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c-Kit＋Lin -细胞体外扩增及体内分化的实验研究
目的：研究移植刚分选及扩增后雄性小鼠的骨髓c-Kit＋Lin-细胞到酒精性肝纤维化雌性模型小鼠体内后，模型小鼠的肝脏形态改变、肝功能变化和移植细胞的分布、分化及归巢情况。方法采用酒精灌胃法建立酒精性肝纤维化雌性小鼠模型，造模成功后随机选取8只模型小鼠（模型组）与正常小鼠8只（对照组）比较两组肝功能变化。剩余模型小鼠再随机选取32只，分为4组处理，并再随机选取8只正常小鼠（第1组）与其对照。模型小鼠的4组分别为：移植前取血处死组（第2组），移植新鲜分选的c-Kit＋Lin-细胞组（第3组），移植扩增后的c-Kit＋Lin-细胞组（第4组），仅予以注射Buffer组（第5组）。采用免疫磁珠法分选雄性小鼠骨髓c-Kit＋Lin-细胞；利用SCF＋HGF＋FL＋LIF ＋TPO＋IL-3因子组合对其进行体外扩增；将刚分选及扩增后c-Kit＋Lin-细胞移植入酒精性肝纤维化雌性模型小鼠体内，检测两组肝功能改变、肝脏纤维化改善、含雄性小鼠Y染色体性别决定基因cDNA（Sry）的移植细胞在受体肝内定居分化情况。结果（1）两移植组在移植30天后，较移植前肝脏纤维化改善明显；（2）两移植组在移植30天后AST、ALT、ALB与移植前比较差异有显著性意义（P＜0．05）；（3）两移植组均可见含雄性小鼠Y染色体性别决定基因cDNA（ Sry）的移植细胞，并同时表达ALB mRNA，计数细胞比例，比较差异无显著性意义（P＞0．05）。结论移植c-Kit＋Lin-细胞后能在受体肝内定居并转化成有功能新生肝细胞；移植c-Kit＋Lin-细胞后能明显改善肝损伤小鼠的肝功能及肝脏纤维化；扩增对c-Kit＋Lin-细胞的归巢、在体内分化没有明显影响。
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小鼠c-Kit+lin-骨髓细胞移植生成肝细胞的实验研究
目的评价小鼠c-Kit+Lin-骨髓细胞的肝干细胞潜能,为骨髓源性肝干细胞的临床运用提供可行性实验依据.方法供体为纯系BALB/C雄性小鼠,c-Kit+Lin-骨髓细胞采用免疫磁珠分选法分离细胞.受体为行35 Gy全肝照射处理后的同龄同系BALB/C雌性小鼠,立即移植供体c-Kit+lin-骨髓细胞.接受c-Kit+lin-骨髓细胞移植1月后,活杀取肝做常规病理学检查、Y染色体的原位杂交检查、甲胎蛋白与白蛋白的免疫组化检测.结果移植1月后小鼠肝脏的组织结构已恢复正常,肝组织细胞中存在原位杂交和免疫组化均呈阳性反应的双阳性细胞.结论小鼠c-Kit+Lin-骨髓细胞具有肝干细胞潜能,移植后可以在肝内定居并分化形成肝细胞.可做为肝病细胞移植疗法的种子细胞.
关键词： 小鼠骨髓细胞 c-Kit+lin-骨髓细胞 骨髓衍生肝干细胞
