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急性B淋巴系白血病细胞CD271表达和血清神经生长因子水平的临床意义
本研究检测惠性B淋巴系白血病( B-ALL)患者血清神经生长因子(NGF)水平及骨髓白血病细胞群表面NGF低亲和性受体CD271的表达,并探讨两者的临床意义.应用酶标记免疫吸附分析法测定B-ALL患者血清NGF水平,应用流式细胞术测定患者骨髓白血病细胞群表面CD271的表达水平.结果表明,病例组患者NGF水平与对照组比较明显升高(t=4.191,p＜0.05),而白血病细胞表面CD271表达与对照组比较明显降低(t=4.898,p＜0.05).25例初治B-ALL患者经CVAD方案化疗1个周期后完全缓解(CR)率为64％( 16/25).未缓解(NR)组患者化疗后NGF水平和CD271表达与对照组比较差异均有统计学意义(t=3.976,p＜0.05和t=5.052,p＜0.05),而CR组化疗后NGF水平和CD271表达与对照组比较差异均无统计学意义(t=1.102,p＞0.05和t=l.150,p＞0.05).CR组和NR组患者化疗前CD271表达比较差异有统计学意义(t=3.889,p＜0.05),但NGF水平比较差异无统计学意义(t =0.476,p＞0.05).CR组和NR组患者化疗后NGF水平及CD271表达比较差异均有统计学意义(t =3.751,p＜0.05和=4.678,p＜0.05).50％ (8/16)例患者在随访过程中复发,复发患者NGF水平和CD271表达分别为( 168.00 +61.66) pg/ml和(52.29±13.00)％,与对照组比较差异均有统计学意义(t=5.284,p＜0.05和t=6.073,p ＜0.05),余8例患者在缓解期NGF水平和CD271表达分别为(81.13 ±25.32) pg/ml和(78.45±7.12)％,与对照组比较差异无统计学意义(t=1.228,p＞0.05和t＝1.144,p＞0.05).B-ALL患者NGF高水平组和低水平组生存时间比较差异无统计学意义(p =0.750),同时CD271高表达组和低表达组生存时间比较差异无统计学意义(p =0.170).结论:B-ALL患者血清NGF水平升高和骨髓白血病细胞CD271表达降低与白血病发生发展有关,这两项指标可能对疗效和预后判断具有一定的参考价值.
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流式细胞术联合检测骨髓细胞CD271、CDl33、CD34的表达与分析
本研究检测骨髓细胞的CD271、CD133和CD34的表达,分析细胞表达CD271与CD133及CD133与CD34的相关性.根据不同设计组合用CD45-PerCP、CD271-PITC、CD133-PE和CD34-FITC标记骨髓细胞,获得细胞后以FSC、SSC和CD45反复对细胞群进行定位和筛选,然后用流式细胞术检测骨髓细胞和骨髓单个核细胞(MNC)的上述表达.结果表明,骨髓细胞CD271+、CD133+和CD34+表达率分别为0.16%、0.20%和0.43%,骨髓单个核细胞分离后CD271+、CD133+和CD34+表达率分别0.49%、0.47%和1.07%;骨髓细胞的CD271+ CD133+共表达率为0.02%,单个核细胞分离后的CD271+ CD133+的共表达率为0.03%.90%CD133+细胞表达CD34,40%CD34+细胞表达CD133.结论:建立的三色荧光联合检测方法可作为检测骨髓中CD271+,CD133+和CD34+细胞的方法.CD271阳性细胞与CD133和/或CD34阳性细胞是不同的细胞群,CD271可能在评价和指导骨髓间充质干细胞的临床治疗中有重要意义.
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CD271及CD133用于阳性分选富集骨髓间充质干细胞的比较
本研究旨在通过对03271(低亲和性神经生长因子受体,low affinity nerve growth factor receptor,LNGFR)及CD133免疫磁珠阳性分选富集骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的比较,选出一种相对理想的从骨髓中富集间充质干细胞的免疫磁珠分选方法.采用免疫磁珠的方法得到骨髓单个核细胞中的CD271+细胞及CD133+细胞;将得到的细胞分别进行培养,14天后计数成纤维细胞集落形成单位(colony forming unit-fibro blast,CFU-F);对每个传代细胞进行计数,绘制细胞增殖曲线;取两种方法得到的细胞培养至3代以后,流式细胞术检测细胞表面抗原,通过细胞形态及免疫化学染色鉴定比较成骨及成脂肪定向诱导分化.结果表明:CD271阳性分选纯度为(89.50 4±0.98)%,CD133阳性分选纯度为(88.03±3.06)%;1×104 个 CD271+ 细胞培养后产生的CFU-F数目是1×104 个CD133+细胞培养后形成CFU-F数目的2倍,CD271-细胞培养后无CFU-F形成,而CD133-细胞培养后可形成少量的CFU-F;两种方法得到的细胞培养至第3代后表型基本一致,即CD34-、CD14-、CD45-、CD90+、CD29+、CD44+、CD105+、CD73+;CD271+细胞的增殖能力比CD133+细胞的高出3倍,而且具有更强的成骨、成脂肪分化潜能.结论:虽然CD271及CD133阳性分选都可以得到间充质干细胞,但相比之下,CD271阳性分选得到的间充质干细胞有更强的增殖和分化能力,因而CD271阳性分选是一种相对理想的从骨髓中富集间充质干细胞的免疫磁珠分选方法.
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治疗用骨髓间充质干细胞分离的相关因素分析
背景:骨髓间充质干细胞的分离、鉴定技术在移植治疗中非常关键.目的:应用Cobe Spectra 6.1骨髓处理程序分析骨髓间充质干细胞的分离方法.设计、时间及地点:以细胞为对象的观察性实验,于2005-11/2007-11在北京军区总医院完成.材料:骨髓来自进行自体骨髓干细胞移植治疗的缺血性股骨头坏死患者.方法:应用COBE Spectra血液成分单采系统骨髓单个核细胞分离程序,在已建立的运行参数条件下分离骨髓间充质干细胞.主要观察指标:分离前后进行白细胞分类、细胞计数检测、流式细胞分析CD34、CD133和CD271的表达,计算有核细胞回收率、单个核细胞回收率;统计方法分析CD271+和CD133+表达与细胞形态学分类的相关性.结果:①骨髓分离后,有核细胞、单个核细胞明显高于分离前(P 均 < 0.01),回收率分别为26.6%、40.0%.②分离的细胞产品中,CD271+、CD133+和CD34+表达率分别为0.63%、0.51%和1.17%,回收率则依次为72.8%、61.6%和67.6%.③相关分析显示,分离前后CD271+表达率均与类单核样细胞数目相关(P均 < 0.01);分离后CD34+表达率与类单核样细胞和类淋巴样细胞数目均相关(P均 < 0.01).④偏相关分析显示,CD271与类单核样细胞相关(P均 < 0.01),CD34与类淋巴样细胞相关(P均 < 0.01).结论:应用Cobe Spectra 6.1骨髓处理程序分离骨髓干细胞用于临床治疗,可以根据治疗需求选择分离类单核样细胞或类淋巴样细胞,有效提高分离效率.
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CD271磁珠体外诱导人胚胎干细胞分化为成骨细胞的可行性
背景:来源于人胚胎干细胞的成骨细胞研究结果引人关注,但是能够产生大量有效的成骨细胞且不含有其他杂细胞的诱导方法仍然没有建立起来.目的:探讨利用CD271磁珠从体外诱导分化的人胚胎干细胞中分选出成骨细胞的可行性.方法:人胚胎干细胞株SYSU-2形成拟胚体6 d,贴壁分化14 d后,通过CD271磁珠分选技术获得CD271阳性细胞,进一步检测CD271阳性细胞核型,表面抗原表达及分化潜能.结果与结论:CD271阳性细胞与骨髓来源的间充质干细胞形态相似,为长梭形,并可在体外保持稳定核型至14代左右.同时,这种细胞也具有与骨髓来源的间充质干细胞相似的表面抗原标记(CD45阴性和CD73,CD105,CD166阳性).分化潜能鉴定证明CD271阳性细胞只能诱导形成成骨细胞.这对于研究成骨发育的机制和为骨组织工程提供足量安全有效的种子细胞都有着重要意义.
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黑色素瘤干细胞标志物研究及其相关治疗:认识与针对性
背景:黑色素瘤是一种高度恶性的皮肤肿瘤,临床上缺乏有效的治疗手段.目的:就目前已发现的黑色素瘤干细胞标记物及其相关的治疗手段做一综述.方法:使用计算机在PubMed数据库和中国知网数据库检索2010年1月至2016年12月关于黑色素瘤干细胞标志物以及黑色素瘤干细胞治疗的相关文献,中文检索关键词为"黑色素瘤干细胞,标志物,治疗",英文检索关键词"melanoma,cancer stem cell,marker,therapy".结果与结论:共纳入符合标准的文献40篇.利用肿瘤干细胞表面标志物从肿瘤组织中筛选和分离出肿瘤干细胞对研究肿瘤的生长发展、侵袭转移以及复发耐药的机制至关重要.黑色素瘤干细胞尚无公认的标记物,目前研究较多的有CD20、CD133、CD271、ABCB5和SOX10.黑色素瘤干细胞的相关治疗则主要集中在针对其表面标志物、异常信号通路和微环境等方面.当前,对黑色素瘤干细胞标记物的认识仍十分有限,且其相关性研究也存在着针对性不强的问题,需待更进一步研究.
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骨髓间充质干细胞表面分子 CD166和 CD271在胃组织中的表达
目的：探讨骨髓间充质干细胞表面分子 CD166和 CD271在正常胃黏膜、腺瘤及胃腺癌中的表达，初步探讨二者是否可以作为胃癌干细胞的标志物。方法：采用免疫组化染色 SP 法，对60例胃腺癌、10例正常胃组织标本和20例腺瘤的胃黏膜组织进行了骨髓间充质干细胞表面分子 CD166和 CD271的检测。结果：CD166在正常胃黏膜、不典型增生和胃癌中的表达逐渐降低，CD166在胃腺癌中的表达强度与胃癌的分化程度呈正相关（r =0.597，P ＜0.01），与浸润深度有关（P ＜0.01）。CD271在正常胃黏膜、不典型增生中几乎不表达，在胃癌中呈低表达，CD271在胃腺癌中的表达强度与浸润深度（P ＜0.01）、淋巴结转移有关（P ＜0.01），与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度无关。结论：正常胃黏膜、腺瘤和腺癌的组织中存在着骨髓间充质干细胞表面分子 CD166的表达，阳性细胞的位置分布没有规律性，不是胃癌肿瘤干细胞的特异性标记物，CD271在正常胃黏膜、腺瘤中几乎不表达，在胃癌中呈低表达，阳性细胞的位置分布没有规律性，不能作为胃癌肿瘤干细胞的标记物。
