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免疫磁珠法分离鉴定前列腺癌干细胞
目的:利用免疫磁珠法从人前列腺癌细胞系PC3中分离并鉴定前列腺癌干细胞.方法:利用免疫磁珠法从人前列腺癌细胞系PC3中分选CD133+和CD44+细胞,通过流式细胞仪、免疫组化、裸鼠成瘤实验检测分选前后PC3细胞膜上CD133+和CD44+细胞比例,并比较细胞在分选前后增殖能力方面差异.结果:流式细胞仪检测PC3细胞CD133+和CD44+分别是1.334％ (s=0.05)和0.874％(s=0.06),而免疫磁珠法分选后的细胞分别为84.824％ (s=0.07)和99.91％ (s=0.03);免疫组化显示分选后细胞CD133+/CD44+高表达;分选后细胞增殖和克隆形成率高于PC3细胞;低密度注射时,裸鼠体内成瘤率明显高于PC3细胞.结论:免疫磁珠法从PC3细胞株中分选的CD133+/CD44+具有肿瘤干细胞生物学特性,可为研究前列腺癌干细胞打下一定基础.
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三种荧光色素标记的CD4抗体在流式细胞术研究T辅助细胞中的有效性评价
探讨三种荧光色素标记的CD4抗体在流式细胞术检测培养刺激前后的T 辅助(Th)细胞中的有效性,从而确定Th细胞研究时优选且有效的CD4抗体.将佛波脂(PMA)和离子霉素(Ion)培养刺激前后的正常人外周血单个核细胞(PBMC)分别用CD3-APC和CD8-PerCP确定Th细胞(CD3+CD8- T细胞)百分率,用CD4-PerCP、CD4-FITC和CD4-APC确定Th细胞(CD4+ T细胞)百分率.并用免疫磁珠分选后的CD4+ T细胞验证CD4-APC抗体在Th细胞研究中的有效性.结果显示:Th细胞(CD3+CD8- T细胞)百分率在培养刺激前后基本无差别(P＞0.05),而Th细胞(CD4+ T细胞)百分率有所下降,其中CD4-PerCP下降的明显(P＜0.05),CD4-FITC和CD4-APC轻微下降(P＞0.05).就平均荧光强度(MFI)而言,CD4-APC在三种荧光色素的CD4抗体中强,且与培养刺激前相比,培养刺激后的CD4-APC下降不明显(P＞0.05),而CD4-PerCP和CD4-FITC平均荧光强度明显下降 (P＜0.05).免疫磁珠分选后的细胞亦证实培养刺激对于CD4-APC表达的影响很小.结论:三种荧光色素抗体中,优选的CD4-APC抗体在流式细胞术中用于Th细胞研究是有效的.
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大鼠肝再生中8种肝脏细胞的凝血反应相关基因转录谱预示的生理活动
目的 了解大鼠肝再生中8种肝脏细胞的凝血反应相关基因转录谱及其预示的生理活动.方法 大鼠再生肝8种细胞的分离,基因表达变化检测,预示的生理活动分析用Cluster等软件及生物信息学和系统生物等方法 进行,用Microsoft Excel等软件分析基因的表达模式. 结果 40个参与凝血反应的基因与肝再生相关,肝细胞、胆管上皮细胞、卵圆细胞、星形细胞、窦内皮细胞、库普弗细胞、陷窝细胞、树突状细胞的相应基因数为13、31、12、33、32、9、34、33.serpine1、a2m在上述8种细胞,vwf、klkb1在除库普弗细胞之外的7种细胞,其他基因在两种或两种以上细胞中发生有意义表达变化.上述基因转录谱预示,肝再生启动和进展阶段激肽释放酶和凝血酶原合成,凝血酶形成等活动增强.终止阶段纤维蛋白单体形成纤维蛋白聚合体等活动增强. 结论 大鼠肝再生与凝血反应密切相关.
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大鼠肝再生中8种肝脏细胞的细胞免疫相关基因转录谱预示的生理活动
目的 了解大鼠肝再生中8种肝脏细胞的细胞免疫相关基因转录谱,及其预示的细胞免疫活动.方法 用Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选方法 分离大鼠再生肝的肝细胞、胆管上皮细胞、卵圆细胞、星形细胞、窦内皮细胞、库普弗细胞、陷窝细胞和树突状细胞等8种细胞,用Rat Genome 230 2.0芯片等检测细胞免疫相关基因在上述细胞中表达变化,用Cluster等软件及生物信息学和系统学生物等方法 分析它们的表达模式及预示的生理活动. 结果 大鼠肝再生中40个细胞免疫相关基因发生了表达变化,相应细胞的基因数为19、19、9、19、19、21、22、21.肝再生启动阶段和进展阶段抗原肽-MHC复合物形成,NF-κB激酶活性和IL-2等细胞因子合成增加,终止阶段NF-κB促进细胞分化活动和caspase诱导T细胞凋亡活动增强. 结论 大鼠肝再生与细胞免疫相关.
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大鼠肝再生中肝脏细胞的基因转录谱预示AI408225促进抗原肽与TCR结合
目的 了解新基因AI408225与大鼠肝再生涉及的体液免疫相关性.方法 大鼠再生肝8种细胞的分离,采用Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选方法 进行,用Microsoft Excel、BLAST等软件分析基因的序列同源性及共表达关系,用生物信息学和系统生物学等方法 分析新基因参与的生理活动. 结果 93个参与体液免疫的已知基因与肝再生相关,肝细胞、胆管上皮细胞、卵圆细胞、肝星形细胞、窦内皮细胞、库普弗细胞、陷窝细胞、树突状细胞的体液免疫相关基因数为33、46、17、59、48、35、53、68.其中,cd4与AI408225同源和共表达. 结论 大鼠肝再生与体液免疫相关,AI408225参与MHC II-抗原肽-CD4-TCR复合物形成.
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应用CD138免疫磁珠分选结合荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤细胞遗传学异常
目的:比较直接荧光原位杂交技术(D-FISH)和CD-138磁珠分选结合FISH(MACS-FISH)的方法检测多发性骨髓瘤(MM)的细胞遗传学异常.方法:对31例MM患者进行了传统G显带核型分析,并采用探针组合(1q21,D13S319,RB1,IgH,P53)同时进行D-FISH法和MACS-FISH法的检测.对17例IgH重组异常的患者,进一步利用IgH/FGFR3,IgH/MAF,IgH/CCND1 3种探针进行FISH检测.结果:31例患者中5例(16.1％)核型分析具有异常克隆.采用直接FISH法有13例(41.9％)检出异常,而采用CD138磁珠分选浆细胞后有25例(80.6％)检出异常.二者异常检出率有显著差异(P=0.042).采用D-FISH法,1q21,D13S319,RB1,IgH,P53 5种探针的异常检出率分别为22.6％,25.8％,29％,38.7％和9.7％;而采用MACS-FISH法上述5种探针异常检出率分别为48.4％,45.2％,48.4％,67.7％和16.1％.骨髓浆细胞比例≥20％时,D-FISH与MACS-FISH异常检出率一致;骨髓浆细胞比例＜20％,MACS-FISH异常检出率明显高于D-FISH法,二者有统计学差异(P=0.00).结论:利用CD-138磁珠分选后进行FISH检测能显著提高MM细胞遗传学异常的检出率.常规核型分析结合MACS-FISH是MM细胞遗传学异常克隆检测的理想方法,尤其适用于骨髓浆细胞比例小于20％的患者.
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CD271及CD133用于阳性分选富集骨髓间充质干细胞的比较
本研究旨在通过对03271(低亲和性神经生长因子受体,low affinity nerve growth factor receptor,LNGFR)及CD133免疫磁珠阳性分选富集骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的比较,选出一种相对理想的从骨髓中富集间充质干细胞的免疫磁珠分选方法.采用免疫磁珠的方法得到骨髓单个核细胞中的CD271+细胞及CD133+细胞;将得到的细胞分别进行培养,14天后计数成纤维细胞集落形成单位(colony forming unit-fibro blast,CFU-F);对每个传代细胞进行计数,绘制细胞增殖曲线;取两种方法得到的细胞培养至3代以后,流式细胞术检测细胞表面抗原,通过细胞形态及免疫化学染色鉴定比较成骨及成脂肪定向诱导分化.结果表明:CD271阳性分选纯度为(89.50 4±0.98)%,CD133阳性分选纯度为(88.03±3.06)%;1×104 个 CD271+ 细胞培养后产生的CFU-F数目是1×104 个CD133+细胞培养后形成CFU-F数目的2倍,CD271-细胞培养后无CFU-F形成,而CD133-细胞培养后可形成少量的CFU-F;两种方法得到的细胞培养至第3代后表型基本一致,即CD34-、CD14-、CD45-、CD90+、CD29+、CD44+、CD105+、CD73+;CD271+细胞的增殖能力比CD133+细胞的高出3倍,而且具有更强的成骨、成脂肪分化潜能.结论:虽然CD271及CD133阳性分选都可以得到间充质干细胞,但相比之下,CD271阳性分选得到的间充质干细胞有更强的增殖和分化能力,因而CD271阳性分选是一种相对理想的从骨髓中富集间充质干细胞的免疫磁珠分选方法.
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致敏小鼠CD4+CD25+调节性T细胞磁珠分选及体外扩增
本研究探讨致敏小鼠CD4+ CD25+调节性T细胞的分选及体外扩增.流式细胞术检测致敏小鼠及正常小鼠体内CD4+ CD25+ Treg细胞水平,免疫磁珠分选方法从小鼠脾细胞中分选出CD4+T细胞、CD4+ CD25+ Treg细胞和CD4+ CD25-T细胞,负载抗CD3/CD28单克隆抗体MACSiBead联合IL-2共同刺激CD4+ CD25+ Treg细胞进行体外扩增培养,用0.4％台盼蓝染色并计数检测细胞的活性,流式细胞术检测分选后细胞纯度、主要表面标记及Foxp3基因的表达.结果表明:致敏小鼠体内CD4+ CD25+ Treg水平较正常小鼠升高(P＜0.05).分选出CD4+ CD25+Treg细胞纯度平均达到87％,细胞活性大于97％,高表达Foxp3基因.体外扩增2周后细胞数扩增倍数能够达到42倍,CD4+ CD25+ Treg细胞所占比例为85.32％,Foxp3表达由(76.92±1.72)％稍下降至(75.33±2.11)％(P＞0.05).结论:免疫磁珠分选法能够分选出高纯度的CD4+ CD25 +Treg细胞,该分选方法不影响分选靶细胞的细胞活力；体外成功扩增了CD4+ CD25+ Treg细胞,扩增后的CD4+CD25+Treg细胞表面标记及Foxp3基因表达无明显改变.
关键词： CD4+CD25+Treg细胞 免疫磁珠分选 扩增 致敏 -
流式细胞仪与免疫磁珠分选法纯化脐血嗜碱粒细胞的比较
近年来研究结果显示,嗜碱粒细胞在过敏反应炎症中担当重要角色,是炎症的发起者和传播者~[1].嗜碱粒细胞占外周血白细胞的小部分(<1%),提纯一定数量的嗜碱粒细胞就需要较多的血,这限制了对它的深入研究.产妇脐带血血量较多,可得到50-150 ml的量,而且脐带血尚未直接受到外界抗原刺激,是研究过敏性疾病发病机制的理想标本.本研究比较流式细胞仪分选和免疫磁珠分选两种方法提纯产妇脐带血中嗜碱粒细胞的分选效率.
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大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的分离及功能鉴定
目的:研究利用免疫磁珠分选法稳定分离正常大鼠脾脏CD+CD25+调节性T细胞的方法.方法:采用免疫磁珠两步法分离大鼠脾组织CD4+CD25+T细胞.首先采用藻红蛋白(PE)标记的抗CD25抗体和抗PE多功能磁珠试剂盒阳性分选CD25+T细胞,再用抗异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体和抗IgG磁珠阳性分选获得CD4+CD25+T细胞.分离后的细胞经流式细胞仪检测分离纯度,台盼蓝染色检测细胞存活率,体外增殖实验检测其对CD4+CD25-T细胞的免疫抑制作用.结果:两次阳性分选后获得的CD4+CD25+T细胞纯度为(90.4±1.6)%,细胞存活率为(92.6±2.4)%.体外增殖实验表明,CD4+CD25+T细胞能明显抑制CD4+CD25-T细胞的增殖(P＜0.01).结论:采用免疫磁珠法两次阳性分选,可稳定地获得纯度理想并有免疫抑制功能的大鼠CD4+CD25+T细胞.
关键词： 免疫磁珠分选 大鼠 CD4+CD25+T细胞 流式细胞术 -
乳腺癌干细胞激素受体与HER-2表达生物学意义的分析
目的:探讨雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人类表皮生长因子受体2(HER-2)在乳腺癌干细胞(BCSCs)和其分化细胞中的表达及意义.方法:选取乳腺浸润性导管癌新鲜标本30例,采用机械分离法将乳腺癌组织块制备成单细胞悬液,通过免疫磁珠两步法从中分离出BCSCs(CD44+ CD24-/low细胞)和乳腺癌分化细胞(CD24+细胞和CD44-CD24-细胞),应用免疫细胞化学Envision二步法检测两组细胞ER、PR和HER-2的表达情况.结果:BCSCs ER--表达率为83.3％(25/30),分化细胞ER--表达率为53.3％(16/30),两者差异有统计学意义,P=0.025;BCSCs PR--表达率为76.7％(23/30),分化细胞PR--表达率为23.3％(7/30),两者差异有统计学意义,P=0.000；BCSCs HER-2--表达率为83.3％(25/30),分化细胞HER-2-表达率为53.3％(16/30),两者差异有统计学意义,P=0.025；BCSCs和分化细胞表型构成不同(P=0.000),BCSCs以ER-、PR-及HER-2-表型为主,占66.7％(20/30),乳腺癌分化细胞以ER和(或)PR+、HER-2-表型为主,占43.3％(13/30).结论:BCSCs ER、PR和HER-2均可呈现阳性或阴性表达,但以阴性表达为主,随着BCSCs的分化,其阳性表达率明显升高.BCSCs的表型以ER-PR-及HER-2-为主,这可能是部分患者内分泌治疗失败的主要原因.
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CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞分选鉴定及其多药耐药性研究
目的:观察MACS免疫磁珠法分选CD44+ CD24-/low乳腺癌干细胞活性,并检测其与多药耐药的关系.方法:运用MACS免疫磁珠法从多药耐药乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中分选CD44+ CD24-/low乳腺癌干细胞,流式细胞术测定分选前后CD44+ CD24-/low细胞比例,微球体培养法检测分选细胞自我更新能力,流式检测CD44+ CD24-/low细胞表面P-糖蛋白(P-gp)表达水平,Real-time PCR检测多药耐药相关基因MDR1表达水平.结果:MACS免疫磁珠法分选后,CD44+ CD24-/low细胞比例为93.85％,其成球能力明显强于non-CD44+ CD24-/low细胞亚群.MCF-7/ADR细胞株和CD44+ CD24-/low乳腺癌干细胞P-gp表达强度分别为101 177.10±2 171.86和114 906.70±2 560.19,P＜0.05.CD44+ CD24-/low乳腺癌干细胞MDR1基因表达水平为MCF-7/ADR细胞株的(1.07±0.02)倍,P＜0.05.结论:经MACS免疫磁珠法分选所得CD44+ CD24-/low细胞亚群有更强的自我更新能力,高表达P-gp蛋白和MDR1基因可能是引起乳腺癌多药耐药的重要原因.
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免疫磁珠分选与顺铂富集喉癌Hep-2细胞系中肿瘤干细胞的比较
目的 比较免疫磁珠分选(MACS)及化疗药物顺铂(DDP)筛选富集喉癌Hep-2细胞系肿瘤干细胞的效果.方法 以CD133MACS、DDP作用两种方法来富集喉癌Hep-2细胞系中的肿瘤干细胞,并以流式细胞术(FCM)榆测处理后CD133+细胞的百分率.同时观察细胞形态学的改变,判断两种方法分选后细胞对后续实验的影响.结果 经FCM检测,MACS分选喉癌Hep-2,CD133+细胞得率为64.33%,不同浓度DDP作用于喉癌Hep-2细胞48 h,FCM检测CD133+细胞有不同的得率,其中质量浓度为4μg/ml时,所得CD133+细胞百分率高,为50.7%.MACS与DDP各组比较差异均有统计学意义(P<0.01);两种方法处理后MACS组细胞的存活状态要好于DDP组.结论 MACS分选纯度较高,对细胞损伤小,适合后续培养;但分选前耗时长,每次分选仅能用于一种Marker.DDP筛选简单易行,符合临床肿瘤干细胞(CSC)抵抗化疗的模式.但阳性细胞得率与细胞毒性成正比.MACS和DDP筛选肿瘤干细胞各有其优势及适用范围,实验中可根据不同目的 来确定所用筛选方法.
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人与犬牙周膜干细胞的生长特性比较
目的:培养、分离人与犬牙周膜下细胞(PLSCs),比较其生长特性,为相关体内研究提供理论和实验依据.方法:采用免疫磁珠分选系统分别从原代培养的人与犬牙周膜细胞中分离PLSCs,通过倒置相差显微镜、细胞计数、集落形成检测、流式细胞仪等方法比较人与犬PLSCs的细胞形态、生长曲线、集落形成率(CFR)及STRO-1+表达情况.结果:人与犬PLSCs形态相似,均为梭形,生长曲线也都旱"S"形.但CFR人PLSCs显著高于犬PLSCs(P<0.05),而且人牙周膜中STRO-1+细胞的表达率高于犬牙周膜中STRO-1+细胞(P<0.05).结论:STRO-1+免疫磁珠分选系统可用于分离人和犬PLSCs,所分离的两种PLSCs的形态和体外生长模式相似,但细胞亚群增殖能力和表型有差异.
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人鼻咽癌细胞株中类肿瘤干细胞的分离、培养及鉴定
目的 检测CD133在人鼻咽癌细胞株SUNE中的表达以及CD133肿瘤细胞的体外增殖、分化情况,并对其进行类肿瘤干细胞的鉴定.方法 采用免疫荧光细胞化学技术及流式细胞仪检测鼻咽癌细胞株SUNE中CD133的表达情况以及CD133'细胞体外分化能力;免疫磁珠分选技术纯化CD133'肿瘤细胞;MTT法检测CD133细胞的体外增殖能力,并将其与CD133-及未分选细胞进行比较.结果 鼻咽癌细胞株SUNE中有0.35%的微量细胞呈CD133表达;免疫磁珠富集的CD133肿瘤细胞在无血清培养基中悬浮生长,并可以形成肿瘤细胞球,具有很强的自我更新和繁殖能力,且在3、5、7 d的紫外吸光度(A)值分别为0.3175±0.007、0.370±0.002、0.5585±0.004,均高于相同条件下未分选细胞和CD133-细胞(P＜0.05)CD133'细胞在含血清培养基中的比例逐日下降,至培养的第12天,由第1天的89.67%下降至0.37%.结论 CD133可作为鼻咽癌类干细胞的标志之一.鼻咽癌细胞株SUNE中存在类肿瘤干细胞,并具有自我更新和分化能力.
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免疫磁珠法分离并鉴定前列腺癌类干细胞
目的 利用免疫磁珠法分选并鉴定人前列腺癌类干细胞.方法 利用免疫磁珠法从人前列腺癌细胞株PC3中分选CD133 +/CD44+细胞,通过免疫组化、流式细胞术、CCK8、平板克隆形成实验及裸鼠成瘤实验鉴定其表面标志物表达情况及肿瘤干细胞特性.结果 经免疫磁珠法分选所得CD133 +/CD44+细胞比例为0.50％；免疫组化及流式显示其CD44/CD133/整合素α2β1均高表达；其细胞增殖和克隆形成率高于PC3细胞；以低密度注射时,其裸鼠体内成瘤率明显高于PC3细胞.结论 利用免疫磁珠法可从人前列腺癌细胞株PC3中高效的分选出具有肿瘤干细胞生物学特性的前列腺癌类干细胞.
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中药复方对CD_4~+T淋巴细胞增殖促进作用
近年来,中医药在艾滋病研究方面取得了一定成果,筛选了上百种具有抗人类免疫缺陷病毒(HIV)的中药.中医药对艾滋病的治疗研究重点多放在增强机体免疫力上,病毒抑制剂及促C_4~+T淋巴细胞增殖制剂相配伍,组成中药复方,对艾滋病可起到良好的综合治疗作用.
关键词： CD_4~+T淋巴细胞 中药复方 免疫磁珠分选 -
人骨关节炎关节软骨间充质祖细胞的免疫磁珠分选和鉴定
背景:从骨关节炎关节软骨中分离培养软骨细胞,再用免疫磁珠分选技术从关节软骨中分选软骨祖细胞,并进行鉴定,经作者检索目前国内没有报道.目的:实验选取人工膝关节置换患者软骨组织体外培养并利用免疫磁珠法分离出具有干细胞特性的软骨间充质祖细胞,拟进一步验证在人软骨组织中含有间充质祖细胞.设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2007-06/12在解放军第三军医大学毒理教研室及西南医院烧伤科实验室完成.材料:标本取材于解放军第三军医大学西南医院关节外科中心同期收治的10例人工膝关节置换患者软骨组织(＞3 cm).患者对治疗及实验均知情同意.方法:统一选用原发性骨关节炎患者关节软骨标本,采用免疫磁珠法分选获得CD105/CD166阳性细胞.并进行成软骨和成脂诱导分化.主要观察指标:①免疫磁珠分选细胞用流式细胞仪和免疫组织化学检测,观察细胞生长特性.②分选细胞成骨和成脂分化后细胞形态和功能的变化.结果:①免疫磁珠分选的关节软骨间充质祖细胞原代和传代细胞均具有干细胞的生长特性.②分选的细胞免疫组织化学检测表达CD105和CD166阳性染色,流式细胞仪检测CD105和CD166阳性细胞比例分别为98.72%和97.5%.④分选细胞经成软骨、成脂诱导后能分化为具有相应细胞表型的细胞.结论:人关节软骨组织中存在具有干细胞特性的软骨间充质祖细胞,利用免疫磁珠技术可成功地将其从关节软骨细胞中分离出来.
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c-Kit＋Lin -细胞体外扩增及体内分化的实验研究
目的：研究移植刚分选及扩增后雄性小鼠的骨髓c-Kit＋Lin-细胞到酒精性肝纤维化雌性模型小鼠体内后，模型小鼠的肝脏形态改变、肝功能变化和移植细胞的分布、分化及归巢情况。方法采用酒精灌胃法建立酒精性肝纤维化雌性小鼠模型，造模成功后随机选取8只模型小鼠（模型组）与正常小鼠8只（对照组）比较两组肝功能变化。剩余模型小鼠再随机选取32只，分为4组处理，并再随机选取8只正常小鼠（第1组）与其对照。模型小鼠的4组分别为：移植前取血处死组（第2组），移植新鲜分选的c-Kit＋Lin-细胞组（第3组），移植扩增后的c-Kit＋Lin-细胞组（第4组），仅予以注射Buffer组（第5组）。采用免疫磁珠法分选雄性小鼠骨髓c-Kit＋Lin-细胞；利用SCF＋HGF＋FL＋LIF ＋TPO＋IL-3因子组合对其进行体外扩增；将刚分选及扩增后c-Kit＋Lin-细胞移植入酒精性肝纤维化雌性模型小鼠体内，检测两组肝功能改变、肝脏纤维化改善、含雄性小鼠Y染色体性别决定基因cDNA（Sry）的移植细胞在受体肝内定居分化情况。结果（1）两移植组在移植30天后，较移植前肝脏纤维化改善明显；（2）两移植组在移植30天后AST、ALT、ALB与移植前比较差异有显著性意义（P＜0．05）；（3）两移植组均可见含雄性小鼠Y染色体性别决定基因cDNA（ Sry）的移植细胞，并同时表达ALB mRNA，计数细胞比例，比较差异无显著性意义（P＞0．05）。结论移植c-Kit＋Lin-细胞后能在受体肝内定居并转化成有功能新生肝细胞；移植c-Kit＋Lin-细胞后能明显改善肝损伤小鼠的肝功能及肝脏纤维化；扩增对c-Kit＋Lin-细胞的归巢、在体内分化没有明显影响。
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免疫磁珠分选人角朊干细胞的实验研究
目的:探索人角朊干细胞(keratinocyte stem cells,KSCs)的免疫磁珠分选(Magnetic Activated Cell Sorting,MACS)的方法.方法:从人包皮组织获得角朊细胞悬液,然后利用人角朊干细胞表面CD49f(整合素α 6)和CD71的表达情况(CD49fbriCD71dim)通过MACS法将KSCs分选出来,在荧光显微镜下观察其荧光标记情况,同时将分选所得的CD49fbriCD71dim细胞进行体外无血清培养,观察其形态及克隆形成.结果:人角朊细胞经MACS法分选后所得的CD49fbriCD71dim细胞比率可达12.02(±6.92)%.CD49fbriCD71dim细胞经培养可见细胞为典型的上皮样特征,呈铺路石样形态,高核浆比例,细胞紧密排列,轮廓清楚,折光性好,并可在5-7天左右形成全克隆,符合KSCs的特点.结论:研究表明MACS分选法可以得到较高比例的人角朊干细胞,并能进行后续培养研究,其不失为一种较理想的人角朊干细胞的分选方法.
