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细胞凋亡的死亡受体途径
死亡受体信号转导通路是诱导细胞凋亡的主要途径之一,目前已知的死亡受体有8种,其信号转导途径主要有3条,分别为TNFR、TRAIL和Fas/FasL信号途径.本文将就这三条通路的研究概况进行阐述.
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TRAIL联合5-氟脲嘧啶对胰腺癌细胞株Canpan-2作用的研究
目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)以及联合应用亚毒性剂量的5-氟脲嘧啶(5-FU)对胰腺癌的治疗作用.方法应用不同浓度的TRAIL及联合亚毒性剂量的5-FU)处理胰腺癌细胞株Canpan-2,MTT法检测细胞毒性作用,流式细胞仪分析细胞凋亡率.结果 TRAIL100ng/ml作用胰腺癌细胞24h后,细胞杀伤率为29.5±1.2%,且其作用存在浓度依赖性;联合应用亚毒性剂量的5-FU能够大大提高TRAIL的细胞毒活性,杀伤率为43.7±1.4%,联合用药前后差异有显著性(P＜0.01).结论 TRAIL与化疗药物5-FU有协同杀伤胰腺癌细胞的作用.
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神经母细胞瘤对TRAIL的不同药理反应与PI3K/AKT信号通路无关
方法取神经母细胞瘤手术标本4例,通过胰酶消化后培养在DMEM细胞培养液中.4个标本各自分为2组:正常培养基培养组与PI3K/Akt抑制剂处理24 h组.然后这些细胞加入100 ng/mL的TRAIL处理90 min后收获.细胞通过流失细胞术检测凋亡,通过western blot检测AKT以及磷酸化AKT的变化.结果 Akt的基线表达因标本的不同而变化;经过PI3K抑制剂LY294002处理24 h后,磷酸化AKT在每个标本中的表达都有所下降;磷酸化AKTPI3K/AKT的抑制没有改变了两个对TRAIL敏感的标本中caspase-3、-8、-9的活化,但没有改变任何标本中TRAIL诱导的凋亡.结论 抑制PI3K/Akt通路不增加神经母细胞瘤细胞株对TRAIL诱导凋亡的敏感性.由于对TRAIL的药物抵抗具有多个重复的途径,神经母细胞瘤在激活PI3K/AKT信号通路上的独特性既对TRAIL的药物抵抗无关,也不会抵消TRAIL的作用.
关键词： 神经母细胞瘤 TRAIL 药理反应 PI3K/Akt信号通路 -
黄连解毒汤70%醇提物对MDR模型小鼠S180肿瘤细胞凋亡因子表达的影响
目的:观察黄连解毒汤70%醇提物对MDR模型小鼠S180肉瘤细胞凋亡因子的影响,探讨其逆转多药耐药作用的分子机制.方法:模拟临床PFC方案,建立小鼠S180肉瘤细胞多药耐药在体模型,同时给予黄连解毒汤70%醇提物灌胃10d,流式细胞仪荧光检测观察细胞凋亡因子Fas、Trail、细胞黏附因子CD54等指标.结果:黄连解毒汤70%醇提物增加耐药细胞凋亡因子Fas、Trail表达率,促进耐药S180细胞的凋亡,降低细胞黏附因子CD54的表达.结论:黄连解毒汤70%醇提物促进耐药细胞凋亡因子的高表达,是其逆转肿瘤多药耐药的途径之一.
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宫颈癌相关基因表达与HPV感染的相关性研究
目的 探讨宫颈癌凋亡相关Bcl-2、TRAIL及Caspasc-3在宫颈组织中的表达及与人乳头瘤病毒感染(HPV)的相关性.方法 采用免疫组织化学方法对宫颈正常组织(NE)26例,宫颈鳞状细胞癌组织(SCC) 30例进行Bcl-2、TRAIL及Caspasc-3蛋白表达的测定,同时采用PCR技术测定各组患者HP16/18感染情况.结果 ①TRALL在SCC组宫颈活检组织中阳性表达率显著低于NE组(P＜0.05),SCC组中Caspage-3阳性表达率均显著低于NE组(P＜0.05),Bcl-2、HPV16/18在SCC组宫颈活检组织中阳性表达率显著高于NE组,(P＜0.05).②在宫颈组织中,TRALL阳性表达率与组织分化程度具有相关性(P＜0.05),Caspage-3阳性表达率与组织分化程度及临床分期具有相关性(P ＜0.05);Bcl-2阳性表达率与组织分化程度及临床分期具有相关性(P＜ 0.05);HPV16/18阳性表达率和SCC病理特征均无关.③HPV16/18感染及Bcl-2表达与TRALL、Caspage-3表达呈负相关(P＜ 0.05);TRALL与Caspage-3表达呈正相关(P＜0.05),HPV16/18感染与Bcl-2表达呈正相关(P＜0.05).结论 Bcl-2的过度表达,TRAIL及Caspasc-3低表达和HPV16/18感染在宫颈癌发病过程中发挥协同作用.
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TRAIL及NF-kB在骨肉瘤中的表达及其意义
本文探讨TRAIL及NF-kB在骨肉瘤中的表达及其与细胞增殖调控的关系.对16例非化疗骨肉瘤,5例骨巨细胞瘤和6例软骨肉瘤石蜡切片,应用流式细胞术(FCM)定量检测TRAIL及NF-kB的表达.结果表明TRAIL和NF-kB在骨肉瘤各期间的表达显著高于骨巨细胞瘤和软骨肉瘤(P<0.01);TRAIL和NF-kB在骨肉瘤不同分化组间表达无明显差异(P>0.05);TRAIL和NF-kB在骨巨细胞瘤和软骨肉瘤间表达无明显差异(P>0.05).结论是TRAIL在骨肉瘤中高表达,但可能受NF-kB高表达的调控,不能诱导细胞凋亡;在骨肉瘤的细胞增殖调控中,NF-kB可能通过调控TRAIL诱导的凋亡途径进而抑制细胞凋亡的发生.
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RNAi靶向沉默FLIP基因促进TRAIL诱导卵巢癌A2780细胞凋亡
目的 探讨RNAi靶向沉默FLIP基因对TRAIL诱导卵巢癌细胞凋亡的影响.方法 设计并体外化学合成FLIP序列特异性双链RNA,在脂质体(LipofectamineTM2000)介导下转染人卵巢癌细胞株A2780.采用半定量RT-PCR和Western blot法检测FLIP-siRNAs转染前后A2780细胞FLIP mRNA和蛋白表达的变化,并筛选出抑制作用强的FLIP-siRNA.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测FLIP-siRNA转染前后TRAIL对A2780细胞生长抑制作用的变化.以Annexin-V-PI双染法流式细胞术(FCM)比较FLIP-siRNA转染前后TRAIL诱导的细胞凋亡的情况.结果 特异性FLIP-siRNA片段能有效降低A2780细胞中FLIP mRNA和蛋白水平(P<0.01),并具有时间依赖性;转染FLIP-siRNA后,TRAIL对A2780细胞的生长抑制作用明显增强(P<0.05),TRAIL诱导的细胞凋亡也显著增加(P<0.05).结论 靶向FLIP基因的siRNAs可在转录和翻译水平抑制FLIP表达,并可增加细胞对TRAIL的敏感性.
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MiR-146a调节TRAIL不敏感的乳腺癌细胞迁移及其分子机制
目的 研究miR-146a及其靶基因EGFR对乳腺癌细胞迁移的影响.方法 用终浓度为50、100、200和500 μg/L的重组可溶性TRAIL(rsTRAIL)持续刺激对TRAIL敏感的MDA-MB-231细胞4周,筛选得到TRAIL不敏感的乳腺癌细胞MDA-MB-231/TR.RT-PCR检测miR-146a的表达；Transwell实验以及划痕实验检测乳腺癌细胞的迁移能力；双荧光素酶报告基因分析以及Western blot鉴定MDA-MB-231/TR细胞中miR-146a与EGFR基因的靶向调控关系；Western blot检测DR4、DR5、IRAK1、CXCR4、p-IκBα、IκBα、caspase 8和caspase 3的蛋白表达水平；染色质免疫共沉淀技术(ChIP)分析MDA-MB-231和MDA-MB-231/TR细胞中NF-κB P65亚基与miR-146a启动子区的结合情况.结果 TRAIL细胞毒作用不敏感的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231/TR中miR-146a的表达降低,并引起其靶基因EGFR的表达增加,终导致TRAIL不敏感的乳腺癌细胞迁移能力增强.同时发现NF-κB参与miR-146a低表达的调控.结论 miR-146a对TRAIL不敏感的乳腺癌细胞迁移起重要的调节作用.
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重组变构人TRAIL对非小细胞肺癌细胞的体外抑制作用
目的研究重组变构人TRAIL(rmhTRAIL)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞和人正常细胞的生长、抑制作用及其与化疗药的联合作用.方法采用四唑盐(MTT)和集落形成试验法检测细胞的生长,并观察了与顺铂(DDP)联合应用对细胞生长的作用.结果rmhTRAIL对多种NSCLC细胞有显著的抑制作用,而对人正常细胞无影响;rmhTRAIL与DDP联合应用具有协同或增强对NSCLC细胞的抑制作用,而且对正常人细胞不表现毒性.结论rmhTRAIL是一种安全、有效的抗肿瘤生物制品.
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TRAIL诱导Hela细胞凋亡的线粒体信号通路
目的 探讨TRAIL诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的线粒体通路.方法 琼脂糖凝胶电泳判断细胞凋亡;激光共聚焦、Western blot、荧光免疫和caspase-3活性检测测定细胞线粒体膜电位(MMP)、BCL-2蛋白、细胞色素c(Cyt c)和凋亡诱导因子(AIF)蛋白在细胞中的定位以及caspase-3活性.结果TRAIL能诱导Hela细胞凋亡,有凋亡细胞特有的DNA梯状条带.同时,TRAIL具有时间依赖性致MMP(P ＜0.05,P＜0.01)减小和BCL-2蛋白含量明显下降,线粒体Cytc蛋白释放,AIF蛋白向细胞质、细胞核转移,caspase-3活性增强(作用10 h后达到2.25±0.20倍,P＜0.05).结论 TRAIL诱导Hela细胞凋亡途径之一是通过线粒体信号通路进行的.
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系统生物学指导下基于TRAIL网络靶向抗肿瘤研究进展
肿瘤是一种系统生物学疾病，治疗这一顽固疾病仅靠单一靶向药物已不太现实。本文将用系统生物学的观点，对肿瘤坏死因子相关凋亡配体（ TRAIL）与现今研究较热点的靶向药物以网络“network”联合方式，协同抗肿瘤进行一个综述。以期待为基于TRAIL个体化治疗肿瘤提供夯实的理论依据。
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人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导急性髓系白血病细胞凋亡的实验研究
为了研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对急性髓系白血病(AML)细胞的作用,通过MTT比色法测定不同浓度TRAIL对39例AML患者(病例组)和21例健康人(对照组)的骨髓或外周血单个核细胞的杀伤率,用流式细胞术检测细胞凋亡.结果发现,不同浓度TRAIL对AML细胞均有不同程度的杀伤作用,而对正常细胞无此作用.结论:TRAIL能通过诱导细胞凋亡而杀伤AML细胞,是一种有望应用于临床白血病治疗的新型生物制剂.
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化疗药物对TRAIL在急性白血病原代细胞表达的影响
为了探讨TRAIL在急性白血病原代细胞表达及化疗药物对TRAIL在急性白血病细胞表达的影响,采集16例初诊的急性白血病患者化疗前、化疗1天后、3天后和5天后的外周血,分离单个核细胞并用流式细胞术检测TRAIL的表达;同时采集12例初诊的急性白血病患者化疗前骨髓,分离单个核细胞进行培养,分别加VP-16和/或干扰素,培养一定时间后检测TRAIL的表达水平.结果表明:与化疗前相比,初治急性白血病患者外周血单个核细胞TRAIL的表达水平在化疗1天后即明显提高(P＜0.05);在体外培养实验中,VP-16上调TRAIL在急性白血病骨髓单个核细胞的表达(P＜0.05),VP-16联合干扰素与单独应用VP-16相比,TRAIL的表达水平无差异(P＞0.05).结论:化疗药物治疗白血病的机制之一可能是通过诱导TRAIL的表达而促进白血病细胞的凋亡.
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人源TRAIL胞外段基因的克隆、表达与功能的初步检测
目的 获得人源TRAIL胞外段结构域在大肠杆菌中可溶性表达,并初步鉴定其功能.方法 RT-PCR法从人外周血单个核细胞中扩增TRAIL胞外段基因,克隆入pGEM-T-Easy载体,DNA序列测定鉴定正确性.为了便于纯化目的蛋白,将其克隆入原核表达载体pET-30a,并在其氨基端加上组氨酸标签.采用E.coli BL21(DE3)表达,Ni亲和柱分离纯化目的蛋白.SDS-PAGE和Western blot鉴定原核表达产物.MTT法、PI染色法及瑞氏-姬姆萨染色法观察TRAIL-His蛋白的生物学活性.结果 所表达目的蛋白相对分子质量(Mr)与预期蛋白Mr相一致,该蛋白分别可以与抗TRAIL多克隆抗体及抗组氨酸标签抗体反应,并可抑制人淋巴瘤细胞系Jurkat细胞的增殖和诱导Jurkat细胞凋亡.结论 获得了具有生物学活性的TRAIL蛋白,为对其生物学功能及肿瘤治疗的进一步研究奠定了基础.
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IFN-γ对TRAIL诱导HBV相关性肝癌细胞凋亡的调节作用
目的以转染了HBV全基因组、并稳定表达HBV病毒颗粒的HepG2.2.15细胞为细胞模型,探讨IFN-γ对新型凋亡分子TRAIL(TNF相关的诱导凋亡配体)诱导凋亡的影响,并初步探索其发生机制. 2和24 h后,细胞表面膜结合型TRAIL和TRAIL受体mRNA的表达.用HBsAg和HBeAg 方法以流式细胞仪检测IFN-γ和TRAIL作用前后,HepG2.2.15细胞的凋亡率.分别用流式细胞术和半定量RT-PCR的方法检测IFN-γ作用0、6、12和24 h后,HBV病毒颗粒的分泌表达状况. ELISA检测试剂盒测定IFN-γ作用0、6、1 结果 TRAIL单独作用、IFN-γ单独作用、TRAIL和IFN-γ联合作用后,HepG2.2.15细胞的凋亡率分别为9.12%、5.84%和46.68%,表明IFN-γ可以显著上调TRAIL诱导的细胞凋亡.IFN-γ作用后,细胞表面膜型TRAIL的表达有显著上调,而部分与TRAIL诱导凋亡相关的TRAIL受体的表达也有不同程度的上调,并且IFN-γ可以抑制HepG2.2.15细胞HBV病毒颗粒的分泌. 结论转染HBV全基因组的HepG2.2.15细胞对TRAIL诱导的凋亡相对耐受,而IFN-γ却可以逆转这种耐受,使其变得对TRAIL诱导的凋亡敏感.其发生机制可能是通过IFN-γ上调细胞表面TRAIL及其受体的表达,以及抑制HBV病毒颗粒的分泌实现的.
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TRAIL及TRAIL受体在慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞的表达
目的探讨TRAIL(TNF-related apoptosis-inducing ligand) 及TRAIL受体(TRAIL-R) mRNA在慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes, PBL)中的表达. 方法分离20例正常人、24例慢性乙型肝炎患者及24例慢性重型乙型肝炎患者之PBL,体外单独或与植物血凝素(PHA)共同培养48 h,荧光素吖啶橙和溴乙啶染色PBL,观察其凋亡细胞比例,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测TRAIL、TRAIL-R mRNA在PBL中的表达. 结果与正常对照组相比,活化诱导的淋巴细胞凋亡在慢性乙型肝炎患者明显增高,而在慢性重型肝炎患者则降低,差异有显著性(P<0.01).PHA活化前,TRAIL mRNA在上述3组研究对象外周血淋巴细胞均不表达;PHA活化后,其表达明显上调,且慢性乙型肝炎组高于正常对照组,慢性重症肝炎组低于正常对照组,差异有显著性(P<0.01).4个TRAIL-R的 mRNA在3组研究对象外周血淋巴细胞均有表达,两两比较差异无显著性(P>0.05).经PHA活化后,TRAIL-R2 mRNA表达明显上调(P<0.01),TRAIL-R3 mRNA表达完全消失,TRAIL-R1与-R4的mRNA表达无明显改变(P>0.05). 结论慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞存在凋亡紊乱现象,TRAIL参与了乙型肝炎患者外周血淋巴细胞活化诱导细胞死亡(activation induced cell death,AICD)的过程,其所介导的淋巴细胞AICD过程受严格的受体控制,其中TRAIL-R2与TRAIL-R3可能起主要调控作用.
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TRAIL及其受体在不明原因早期复发性流产绒毛中的表达
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体(DR4、DR5、DcR1、DcR2)在不明原因早期复发性流产(URSA)绒毛中的mRNA及蛋白表达,初步探索其与URSA的关系.方法 选择妊娠42～69 d URSA患者20 例作研究组,健康人工流产者20 例作对照组,分别取绒毛组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法及免疫组化法检测TRAIL及其受体的基因和蛋白表达,以t检验及χ2检验分别比较两组绒毛组织中TRAIL及其受体基因及蛋白表达水平的差异.结果 研究组绒毛组织中TRAIL及其受体DR4、DR5 mRNA及蛋白表达较强,而DcR1、DcR2 mRNA及蛋白与正常对照相比表达较少,P值均小于0.05.结论 TRAIL及其受体表达失衡可能导致绒毛细胞凋亡紊乱,可能是自然流产发生的机制之一.
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一个新的凋亡分子--Trail
细胞凋亡是生物体重要的生理和病理现象之一,其在癌变机制和维持宿主免疫系统的内稳定方面有着重要的意义和不可缺的调节作用[1].在细胞凋亡的调控系统中,Fas/Fas配体(FasL)已被广泛的研究.新近,肿瘤坏死因子(TNF)家族中的另一个重要分子Trail(TNF-related apoptosis-inducing ligand),或称Apo-2配体在细胞凋亡中的调控作用引起了学者们的极大兴趣和重视[2].本文就Trail的生物学特点,尤其是在T细胞的表达和诱导T细胞凋亡方面的研究近况作一简介.
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美国心脏学会2008年年会新临床试验结果(二)
1 强化降脂治疗新靶点研究(The treating to new targets trail, TNT研究)--他汀类药物治疗后肾功能改善与心血管事件降低相关采用阿托伐他汀80 mg/d强化降脂与10 mg/d常规降脂进行比较的TNT研究表明,肾功能呈剂量依赖性的改善和心血管风险呈剂量依赖性的降低.亚组分析结果显示,无论基线肾功能情况如何,肾小球滤过率(eGFR)改善与主要心血管事件(MCVE)降低具有高度剂量相关性.这是他汀类药物治疗研究中第1次显示出肾功能改善与心血管事件降低之间存在明显的相关性.
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TRAIL与肿瘤治疗研究进展(文献综述)
细胞凋亡即细胞程序化死亡在清除肿瘤细胞、自身反应性淋巴细胞和病毒感染细胞保持机体正常生理功能中起重要作用.而肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员在诱导肿瘤细胞凋亡中发挥着重要作用,其中TRAIL(TNF-related apoptosis-inducing ligand)及其受体是近几年新发现的TNF家族新成员,其在体内、体外均显示出良好的抗肿瘤效应且对正常组织细胞无毒性,因此有望为肿瘤治疗提供新的途径.
