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HLA-DR4与类风湿关节炎的相关性探讨
目的探讨HLA-DR4与类风湿关节炎(RA)的相关性.方法采用特异性引物聚合酶链反应方法对广东地区汉族人群52例类风湿关节炎患者及100例正常健康者的HLA-DR4基因进行分析,并测定其基因频率.结果 HLA-DR4基因在52例类风湿关节炎患者中的基因频率(48.1%)显著高于其在100例正常对照组中的基因频率(19.6%,p<0.01).结论 HLA-DR4基因与广东地区人群的类风湿关节炎易感性有关联.
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体DR4在大肠癌的表达及意义
目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体DR4在大肠癌组织中的表达情况及其与临床病理的关系.方法:采用免疫组化SP法和流式细胞分析方法对41例大肠癌组织和9例正常组织DR4的表达情况进行检测并比较.结果:DR4蛋白免疫组化染色定位于细胞膜和细胞浆,癌组织中阳性表达率为65.85%,明显高于正常组织的22.20%(P＜0.05).流式细胞分析该蛋白表达量,癌组织平均荧光指数为1.17±0.13,亦明显高于正常组织的1.00±0.13(P＜0.05).不同分化程度的癌组织中DR4蛋白表达无统计学差异,临床有淋巴结转移的癌组织与无淋巴结转移的癌组织DR4表达无统计学差异.结论:大肠癌组织中DR4表达上调,与组织分化程度无关.
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宫颈癌组织中Trail受体DR4与凋亡相关蛋白Bax表达及其临床意义的研究
目的:通过检测宫颈癌组织中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Trail)的受体DR4及凋亡相关蛋白Bax的表达,探讨宫颈癌组织中的细胞凋亡因素,为寻找新的治疗途径提供思路.方法:随机选取41例宫颈鳞癌患者按照分化程度分高/中分化组(A组)23例和低分化组(B组)18例,选取20例慢性宫颈炎患者作为对照组(C组),利用免疫组织化学ABC染色法检测宫颈癌组织中DR4和Bax的表达.结果:DR4、Bax在3组中均有表达,C组中DR4表达高,为4.72±0.35,与A、B组比较差异有统计学意义,P<0.05;A组DR4表达为3.23±1.94,高于B组的1.35±1.14,差异有统计学意义,P<0.05.Bax在C组中表达低,为6.05±1.04,在A组中表达高,3组比较差异有统计学意义,P<0.05,结论:分化程度高的癌组织中DR4和凋亡因子Bax表达高于分化程度低的癌组织,DR4、Bax的表达与宫颈癌的预后有关.
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5-氮杂胞苷对胃癌细胞系的生长凋亡及DR4与DR5表达的影响
目的 探讨5-氮杂胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌细胞系的生长,凋亡及DR4与DR5表达的影响.方法 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法、Western blot方法和甲基化特异性PCR(MS-PCR)法检测5-Aza-CdR处理后的胃癌细胞株内DR4和DR5的RNA表达水平.结果 5-Aza-CdR能够逆转胃癌细胞中DR4和DR5的启动子甲基化水平,并上调DR4和DR5的表达水平.结论 5-氮杂胞苷对胃癌细胞系MKN28、AGS和SGC7901具有增殖抑制作用,且具有药物浓度和作用时间的依赖性.促进胃癌细胞系MKN28、AGS和SGC7901的凋亡且能使死亡受体DR4和DR5的表达水平增高.
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5-氮杂胞苷对胃癌细胞系的生长凋亡及DR4与DR5表达的影响
目的 探讨5-氮杂胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌细胞系的生长,凋亡及DR4与DR5表达的影响.方法 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法、Western blot方法和甲基化特异性PCR(MS-PCR)法检测5-Aza-CdR处理后的胃癌细胞株内DR4和DR5的RNA表达水平.结果 5-Aza-CdR能够逆转胃癌细胞中DR4和DR5的启动子甲基化水平,并上调DR4和DR5的表达水平.结论 5-氮杂胞苷对胃癌细胞系MKN28、AGS和SGC7901具有增殖抑制作用,且具有药物浓度和作用时间的依赖性.促进胃癌细胞系MKN28、AGS和SGC7901的凋亡且能使死亡受体DR4和DR5的表达水平增高.
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TRAIL受体在老年结肠癌中的表达及临床意义
目的 探讨老年结肠癌中TRAIL受体DR4的表达及其与病理学参数的关系.方法 应用免疫组织化学法检测82例老年结肠癌标本中DR4的表达,并结合浸润深度及分级探讨其临床意义.结果 A、B、C期三组之间DR4表达量无显著性差异,D期癌组织中表达明显减少,且与A,B,C期比较差异有显著性;DR4的表达随着结肠癌分化程度的降低而降低,DR4蛋白表达差异有显著性.结论 DR4的表达与结肠癌的分期及分级有关,分期越晚,癌细胞分化程度越差,DR4表达率越低,提示TRAIL与其结合后可杀伤结肠癌细胞,随着DR4表达量减少,被杀伤的肿瘤细胞减少,肿瘤的恶性度增加,预后较差.
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IFN-α对肿瘤细胞上TRAIL受体DR4和DR5表达的调节及意义
目的研究IFN-α对肿瘤细胞Colo205 TRAIL功能受体DR4和DR5表达的调节作用,以及IFN-α刺激与肿瘤细胞对rTRAIL诱导凋亡敏感性的影响.方法 Colo205细胞以IFN-α刺激0、24、48和72 h;采用RT-PCR方法检测DR4和DR5 基因表达;用间接免疫荧光染色结合流式细胞技术检测细胞表面DR4和DR5分子表达;采用annexinV和碘化丙锭双染色试剂盒检测细胞凋亡.结果 IFN-α刺激后,DR4和DR5 的mRNA在细胞表面的表达均有增加,刺激48 h,膜型DR4和DR5表达达到高峰值(16.7%和29.8%);rTRAIL凋亡诱导效应在IFN-α刺激48 h的Colo205细胞中高.结论 IFN-α上调死亡受体DR4、DR5的表达可能是其促进rTRAIL 诱导肿瘤凋亡的重要机制.
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体在直肠癌中的表达及临床意义
目的:探讨直肠癌中TRAIL受体DR4的表达及其与病理学参数的关系.方法:应用免疫组织化学法检测78例直肠癌标本中DR4的表达,并结合浸润深度及分级探讨其临床意义.结果:A、B、C期3组之间DR4表达量差异无统计学意义,D期癌组织中表达明显减少,且与A、B、C期比较差异有统计学意义;DR4的表达随着直肠癌分化程度的降低而降低,各期DR4蛋白表达差异比较有统计学意义.结论:DR4的表达与直肠癌的分期及分级有关,分期越晚,癌细胞分化程度越差,DR4表达率越低,提示TRAIL与其结合后可杀伤直肠癌细胞,随着DR4表达量减少,被杀伤的肿瘤细胞减少,肿瘤的恶性度增加,预后较差.
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抗TRAIL死亡受体抗体及其在肿瘤治疗中的研究进展
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis-inducing lig-and,TRAIL)是近几年发现的肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)超家族成员.TRAIL能与他的死亡受体(death receptor,DR)TRAIL-R1(DR4)和TRAIL-R2(DR5)结合并特异性地诱导许多肿瘤细胞凋亡,但对大多数正常细胞没有毒性.一些抗TRAIL死亡受体抗体也能先择性杀伤肿瘤细胞,并在癌症治疗上显示了良好的治疗效果.本文就TRAIL的凋亡诱导途径以及抗TRAIL受体抗体在肿瘤治疗中的研究进展作一综述.
关键词： 癌 TRAIL DR4 DR5 抗TRAIL死亡受体抗体 -
退变腰椎间盘中细胞凋亡及DR4、DcR1的表达
目的 检测死亡受体DR4及诱骗受体DcR1的表达、腰椎间盘中髓核组织细胞凋亡率.方法 采用原位DNA片段末端标记法(TUNEL)和免疫组织化学方法 对退变组的36例退变腰椎间盘髓核组织及对照组的22例创伤腰椎间盘髓核组织进行检测.结果 36例退变腰椎间盘组织细胞凋亡率为52 41%,DR4细胞阳性率为53 24%,DcR1细胞阳性率为24 36%;22例创伤腰椎间盘组织细胞凋亡率为35 47%,DR4细胞阳性率为32 53%,DcR1细胞阳性率为30 54%.两组间细胞凋亡率、DR4蛋白表达差异均有统计学意义(P<0 05).两组间DcR1蛋白表达差异无统计学意义(P>0 05).两组髓核内DR4染色阳性细胞率与TUNEL阳性细胞率之间呈正相关(r=0 865,P<0 01).两组髓核内DcR1阳性细胞率与TUNEL阳性细胞率无关,差异无统计学意义(P>0 05).结论 腰椎间盘中可能存在TRAIL/DR4诱导的凋亡途径,DR4可能在腰椎间盘退行性变发生和发展中发挥重要作用.
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重组人可溶性TRAIL分子诱导白血病细胞株凋亡的研究
比较重组人可溶性TRAIL(rhsTRAIL)诱导Jurkat细胞株、K562细胞株以及HL-60细胞株凋亡之间的差异,探讨这些差异与细胞表面TRAIL受体(DR4、DR5、DcR1和DcR2)表达量的关系. 不同浓度的rhsTRAIL分别处理Jurkat细胞、K562细胞和HL-60细胞12 h、24 h和48 h后,用流式细胞仪检测经碘化丙啶(PI)染色后的细胞凋亡情况;用RT-PCR方法检测细胞表面受体DR4、DR5、DcR1、DcR2的表达. 培养12 h、24 h、48 h后,不同浓度rhsTRAIL 诱导Jurkat细胞株的凋亡率均明显高于对照组,且具有剂量依赖性和时间依赖性;但K562细胞株和HL-60细胞株未见明显的凋亡发生.RT-PCR结果显示,培养12 h、24 h、48 h后,Jurkat细胞株表面DR4的表达随时间的延长和rhsTRAIL浓度的升高而升高,而DR5、DcR1和DcR2的表达未检出;K562和HL-60细胞株表面DR4的表达没有明显变化,而且DR5、DcR1和DcR2的表达也未检出. rhsTRAIL诱导Jurkat细胞株的凋亡具有剂量依赖性和时间依赖性,且与其细胞表面DR4的表达呈正相关;在一定的浓度条件下,rhsTRAIL未能诱导K 562和HL-60细胞株发生明显凋亡,且其细胞表面DR4的表达也未见明显变化.这些结果提示,应用TRAIL治疗不同种类白血病时,应注意它的使用剂量和适应范围.
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细菌双杂交系统在细胞外蛋白质相互作用中的应用
目的:探索应用细菌双杂交系统在细胞外蛋白质之间相互作用的可行性.方法:应用Stratagene BacterioMatch two hybrid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达质粒;以pBT构建编码DR4、DR5、OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒.重组质粒分别相应共转化报告菌株XL1-Blue MRF,报道基因产物以抗羧苄青霉素和β-半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标.结果:pTRG-TRAIL与pBT-DR4,pTRG-TRAIL与pBT-DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青霉素(500 μg/ml以上)筛选下宿主菌呈转录激活状态,pTRG-TRAIL与pBT-OPG 组共转化后在低浓度羧苄青霉素(250 μg/ml以下)筛选下宿主菌呈转录激活状态,用X-Gal-PETG平皿可以进一步验证阳性克隆.对照组pTRG-TRAIL与pBT-LGF2,pBT-DR4、pBT-DR5或pBT-OPG与pTRG-Gal11 4组共转化后呈阴性.结论:所用的双杂交序列皆为编码这些蛋白质的细胞外区域,而这些蛋白质本身的相互作用已有其他报道验证,所以细菌双杂交系统可以用于细胞外蛋白质的相互作用研究.
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TRAIL及其受体在肝脏疾病中的作用研究进展
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是近年来发现的肿瘤坏死因子(TNF)家族成员之一,越来越多的证据表明TRAIL及其受体介导的细胞凋亡在多种肝脏疾病的发生发展中有着重要作用,TRAIL及其受体的发现为肝脏疾病的治疗提供了新的研究方向.
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苦参碱对人肝星状细胞系LX-2凋亡影响的研究
肝纤维化是肝病研究领域的一大热点,目前认为诱导活化的肝星状细胞(HSC)凋亡是治疗肝纤维化的有效方法.肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)是TNF超家族的新成员[1].
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DR4和DR5在人胃癌细胞系中的表达及其启动子区甲基化水平
目的 探讨DR4和DR5在胃癌发病中的作用及分子机制,为胃癌治疗提供新思路.方法 分别采用RT-PCR、Western blot和甲基化特异性-PCR(MS-PCR)检测四种胃癌细胞株(AGS、SGC7901、MKN28、MGC803)内DR4和DR5 mRNA表达水平、蛋白表达水平及启动子区甲基化水平,同时以自胃溃疡患者切除胃黏膜分离的细胞为对照.结果 除MGC803细胞DR5外,余胃癌细胞中DR4、DR5 mRNA及蛋白表达水平均显著低于胃溃疡细胞(P均＜0.05),且其启动子区有高甲基化现象.结论 DR4和DR5表达水平降低在胃癌发病中具有重要作用,其分子机制可能为启动子区高甲基化.
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反复自然流产与绒毛中TRAIL及其受体的表达相关性分析
目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL及其受体在不明原因早期反复自然流产患者(URSA)绒毛中的表达.方法:实验组15例,为妊娠45～60d的URSA患者;对照组15例,为健康的人工流产患者.2组分别取绒毛组织采用免疫组化法检测TRAIL及其受体的表达.结果:实验组绒毛组织中TRAIL及其受体DR4、DR5蛋白表达较强,诱骗受体DcR1及DcR2蛋白与正常对照组相比表达较少.结论:TRAIL及其受体参与维持母胎界面的免疫耐受,其表达失衡可能导致绒毛细胞凋亡紊乱,是造成自然流产的机制之一.
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TRAIL及其受体DR4、DcR1在大肠癌及癌旁组织中的表达
目的研究人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand, TRAIL)及其受体DR4、DcR1在大肠癌和癌旁组织中的表达及意义.方法采用免疫组化SP法检测42例大肠癌及其癌旁5cm组织、25例正常大肠粘膜组织中TRAIL及其受体DR4、DcR1表达水平.结果 TRAIL及DR4在大肠癌、癌旁组织及正常大肠粘膜组织中的表达呈递增趋势,而DcR1的表达则与之相反(P<0.05);TRAIL和DR4在中、低分化癌中的表达明显低于高分化癌中的表达,而DcR1的表达则与之相反(P<0.01);TRAIL、DR4、DcR1的表达与肿瘤的病理类型、Duke's分期及淋巴结转移与否等因素无关(P>0.05).结论 TRAIL、DR4、DcR1可能与大肠癌的发生、发展密切相关;DR4可能在TRAIL诱导的凋亡通路中发挥一定作用,而DcR1的表达与否一定程度上决定了TRAIL能否发挥其生物效应.
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TRAIL及其受体在乳腺癌组织中的表达及意义
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体(DR4、DR5、DcR1、DcR2)在乳腺癌组织的表达及意义.方法 用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测60例乳腺癌及对应的正常乳腺组织中TRAIL及其受体的表达.结果 乳腺癌组织中TRAIL、DcR1、DcR2表达均低于正常乳腺组织(P＜0.05),且TRAIL及其受体的表达与乳腺癌的分期、分级等无关(P＞0.05).结论 TRAIL及其受体在乳腺癌凋亡过程中起着重要的作用,TRAIL及其诱骗受体低表达同乳腺癌的发生关系密切.
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C端截断的HBX突变体通过上调DR4和DR5表达促TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡
目的 探讨不同的HBX截断突变体对TRAIL-R1 (DR4)和TRAIL-R2(DR5)表达的影响,以及DR4和DR5在HBX截断突变体增强TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡中的作用.方法 构建HBX的1～120 aa(C端截断)、51 ～ 120 aa(C端和N端共同截断)和51 ～ 155 aa(N端截断)的突变体表达载体HBX1、HBX2和HBX3;在HepG2和Huh-7肝癌细胞中,Real-time PCR和Western blot检测稳定转染HBX不同突变体的DR4和DR5的表达;Western blot检测RNA小干扰载体(DR4-siRNA和DR5-siRNA)的HBX突变体的DR4和DR5表达情况,流式细胞术检测TRAIL (200 ng/ml)诱导的肝癌细胞凋亡情况.结果 经PCR扩增和双酶切鉴定,3种突变体表达载体HBX1、HBX2和HBX3重组质粒构建成功,测序检测目的基因序列正确;Real-time PCR和Western blot表明,HBXI能显著增加2种肝癌细胞系中的DR4和DR5基因和蛋白的表达;而HBX2和HBX3对DR4和DR5基因和蛋白的表达无显著影响;在HepG2-HBX1和Huh-7-HBX1细胞中,与对照组相比,DR4-siRNA和DR5-siRNA显著降低了DR4、DR5的表达;流式细胞术检测结果显示HepG2-HBX1和Huh-7-HBX1细胞的凋亡率较对照组细胞均显著提高;RNA小干扰抑制DR4和DR5的表达后,HepG2-HBX1和Huh-7-HBX1细胞的凋亡率下降.结论 成功构建了3种不同HBX突变体的真核表达载体;HBX基因C端截断(1～120 aa)的突变体能够上调DR4和DR5的表达,且能够上调DR4和DR5的表达促进TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡.
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绒毛中TRAIL及其受体的表达与不明原因反复自然流产的相关性的探讨
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL及其受体在不明原因早期反复自然流产患者(URSA)绒毛中的表达及二者的相关性.方法 选择实验组妊娠45～60d的URSA患者15例,对照组健康人工流产15例.两组分别取绒毛组织采用免疫组化法检测TRAIL及其受体的表达,进行方差分析和t检验比较两组绒毛组织中TRAIL及其受体蛋白表达水平的差异.结果 实验组绒毛组织中TRAIL及其受体DR4、DR5蛋白表达较强,而诱骗受体DcR1及DcR2蛋白与正常对照相比表达较少,p值均小于0.05.结论 TRAIL及其受体可能是造成自然流产的机制之一.
