSO处理后处于G1/G0和G2/M期的HepG2比例升高,处于有丝分裂期的HepG2细胞内HBcAg弥散分布于全细胞.结论:HepG2细胞感染HBV后核心颗粒不能穿过核孔携带HBV DNA进入细胞核可能是其抵制HBV感染的重要原因.DMSO可促进HBV核心颗粒进入细胞核而有助于感染.
-
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体DR4在大肠癌的表达及意义
目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体DR4在大肠癌组织中的表达情况及其与临床病理的关系.方法:采用免疫组化SP法和流式细胞分析方法对41例大肠癌组织和9例正常组织DR4的表达情况进行检测并比较.结果:DR4蛋白免疫组化染色定位于细胞膜和细胞浆,癌组织中阳性表达率为65.85%,明显高于正常组织的22.20%(P＜0.05).流式细胞分析该蛋白表达量,癌组织平均荧光指数为1.17±0.13,亦明显高于正常组织的1.00±0.13(P＜0.05).不同分化程度的癌组织中DR4蛋白表达无统计学差异,临床有淋巴结转移的癌组织与无淋巴结转移的癌组织DR4表达无统计学差异.结论:大肠癌组织中DR4表达上调,与组织分化程度无关.
-
三氧化二砷抑制肝癌细胞端粒酶表达及诱导细胞凋亡作用
目的:观察三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株细胞端粒酶表达和细胞生长抑制的影响及诱导细胞凋亡的作用,探讨三氧化二砷的抗肿瘤作用及机制.方法:采用噻唑蓝比色分析法(MTT法),流式细胞分析,原位杂交方法以及TUNEL原位末端标记法观察和检测了不同浓度的三氧化二砷对人肝癌细胞株(SMMC-7721)细胞的增生,细胞DNA含量的分布,细胞端粒酶表达的影响及细胞凋亡的诱导作用.结果:20,5,5 μmol/L三氧化二砷在24,48,72 h时抑制率分别为22.0%,25.7%,32.0%,均能明显抑制人肝癌细胞株细胞的增生(单侧置信区间为10.1,23.7,18.0,P＜0.05).流式细胞分析显示加药组G0/G1期细胞比例减少,S期细胞所占比例增高.随着药物浓度的增加细胞端粒酶的表达下降,而凋亡细胞数增加.结论:三氧化二砷能抑制人肝癌细胞增生,其抑制作用具有时间-计量效应关系,并能抑制肝癌细胞端粒酶的表达及诱导肝癌细胞凋亡.
-
支气管哮喘患者外周血T淋巴细胞凋亡及相关基因的表达
我们对哮喘患者的外周血T淋巴细胞的活化诱导细胞凋亡(AICD)及影响细胞凋亡的分子调控机制进行了检测和分析，以期为揭示哮喘的慢性气道炎症机制提供依据。 对象与方法按1997年《支气管哮喘防治指南》［1］，选择初治哮喘患者10例为哮喘组，男、女各5例，平均 (35.8±10.3)岁。选择10名无吸烟史的健康人为对照组，男、女各5例，平均(35.9±11.0)岁。于淋巴细胞分离液中分离外周血单个核细胞（PBMC），尼龙毛柱分离出T淋巴细胞。一部分加入PHA-P液（终浓度为10 μg/ml）和IL-2（终浓度为50U/ml），另一部分仅加入IL-2（终浓度为50 U/ml），然后同时体外培养24 h。回收培养T细胞用AnnexinV法和碘化丙啶(PI)染色法检测T细胞凋亡。AnnexinV凋亡检测试剂盒购自美国Pharmingen公司，按说明书进行免疫荧光标记和流式细胞分析。PI染色法：将细胞加入75%乙醇，-20℃冻存12 h以上。检测前取出细胞加入PI、RNAase，避光孵育15 min后行流式细胞分析。用荧光素(FITC)-Fas单抗及藻红素（PE）-CD3单抗标记，流式细胞检测T细胞膜表面Fas受体的表达情况。用TRIZOL反应剂提取培养T细胞的总RNA，用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增Bax、Bcl-XL特异性基因片段。特异性引物序列（Bax：5′GGACCCGGTGCCTCAGGA，3′CAAAGATGGTCACGGTCTGC；Bcl-XL：5′TTGGACAATGGAC TGGTTGA，3′GTAGAGTGGATGGTCAGTG）及反应条件参照文献［2］。通过凝胶图像扫描及分析系统，以扩增的特异性DNA片段的荧光强度与同时扩增的内参照GAPDH片段的荧光强度比值作为特异性扩增片段的半定量检测值。统计学分析采用F检验、t检验、直线相关分析。
-
类风湿关节炎活动期活化T淋巴细胞的检测
目的研究类风湿性关节炎(RA)活动期外周血活化T淋巴细胞的水平.方法采用免疫荧光染色法和流式细胞仪检测20例RA患者及11例正常人外周血CD4+、CD134+及CD4+CD134+的细胞数.结果正常组CD4+细胞数(28.85±1.52)%,CD134+细胞数(9.55±0.59)%,CD4+CD134+细胞数(6.72±0.48)%;RA组CD4+细胞数(34.39±1.33)%,CD134+细胞数(15.92±1.14)%,CD4+CD134+细胞数(10.11±0.71)%.两组比较,差异均有显著性(PCD4=0.0140、PCD134=0.0004、PCD4CD134=0.0025).结论活化T淋巴细胞水平在RA活动期升高,可以使我们进一步了解其作用机理,对RA的防治具有重要意义.
