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维生素C联合自家全血适时应用治疗碱烧伤所致眼睑球结膜粘连
眼部碱烧伤时有发生,眼睑球结膜粘连常造成患者眼球转动受限,眼感不适,自家全血适当时期应用,及维生素C合理应用,可减少眼睑球结膜粘连,促进角膜结膜恢复.2010年3月至2012年3月对我院眼部化学性碱烧伤患者36例进行治疗,观察角膜结膜变化、眼睑球结膜粘连情况,报告如下.1 资料与方法1.1 临床资料:化学性碱烧伤36例,患眼42只.男性32例,女性4例.年龄4～62岁.石灰水烧伤26例,石灰膏1例,白灰粉8例,氨水1例.烧伤程度按全国眼外伤职业病学组通过的分度标准[1],其中Ⅰ度烧伤29例(35只眼),Ⅱ度6例(6只眼),Ⅲ度1例(1只眼).就诊时间10 min至38 h,就诊时均有不同程度的眼睑肿胀、结膜充血、水肿,部分结膜贫血、角膜水肿,上皮剥脱,实质层混浊,荧光染色阳性,房水轻混,瞳孔圆形,光反射迟钝.
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Sysmex XT-2000i血液分析仪故障维修
Sysmex XT-2000i血液分析仪是SYSMEX精心打造的新一代X系列全自动五分类血液分析仪的重要成员之一.它采用了与目前在业界处于高端的XE-2100血液分析仪同样的技术和原理,XT-2000i的核酸荧光染色技术配合全自动网织红细胞检测技术,能使用户在外周血的三系包括红系、粒系及巨核系(血小板)检测上都有可靠的保证.本文主要对该机器在使用过程中遇到的两个故障进行经验总结,仅供维修工程人员参考.
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SYSMEXXT－4000i全自动血液分析仪常见故障排除及维护保养
SYSMEX XT－4000 i 血液分析仪运用了SYS-MEX的核酸荧光染色流式细胞技术来进行血液细胞和体液细胞的分析，能有效排除电阻抗法计数时常见的干扰：如血小板聚集、大血小板和细胞碎片等，保证了白细胞计数和五分类结果的准确；能提供幼稚粒细胞（ IG ）的定量报告参数，网织红细胞平均血红蛋白含量（ RET－HE ）定量报告；双方法进行血小板的检测，更好的解决地址血小板计数和血小板检测中的常见干扰；检测模式包括CBC、 CBC DIFF、 CBC DIFF RET、 CBC RET及手工、末梢血稀释、封闭、 BodyFluid四种进样方式，是一款真正拥有体液分析功能的仪器。在仪器日常使用过程中，为了保证测定结果的准确性，更好地为临床服务，应对仪器进行必要的维护保养。在长时间使用过程中，我们发现了几种常见故障，现报告如下。
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五种方法检测临床标本中结核分支杆菌的比较分析
迄今为止，对结核病的病原体快速诊断的方法仍很有限，国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法。我们应用抗酸染色、细菌培养、荧光染色、PCR、PCR反向探针膜杂交法检测临床标本中的结核分支杆菌比较分析，报告如下。材料与方法 一、材料 标本来源：43例临床标本选自1999年1月至10月长治医学院附属和平医院传染科门诊及住院结核病患者。采集痰、脑脊液、胸腹水等标本于灭菌青霉素小瓶中送检。其中男20例，女23例。对照组16例为肝癌，肝硬化患者痰，腹水。
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血液系统肿瘤细胞系中CD34+干细胞特性研究
目的探讨造血系统多种肿瘤细胞系中CD34+干细胞是否存在,并对其性质进行研究.方法利用流式细胞检测技术,检测了急性单核细胞白血病细胞THP-1、红白血病细胞MEL、慢性粒细胞白血病细胞K562,急性淋巴细胞白血病细胞MOLT-4,恶性淋巴瘤细胞RAJI,多发性骨髓瘤细胞RPMI8226、SP2/0和树突状细胞肉瘤DCS肿瘤细胞中CD34+的肿瘤细胞所占的比例.选取了MOLT-4和K562细胞系,分选出CD34+细胞,继续培养,观察CD34+细胞比例变化;比较CD34+与CD34-肿瘤细胞在功能状态、细胞周期、分化状态、耐药性的差异. 结果8种不同类型造血系统肿瘤细胞中CD34阳性率依次为2.5%、5.2%、3.1%、2.1%、1.4%、O、0和6.2%.从K562细胞中分选出CD34+细胞,继续培养后恢复为原来比例.MOLT-4和K562细胞系中分离出的CD34+细胞RNA含量低、细胞处于G0/G1期的比率较高(81.5%和77.9%)、分化抑制蛋白Id-1表达强阳性/阳性(分化程度低)、多耐药蛋白p-gp高表达(耐药性强).结论血液系统肿瘤细胞系中有一小部分肿瘤细胞带正常造血干细胞的标记,并且带有这种标记的细胞表现出更为原始的细胞特性,其中包括血液肿瘤细胞干细胞.
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金胺O荧光染色法在病理特殊染色中的应用
目的 探讨金胺O荧光染色法应用在病理特殊染色上的可行性.方法 采用金胺O配制成的荧光染色液,用于考虑为结核的病理活检组织中,并以经典的抗酸染色法为对照.结果 在荧光镜下,金胺O荧光染色法将结核杆菌染成金黄色.结论 金胺O荧光染色法在病理特殊染色工作中有一定价值.
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幽门螺杆菌体外培养影响因素探讨
目的 探索影响幽门螺杆菌体外培养的影响因素.方法 观察不同培养时间幽门螺杆菌的菌落特点和细菌形态特点,确定幽门螺杆菌的佳培养时间；通过SYTO9/PI核酸染料对暴露于空气中不同时间的幽门螺杆菌进行死活菌的染色,估计幽门螺杆菌在空气中的存活时间.结果 培养3d的幽门螺杆菌菌落为针尖大小、形态为典型弯曲杆菌,培养超过3d的幽门螺杆菌菌落直径可达1 mm,菌体形态多为球型；荧光染色检查显示,暴露在空气中的幽门螺杆菌随着暴露时间的延长逐渐死亡,4h后几乎全部死亡.结论 幽门螺杆菌体外培养佳培养时间为3d,且菌体形态典型.幽门螺杆菌暴露于空气中的存活时间≤4h.
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猴头菌原生质体制备及单核体鉴定研究
目的通过优化猴头菌原生质体的制备条件，结合荧光染色鉴定及分子鉴定获得高纯度的单核体，为进一步开展猴头菌基因组水平的研究提供材料。
方法对三类酶系统、溶壁酶浓度、无机和有机两类稳渗剂、pH 3.5~6.5、酶解温度20~40℃、培养基成分以及菌龄为48~144 h 菌丝的原生质体制备条件进行考察。其中三类酶系统分别为：1.5%的单一酶系统（溶壁酶、纤维素酶、蜗牛酶），1.5%的纤维素酶和蜗牛酶的混合酶系统，2%的溶壁酶系统；溶壁酶浓度：1%、1.5%、2%、3%、4%；培养基成分的考察：碳源种类筛选及综合培养基中添加成分的筛选。将制得的原生质体稀释后涂板再生及鉴定，以选取单核菌丝。单核菌丝的鉴定方法包括：性状、显微及分子鉴定。其中显微鉴定的观察方法包括一般显微观察和 DAPI 荧光染色观察；分子鉴定扩增的是单核菌丝的核糖体内转录间隔区（ITS）序列。
结果在马铃薯培养基中静置培养72 h 的猴头菌丝，用2%的溶壁酶液，以0.6 mol/L KCl 为渗透压稳定剂，在 pH 5.5、温度30℃的条件下酶解3 h，原生质体的释放量大；再生的单核体经形态及分子生物学鉴定证明是猴头菌。结论通过原生质体制备及再生方法获得的猴头菌的单核菌丝可以为猴头菌活性次生代谢产物相关基因的发掘奠定基础。 -
乙型流感病毒诱导HeLa细胞凋亡并伴随P16蛋白高效表达
近年的研究发现,甲、乙、丙型流感病毒感染宿主细胞时均可不同程度地诱导细胞凋亡,细胞凋亡是流感病毒杀死宿主细胞的主要方式.目前,甲型流感病毒诱导宿主细胞凋亡基因的调控及蛋白表达的研究结果已有报道,而乙、丙型流感病毒诱导细胞凋亡调节机制的结果尚未见报道.本文以乙型流感病毒(B/沪防93-1株)感染HeLa细胞,通过Hoechst 33258荧光染色、琼脂糖凝胶电泳分析检测细胞凋亡,并用免疫组化技术测定P16基因蛋白表达,以MPIAS-500计算机多媒体图象分析系统作蛋白表达图象分析,用阳性染色A值(吸光度,原为光密度OD值)表示P16蛋白表达量,从而探讨乙型流感病毒诱导细胞凋亡及P16蛋白在细胞凋亡过程中可能的调节作用.
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当前临床流式细胞分析的发展趋势
流式细胞分析,又称流式细胞术(Flow cytometry,FCM),是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术,它具有如下几个特点:①标本只要是单细胞即可用于分析,如血液、骨髓、体液中的细胞、培养细胞等,实体组织只要经处理后制成单细胞悬液也能分析,因此,实际上所有组织细胞均可用于分析.②极短时间内可分析大量细胞,只要标本中的细胞数量足够,流式细胞仪(Flow cytometer)可以每秒钟数十、数百、数千个细胞的速率进行测量,测量的细胞总数可达数千、数万乃至数百万个.③可同时分析单个细胞的多种特征,当同时用多种分子探针,如用不同荧光素标记的不同单克隆抗体进行多色荧光染色,通过流式细胞分析,即可获得单细胞的多种信息,使细胞亚群的识别、计数更为准确.④定性或定量分析细胞:通过荧光染色对单细胞的某些成分如DNA含量、抗原或受体表达量、Ca2+浓度等均可进行单细胞水平的定性与定量分析.
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尿有形成分的识别与检查方法的选择
尿有形成分检查又称尿沉渣检查(examination of urinary sediments),是将新鲜尿离心后,经显微镜检查尿沉淀物中各种有形成分的检查方法[1].由于仪器分析进展,现代的尿有形成分检查可采用不离心法,用激光荧光染色及流式分析的分析方法,(Sysmex UF50,UF100)或使用计算机图像自动识别系统(Iris IQ200)来计数尿中各种颗粒,因而又可称为尿中颗粒计数法(particle analysis)[2].目前国内大多数医院实验室仍习惯于传统的普通显微镜检查法,由于在尿中可存在多种有形成分如细胞类、管型类、微生物类、结晶类等,为了进一步识别及鉴别这些成分除用普通光学显微镜外还有相差显微镜、偏光显微镜、荧光显微镜、干涉显微镜及电子显微镜等检查,而在普通显微镜检查又可分为染色法及非染色法.
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一种新型快速检出分枝杆菌变色液体培养基的评价
结核病的早期发现主要靠实验室诊断，涂片抗酸染色（或荧光染色）找抗酸杆菌阳性率低（10%～20%）；常用的固体培养基阳性率虽可达40%。但时间长。尽管BACTEC 460TB检测系统能快速检出分枝杆菌，但其仪器及试剂价格昂贵、且有放射性污染［1］。近年来，变色液体培养基在国外应用的越来越广泛［2］。我们将一种新型的分枝杆菌快速变色液体培养基与改良罗-琼（Lowenstein-Jensen,L-J）培养基进行了比较研究，现将结果报道如下。 一、材料 1.标准菌株：人型结核分枝杆菌、浅黄色分枝杆菌、草分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、胞内分枝杆菌、马耳摩分枝杆菌、爱知分枝杆菌、田鼠分枝杆菌、偶发分枝杆菌、副偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌龟亚种、龟分枝杆菌脓肿亚种、耻垢分枝杆菌、次要分枝杆菌、非洲分枝杆菌、胃分枝杆菌、不产色分枝杆菌、金色分枝杆菌、新金色分枝杆菌、鸟分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、卡介苗和蟾蜍分枝杆菌由我们研究所保藏。 2.标本：141份临床标本，其中139份痰、1份伤口脓性分泌物和1份支气管肺泡灌洗液。 3. 快速变色液体培养基：由深圳市怡百世生物技术有限公司提供。其主要成分为磷酸盐缓冲液、谷氨酸钠、多种维生素、多种微量元素、甘油、马血清、变色剂以及甲氧苄氨嘧啶、氨苄青霉素、多粘菌素B、两性霉素B和萘啶酸等多种抗生素。 4. 改良罗-琼（L-J）培养基：按照文献［1］配制。 二、方法 1.取对数生长期的标准人型结核分枝杆菌和偶发分枝杆菌于含10%吐温80磨菌瓶中，磨菌混匀，用无菌磷酸盐缓冲液调其浊度为No1 MacFarland单位，再用无菌磷酸盐缓冲液作1∶10系列稀释，各分别接种100 μl于变色液体培养基和改良L-J培养基，37℃培养。当培养基变为紫红色或底层有紫色颗粒沉淀时，取少量液体涂片，进行金胺O荧光染色证实为分枝杆菌。 2. 标本处理：标本经2～4倍体积的4%NaOH消化20 min，离心10 min，沉淀经无菌磷酸盐缓冲液洗涤2次，再加入400 μl无菌磷酸盐缓冲液，混匀后，分别取200 μl接种于变色液体培养基和改良L-J培养基，37℃培养。 3．结果观察与报告：变色培养基接种后，每24 h观察1次，2周后每周观察3次，若培养基变为紫红色或底层有紫色颗粒沉淀，经荧光染色证实有分枝杆菌时，报告分枝杆菌生长阳性。改良L-J培养基接种后3 d、7d观察结果，以后每周观察1次。8周未见液体培养基变紫红色或底层有紫色颗粒沉淀，固体培养基上未见菌落，报告分枝杆菌培养阴性。
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4种方法比较检测新鲜和陈旧标本中的结核分枝杆菌
我们应用抗酸染色、细菌培养、荧光染色、聚合酶链反应(PCR)4种方法分别检测陈旧标本和新鲜标本中结核分枝杆菌,并作比较分析如下.一、材料与方法1.标本来源:120份标本来自1996年10月～1997年4月长治医学院附属和平医院传染科结核患者的痰、脑脊液、胸腹水等并置于灭菌青霉素小瓶中.当即对其中43份标本处理,取每份标本的1/2做抗酸染色、细菌培养、荧光染色、PCR检测.其余的1/2留在容器中放4℃冰箱,直至1999年10月再用4种方法检测.2.抗酸染色、细菌培养按实验室常规方法操作.荧光染色试剂金胺0-罗丹明,结核分枝杆菌在背景中呈现金黄色荧光.PCR根据TB多拷贝插入序列S6110自行设计的寡
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2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖诱导肝癌细胞凋亡的形态学变化
目的:探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖诱导肝癌细胞株HepG2凋亡的可能性.方法:选用不同浓度的2-(3-羧基-l-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖与肝癌细胞株共同孵育不同时间后,应用倒置相差显微镜、荧光显微镜、透射电子显微镜对细胞生长状况及药物作用后细胞的形态进行观察.结果:经2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖作用24-72 h后,HepG2肝癌细胞株出现体积缩小,荧光染色增强,胞核或胞质中可见致密浓染的块状或颗粒状黄绿色荧光染色.染色质固缩,并凝结成块,聚集在核膜周边呈新月状或肾状,胞质浓缩,内质网疏松并与胞膜融合形成-个个空泡.且凋亡细胞含量呈一定的浓度、时间相关性.结论:2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖具有诱导HepG2细胞凋亡的作用.
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反义VEGF寡核苷酸与碘油混合肝动脉注入转染鼠肝癌的可行性
目的:探讨反义VEGF寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)转染Walker-256瘤细胞及其与碘油混合后肝动脉注入转染鼠肝癌及在鼠肝、肺、肾组织的分布情况.方法:将异硫氰酸荧光素(5'-FITC)标记的VEGF ASODN加入培养的Walker-256瘤细胞培养液中,不同时间用荧光显微镜观察细胞内ASODN的分布.12只Walker-256移植性大鼠肝癌模型,一组肝动脉内注入荧光标记的VEGFASODN(TAI组,n=6),另一组肝动脉内注入荧光标记的VEGF ASODN与超液态碘油的混合液(混合组,n=6),两组分别于术后1 d、3d、6d取动物的肝、肺、肾组织行冰冻切片,荧光显微镜观察各组织内ASODN的分布情况.结果:荧光标记的ASODN与Walker-256瘤细胞共同培养后2 h时可见瘤细胞胞质内有点状荧光染色,6 h胞核内有荧光染色,12 h荧光染色强,胞核及胞质中均可见荧光染色,24h荧光物质减少,48h完全消失.1 d和3 d时混合组肝癌组织及肝组织内荧光染色强于TAI组,而肺、肾组织荧光染色弱于TAI组;6 d时TAI组肝、肺、肾组织内荧光染色基本消失,而混合组肝、肺、肾组织仍有少许荧光染色.ASODN可以进入肝癌细胞及瘤周肝细胞.结论:VEGF ASODN可以转染Walker-256细胞,其与碘油混合后可以延长ASODN在肝内的停留时间,增加对肝癌组织的转染率,减少其在肝外组织的分布.与碘油混合后肝动脉注入是VEGF ASODN反义基因治疗肝癌的理想给药方法.
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槐耳清膏诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的实验研究
槐耳清膏是药用真菌槐耳菌质的热水提取物，临床上证实有一定的抗癌效果。为进一步探讨其抗癌机制，我们研究了槐耳清膏在体外诱导人肺腺癌细胞系A549凋亡的作用。 材料与方法引进并培养人肺腺癌细胞系A549细胞株。制备不同浓度的槐耳清膏PRMI-1640含药培养液与接种成功、呈对数生长的A549细胞共同培养24 h后，每6 h进行以下观察及测定（设阳性对照组羟基喜树碱100 μg/ml，共同孵育10～12 h后进行测定）［1］。（1）荧光染色：收集培养细胞，清洗并均匀涂片自然风干24 h，置于0.05 mg/L的Hoechst33258及0.1 mg/L的硫柳汞的无钙、镁的磷酸缓冲染色液中作用40 min，封片后荧光显微镜下观察、拍照、计数；（2）电子显微镜观察：同上收集细胞6×106，磷酸缓冲液（PBS）清洗，戊二醛固定，再经锇酸染色、缩水包埋、切片后透射电子显微镜观察照相记录；（3）流式细胞仪分析：同法收集、清洗、固定细胞2×106，离心后加入100 μl磷酸二氢钠/柠檬酸缓冲液室温震荡30 min，在离心的细胞中加入含100 mg/L 核糖核酸酶A（Rnase A）和25 mg/L 碘化丙啶（PI）的染色液1 ml在暗处4℃染色3 h，用FACSort流式细胞仪分析细胞周期。实验数据通过SPSS For Windows软件进行统计学分析。
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4种结核分枝杆菌检测方法的比较
目的 建立更快速、准确的痰结核分枝杆菌检测方法.方法 收集83份肺结核病患者的痰标本,分别采用涂片抗酸染色、荧光染色法、罗氏培养和DNA环介导恒温扩增(LAMP)试验对结核分枝杆菌进行检测,并对其阳性检出率进行比较.结果 LAMP试验结核分枝杆菌检出率为72.6％,高于罗氏培养法的57.8％(x2=11.4,P＜0.01),同样高于荧光染色的59.8％(x2=8.6,P＜0.01),显微镜下抗酸染色法的检出率低,为51.8％,明显低于LAMP法(x2=22.2,P＜0.01)；荧光染色法与萋尼染色法比较,差异无统计学意义.结论 LAMP试验检测痰结核分枝杆菌具有快速、敏感、简便、特异等优点,在肺结核患者的早期诊断中将发挥重要作用.
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荧光染色、PAS染色和美蓝染色在马拉色菌毛囊炎诊断中的比较
目的 比较真菌荧光染色、过碘酸雪夫染色(PAS)和美蓝染色在马拉色菌毛囊炎诊断中的价值.方法 皮肤科门诊马拉色菌毛囊炎患者100例,每例患者均于皮损处取3份标本,同时行荧光染色、PAS染色和美蓝染色进行比较.结果 100例患者中,荧光染色阳性98例,PAS染色阳性91例,美蓝染色阳性93例,三者间阳性率无显著性差异.结论 荧光染色、PAS染色和美蓝染色在马拉色菌毛囊炎诊断中均具有良好的染色效果.美蓝染色法操作简单,对于初学者易于常握,且成本较低,适用于临床.
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云香精致角结膜损伤的报告
患者王××,女,68岁,一天前的晚上将云香精误作白内停滴眼液滴眼,当时疼痛、畏光、流泪、睁眼困难、视物模糊,立即用自来水冲洗,因上述症状加重而到我院就诊.体检:视力:右0.02,左0.3,右眼睑肿胀,内外眦处较多黄色粘液性分泌物,球结膜充血(+++),裂隙灯下见,角膜雾状水肿,角膜上皮大片状剥脱,荧光染色阳性.
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实验组织切片荧光染色后再行苏木素-伊红染色的方法及体会
目的:初步探索荧光染色后的组织切片再行苏木素-伊红(HE)染色的技术方法和操作程序. 方法:分别用5 μm石蜡、冰冻两种组织切片按常规间接免疫荧光加荧光化学方法进行荧光染色,然后用pH 4.7～5.0 50%的乙醇洗脱封片的缓冲甘油,再进行常规HE染色.分别用荧光显微镜与光学显微镜观察、拍照,进行HE染色效果比较.结果:荧光染色后的组织切片标本再行HE染色,其染色效果和组织细胞结构的清晰度与组织切片单独进行HE染色相比无明显差异.结论:本实验操作方法简单;结果可靠;增加了单张切片的信息含量;节约实验成本;更为组织细胞形态学检测方法的相互转化与衔接提供了技术和思维平台.
