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灯盏花对成骨细胞及破骨前体细胞OPG/RANKL/RANK表达的影响
目的 研究不同浓度和不同作用时间的灯盏花对体外培养的成骨细胞和破骨前体细胞中OPG/RANKL/RANK mRNA及蛋白表达的影响,初步探讨灯盏花对骨改建的作用及其机制.方法 体外培养人MG63细胞和小鼠RAW264.7细胞,分别取第三代细胞分为对照组和不同的实验组,分别应用不同浓度的灯盏花(0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL)干预48 h后提取总RNA和蛋白质,同时单独对0、1 mg组设12、24、48 h时间点提取蛋白质,采用半定量RT-PCR方法检测MG63细胞OPG mRNA和RANKL mRNA的表达以及RAW264.7细胞RANK mRNA的表达,采用Western blot法检测MG63细胞OPG蛋白和RANKL蛋白的表达以及RAW264.7细胞RANK蛋白的表达.结果灯盏花随浓度(0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL)增高,干预48 h后MG63细胞OPG mRNA和蛋白表达逐步降低(P <0.05);MG63细胞RANKL mRNA和蛋白表达逐步增加(P <0.05);RAW264.7细胞RANK mRNA表达增加(P <0.05),但0.1 mg/mL组较0.01 mg/mL组 mRNA表达稍降低,RANK蛋白表达逐步增加(P <0.05).1 mg/mL灯盏花干预12、24、48 h后MG63细胞OPG蛋白表达随时间逐步降低(P <0.05)、RANKL蛋白表达随时间逐步增加(P <0.05);RAW264.7细胞RANK蛋白表达随时间逐步增加(P <0.05).结论 灯盏花大致上呈剂量和时间依赖性抑制成骨细胞OPG表达,促进成骨细胞RANKL的表达和破骨前体细胞RANK的表达,灯盏花可能有促进骨吸收的作用.
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雷公藤多苷对rmMIF诱导大鼠成纤维样滑膜细胞增殖及RANKL/OPG表达的影响
目的 观察雷公藤多苷(tripterygium glycoside,TG)对重组鼠巨噬细胞移动抑制因子(recombinant mouse macrophage migration inhibitory factor,rmMIF)诱导大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的增殖及其细胞核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappaB ligand,RANKL)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的干预作用.方法 采用大鼠FLS细胞株RSC-364,常规方法 复苏、培养、传代,实验用3～5代FLS.分为4组:空白对照组加入200 μl DMEM培养液,另3组分别加入200 μl含rmMIF(200 ng/ml)(MIF组)、rmMIF(200 ng/ml)+TG(20 μg/ml)(MIF+TG组)、rmMIF(200ng/ml)+MTX(0.5 μg/ml)(MIF+MTX组)的DMEM培养液.置37℃、5%CO2孵箱培养48 h.MTT法检测FLS的增殖活性;免疫组化法检测滑膜细胞OPG/RANKL的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测FLS上清液OPG、RANKL表达.结果 MIF组增殖活性高于空白对照组,MIF+TG组、MIF+MTX组增殖活性低于空白对照组和MIF组(P＜0.01).MIF+TG组和MIF+MTX组细胞OPG标记指数均高于空白对照组和MIF组,MIF+TG组OPG标记指数高于MIF+MTX组(P＜0.01,P＜0.05).MIF组细胞RANKL标记指数高于空白对照组,MIF+TG组、MIF+MTX组RANKL标记指数均低于MIF组(P＜0.05,P＜0.01).MIF组上清液RANKL浓度和RANKL/OPG值均高于空白对照组,MIF+MTX组上清液RANKL浓度低于空白对照组(P＜0.05,P＜0.01);MIF+TG组和MIF+MTX组上清液RANKL浓度和RANKL/OPG值均低于MIF组(P＜0.01).结论 rmMIF可促进体外培养大鼠FLS增殖,上调FLS的RANKL表达和RANKL/OPG值;TG抑制rmMIF诱导的大鼠FLS增殖、降低rmMIF诱导大鼠FLS分泌RANKL、下调FLS的RANKL表达和RANKL/OPG比值,可能是其治疗类风湿关节炎的骨免疫学机制之一.
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血清白细胞介素-34在银屑病关节炎骨破坏中的作用研究
目的 探讨血清IL-34水平与PsA骨破坏的相关性.方法 以40例PsA患者为实验组,以20例银屑病患者(银屑病组)及20名健康志愿者为健康对照组,检测3组研究对象外周血IL-34及破骨细胞相关细胞因子,包括TNF-α、细胞NF-κB受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)的水平,分析IL-34与外周血破骨前体细胞(OCP)的数量、疾病活动度及影像学评分间的相关性.所有数据均采用GraphPad Prism 6软件进行分析.采用多因素方差分析进行多组比较,两两比较采用q检验,采用Spearman相关分析评估各指标间的相关性.结果 PsA组患者血清IL-34的水平[(328±476) pg/ml]高于银屑病组[(33±52)pg/ml,q=3.92,P＜0.01]及健康对照组[(32±32) pg/ml,q=3.93,P＜0.01],侵蚀性PsA组高于非侵蚀性PsA组[(449±527) pghrd与(47±24) pg/ml,q=4.04,P＜0.01].PsA组患者外周血TNF-α、RANKL水平及OCP计数[(125±79) pg/ml、(488±475) pg/ml及17.7±4.8(5个视野)]均高于银屑病组[(40±22) pg/rnl、(26±3) pg/ml及5.2±0.8(5个视野),q=7.32、6.14及2.94,P均＜0.01]及健康对照组[(41±19) pg/ml、(65±8) pg/ml及6.2±1.8(5个视野),q=6.67、5.62及2.71,P均＜0.01],PsA组的OPG/RANKL比值(0.5±0.4)显著低于银屑病组(4.3±2.7,q=-3.30,P＜0.01]及健康对照组(1.8±0.6,q=-1.72,P＜0.01),IL-34、TNF-α及RANKL的水平均与OCP呈正相关(r=0.10,P＜0.05;r=0.12,P＜0.05;r=0.13,P＜0.05).结论 PsA患者尤其是侵蚀性PsA患者外周血中存在较高水平的IL-34,与OCP数量呈正相关,IL-34参与了OCP及破骨细胞的分化,进而促进骨破坏过程.因此,IL-34有望成为治疗PsA的新靶点.
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ERK信号通路对钛合金诱导成骨细胞RANKL、OPG表达的作用
目的 探讨钛合金颗粒对体外培养的小鼠成骨细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)及骨保护素(OPG)基因表达和蛋白分泌的影响,以及细胞外信号调控激酶1/2(ERK1/2)信号通路在其中的作用.方法 体外培养成骨细胞.实验分3组:对照组(A组);钛合金组(B组):给予浓度为0.1 g/L钛合金颗粒干预;抑制剂组(C组):给予钛合金颗粒+ERK信号通路抑制剂PD98059,每组6个样本.采用RT-PCR和ELISA法分别检测成骨细胞RANKL、OPG基因和蛋白表达.结果 3组各个时间点均可见RANKL、OPG的表达;但B组RANKL、OPG mRNA的表达和蛋白分泌量以及RANKL/OPG比值显著高于A组(P<0.01);而C组RANKL、OPG mRNA的表达和蛋白分泌水平以及RANKL/OPG比值的增幅显著小于B组(P<0.01).结论 钛合金颗粒可刺激成骨细胞RANKL mRNA、OPG mRNA的表达并促进RANKL、OPG蛋白的分泌,增加RANKL/OPG比值;ERK信号通路抑制剂PD98059可一定程度抑制RANKL和OPG的表达,降低RANKL/OPG比值,对减少假体周围骨溶解的发生可能起重要作用.
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强直性脊柱炎患者血清TNF-α、RANKL、OPG 和IL-34水平与附着点病变的相关性研究
目的 探讨强直性脊柱炎(AS)患者TNF-α、细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)和IL-34水平与超声评估附着点病变、实验室指标和临床指标的相关性.方法 选取AS患者21例(AS组),类风湿关节炎(RA)患者21例(RA组),健康者41例(健康对照组).采用ELISA法检测各组血清TNF-α、RANKL、OPG和IL-34水平.分析AS患者TNF-α、RANKL、OPG和IL-34与超声评估附着点病变、实验室指标和临床指标的相关性,并分析4项血清指标之间的相关性.结果 AS组患者血清TNF-α、RANKL和IL-34水平均高于RA组患者及健康对照组,血清OPG均低于RA组患者及健康对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).AS患者血清RANKL和IL-34水平与超声评估附着点骨侵蚀关节个数(r=0.564和0.482,均P＜0.05)及附着点炎关节个数(r=0.634和0.545,均P＜0.05)均呈正相关.AS患者血清IL-34水平与Bath强直性脊柱炎病情活动指数呈负相关(r=-0.454,P＜0.05).AS患者血清RANKL水平与血清OPG水平呈负相关(r=-0.461,P＜0.05).ROC曲线显示血清RANKL和IL-34水平诊断AS的AUC分别为0.994和0.941,均P＜ 0.05.当血清RANKL水平≥125.85pg/ml,灵敏度为0.95,特异度为0.95;当血清IL-34水平≥728.15pg/ml,灵敏度为0.95,特异度为0.73.结论 AS患者外周血中存在较高水平的RANKL和IL-34,其与超声评估附着点病变骨侵蚀关节个数及附着点炎关节个数均呈正相关,提示两者可作为预测AS患者存在附着点病变的尤其是存在骨侵蚀的可靠指标.
关键词： 强直性脊柱炎 IL-34 细胞核因子-κB受体活化因子配体 附着点炎 超声 -
趋化因子CXCL13对TNF-α诱导的人骨关节滑膜细胞RANKL表达的影响
目的 探讨趋化因子CXCL13对TNF-α诱导的人骨关节滑膜细胞调控细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响.方法 ①体外培养人骨关节滑膜细胞,并给予10μg/mL TNF-α处理,分别在培养0、6、12、24h时采用免疫荧光法检测CXCL13表达.②人滑膜细胞给予10 μg/mL TNF-α处理24h,将培养液更换为含0、5、10、25 ng/mL CXCL13的培养液继续培养24 h,或将培养液更换为含25 ng/mL CXCL13的培养液分别作用0、1、3、6、24 h;以不加TNF-α及CXCL13处理的常规培养细胞作为对照细胞.收集各浓度、各时间点细胞,采用Western blotting法检测RANKL蛋白相对表达量.结果 ①TNF-α作用0、6、12、24 h时细胞CXCL13相对表达量(荧光强度)分别为0.907±0.350、0.823±0.730、0.710±0.660、0.653±0.850,组间比较P均＜0.05.②对照细胞RANKL蛋白相对表达量为0.956±0.014,25 ng/mL CXCL13处理0、1、3、6、24h时RANKL蛋白相对表达量分别为1.543±0.047、1.366±0.026、0.883±0.026、0.367±0.034、0.246±0.015;0、5、10、25 ng/mL CXCL13作用24h时RANKL蛋白相对表达量分别为0.287±0.007、0.189±0.008、0.069±0.004、0.022±0.002;上述各组、各时间及各浓度细胞比较P均＜0.05.结论 趋化因子CXCL13能够在一定浓度和时间内抑制TNF-α诱导的人骨关节滑膜细胞RANKL蛋白表达.
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基于RANKL-RANK-OPG轴研究丹参素防治牙槽骨骨质疏松的作用
目的:探讨RANKL-RANK-OPG轴在丹参素防治牙槽骨骨质疏松中的作用.方法:SD大鼠随机分为3组:对照组、去卵巢组和丹参素治疗组.实验90 d后取大鼠牙槽骨,HE染色观察牙槽骨组织形态学改变,组织化学染色方法检测牙槽骨组织中TRAP的活性,免疫组化的方法检测牙槽骨组织中RANKL和OPG的表达情况.结果:与去卵巢组相比:丹参素治疗组牙槽骨骨量明显增多,TRAP阳性的破骨细胞数减少,RANKL/OPG减小.结论:丹参素防治牙槽骨骨质疏松可能与其调控RANKL-RANK-OPG轴有关.
关键词： 牙槽骨 骨质疏松 丹参素 细胞核因子-κB受体活化因子配体 骨保护素 -
正畸对牙周膜细胞OPG、RANKL表达的影响
目的:探讨正畸力作用对移动牙牙周膜代谢的影响,以及牙周膜代谢在正畸骨改建中的作用.方法:选择临床正畸拔牙病例,在拔除第一前磨牙后,分别在尖牙的牵引移动前、牵引移动3个月时、牵引移动结束3个时间段,从移动牙的压力侧、张力侧分别提取人牙周膜细胞,进行细胞原代培养,并用RT-PCR检测其护骨素(OPG)、细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)的表达变化.结果:人牙周膜细胞原代培养成功.尖牙近中侧OPG的表达以及尖牙远中侧RANKL的表达均在尖牙移动前接近阴性,尖牙移动3个月时强,尖牙移动结束时减弱,而且3个观察时间点两两比较,差异均有统计学意义(P<0.01).结论:OPG、RANKL因子存在于牙周膜细胞中,正畸牙齿移动时其活性增强,可能参与正畸牙移动和局部牙槽骨改建的全过程.
关键词： 正畸 牙齿移动 人牙周膜细胞 护骨素 细胞核因子-κB受体活化因子配体 -
阳极氧化处理后的新型钛合金表面成骨细胞OPG、RANKL基因表达研究
目的:新型钛合金Ti-24Nb-4Zr-7.9Sn(TNZS)经过阳极氧化(anodic oxidation,AD)技术处理后,分析其表面的人成骨样MG63细胞骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)基因表达水平.方法:将人成骨样MG63细胞接种于Ti-6Al-4V、TNZS、AD-TNZS表面,采用半定量RT-PCR法检测OPG、RANKL mRNA的表达量.结果:人成骨样MG63细胞在AD-TNZS表面的OPGm RNA表达量有所提高,而RANKL mRNA的表达量3组材料间无明显差异.结论:阳极氧化处理的TNZS钛合金可能通过影响骨保护素、细胞核因子-κB受体活化因子配体调节成骨细胞、破骨细胞的平衡,从而促进种植体植入后的骨重建.
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亚砷酸对大鼠类风湿关节炎模型作用机制的探讨
目的:研究亚砷酸在类风湿关节炎(RA)大鼠中的治疗作用.方法:40只大鼠随机分成4组:正常对照组(C组)、模型组(M组)、低剂量亚砷酸组(LSA 1.5 mg·kg-1·d-1)、高剂量亚砷酸组(HSA 3.0 mg·kg-1·d-1).原位杂交检测各组核因子-κB(NF-κB)、细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA的表达.结果:与C组比较,M组NF-κB、RANKL mRNA大量表达(P＜0.01);与M组比较,LSA组及HSA组NF-κB、RANKL mRNA表达降低(P＜0.01),且HSA组更明显.结论:RANKL、NF-κB在类风湿关节炎发生发展中具有重要作用,亚砷酸对类风湿关节炎有治疗作用.
关键词： 核因子-κB 细胞核因子-κB受体活化因子配体 类风湿关节炎 亚砷酸 -
补肾通络中药在类风湿性关节炎骨侵蚀中的保护效应
目的:探讨骨保护素(OPG)、细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)在类风湿关节炎(RA)骨侵蚀中的意义,研究补肾通络中药对RA骨侵蚀的保护作用.方法:收集健康者及RA患者治疗前后外周血,用ELISA法检测RANKL和OPG含量.结果:RA组外周血RANKL、OPG的含量明显高于正常组,OPG/RANKL比率明显降低.中药治疗后OPG的含量较治疗前明显增高,RANKL的含量较治疗前明显降低,OPG/RANKL比率明显增高.结论:局部微环境中RANKL与OPG的相对比值可能反映RA骨侵蚀中破骨细胞与成骨细胞功能倾向.补肾通络中药可能通过上调OPG,下调RANKL,增高OPG/RANKL比值从而对RA骨侵蚀起保护作用.
关键词： 类风湿性关节炎 骨保护素 细胞核因子-κB受体活化因子配体
