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抗DRS单抗CTB006联合5-FU对结直肠癌细胞系作用研究
目的 探讨肿瘤坏死因子相关诱导配体受体(DR5)激动型单抗CTB006对人结直肠癌细胞系SW1116、SW480、SW620、Colo205的影响.方法 采用ATPlite法检测CTB006组、5-FU组及两药物合用组作用后的细胞存活率,流式细胞仪技术检测细胞系表面DR5的表达水平,研究两者之间的关系.结果 CTB006和5-FU对四种结直肠癌细胞增殖均表现出抑制作用.CTB006对早期细胞SW 1116增殖抑制效果欠佳,对中晚期细胞SW480、SW620、Colo205有着良好的增殖抑制作用(P < 0.05).当联合使用5-FU后,对后三者有明显的协同作用.流式细胞仪检测DR5表达水平,SW 1116细胞表达(47.01±30.4)%,SW480细胞表达(76.11±15.1)%,SW620细胞表达(86.77±9.3)%,Colo205细胞表达(93.55±7.9)%.结论 CTB006对中晚期结直肠癌杀伤作用较强,联用5-FU具有显著的协同作用.
关键词： 结直肠肿瘤 受体 TNF相关凋亡诱导配体 药物协同作用 氟尿嘧啶 -
腺病毒介导NDRG2基因和rhTRAIL对人前列腺癌细胞株PC-3的协同作用
目的：观察携带NDRG2基因的腺病毒（Ad-NDRG2）与重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（rhTRAIL）联合给药对人前列腺癌细胞株PC-3的抗肿瘤增效作用。方法以Ad-NDRG2感染体外培养的PC-3细胞，采用Western blot方法检测NDRG2蛋白表达水平的变化。流式细胞仪检测术和MTT实验分析Ad-NDRG2给药后PC-3细胞对TRAIL敏感性的变化。建立裸鼠移植瘤模型，观察Ad-NDRG2与TRAIL联合给药的体内抗肿瘤作用。结果病毒感染单位为40MOI时的感染效率可达100%。Ad-NDRG2感染后PC-3细胞中NDRG2和p21蛋白表达明显增加，而CyclinD1表达减少。Ad-NDRG2协同浓度10-7 ng/ml以上rhTRAIL作用48 h，可增强对PC-3细胞的生长抑制作用（抑制率≥37.5%）和诱导凋亡作用（凋亡率≥35.4%）。动物实验表明：rhTRAIL 组，Ad-NDRG2组，Ad-NDRG2与 rhTRAIL 联合给药组移植瘤的抑瘤率分别为32.6%、30.1%和54.7%，两药相互作用指数CDI为0.86。结论腺病毒介导NDRG2基因感染细胞后，可增强人前列腺癌PC-3细胞在体内及体外对rhTRAIL的敏感性。
关键词： 前列腺肿瘤 TNF相关凋亡诱导配体 NDRG2基因 增效作用 -
IFN-γ对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体诱导正常人骨髓单个核细胞凋亡的影响
目的：以正常人骨髓单个核细胞（BMMNC）为细胞模型，探讨 IFN-γ对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）诱导BMMNC凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法流式细胞仪检测对照组、TRAIL组、IFN-γ组、IFN-γ＋TRAIL组细胞的凋亡率及IFN-γ作用0、6、12和24 h后，细胞表面膜结合型TRAIL及其受体DR5蛋白的表达。结果对照组、TRAIL组、IFN-γ组、IFN-γ＋TRAIL组，流式细胞仪检测BMMNC的凋亡率分别为（23.50±2.170）%，（23.85±1.44）%，（29.97±1.16）%，（38.00±2.21）%，差异有统计学意义（ P＜0.05）；IFN-γ作用0、6、12和24 h后，流式细胞仪检测BMMNC表面TRAIL的平均荧光强度分别是20.29±1.07、24.91±0.40、28.55±0.81、33.26±2.00，及其受体DR5的平均荧光强度分别是14.51±0.82、17.59±1.31、24.61±0.88、32.49±2.61，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 IFN-γ和TRAIL联合作用能显著提高BMMNC的凋亡率，其机制可能与IFN-γ能上调TRAIL及其受体DR5蛋白的表达有关。
关键词： TNF相关凋亡诱导配体 干扰素Ⅱ型 细胞凋亡 DR5 骨髓单个核细胞 -
诱骗受体及护骨素基因多态性与溃疡性结肠炎的关系
目的 探讨诱骗受体(DcR)1、DcR2及护骨素(OPG)基因的多态性与溃疡性结肠炎(UC)易感性的关系.方法 收集352例UC患者和463例性别、年龄相匹配的健康对照者,采用微测序技术检测DcR1(rs12549481位点)、DcR2(rs1133782位点)及OPG(rs3102735位点)的基因型频率.结果 在显性模型中,UC组DcR2(rs1133782位点)的突变等位基因(A)和基因型(GA+ AA)频率均低于对照组[6.25％ (44/704)比8.96％(83/926),P=0.043;11.36％ (40/352)比17.28％(80/463),P=0.018];而在隐性模型中,UC组OPG(rs3102735位点)的突变等位基因(T)和纯合子突变基因型(TT)的频率均高于对照组[86.36％(608/704)比81.53％(755/926),P=0.009;75.28％(265/352)比66.95％ (310/463),P=0.010].采用非条件Logistic回归分析发现,重度UC患者中OPG(rs3102735位点)的突变等位基因(T)的频率明显低于轻-中度患者[76.67％(69/90)比87.79％(539/614),OR=0.457,95％CI0.265～0.788,P=0.004].而DcR2(rs1 133782位点)基因多态性与UC患者临床病理特征的关联性无统计学意义(P＞0.05).由于对照组中DcR1基因型分布不符合Hardy-Weinberg平衡规律,故对其未进一步做统计学分析.结论 DcR2(rs1133782位点)基因多态性可能与UC的易感性相关;OPG(rs3102735位点)基因突变不仅会提高UC的患病风险,还可能影响UC的疾病严重程度.
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Smac/DIABLO诱导胰腺癌细胞凋亡并增加对TRAIL及吉西他滨化疗的敏感性
目的 探讨外源性Smac/DIABLO对人胰腺癌SW1990细胞生物学特性和对TRAIL及吉西他滨化疗敏感性的影响. 方法 利用脂质体2000介导Smac/DIABLO基因转染胰腺癌SW1990细胞获得细胞SW1990/Smac,转染空载体为对照组(SW1990/neo)；在不同浓度和时间下以肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和吉西他滨处理2组细胞株并分为TRAIL组、吉西他滨组和联合组.MTT法检测细胞株的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率及凋亡细胞形态,Western blot检测凋亡相关蛋白Smac/DIABLO、抑制凋亡蛋白XIAP、细胞色素C及细胞凋亡因子caspase-3的表达.结果 转染Smac/DIABLO的细胞生长明显落后于转染空载体的细胞.TRAIL浓度为200、500、1000、2500 ng/ml时,作用24 h对SW1990/neo和SW1990/Smac细胞的抑制率分别为11.11％、46.03％、67.08％、76.19％及22.11％、42.67％、56.63％、67.6％ (P ＜0.05).吉西他滨浓度分别为10、20、40、60μmol/L作用24 h对SW1990/neo和SW1990/Smac的抑制率分别为15.2％、34.6％、55.16％、76.4％和22.65％、36.85％、55.11％、79.99％ (P＜0.05).以TRAIL(500 ng/ml)、吉西他滨(20 μmol/L)及TRAIL(500 ng/ml)+吉西他滨(20 μmol/L)作用24 h后,SW1990/neo和SW1990/Smac细胞的凋亡率分别为5.64％、15.30％、27.27％和20.37％、23.27％、67.30％ (P ＜0.05).SW1990/Smac细胞在TRAIL及吉西他滨作用后,细胞内促凋亡蛋白Smac/DIABLO、细胞色素C及caspase-3活化片段表达均显著升高,而抑制凋亡蛋白XIAP表达显著降低(P＜0.05).结论 Smac/DIABLO可诱导SW1990细胞的凋亡、抑制细胞增殖,并增强胰腺癌细胞对TRAIL及吉西他滨的化疗敏感性,其机制可能与Smac/DIABLO、细胞色素C、XIAP及caspase-3的活性有关.
关键词： 胰腺肿瘤 TNF相关凋亡诱导配体 细胞凋亡 吉西他滨 -
TRAIL、Caspase-3及NF-κB在胆管癌中表达的意义
目的 探讨TRAIL、Caspase-3及NF-κB在胆管癌发生、发展及侵袭中的作用.方法 运用原位杂交、免疫组织化学法检测TRAIL、Caspase-3及NF-κB在胆管癌中的表达情况.结果 TRAIL在胆管癌及癌旁正常胆管组织中的阳性表达率分别为45.2%(19/42)、53.3%(8/15),差异无统计学意义(P>0.05);其在胆管癌的不同临床、病理特征之间的表达差异亦无统计学意义(P均>0.05).Caspase-3在胆管癌组织中的阳性表达率为30.9%(13/42),明显低于癌旁正常胆管组织中的60.0%(9/15)(P<0.05):NF-κB在胆管癌组织中的阳性表达率为61.9%(26/42),明显高于癌旁正常胆管组织中的26.7%(4/15)(P<0.05).胆管癌中Caspase-3、NF-κB的表达均与患者的性别、年龄、病变部位无关(P>0.05),而与是否转移扩散、组织分化程度及生存时间有关(P<0.05).此外,胆管癌中TRAIL表达与Caspase-3的表达呈正相关(P<0.05),NF-κB与Caspase-3呈负相关(P<0.05),TRAIL与NF-κB无相关性(P>0.05).结论 TRAIL表达无肿瘤特异性,表达水平的高低并不能完全决定胆管癌转移扩散与否,亦不能完全决定其恶性程度和预后.NF-κB的活化、Caspase-3的失活或缺失可能促进了肿瘤的转移扩散,并导致了不良的预后.NF-κB通过抑制Caspase-3的活性,从而阻断了TRAIL介导的凋亡途径,使得组织逃避凋亡而无限增生,导致了肿瘤的发生、发展及转移扩散.
关键词： 胆管肿瘤 TNF相关凋亡诱导配体 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 NF-κB -
联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体和阻断PI3-K-Akt信号通路影响鼻咽癌细胞生长凋亡的实验研究
目的 观察联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)和阻断PI3-K-Akt信号通路,对鼻咽癌细胞株CNE-2的影响,并探索其可能的机制.方法 用TRAIL和PI3-K特异性抑制剂LY294002单独和联合处理鼻咽癌细胞株CNE-2,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞存活率,流式细胞仪进行细胞凋亡率的分析,Western blot检测相关蛋白表达及Caspase活化程度.用TRAIL和LY294002单独和联合处理人良性成纤维细胞株MRC-5,检测细胞存活率.结果 TRAIL质量浓度＞1 ng/ml时,联合处理组CNE-2细胞存活率大于TRAIL单独处理组存活率(P值均＜0.05)；当TRAIL质量浓度为10 ng/ml和100 ng/ml,联合处理组细胞凋亡率明显大于TRAIL单独处理组细胞凋亡率(t值为7.167和7.206,P值均＜0.05)；与TRAIL单独处理组相比,联合处理组出现明显的Caspase-8、Caspase-3、Caspase-9活化增多.两组对比Akt、p-Akt、Bcl-2表达无明显改变；在MRC-5中,对照组、TRAIL单独处理组和联合处理组细胞存活率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 联合TRAIL和阻断PI3-K-Akt信号通路对抑制鼻咽癌细胞株CNE-2生长,诱导细胞凋亡具有协同作用,其可能机制是诱导线粒体依赖途径.
关键词： TNF相关凋亡诱导配体 色酮类 吗啉类 1-磷脂酰肌醇3-激酶 细胞凋亡 鼻咽肿瘤 -
TRAIL受体家族基因多态性及sTRAIL水平与溃疡性结肠炎的关系
目的 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的受体家族包括死亡受体(DR4、DR5),诱骗受体(DcR1、DcR2)及护骨素(OPG).研究显示TRAIL 3'非翻译区基因多态性与溃疡性结肠炎(UC)的易感性相关,由于TRAIL各受体间的平衡及相互作用是调节靶细胞对TRAIL诱导凋亡敏感度的关键因素,因此本研究将进一步探讨TRAIL受体家族基因多态性与UC的关系.方法 收集146例UC患者和247例正常对照者,采用微测序技术检测DR4(rs20575、rs13278062)、DR5(rs1047266)、DcR1(rs12549481)、DcR2(rs1133782)及OPG(rs3102735)6种单核苷酸多态性.结果 在显性模型中,与对照组相比,UC组中DR4(rs20575)的突变等位基因(G)和基因型(CG+GG)频率均增高(4.79％ vs 1.62％,P=0.009;8.22％ vs 3.24％,P=0.030),而DcR2(rs1133782)的突变基因型(GA +AA)频率降低(10.27％ vs 18.22％,P=0.034).采用隐性模型分析,UC组中OPG(rs3102735)的突变等位基因(T)和基因型(TT)频率均显著高于对照组(86.99％ vs80.9％,P=0.029;76.03％ vs66.40％,P=0.044).经非条件Logistic回归分析,与轻中度患者相比,重度UC患者中DR4(rs20575)的突变等位基因(G)和基因型(CG+GG)频率均显著增高(15.00％ vs 3.17％,P=0.001;25.00％ vs5.56％,P=0.003),而DR4(rs13278062)的突变基因型(T)和基因型(GT+ TT)及OPG(rs3102735)突变等位基因(T)频率均显著降低(17.50％ vs33.73％,P=0.040;30.00％ vs 59.22％,P=0.014;75.00％ vs 88.89％,P=0.015).此外,本研究还发现,UC组中sTRAIL水平显著高于对照组.结论 DR4(rs20575)、DcR2(rs1133782)及OPG(rs3102735)基因多态性与UC相关,DR4(rs20575、rs13278062)及OPG(rs3102735)基因突变可能影响UC疾病严重程度.此外,本研究还发现血浆sTRAIL水平与UC相关,提示TRAIL及其受体所构成的凋亡途径可能与UC相关.
关键词： 溃疡性结肠炎 TNF相关凋亡诱导配体 受体 基因多态性 -
NDV7793促进人CD4+T细胞表达TRAIL的实验研究
目的：研究新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）弱毒株NDV7793能否促进人CD4+T细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡因子诱导配体（TNF-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL）。方法：首先用免疫磁珠分选法（magnetic activated cell sorting，MACS）分选外周血静止CD4+T细胞，然后加抗CD3抗体、抗CD28抗体和白细胞介素-2（interleukin-2，IL-2）使之成为能被NDV激活的CD4+T细胞。用流式细胞技术（flow cytometry， FCM）检测NDV刺激的CD4+T细胞的TRAIL的表达水平。结果：MACS法分选外周血得到的CD4+T细胞纯度达到（97.38±0.28）%；能被NDV激活的CD4+T细胞表面分子CD25和CD69双阳性表达率可达（29.30±1.08）%，与PBS阴性对照组（2.40±1.30）%相比，差异有统计学意义（P<0.05）；FCM检测结果显示，与对照组比较， NDV7793刺激的CD4+T细胞TRAIL表达水平均有显著升高，且在NDV7793效价为25 HU时达到大值。结论：NDV7793可刺激CD3抗体、CD28抗体和IL-2预先活化的CD4+T细胞表达TRAIL。
关键词： 新城疫病毒 CD4+T细胞 TNF相关凋亡诱导配体 -
PI3K/mTOR双靶点抑制剂PI-103与TRAIL联合应用对喉鳞癌Hep-2细胞的作用
目的 探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)双靶点抑制剂PI-103与肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)联合应用对喉鳞癌Hep-2细胞的作用.方法 将喉癌Hep-2细胞分为7组,分别为PI3K抑制剂LY294002组、mTOR抑制分子雷帕霉素组、PI3K/mTOR双靶点抑制剂PI-103组、LY294002+ TRAIL组、雷帕霉素+TRAIL组、PI-103+ TRAIL组和阴性对照组,以流式细胞仪检测各组Hep-2细胞周期及凋亡率.设立PI-103组、PI-103+ TRAIL组和阴性对照组,Transwell检测各组对Hep-2细胞迁移及侵袭能力影响,Western印迹法检测各组细胞中细胞凋亡及PI3K/蛋白激酶B(AKT)/mTOR信号通路相关蛋白的表达水平.结果 PI-103+ TRAIL组能够阻滞细胞周期于S期[G1:(1.80 ±0.30)％;G2:0.00],相比其他各组能显著抑制细胞分裂,增强细胞凋亡[(66.78±2.93)％](均P＜0.05).PI-103+ TRAIL组细胞迁移数和侵袭数分别为(17.0±3.4)个和(18.4±5.4)个,PI-103组为(41.2±3.8)个和(41.6±4.7)个,联合用药组可显著降低细胞迁移及侵袭能力(均P＜0.05).与对照组相比,PI-103处理组、PI-103+ TRAIL处理组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-9、8、3的表达量逐渐升高,细胞周期蛋白(Cyclin) D1、Cyclin E1、p-AKT、磷酸化真核翻译起始因子4E结合蛋白1(p-4E-BP1)的表达量逐渐降低(均P＜0.05).结论 PI-103与TRAIL联合应用于喉鳞癌Hep-2细胞能显著增强抗瘤效果,有望应用于喉鳞癌的治疗.
关键词： 喉肿瘤 癌 鳞状细胞 TNF相关凋亡诱导配体 PI-103 -
肿瘤坏死因子凋亡微弱诱导剂与妇科肿瘤的研究进展
肿瘤坏死因子凋亡微弱诱导剂(tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis,TWEAK)是新发现的肿瘤坏死因子超家族成员,广泛表达于人体各种组织细胞中,通过与其受体成纤维细胞生长诱导因子14(fibroblast growth factor-inducible 14,Fn14)特异性结合发挥生物学效应.TWEAK和Fn14在肿瘤的发生发展中起重要的调控作用,包括诱导细胞凋亡,促进细胞增殖和血管形成,提高细胞侵袭力和炎症效应等.新研究认为,TWEAK和Fn14与妇科肿瘤的发生发展密切相关,可能成为妇科肿瘤治疗的新靶点.
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白藜芦醇对白血病细胞系KG-1a细胞被免疫细胞杀伤敏感性的影响
目的 探讨白藜芦醇对白血病细胞系KG-1a细胞被活化免疫细胞杀伤敏感性的影响及其作用机制.方法 用锥虫蓝染色法检测白藜芦醇对KG-1a细胞增殖的半数抑制浓度(IC50值).分离健康人外周血单个核细胞,用IL-2和IL-15刺激活化免疫细胞.用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测白藜芦醇作用前后KG-1a细胞对免疫活性细胞杀伤的敏感性.流式细胞术检测活化免疫细胞表面肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的表达及白藜芦醇作用前后KG-1a细胞表面TRAIL受体(DR4/5和DcR1/2)的表达.结果 白藜芦醇能抑制KG-1a细胞增殖,作用24 h IC50值约为25 μmol/L.在效靶比为10∶1和20∶1时,白藜芦醇作用后活化免疫细胞对KG-1a细胞的杀伤率分别为(55.80±10.88)％和(72.31±13.06)％,高于对照组的(24.96±9.25)％和(37.93±5.21)％,差异有统计学意义(P＜0.05).白藜芦醇作用后的KG-1a细胞,DR5的表达为(9.05±3.57)％,高于作用前的(3.110.54)％,差异有统计学意义(P＜0.05);DcR1的表达为(13.23±3.56)％,低于作用前的(53.75±10.51)％,差异有统计学意义(P＜0.05).阻断TRAIL后,在效靶比为10∶1和20∶1时,白藜芦醇作用后活化免疫细胞对KG-1a细胞的杀伤率分别为(35.97±6.36)％和(49.80±10.68)％,低于对照组的(52.92±6.98)％和(70.73±9.79)％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 白藜芦醇可增强KG-1a细胞被活化免疫细胞杀伤的敏感性,其途径可能是通过调节TRAIL通路实现的.
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可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在原发性胆汁性肝硬化患者血清中的表达及意义
目的 观察人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血中水平的表达,并探讨sTRAIL在PBC发病机制中的作用.方法 用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测PBC患者26例(PBC组),慢性肝炎肝硬化患者27例(慢性肝炎肝硬化组)以及健康体检者25例(正常对照组)的sTRAIL并同时测定IgG、IgA、IgM,观察各指标在PBC中的改变.结果 PBC组和慢性肝炎肝硬化组sTRAIL浓度均显著高于正常对照组(158.73±42.45)pmol/L,(108.13±41.60)pmol/L vs(73.83±8.60)pmol/L(P<0.01).PBC组sTRAIL也较慢性肝炎肝硬化组明显升高(P<0.01).结论 sTRAIL在PBC患者及慢性肝炎肝硬化患者血清中均升高,但二者升高程度比较差异有统计学意义,检测sTRAIL对PBC患者的临床诊断中具有辅助作用并有助于PBC发病机制的研究.
关键词： TNF相关凋亡诱导配体 肝硬化 胆汁性 酶联免疫吸附测定 -
DcR3-RNAi-SW480结肠癌稳转细胞模型的建立及方法优化
目的 建立靶向沉默诱骗受体3(decoy rcceptor 3,DcR3)基因表达的DcR3 RNAi-SW480稳转细胞系,并对其条件及方法进行优化.方法 构建靶向沉默DcR3基因的siRNA质粒表达载体,转染SW480细胞,并以G418及流式细胞仪筛选稳转细胞.实验分为3组:DcR3-RNAi稳转组、阴性对照组、空白对照组.蛋白质印记法(Western-blot)检测DcR3蛋白沉默情况.分别应用琼脂糖凝胶电泳、甲基噻唑基四唑(MTT)比色法、流式细胞术等方法对脂质体与质粒的比例、G418的筛选浓度、筛选的佳方式等进行优化.结果 DcR3-RNAi稳转细胞组DcR3表达水平较对照组明显降低；在本实验室条件下,脂质体(μl)与DcR3-siRNA质粒(μg)佳比例为3.5∶1；G418筛选浓度为800 mg/L;G418联合流式细胞仪双筛的稳转细胞比例明显高于仅用G418单筛.结论 成功建立特异性沉默DcR3基因表达的稳转DcR3-RNAi-SW480细胞系；G418联合流式是筛选稳转细胞较高效的方法；对转染及筛选的条件及方法进行优化,可提高转染与筛选效率.
关键词： 结肠肿瘤 受体 TNF相关凋亡诱导配体 RNA干扰 稳转 -
TRAIL及其受体在肿瘤治疗中作用机制研究的现状与展望
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL) 是肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)超家族中的一员,早由Wiley等[1] 从人心肌cDNA文库中克隆出来并命名.肿瘤坏死因子家族(tumo r necrosis factor,TNF)有3种分子可诱导凋亡,TNF、FasL和TRAIL.TRAIL与前两者比较,不同之处在于,具有强大和特异性诱导肿瘤细胞凋亡的能力,但对正常细胞无此效应;有更广的抗癌谱;对核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)仅有很微弱的激活作用,即使是全身用药,也不会产生严重的炎症反应.因此,TRAIL 被认为是一种更为安全且极具潜力的抗肿瘤因子.本文就其结构功能及抗肿瘤机制研究新进展综述如下.
关键词： 受体 TNF相关凋亡诱导配体 细胞凋亡 肿瘤 综述文献 -
通过奥沙利铂抑制PI3K/Akt通路以增强TRAIL诱导结肠癌RKO细胞凋亡敏感性的实验研究
目的 通过亚毒性剂量奥沙利铂抑制PI3K/Akt通路以增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导结肠癌RKO细胞凋亡的敏感性,探讨其作用机制.方法 将常规传代培养的人结肠癌RKO细胞分为空白对照组、对照组、TRAIL单药组(25、50、100、200、400 ng/ml)、奥沙利铂单药组(10、20、40、80 μg/ml)及联合用药组(100 ng/ml TRAIL+40 μg/ml奥沙利铂).采用甲基偶氮唑蓝(MTT)检测对数生长期细胞,计算细胞增殖率和药物抑制细胞增殖50%的浓度(IC50);瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态;流式细胞术检测细胞凋亡,计算细胞凋亡率;蛋白印迹法(Western blot)检测各组细胞蛋白变化.结果 TRAIL单药组24 h时细胞增殖率与对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);奥沙利铂单药组24、48、72 h时IC50与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);联合用药组24 h时细胞增殖率与40 μg/ml奥沙利铂单药组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).100 ng/ml TRAIL组细胞凋亡率与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);40 μg/ml奥沙利铂组、联合用药组细胞凋亡率与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).100 ng/ml TRAIL组p-Akt活化性增强,没有观察到活化的Caspase-3;40 μg/ml奥沙利铂组和联合用药组p-Akt活化性被明显抑制,可以观察到活化的Caspase-3.对照组细胞形态正常,40 μg/ml奥沙利铂组可见典型的凋亡小体.结论 奥沙利铂可通过抑制PI3K/Akt通路活化而增强TRAIL诱导结肠癌RKO细胞凋亡的敏感性,为结肠癌的治疗提供了新思路.
关键词： TNF相关凋亡诱导配体 奥沙利铂 结肠肿瘤 PI3K/AKT 细胞凋亡 -
经卡介苗活化的树突状细胞疫苗治疗胰腺癌的基础及临床运用展望——暨向2011年诺贝尔医学奖得主Ralph Steinman教授致敬
目的 探讨经卡介苗(BCG)活化的树突状细胞(DC)疫苗体外直接抗胰腺癌细胞Panc02的机制,以及观察经不同部位注射DC疫苗抗小鼠胰腺癌移植瘤的效应.方法 从C57BL/6小鼠骨髓中诱导培养DC,并予以BCG促成熟,用流式细胞技术检测DC成熟度,CCK-8细胞计数检测DC直接抑制Panc02增殖情况,流式细胞仪检测BCG促成熟DC表面凋亡诱导配体(TRAIL)的表达量.C57BL/6小鼠皮下接种Panc02胰腺癌细胞制成荷瘤小鼠,第7d予以DC疫苗注射免疫治疗(DC疫苗为经Panc02细胞冻融抗原致敏后BCG促成熟的DC),分为3组:瘤内注射生理盐水组、皮下注射DC疫苗组和瘤内注射DC疫苗组,1周后再治疗1次,第2次治疗后15d处死小鼠,观察不同治疗抗肿瘤的效果.结果 BCG活化后DC疫苗成熟度明显增加,其表型CD86表达增加;经BCG活化成熟的DC能直接抑制Panc02细胞生长,这一作用可被TRAIL抗体部分抑制,且流式细胞术检测发现成熟DC表面分子TRAIL明显高于未经BCG促成熟组未成熟DC.肿瘤体重:瘤内注射DC疫苗组＜皮下注射DC疫苗组＜瘤内注射生理盐水组(P＜0.01).结论 BCG活化的胰腺癌DC疫苗的生物活性明显增加,并可通过TRAIL这一途径直接杀伤肿瘤细胞;且经BCG活化的DC疫苗瘤内注射免疫治疗抗肿瘤作用更强.
关键词： 树突细胞 卡介苗 胰腺肿瘤 TNF相关凋亡诱导配体 -
碘过量对NOD和Balb/c鼠甲状腺TRAIL和TRAIL-sR1表达的影响
目的 观察碘过量对自身免疫性疾病敏感品系NOD鼠和非敏感品系Balb/c鼠甲状腺细胞凋亡相关基因肿瘤坏死因子的相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)和其受体TRAIL刺激性受体1(TRAIL-sR1)表达的影响,了解碘过量诱导实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)发病过程中TRAIL和TRAIL-sR1的作用机制.方法 6～7周龄雌性NOD鼠和Balb/c鼠各16只,按体质量各随机分为对照组和碘过量(HI)组,每组8只.对照组饮高压灭菌水,HI组饮0.05%NaI添加水,饲养8周后处死.测量甲状腺相对质量,进行甲状腺组织形态学观察,测量血清甲状腺素(TT4)和甲状腺刺激激素(TSH),检测甲状腺滤泡上皮细胞凋亡情况,应用实时定量PcR(real time PCR)方法检测TRAIL和TRAIL-sR1 mRNA表达情况.结果 NOD鼠HI组甲状腺相对质量[(104.8±14.5)mg/kg]高于对照组[(71.8±20.4)mg/kg],血清TT4水平[(30.77±3.59)mmol/L]低于对照组[(36.43±2.66)mmol/L],TSH水平[(6.98±0.66)μg/L]高于对照组[(5.55±0.56)μg/L],组间比较差异均有统计学意义(t值分别为7.773、-9.526、-4.458,P均<0.05).HI组甲状腺出现滤泡扩张、胶质潴留及明显的淋巴细胞浸润伴灶性纤维化.Balb/c鼠川组甲状腺相对质量[(155.8±20.8)mg/kg]高于对照组[(105.1±22.0)mg/kg],血清TT4水平[(19.75±3.32)mmol/L]低于对照组[(23.46±6.21)mmol/L],TSH水平[(4.14±1.71)μg/L]高于对照组[(3.55±1.41)μg/L],组间比较差异均有统计学意义(t值分别为7.554、-7.239、3.140,P均<0.05);HI组甲状腺仅有甲状腺滤泡扩张,胶质潴留,而未见明显的淋巴细胞浸润.HI组NOD鼠和Balb/c鼠甲状腺滤泡上皮细胞的凋亡指数(3.97±0.91、1.05±0.45)分别高于对照组(0.21±0.15、0.10±0.03),组间比较差异均有统计学意义(t值分别为-7.167、-17.772,P均<0.05),Balb/c鼠HI组的甲状腺滤泡上皮细胞的凋亡指数低于NOD鼠HI组,组间比较差异有统计学意义(t=-7.625,P<0.05).NOD鼠HI组TRAIL mRNA表达水平(0.018 88±0.005 77)高于对照组(0.00961±0.005 91),组间比较差异有统计学意义(t=-2.710,P<0.05);Balb/c鼠HI组TRAIL表达水平(0.001 24±0.000 46)与对照组(0.000 59±0.000 39)比较,差异无统计学意义(t=-1.940,P>0.05);NOD鼠和Balb/c鼠HI组的TRAIL-sR1 mRNA表达水平(0.000 53±0.000 15、0.000 42±0.000 09)均高于对照组(0.000 28±0.000 05、0.000 17±0.000 06),组间比较差异有统计学意义(t值分别为3.050,3.990,P均<0.05),Balb/c鼠HI组的TRAIL和TRAIL-sR1的mRNA表达水平均低于NOD鼠HI组,组间比较差异均有统计学意义(t值分别为-3.370、-4.760,P均<0.05).结论 碘过量可使NOD和Balb/c鼠发生胶质潴留性甲状腺肿,并可造成NOD鼠甲状腺发生明显的炎症反应.TRAIL和TRAIL-sR1表达水平升高是碘过量导致甲状腺滤泡上皮凋亡和炎症发生的分子基础之一.遗传在甲状腺炎的发病过程中起到至关重要的作用.
关键词： 碘 甲状腺炎 自身免疫 受体 TNF相关凋亡诱导配体 -
XAF1增加TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡的敏感性
背景:肿瘤坏死因子(TNF)相关凋亡诱导配体(TRAIL)可特异性诱导肿瘤细胞凋亡,但部分肿瘤细胞对TRAIL不敏感甚至耐药.目的:探讨X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)是否可增加TRAIL诱导的肝癌细胞株凋亡的敏感性.方法:重组人TRAIL(rhTRAIL)因子分别加入3株肝癌细胞株SMMC7721、HepG2和Bel-7404中培养,联合或不联合相同感染复数(MOI)的重组腺病毒Ad5/F35-XAF1和对照空病毒Ad5/F35-Null.作用48 h后,以MTT法检测细胞活力,以Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率.结果:随着TRAIL浓度的增加,3株肝癌细胞株的细胞活力均不同程度降低.TRAIL与Ad5/F35-XAF1联合作用后,其细胞活力显著低于单独TRAIL组,而Ad5/F35-Null组细胞活力与单独TRAIL组无明显差异.与空白对照组和Ad5/F35-Null组相比,TRAIL组和Ad5/F35-XAF1组3株肝癌细胞株的凋亡率均显著增加.TRAIL与Ad5/F35-XAF1联合作用后,细胞凋亡率显著高于Ad5/F35-XAF1组或TRAIL组.结论:XAF1可明显增加TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡的敏感性,两者联合应用对诱导不同肝癌细胞凋亡具有协同作用.
关键词： XIAP相关因子1 TNF相关凋亡诱导配体 肝肿瘤 细胞凋亡 -
TRAIL联合吉西他滨对肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响
目的:观察吉西他滨(gemcitabine)联合TNF相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducingligand,TRAIL)对人肺癌细胞NCI-H460增殖和凋亡的影响.方法:MTT法检测NCI-H460细胞的增殖,流式细胞术检测NCI-H460细胞的凋亡.结果:吉西他滨和TRAIL单用或联用均可浓度(0.001～10μg/m1)和时间(24、48、72 h)依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,两药联用比单用时抑制率更高,3组药物作用72 h时对肿瘤的抑制率分别为14.9%～77.5%、23.4%～74.8%、22.3%～80.5%;作用72 h时两药单用和联用对细胞增殖抑制的IC50分别为0.085 3、0.098 2、0.043 5μg/ml.两药联用对NCI-H460细胞增殖的抑制效果还与用药顺序以及两药比例有关,吉西他滨作用24 h后再加TRAIL比TRAIL作用24 h后再加吉西他滨对NCI-H460的抑制效果更好,吉西他滨与TRAIL联用的比例为1:0.3时对NCI-H460细胞增殖的抑制率大.吉西他滨和TRAIL联用时NCI-H460细胞的凋亡率显著高于两药单用的凋亡率(49.04%vs 29.33%、25.69%,P＜0.01).结论:吉西他滨与TRAIL联用可协同抑制肺癌细胞NCI-H460的增殖、促进细胞凋亡.
