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骨灵片对原发性骨质疏松症大鼠骨密度及血清OPG/RANKL水平的影响
目的:观察骨灵片对原发性骨质疏松症(POP)大鼠骨密度(BMD)及血清OPG、RANKL表达的影响.方法:将大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、骨灵片高、中、低剂量组,采用去势法建立大鼠POP动物模型,正常饲养1月后,骨灵片3个剂量组和阳性对照组分别给予骨灵片和护骨胶囊治疗3个月后处死,采用X线骨密度仪和ELISA法分别测定大鼠股骨BMD及血清OPG、RANKL.结果:与模型组比较,各给药组BMD值均较高,其中骨灵片高、中剂量组BMD与模型组比较有显著性差异(P<0.05),骨灵片3个剂量组及阳性对照组与正常组比较无显著性差异(P>0.05).骨灵片3个剂量组、阳性对照组及模型组的血清OPG和RANKL均较正常组升高,而骨灵片3个剂量组、阳性对照组测得较高的OPG和RANKL值,较之模型组有显著性差异(P<0.05,P<0.01).结论:骨灵片可通过上调OPG,下调RANKL的表达,影响OPG/RANKL/RANK系统,抑制骨丢失,维持BMD,从而起到防治POP的作用.
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淫羊藿总黄酮对去卵巢大鼠骨组织OPG、OPGL mRNA表达的影响
目的:探讨淫羊藿总黄酮(total flavone of epimedium,TFE)治疗骨质疏松症的分子机制,为传统中药的现代化和二次开发提供实验依据.方法:将60只4月龄健康雌性SD大鼠按随机数字表法分为对照组(A组,20只,行假手术处理),去卵巢组(OVX组,20只,切除卵巢后不给予淫羊藿处理),淫羊藿组(TFE组,20只,切除卵巢后给予淫羊藿灌胃).所有大鼠术前及术后4周以DEXA骨密度仪检测L<,4>骨密度变化(若BMD下降>20%,则骨质疏松模型建立).模型建立后TFE组大鼠给予淫羊藿总黄酮(浓度30mg/ml,10ml/kg,1次/d)灌胃4周.所有大鼠处死前再行DEXA骨密度检测,过量麻醉法处死后取其股骨下部,切片匀浆提取骨组织中RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测骨组织护骨素(osteoprotegrin,OPG)、护骨素配体(OPGL)mRNA的表达.结果:①TFE组大鼠切除卵巢4周后,腰椎BMD均值降至(0.084±0.020)g/cm<'2>,降幅>20%证明骨质疏松模型建立.TFE灌胃4周后其腰椎BMD提高至(0.112±0.009)g/cm<'2>,与给药前比较有明显改善,差异有统计学意义(P<0.05);②TFE组大鼠骨组织中OPG mR-NA的表达较OVX组相比,明显增强,且有统计学差异(P<0.05),但对OPGL mRNA表达促进作用不明显,组间无统计学差异(P>0.05).结论:TFE是通过促进骨组织中OPG mRNA的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟,从而达到治疗骨质疏松症的目的.
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补肾宁心方对小鼠绝经后骨质疏松的选择性作用
目的:探讨补肾宁心方防治绝经后骨质疏松的作用.方法:建立BALB/c小鼠绝经后骨质疏松模型,灌服补肾宁心方浓缩液(简称补肾方),并以17β-雌二醇为阳性对照(简称E2组),以生理盐水为阴性对照(简称模型组).12周后处死,取血测Th1/Th2型细胞因子;取椎骨(L3-4)和左股骨测骨密度(BMD);取右股骨行骨组织形态计量分析;胫骨提取总RNA,半定量RT-PCR分析护骨素(OPG)的mR-NA表达.计算子宫对体重的比值,并行子宫组织切片观察.结果:补肾方组的IFN-γ水平较模型组明显升高(P＜0.01);而IL-4水平低于模型组(P＜0.05).补肾方组与E2组均可改善小鼠的BMD,增加骨小梁面积,使OPG mRNA表达增加.补肾方组的子宫与模型组比较无显著性差异.结论:补肾方能够选择性地防治绝经后骨质疏松,对子宫无或仅有轻微的刺激作用.其机制与调节Th1/Th2的偏离及提高OPG的表达,抑制破骨细胞的活性有关.
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针刺对快速老化骨质疏松小鼠P6骨代谢因子OPG、BMP-2的影响
目的:探讨针刺治疗骨质疏松的机制.方法:以快速老化骨质疏松小鼠P6(SAMP6)及正常同源抗快速老化小鼠R1(SAMR1)为模型,采用Western Blot等方法,观察SAMP6对照组、SAMP6针刺组、SAMP64非穴位刺激组和SAMR1对照组股骨护骨素(OPG)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)蛋白表达的变化.结果:SAMP6对照组股骨OPG、BMP-2表达显著下调(P<0.05);针刺后两者表达上调并趋于正常(P<0.05).结论:SAMP6小鼠发生骨质疏松与OPG、BMP-2等骨代谢因子表达异常有关,针刺可通过促进成骨细胞形成并分泌骨代谢因子来刺激骨形成,降低骨转换率,达到改善骨质疏松的作用.
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淫羊藿苷对Ⅱ型胶原诱导型关节炎大鼠骨破坏及血清RANKL/OPG的干预作用
目的 观察淫羊藿苷对Ⅱ型胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清破骨细胞分化因子(receptor activator of NFκB-ligand,RANKL)和护骨素(osteoprotegerin,OPG)的影响及对骨破坏的保护作用.方法 除正常组(8只)外,其余大鼠用牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂注射诱导建立CIA大鼠模型.选取关节炎指数(arthritis index,AI)≥6分的CIA大鼠24只,根据其AI评分分为模型组、甲氨喋呤组和淫羊藿苷组,每组8只.正常组和模型组给予生理盐水灌胃,甲氨喋呤组给予甲氨喋呤每周 5 mg/kg灌胃,淫羊藿苷组给予淫羊藿苷20 mg/(kg·d)灌胃,均连续给药4周.每周记录大鼠AI评分.给药结束后,HE染色观察踝关节组织形态学变化;X射线检查足趾骨质破坏与骨质疏松情况;ELISA法测定血清RANKL、OPG水平.结果 给药4周后,与模型组比较,淫羊藿苷组AI评分、Larsen评分、血清RANKL水平及RANKL/OPG比值明显降低,OPG水平明显升高,差异均有统计学意义(P <0.05,P <0.01);甲氨喋呤组上述指标均降低,差异无统计学意义(P >0.05).HE染色示淫羊藿苷组关节滑膜增生、炎症细胞浸润与软骨面破坏程度明显减轻.结论 淫羊藿苷能缓解或减轻CIA大鼠骨破坏程度,其作用机制可能与降低CIA大鼠血清RANKL水平,提高OPG浓度进而降低RANKL/OPG比例有关.
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灯盏花对成骨细胞及破骨前体细胞OPG/RANKL/RANK表达的影响
目的 研究不同浓度和不同作用时间的灯盏花对体外培养的成骨细胞和破骨前体细胞中OPG/RANKL/RANK mRNA及蛋白表达的影响,初步探讨灯盏花对骨改建的作用及其机制.方法 体外培养人MG63细胞和小鼠RAW264.7细胞,分别取第三代细胞分为对照组和不同的实验组,分别应用不同浓度的灯盏花(0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL)干预48 h后提取总RNA和蛋白质,同时单独对0、1 mg组设12、24、48 h时间点提取蛋白质,采用半定量RT-PCR方法检测MG63细胞OPG mRNA和RANKL mRNA的表达以及RAW264.7细胞RANK mRNA的表达,采用Western blot法检测MG63细胞OPG蛋白和RANKL蛋白的表达以及RAW264.7细胞RANK蛋白的表达.结果灯盏花随浓度(0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL)增高,干预48 h后MG63细胞OPG mRNA和蛋白表达逐步降低(P <0.05);MG63细胞RANKL mRNA和蛋白表达逐步增加(P <0.05);RAW264.7细胞RANK mRNA表达增加(P <0.05),但0.1 mg/mL组较0.01 mg/mL组 mRNA表达稍降低,RANK蛋白表达逐步增加(P <0.05).1 mg/mL灯盏花干预12、24、48 h后MG63细胞OPG蛋白表达随时间逐步降低(P <0.05)、RANKL蛋白表达随时间逐步增加(P <0.05);RAW264.7细胞RANK蛋白表达随时间逐步增加(P <0.05).结论 灯盏花大致上呈剂量和时间依赖性抑制成骨细胞OPG表达,促进成骨细胞RANKL的表达和破骨前体细胞RANK的表达,灯盏花可能有促进骨吸收的作用.
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补肾宁心方对小鼠绝经后骨质疏松的影响
目的探讨补肾宁心方防治绝经后骨质疏松的作用.方法建立BALB/c小鼠绝经后骨质疏松模型,灌服补肾宁心方浓缩液(简称补肾方组),并以17 β-雌二醇为阳性对照(简称E2组),以生理盐水为阴性对照(简称模型组).12周后处死,取血测Th1/Th2型细胞因子;取椎骨(L3-4)和左股骨测骨密度(BMD);取右股骨行骨组织形态计量分析;胫骨提取总RNA,半定量RT-PCR分析护骨素(OPG)的mRNA表达.计算子宫对体重的比值,并行子宫组织切片观察.结果补肾方组的IFN-γ水平较模型组明显升高(P＜0.01),而IL-4水平低于模型组(P＜0.05).补肾方组与E2组小鼠的BMD均改善,骨小梁面积增加,OPG mRNA表达增加;但补肾方组小鼠的子宫明显小于E2组(P＜0.05),与模型组比较差异无显著性.结论补肾方能够选择性地防治绝经后骨质疏松,对子宫无或仅有轻微的刺激作用.其机制可能与调节Th1/Th2的偏移及提高OPG的表达,抑制破骨细胞的活性有关.
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五味子对去卵巢致骨质疏松大鼠胫骨护骨素、核因子-кB受体活化因子配体蛋白表达的影响
目的 探讨五味子对去卵巢大鼠骨质疏松症的治疗作用及其机理.方法 将59只雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组、阳性对照组及五味子组,其中五味子组11只,其余每组12只.摘除大鼠双侧卵巢1个月后,五味子组灌服五味子水煎剂(lg/ml),阳性对照组予己烯雌酚(0.008mg/ml)灌胃3个月(5.6m1/kg).对不脱钙骨切片进行形态计量并检测胫骨成骨细胞(OB)和骨髓基质细胞(MSC)中护骨素(OPG)、核因子-кB受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达.结果 五味子组大鼠胫骨骨小梁体积百分比较模型组显著增高,除骨皮质类骨质平均宽度外,骨小梁吸收表面百分比、骨小梁形成表面百分比、骨小梁矿化率术较模型组均显著降低,OB及MSC中OPG蛋白表达明显增高(P＜0.05或P＜0.01),OB中RANKL蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 五味子对卵巢切除大鼠骨质疏松症治疗作用机理之一是通过促进OB和MSC中OPG的分泌,使之与RANKL的结合增多,进而抑制破骨细胞的活性.
关键词： 五味子 骨质疏松症 护骨素 核因子-кB受体活化因子配体 -
妊娠期糖尿病及正常糖耐量孕妇血浆护骨素水平的比较
目的 比较妊娠期糖尿病(GDM)和正常糖耐量(NGT)妊娠妇女在怀孕中晚期血浆护骨素(OPG)及相关因子水平.方法 NGT和GDM妊娠妇女各65例,于孕24～28周取静脉血,-20℃低温保存.用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血浆护骨素(OPG)水平,同时测定空腹血糖(FPG),空腹胰岛素(FINS),糖化血红蛋白(HbA1c),血脂水平,超敏C反应蛋白(hs-CRP),血细胞计数,计算胰岛细胞功能(HOMA-B)和胰岛素抵抗(HOMA-IR)的评估指数.结果 GDM组和NGT组血浆骨保护素(OPG)水平分别为2 619[1968,3917] ng/L和3 225[2 146,4 226] ng/L,两组间无明显差异.在NGT组,OPG与FINS(r =0.335；P ＜0.05)、HOMA-IR(r =0.363；P＜0.05)和血小板计数(r =0.333;P＜0.05)呈正相关,与载脂蛋白B(r=-0.254; P＜0.05)呈负相关,在GDM组,未发现上述指标与OPG水平相关.结论 OPG可能参与了糖耐量正常孕妇孕期的胰岛素抵抗和炎性反应.
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护骨素与糖尿病血管并发症关系研究进展
血管并发症是糖尿病主要并发症之一,是糖尿病患者致死致残的主要原因.血清护骨素(OPG)水平与糖尿病血管并发症关系密切.本文对OPG与糖尿病血管并发症的关系及其机制作一综述.
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护骨素与糖尿病及其血管并发症关系研究进展
糖尿病血管病变是糖尿病主要并发症,护骨素(OPG)与血管疾病密切相关.本文概述OPG的结构、表达调控、生物学作用,探讨OPG与糖尿病及其血管并发症(大、微血管并发症及内皮功能异常)的关系.
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2型糖尿病患者血浆护骨素浓度与内皮依赖性血管舒张功能关系的研究
目的 探讨T2DM患者血浆护骨素(OPG)浓度与内皮依赖性血管舒张功能的关系. 方法 选取T2DM患者(T2DM组)154例和健康对照(NC)者46名,分别测定其血浆OPG浓度,并采用高分辨血管外超声法检测肱动脉血流介导的内皮依赖性血管舒张功能和硝酸甘油介导的非内皮依赖性血管舒张功能. 结果 T2DM组血流介导的内皮依赖性血管舒张功能为(3.56±0.64)％,低于NC组(5.32±0.55)％(P＜0.01).多元回归分析显示,内皮依赖性血管舒张功能、24 hUA1b均与血浆OPG水平相关.Pearson相关分析显示,OPG浓度与内皮依赖性血管舒张功能呈负相关(r=-0.284,P=0.000). 结论 血浆OPG水平在T2DM患者中升高,其水平与内皮依赖性血管舒张功能呈负相关.
关键词： 糖尿病 2型 护骨素 内皮依赖性血管舒张功能 -
2型糖尿病患者护骨素基因启动子区950T→C多态性与血管并发症的关系
目的 探讨2型糖尿病患者护骨素(OPG)基因启动子区950T→C多态性与合并冠心病、脑血管病、视网膜病变的关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)法检测OPG基因型.结果 OPG基因启动子区950T→C多态性与糖尿病合并冠心病、脑血管病无明显相关性(P＞0.05),而与视网膜病变相关,合并视网膜病变患者C等位基因比例显著高于无视网膜病变患者(χ~2=4.696,P＜0.05).结论 C等位基因可能增加2型糖尿病并发视网膜病变的遗传易感性.
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急性心肌梗死患者血清护骨素水平的变化
目的 研究急性心肌梗死患者血清护骨素水平的变化及意义.方法 测定48例急性心肌梗死患者入院时,24、72 h、1周及4周后血清护骨素水平.血清护骨素采用ELISA法测定.结果 急性心肌梗死患者入院时血清护骨素水平即明显升高(3.87±0.34)ng/L,显著高于稳定性心绞痛组(3.17±0.29)ng/L(P＜0.01)与正常对照组(2.26±0.32)ng/L(P＜0.01),72 h达高峰,4周后有所下降,但仍明显高于正常水平.结论 急性心肌梗死患者血清护骨素水平显著高于稳定性心绞痛患者,且呈动态变化.
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前列腺素E2调节大鼠成骨细胞RANKL/OPG mRNA表达的信号通路研究
目的 探讨前列腺素E2(PGE2)对大鼠成骨细胞RANKL和OPG mRNA表达的调节及其信号转导机制.方法 培养大鼠UMR106成骨细胞,采用不同浓度的PGE2、不同信号通路的激动剂和阻断剂干预细胞不同时间后收集细胞提取总RNA,实时荧光定量PCR检测RANKL和OPG mRNA的表达水平.结果PGE2、Forskolin和db-cAMP均可促进RANKL mRNA表达,抑制OPG mRNA的表达.PMA促进RANKL和OPG mRNA表达而A23187则下调RANKL和OPG表达.KT-5720下调PGE2诱导的RANKL mRNA表达约53%(P<0.001),而chelerythrine、维拉帕米、W7、KN-62和PD98059则对PGE2>诱导的RANKL mRNA表达无明显影响(P>0.05).KT-5720(P=0.01)、维拉帕米(P=0.029)和W7(P<0.001)均能部分阻断PGE2对OPG mRNA表达的下调作用,KN-62、PD98059和chelerythrine则不影响PGE2对OPG表达的调节(P>0.05).结论 PGE2诱导的RANKL表达是由PKA信号通路介导的,而PKA和钙/钙调蛋白信号通路则介导了PGE2对OPG表达的抑制作用.
关键词： 前列腺素E2 核因子-κB受体激活物配基 护骨素 信号通路 钙调蛋白 -
MAPK信号通路在力学刺激对MG-63成骨样细胞护骨素表达中的作用
目的 观察力学刺激对MG-63成骨样细胞护骨素(osteoprotegrin,OPG)表达及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响,以及探讨MAPK信号通路在OPG表达中的作用.方法 将不同作用时间的机械应变分别作用于MG-63成骨样细胞,采用免疫印迹(Western blot)法检测OPG蛋白、 磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、p38MAPK(p-p38MAPK)、JNK(p-JNK)表达,采用RT-PCR方法检测OPG mRNA的表达,同时应用信号通路阻断剂观察MAPK各信号通路在OPG表达中的作用.结果 机械力学刺激明显促进了MG-63成骨样细胞OPG蛋白及mRNA的表达,加力1、3、6、12 h后OPG蛋白表达分别是对照组的2.3、4.2、5.9、6.6倍(P<0.05),加力3、6、12 h后OPG mRNA表达分别是对照组的4.8、6.8、7.5倍(P<0.05),加力12 h组作用明显.力学刺激能够激活ERK1/2信号通路,加力60 min后激活显著,p-ERK1/2表达是对照组的3.2倍(P<0.05).力学刺激也能激活JNK信号通路,加力10 min后开始活化,加力30 min后显著,加力10、15、30 min后p-JNK表达分别是对照组的2.9、4.3、5.1倍(P<0.05).但力学刺激不能激活p38MAPK信号通路.分别应用ERK1/2、JNK的信号通路阻断剂后,发现当抑制ERK1/2信号通路时,OPG蛋白表达也受到了抑制,差异有统计学意义(P<0.05).结论 机械力学刺激上调了MG-63成骨样细胞OPG蛋白及mRNA的表达,ERK1/2信号通路可能参与了此过程.
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广西壮族绝经后妇女雌激素受体-α基因多态性对血清护骨素的影响
目的 了解雌激素受体-α基因多态性对广西壮族绝经后妇女护骨素的影响,为雌激素受体基因所致的护骨素降低引起绝经后骨质疏松症早期防治提供理论依据.方法 621例广西壮族绝经妇女,定量超声骨质密度仪检测右侧足跟骨测量宽带超声衰减值,并早上空腹采肘静脉血5 ml,限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测雌激素受体-α基因多态性,用酶联免疫法测定各基因型对应的血清护骨素.结果 绝经早期各雌激素受体-α各基因型的护骨素和骨密度都是降低的,各雌激素受体-α各基因型之间骨密度和护骨素均无明显差别(P＞0.05).而60岁后绝经晚期雌激素受体-αPvuⅡ酶切的P等位基因与同一年龄组其他4个基因组比较,护骨素和骨密度明显降低(P＜0.05);65岁后绝经晚期雌激素受体-αXba Ⅰ酶切的Xx等位基因与同一年龄组其他4个基因组比较,护骨素和骨密度明显提高(P＜0.05).结论 雌激素受体-αPvuⅡ酶切的P等位基因护骨素和骨密度较低,更易患绝经后骨质疏松症,而雌激素受体-αXbaⅠ酶切的Xx等位基因护骨素和骨密度较高,不易患绝经后骨质疏松症.绝经后骨质疏松症防治方面,应该根据雌激素受体不同基因型对不同个体采取个体化防治.
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诱骗受体及护骨素基因多态性与溃疡性结肠炎的关系
目的 探讨诱骗受体(DcR)1、DcR2及护骨素(OPG)基因的多态性与溃疡性结肠炎(UC)易感性的关系.方法 收集352例UC患者和463例性别、年龄相匹配的健康对照者,采用微测序技术检测DcR1(rs12549481位点)、DcR2(rs1133782位点)及OPG(rs3102735位点)的基因型频率.结果 在显性模型中,UC组DcR2(rs1133782位点)的突变等位基因(A)和基因型(GA+ AA)频率均低于对照组[6.25％ (44/704)比8.96％(83/926),P=0.043;11.36％ (40/352)比17.28％(80/463),P=0.018];而在隐性模型中,UC组OPG(rs3102735位点)的突变等位基因(T)和纯合子突变基因型(TT)的频率均高于对照组[86.36％(608/704)比81.53％(755/926),P=0.009;75.28％(265/352)比66.95％ (310/463),P=0.010].采用非条件Logistic回归分析发现,重度UC患者中OPG(rs3102735位点)的突变等位基因(T)的频率明显低于轻-中度患者[76.67％(69/90)比87.79％(539/614),OR=0.457,95％CI0.265～0.788,P=0.004].而DcR2(rs1 133782位点)基因多态性与UC患者临床病理特征的关联性无统计学意义(P＞0.05).由于对照组中DcR1基因型分布不符合Hardy-Weinberg平衡规律,故对其未进一步做统计学分析.结论 DcR2(rs1133782位点)基因多态性可能与UC的易感性相关;OPG(rs3102735位点)基因突变不仅会提高UC的患病风险,还可能影响UC的疾病严重程度.
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雌二醇对人成骨肉瘤MG63细胞株护骨素、护骨素配体及其相关因子的调节
目的观察17β-雌二醇(17β-E2)和ICI 182780对人成骨肉瘤MG63细胞株表达护骨素(OPG)、OPG 配体(OPGL)及其相关因子[TRAIL、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、转化生长因子β(TGFβ)]的影响.方法用逆转录PCR(RT-PCR)法检测基因表达情况,用Western blot分析法检测蛋白表达情况.结果 (1)17β-E2能上调MG63细胞中OPG及TGFβ的表达,下调OPGL、M-CSF及TRAIL的表达.(2) ICI 182780对被检测基因有不同的调节活性.结论雌激素缺乏可能导致成骨细胞中OPG、TGFβ的表达减少,而解除了对OPGL、M-CSF和TRAIL等细胞因子的抑制作用,使破骨细胞的数量和活性增加,骨吸收增强和骨量丢失,这可能是绝经后骨质疏松症的一个重要的发病机制;ICI 182780并非纯雌激素受体拮抗剂,而属于选择性雌激素受体调节剂.
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携带人护骨素基因的腺相关病毒在关节炎大鼠膝关节转导的初步研究
护骨素(OPG)是一种分泌型糖蛋白和缺乏跨膜结构域的肿瘤坏死因子受体超家族成员,主要通过与NF-кB受体活化因子配体(RANKL)结合而发挥骨保护作用.OPG不仅抑制破骨细胞生成,还抑制破骨细胞的骨吸收功能.各种上游因子如甲状旁腺激素、前列腺素、TNF、IL等终均通过改变RANKL/OPG的比率而发挥作用,血清RANKL/OPG对早期类风湿关节炎的骨破坏具有预测作用[1].
