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流式细胞仪与免疫磁珠分选法纯化脐血嗜碱粒细胞的比较
近年来研究结果显示,嗜碱粒细胞在过敏反应炎症中担当重要角色,是炎症的发起者和传播者~[1].嗜碱粒细胞占外周血白细胞的小部分(<1%),提纯一定数量的嗜碱粒细胞就需要较多的血,这限制了对它的深入研究.产妇脐带血血量较多,可得到50-150 ml的量,而且脐带血尚未直接受到外界抗原刺激,是研究过敏性疾病发病机制的理想标本.本研究比较流式细胞仪分选和免疫磁珠分选两种方法提纯产妇脐带血中嗜碱粒细胞的分选效率.
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慢性乙型肝炎肝纤维化患者外周血CD4+ CD25+ CD127low/-T细胞与人肝星状细胞共培养的实验研究
目的 探讨CD4+CD25+CD127low/-T细胞在慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化发病机制中的作用.方法 按肝纤维化S分期将慢性乙型肝炎肝纤维化患者分为S1～S2期6例和S3～S<,4>期7例;采用磁激活细胞分选法(MACS)提取13例患者和6例健康对照者外周血CD4+CD25+CD127low/-T细胞;分别将CD4+CD25+CD127low/-T细胞以不同比例与人肝星状细胞株(hepaticstellate cell,HSC)共培养5天,检测各组HSC的增殖及TGF-β,的分泌.结果 CD4+ CD25+ CD127low/-T细胞与HSC之比,当健康对照组和S1～S2期组为1.5:1,S3～S<,4>期组为2:1时,HSC的增殖速度和TGF-β1分泌量均在同组不同比例中达高值.各组同比例之间,当比例为1.5:1时,健康对照组HSC的增殖速度显著高于S3～S<,4>期组(P<0.05);在比例为1:1～2:1范围内,S1～S2期组和S3～S<,4>期组HSC的TGF-β1分泌量远高于同比例健康对照组(P<0.05).结论 CD4+CD25+CDl27low/-T细胞可能通过自身细胞数量和功能的双重调节,影响肝星状细胞的增殖和分泌,参与了慢乙肝肝纤维化的进展.
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重楼皂甙Ⅱ对狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25+T调节细胞表达的细胞因子的影响
目的:研究重楼皂甙Ⅱ对狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25+Treg分泌的细胞因子IL-10和TGF-β的影响.方法:10例健康人为正常对照组,20例LN病人随机分为四组:LN对照组(n=5)、重楼干预组1(n=5,接种细胞数为1× 105/1.5ml/孔)、重楼干预组2(n=5,接种细胞数为2× 105/1.5ml/孔)、重楼干预组3(n=5,接种细胞数为5× 105/1.5ml/孔).分离外周血单个核细胞,利用免疫磁珠法分离CD4+CD25+ Treg.重楼干预组予重楼皂甙II干预,正常时照组和LN对照组不予处理,各组培养72h.取各组上清,用ELISA分别检测IL-10和TGF-β的水平.结果:与正常组比较,其余各组TGF-β和IL-10的水平明显降低(P<0.01).与LN对照组比较,重楼皂甙II干预后各组TGF-β和IL-10的水平升高(P<0.05).重楼干预组之间比较,重楼干预组2的TGF-β和IL-10水平较其他两组明显升高(P<0.01),而重楼干预组1和3的TGF-β和IL-10水平变化无显著性差异(P>0.05).结论:重楼皂甙II可上调LN患者TGF-β和IL-10的水平,上调的幅度受接种细胞数量的影响.
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神经营养素受体在人外周血T细胞中表达的研究
目的研究人外周血CD4+/CD8+T细胞4种神经营养素受体基因的转录. 方法应用尼龙毛法分离出T细胞,磁式细胞分离法(MACS)分离CD4+/CD8+T细胞亚群,再以RT-PCR法研究4种神经营养素受体在两种T细胞亚群上的表达.结果未经刺激的CD4+/CD8+T细胞亚群不表达任何神经营养素受体.经PHA或PPD刺激后,CD4+/CD8+T细胞亚群表达trkA,CD8+T细胞亚群表达trkC;而在各种状态下的T细胞上均未见表达trkB及p75NGFR.结论神经营养素受体在两种T细胞亚群中有不同的表达格局,提示不同T细胞亚群受神经营养素调节的模式可能各不相同.
关键词： CD4+/CD8+T淋巴细胞 MACS RT-PCR 神经营养素受体 -
MACS手术的应用与探索
目的：应用MACS(minimal access cranial suspension lift)进行中下面部除皱术，总结并探索这种手术疗效的持续性，瘢痕的隐蔽性及二次除皱的安全性。方法：介绍MACS的手术方法，在随访1年以上的患者中探索斜行切口保存毛囊对切口瘢痕的隐蔽作用及再次提紧荷包缝合在二次MACS手术时的价值。结果：随访的30例患者面部除皱作用持久，切口瘢痕不明显，二次手术安全可靠。结论：MACS手术是效果持久、安全的除皱手术。
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新疆地区健康成人外周血NK细胞体外扩增技术的研究
目的 探索用免疫磁珠分选高纯度CD3-CD56+CD16+CD19-CD45+NK细胞并研究体外保持NK细胞活性及体外扩增技术.方法 应用免疫磁珠阴性分选法(MACS)分离出高纯度的CD3-CD56+CD16+CD19-CD45+NK细胞,置于含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中,分别加入500、1 000、6 000 U/mL 3种不同浓度的细胞因子IL-2,组成不同培养体系进行体外扩增.采用细胞计数法、流式细胞术免疫表型分析方法,比较3种细胞因子刺激组及对照组培养的NK细胞数量及纯度的变化.结果 免疫磁珠阴性分选后所得的高纯度CD3-CD56+CD16+CD19-CD45+NK细胞纯度由分选前的(29.66±2.31)%提高到(95.37±1.93)%,培养7 d后,空白对照组NK细胞纯度降低为(61.82±2.58)%,而加入细胞因子IL-2的3组NK细胞纯度均无明显差异(P>0.05).18 d后,空白对照组的NK细胞纯度降低至(4.28±1.56)%,而浓度为6 000 U/mL的实验组纯度为(93.72±2.29)%,与加入细胞因子IL-2前比较,差异无统计学意义(P>0.05).NK细胞中加入3种不同浓度细胞因子IL-2组500、1 000、6 000 U/mL未见明显扩增,差异无统计学意义(P>0.05).结论 经免疫磁珠分选法分选获得的NK细胞,在体外使用10%胎牛血清的RPMI1640培养基培养,添加刺激因子IL-2后,可有效提高NK细胞的存活率,为今后NK细胞的研究与免疫治疗提供了一种简单、有效保持NK细胞纯度的方法.
