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流式细胞仪与免疫磁珠分选法纯化脐血嗜碱粒细胞的比较
近年来研究结果显示,嗜碱粒细胞在过敏反应炎症中担当重要角色,是炎症的发起者和传播者~[1].嗜碱粒细胞占外周血白细胞的小部分(<1%),提纯一定数量的嗜碱粒细胞就需要较多的血,这限制了对它的深入研究.产妇脐带血血量较多,可得到50-150 ml的量,而且脐带血尚未直接受到外界抗原刺激,是研究过敏性疾病发病机制的理想标本.本研究比较流式细胞仪分选和免疫磁珠分选两种方法提纯产妇脐带血中嗜碱粒细胞的分选效率.
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脑胶质瘤U251细胞CD133阳性与阴性对放射敏感性影响的初步研究
肿瘤干细胞可能是肿瘤的“起始细胞”和治疗失败的根源[1].但是,肿瘤干细胞和非干细胞放射生物学特性之间的差异仍不十分清楚.为此以CD133为标志物,对脑胶质瘤U251细胞应用流式细胞仪分选出CD133阳性与阴性细胞,观察两者之间放射敏感性差异.
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一种快速获得Vav1基因敲除稳定细胞系的方法
目的 建立一种快速获得Vav1基因敲除稳定细胞系的方法.方法 构建针对小鼠Vav1基因的特异性打靶载体,利用脂质体转染法转染B16小鼠黑色素瘤细胞,使用流式细胞仪对GFP阳性单细胞进行分选,对得到的GFP阳性单克隆细胞使用直接裂解法获取基因组DNA,将其用于荧光PCR,产物通过毛细管电泳和分析后即可快速获知其基因型.结果 使用以上方法在短时间内得到了大量GFP阳性单克隆细胞,从中随机挑选16个,通过荧光PCR检测其基因型,结果表明敲除效率为87.5%;通过测序对部分荧光PCR结果进行验证,发现其基因型结果完全正确.结论 将CRISPR/Cas9基因编辑系统、流式细胞仪单克隆分选、荧光PCR和大批量DNA样本处理技术结合,可以短时间内在B16小鼠黑色素瘤细胞中获得大量Vav1基因敲除稳定单克隆细胞.
关键词: CRISPR/Cas9 基因敲除 Vav1基因 流式细胞仪分选 荧光PCR -
间接ELISA检测抗中性粒细胞胞浆总抗体及其临床意义
目的建立检测抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),观察韦格纳氏/多血管炎、系统性红斑狼疮(SLE)、肾炎和溃疡性结肠炎患者中ACNA的存在状况.方法用建立的ELISA法检测100例韦格纳氏/多血管炎、SLE、肾炎或溃疡性结肠炎患者血清中的ANCA,同时以特异性MPO-ANCA及PR3-ANCA为对照.结果阳性参考血清批内变异系数(CV)和批间CV分别为0.061%和0.102%.用抗原吸收后吸光度(A)降低明显.总ANCA在韦格纳氏/多血管炎患者中的阳性率为43.8%,高于SLE、肾炎和溃疡性结肠炎患者(分别为15.2%、23.1%和25%),而52份正常人血清均为阴性.用特异性MPO-ANCA及PR3-ANCA与ELISA检测总ANCA结果比较差异无显著性(P>0.05).结论 ANCA可作为韦格纳氏/多血管炎的血清学标志,ELISA检测总ANCA可克服间接免疫荧光法的不足,灵敏度高,适于大样本的ANCA检测.
关键词: 抗中性粒细胞胞浆抗体 酶联免疫吸附试验 流式细胞仪分选 -
一种基于流式细胞仪分选后的细胞原位分子杂交
原位分子杂交是从组织细胞原位显示特定核酸序列存在的技术,它对一些异质性的细胞群体如血液,脑组织等,常不能准确阐明特定核酸序列表达于何种类型的细胞,或在某一细胞群体是否有特定基因的表达.