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槐耳清膏抑制人前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭作用及其机制研究
该研究探讨槐耳清膏对人前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭的抑制作用及其相关分子机制.采用CCK-8法检测槐耳清膏对PC3细胞的增殖抑制作用.采用流式细胞术分析槐耳清膏给药后PC3细胞凋亡及细胞周期的变化.采用细胞划痕实验及Transwell侵袭实验分析给药后PC3细胞侵袭与迁移能力的变化.通过Western blot法,检测槐耳清膏给药后与侵袭迁移相关的EMT蛋白标志物表达水平的变化及MAPK信号通路中关键蛋白磷酸化水平的变化.结果显示,槐耳清膏可以明显抑制人前列腺癌PC3细胞的增殖.槐耳清膏8g.L-1作用于PC3细胞48 h后,细胞凋亡率较对照组明显升高,且细胞发生明显的S期阻滞.槐耳清膏给药后可以明显降低PC3细胞的侵袭与迁移能力,并且能够下调N-cadherin和TCF8/ZEB1的表达水平和上调E-cadherin的蛋白表达水平,表明槐耳清膏能够促进PC3细胞MET的发生,同时还发现MAPK信号通路中的关键蛋白JNK和ERK的磷酸化水平明显下降.因此,槐耳清膏能够抑制人前列腺癌PC3细胞增殖和迁移侵袭能力,这可能与其调控EMT及抑制MAPK信号通路有关.
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槐耳清膏通过激活自噬抑制人肝癌细胞SK-HEP-1增殖
该研究探讨槐耳清膏对人肝癌细胞SK-HEP-1自噬的影响及此影响在细胞增殖中发挥的作用.采用CCK-8法检测了槐耳清膏不同作用浓度以及不同作用时间下对人肝癌细胞SK-HEP-1增殖的影响.采用吖啶橙染色法检测了槐耳清膏给药对SK-HEP-1细胞中自噬溶酶体形成的作用.采用免疫荧光法检测了槐耳清膏给药后SK-HEP-1细胞中自噬标志物LC3的表达及分布情况.此外,还借助免疫印迹法检测了槐耳清膏给药后SK-HEP-1细胞中LC3的表达情况.后,该研究采用CCK-8法分析了槐耳清膏与自噬抑制剂bafilomycin A1联合给药以及槐耳清膏单独给药对SK-HEP-1细胞增殖的作用.结果显示,槐耳清膏能够显著抑制人肝癌细胞SK-HEP-1的增殖,并且具有明显的时间与浓度依赖性.吖啶橙染色实验结果表明槐耳清膏能够明显促进细胞中自噬溶酶体的生成.免疫荧光及免疫印迹实验结果显示,槐耳清膏给药作用后细胞内LC3绿色荧光颗粒数量和亮度明显增高,而且自噬标志蛋白LC3-Ⅱ的表达量也明显上升,这部分结果提示槐耳清膏能够明显激活SK-HEP-1细胞自噬的发生.此外,笔者还发现自噬被抑制后SK-HEP-1细胞对槐耳清膏给药的敏感性显著下调.因此,自噬活化参与了槐耳清膏对人肝癌细胞SK-HEP-1增殖的抑制作用.
关键词： 槐耳清膏 人肝癌细胞SK-HEP-1 自噬 增殖 -
槐耳清膏对缺氧结肠癌SW480细胞VEGF及HIF-1α表达的影响
目的: 观察槐耳清膏对体外培养人结肠癌SW480细胞系VEGF和HIF-1α表达的影响.方法: 体外培养人结肠癌SW480细胞48 h, 随机分为常氧对照组(NC组)、低氧对照组(HC组)和低氧槐耳组(HH组), HH组RPMI 1640培养基含槐耳清膏(终浓度1 g/L). 半定量RT-PCR检测SW480细胞VEGF和HIF-1α mRNA表达水平, Western blot检测两者蛋白表达水平.结果: HH组和HC组VEGF、HIF-1α mRNA表达水平均显著高于NC组(4.71±0.07, 4.54±0.02 vs 1.19±0.03;5.68±0.07, 5.58±0.05 vs1.21±0.05, 均P<0.05), 但HH组与HC组比较无统计学差异. HC组VEGF、HIF-1α蛋白表达均显著显著高于NC组(0.66±0.03 vs 0.38±0.02;0.58±0.04 vs 0.31±0.03, 均P<0.05), 与HC组比较, HH组VEGF和HIF-1α蛋白表达均显著下降(0.37±0.03, 0.30±0.05, 均P<0.05).结论: 槐耳清膏通过下调人结肠癌SW480细胞内HIF-1α和VEGF蛋白表达抑制肿瘤生成.
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槐耳清膏诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的实验研究
槐耳清膏是药用真菌槐耳菌质的热水提取物，临床上证实有一定的抗癌效果。为进一步探讨其抗癌机制，我们研究了槐耳清膏在体外诱导人肺腺癌细胞系A549凋亡的作用。 材料与方法引进并培养人肺腺癌细胞系A549细胞株。制备不同浓度的槐耳清膏PRMI-1640含药培养液与接种成功、呈对数生长的A549细胞共同培养24 h后，每6 h进行以下观察及测定（设阳性对照组羟基喜树碱100 μg/ml，共同孵育10～12 h后进行测定）［1］。（1）荧光染色：收集培养细胞，清洗并均匀涂片自然风干24 h，置于0.05 mg/L的Hoechst33258及0.1 mg/L的硫柳汞的无钙、镁的磷酸缓冲染色液中作用40 min，封片后荧光显微镜下观察、拍照、计数；（2）电子显微镜观察：同上收集细胞6×106，磷酸缓冲液（PBS）清洗，戊二醛固定，再经锇酸染色、缩水包埋、切片后透射电子显微镜观察照相记录；（3）流式细胞仪分析：同法收集、清洗、固定细胞2×106，离心后加入100 μl磷酸二氢钠/柠檬酸缓冲液室温震荡30 min，在离心的细胞中加入含100 mg/L 核糖核酸酶A（Rnase A）和25 mg/L 碘化丙啶（PI）的染色液1 ml在暗处4℃染色3 h，用FACSort流式细胞仪分析细胞周期。实验数据通过SPSS For Windows软件进行统计学分析。
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槐耳清膏体外逆转人肝癌细胞HepG2/ADM多药耐药性
目的 探讨槐耳清膏体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用及可能的机制.方法 MTT法检测槐耳清膏的细胞毒作用和处理前后耐药细胞对化疗药物的敏感性;流式细胞仪检测细胞内阿霉素浓度;RT-RCR检测MDR1基因的表达.结果 槐耳清膏在0.01g/L以下剂量时对HepG2和HepG2/ADM耐药细胞株的抑制率均＜10%,半数抑制率(IC50)分别为0.917 g/L和1.66 g/L,无细胞毒剂量即0.008 g/L的槐耳清膏能部分逆转HepG2/ADM细胞的耐药性,与之合用使耐药肝癌细胞对阿霉素、顺铂、丝裂霉素、氟尿嘧啶的相对逆转效率分别为79%、73.5%、97.4%和86.7%,HepG2/ADM细胞内阿霉素浓度明显增加,MDR1表达下降了33.7%.结论 槐耳清膏具有体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用,可能与下调MDR1表达、增加细胞内化疗药物积累有关.
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槐耳清膏对乳腺癌患者外周血单核细胞分泌细胞因子的影响
槐耳颗粒是一种新型真菌类抗肿瘤新药,研究表明该药不仅能抑制肿瘤细胞的生长,还可增强机体免疫功能.本实验研究槐耳清膏对乳腺癌患者外周血单核细胞分泌IL-2,IL-4,IL-10及IFN-γ细胞因子的影响,探索槐耳清膏增强机体免疫机制抗肿瘤的可能机制.
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槐耳清膏诱导人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231凋亡的研究
本实验研究了槐耳清膏对人乳腺癌MCF-7及MDAMB-231细胞的生长抑制、凋亡诱导作用及其对凋亡相关基因p53,caspase-3表达水平的影响,为探索槐耳清膏诱导肿瘤细胞凋亡的机制提供线索,现报告如下.
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槐耳清膏联合氟尿嘧啶抑制肝癌生长转移的实验研究
槐耳清膏的主要活性成分是多糖蛋白[1](polysaccharide of trametes robiniophila murr,PS-T),能诱导人直肠癌细胞株(HR8348细胞)发生凋亡[2],对血管内皮细胞体外构建新生血管有抑制作用[3].但槐耳清膏对肝癌在体内的生长和转移的干预作用尚无报道.本研究利用裸鼠人肝癌转移模型LCI-D20[4]进行了抑制肿瘤生长和转移的动物实验,现报道如下.
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槐耳清膏对K562细胞体外作用研究
目的 通过用不同浓度的槐耳清膏作用于体外培养的K562细胞,探讨槐耳清膏对K562细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用.方法 应用MTY法、细胞形态学观察以及流式细胞术观察槐耳清膏对体外培养的K562细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用.结果 MTT法结果显示:在终浓度分别为0.5、1、2、4和8 mg/ml的槐耳清膏作用于体外培养的K562细胞12、24、36、48、72 h后,槐耳清膏抑制细胞增殖作用随着浓度增加及培养时间延长而逐渐增强,与对照组相比差异统计学意义(P<0.01).流式细胞技术显示:不同浓度的槐耳清膏作用于K562细胞48 h后,随着浓度的增加,凋亡细胞百分比逐渐增加,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01).结论 槐耳清膏在体外对K562细胞有抑制增殖和诱导凋亡的作用.
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实验性肝癌中比较槐耳与IL-2对PTEN和IL-2R阳性细胞的影响
目的比较槐耳清膏与IL-2对抑癌基因PTEN表达和IL-2R阳性细胞的影响.方法应用二乙基亚硝胺(DENA)制备40只大鼠肝癌模型,分为5组,对照组(G1)、单纯诱癌组(G2)、诱癌加槐耳清膏组(G3)、诱癌加9周后槐耳清膏组(G4)和诱癌加9周后IL-2组(G5).于实验第20周处死动物取肝组织,用RT-PCR检测PTEN表达,免疫组化检测IL-2R阳性细胞,并通过计算机图像分析系统分别比较各组中PTEN的表达量和IL-2R阳性细胞数.结果 G3,G4,G5肝癌的形成率明显降低,肝内IL-2R阳性的活化T细胞数G3和G5显著高于其他各组(P均＜0.01).在G5中,无癌形成的肝内IL-2R阳性细胞数显著高于有癌形成者.PTEN相对表达量G3显著高于G2(P＜0.01).结论槐耳清膏和IL-2均能增加肝内IL-2R阳性细胞数,增强体内细胞免疫功能,有效抑癌;槐耳清膏还能抑制抑癌基因PTEN的缺失而发挥抑癌作用,槐耳抗癌的应用前景将优于IL-2.
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槐耳清膏在肝癌治疗中的抑癌研究
目的从病理角度在细胞水平上观察槐耳清膏的防癌与抑癌作用. 方法联合应用二乙基亚硝胺、四氯化碳复制鼠肝硬化肝癌模型, 分为7组, 在不同阶段灌服槐耳清膏进行干预, 20周后处死鼠进行病理观察. 结果在鼠肝癌模型制备早期灌服槐耳清膏具有显著的防癌作用, 癌变率显著降低; 在癌形成与发展过程中灌服槐耳清膏也有显著的抑癌效应, 可减轻癌变的病理变化; 槐耳清膏还能通过抑制肝硬化来干预癌的形成, 其疗效与疗程呈正相关. 结论槐耳清膏具有确切的防癌、抑癌作用, 是临床抗肿瘤的理想药物.
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槐耳清膏和TOR逆转人肺腺癌细胞顺铂耐药性实验研究
目的:研究槐耳清膏体外逆转人肺腺癌细胞株A2/cDDP耐药性的作用,并与TOR比较,探讨其可能机制.方法:MTT法确定槐耳清膏适逆转浓度和处理前后A2/cDDP细胞对顺铂的敏感性,并与托瑞米芬(TOR)比较;RT-PCR测定CTR1和GSTπ基因表达变化.结果:槐耳清膏适逆转浓度为0.6 mg/mL,此时A2和A2/cDDP细胞抑制率均＜5％;槐耳清膏和TOR的半数抑制率(IC50)分别为(4.21±0.005) mg/mL和(39.06±0.0115)μmol/mL,逆转倍数(RI)分别为2.95±0.023和3.15±0.014,均能明显逆转A2/cDDP耐药性,P＜0.05;而两者间比较无明显差异,P＞0.05;槐耳清膏能明显增高A2/cDDP细胞CTR1表达并抑制GSTπ的表达.结论:槐耳清膏能体外逆转A2/cDDP对顺铂的耐药性,其逆转能力与TOR相近;上调CTR1和下调GSTπ表达可能是其相关机制.
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槐耳清膏对人肺腺癌A2细胞生物学行为影响及相关机制研究
目的:研究槐耳清膏对人肺腺癌A2细胞的增殖抑制作用及凋亡促进作用,并探讨其分子机制.方法:MTT法检测槐耳清膏对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响;Western blotting测定Wnt-1和Survivin蛋白表达的变化.结果:槐耳清膏能显著抑制人肺腺癌A2细胞增殖、促进凋亡,P＜0.05;下调靶基因蛋白表达水平.结论:槐耳清膏可抑制人肺腺癌A2细胞增殖、促进细胞凋亡,其机制可能与下调Wnt-1和Survivin表达有关.
关键词： 人肺腺癌细胞株A2 Wnt-1蛋白 Survivin蛋白 槐耳清膏 -
槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖及周期的影响
目的：研究槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖及周期的影响。方法制备浓度为0、3、6、9 mg／ml的槐耳清膏与人肺腺癌A549细胞作用后，采用流式细胞检测观察细胞凋亡率，并分析药物干预36 h对细胞周期和细胞凋亡率的影响。结果流式细胞术检测结果显示，槐耳清膏各浓度组均可发生细胞凋亡，与对照组相比差异显著（P＜0.05）。各浓度组可使人肺腺癌A549细胞G0／G1、S期细胞比例减少，G2／M期细胞比例增多。结论槐耳清膏能诱导人肺腺癌A549细胞增殖，可能与细胞被阻滞于G2／M期有关。
关键词： 槐耳清膏 人肺腺癌A549 细胞 细胞增殖 细胞周期 -
槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖抑制及诱导凋亡的影响.方法 制备不同浓度的槐耳清膏(0、3、6、9 mg/ml)和羟基喜树碱100 μg/ml作用于A549细胞,分别于24、36和48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 槐耳清膏与羟基喜树碱均可诱导A549细胞凋亡,槐耳清膏各浓度组与阴性对照组相比差异显著(P<0.05),且这种抑制存在浓度和时间依赖性,槐耳清膏浓度在3.0 mg/ml 36 h后抑制作用强,羟基喜树碱组与之比较无显著差异(P>0.05),各浓度槐耳清膏组在与A549细胞作用36 h后达到抑制高峰.结论 槐耳清膏在体外能抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,诱导细胞凋亡作用.
关键词： 槐耳清膏 人肺腺癌A549细胞 增殖 凋亡 -
槐耳清膏诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究
目的 研究槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制.方法 用终浓度为0、0.5、1、2、4、6 mg/mL的槐耳清膏和10 μg/mL的5-氟尿嘧啶(5-Fu)作用于SGC-7901细胞,分别于24 h和48 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;48 h后收集各组胃癌SGC-7901细胞,琼脂糖凝胶电泳检测DNA,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测survivin mRNA表达.结果 MTT法检测显示,槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系(P＜0.05);槐耳清膏6 mg/mL组的抑制率48 h后达到(77.9±2.3)%,5-Fu组为(53.4±1.6)%,差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术检测显示,槐耳清膏4 mg/mL组的细胞凋亡率高,早期凋亡细胞达33.2%;6 mg/mL组早期凋亡细胞6.3%,而晚期凋亡细胞为19.9%.RT-PCR结果显示,槐耳清膏组胃癌SGC-7901细胞survivin mRNA表达下调.结论 槐耳清膏在体外对胃癌SGC-7901细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断槐耳清膏诱发胃癌细胞凋亡与其对survivin基因表达的抑制有关.
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槐耳清膏对人乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞增殖的影响
目的:研究槐耳清膏对人乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞增殖的影响.方法:配制不同浓度的槐耳清膏(3、6、9 mg·ml-1)作用于MCF-7及MDA-MB-231细胞48 h后,MTT比色法测定槐耳清膏各浓度组对MCF-7及MDA-MB-231细胞的增殖抑制率.结果:槐耳清膏作用于乳腺癌MCF-7细胞48 h后,与阴性对照组比较,各浓度组的OD值逐渐下降,在槐耳清膏浓度为3、6、9 mg·ml-1时其细胞抑制率分别为(17.4±1.4)％、(58.6±3.7)％、(76.1±2.9)％,差异具有统计学意义(P＜0.05).槐耳清膏作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞48 h后,与阴性对照组比较,各浓度组的OD值变化不大,在槐耳清膏浓度为3、6、9 mg·ml-1时其细胞抑制率分别为(10.3±1.7)％、(15.1±2.6)％、(17.8±3.9)％,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:槐耳清膏对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有明显的抑制作用,随着药物浓度的增加抑制作用更加明显.槐耳清膏对乳腺癌MDA-MB-231细胞无明显的抑制增殖作用.
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槐耳清膏抑制MCF-7细胞裸鼠成瘤性实验研究
目的:构建裸鼠异种乳腺癌移植瘤模型(裸鼠接种MCF-7细胞),给予该模型鼠槐耳清膏处理,观察移植瘤组织病理变化特点,探讨其对裸鼠致瘤性的影响.方法:将裸鼠随机分为实验组和对照组,分别给予槐耳清膏(浓度150 mg·ml-1)和0.9%生理盐水各0.2 ml灌胃,每天两次,共30 d.观察裸鼠瘤体积及瘤体重的变化,显微镜观察移植瘤组织病理变化特点.结果:裸鼠在接种MCF-7细胞3周后,接种部位均长出肿瘤,成瘤率100%,实验组和对照组移植瘤重分别为(0.20 ± 0.07)g和(0.57 ± 0.32)g,实验组裸鼠移植瘤体重明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),两组移植瘤体积分别为(0.32 ± 0.74)cm3与(0.84 ± 0.62)cm3,实验组移植瘤体积较对照组小,具有统计学差异(P<0.01).HE染色后,实验组裸鼠移植瘤镜下可见肿瘤组织细胞出现不同程度的退行性变,中央及边缘细胞出现大片缺血坏死区,在血供较丰富的区域表现尤为明显,而在坏死灶周围可见残存的肿瘤细胞.对照组细胞生长旺盛,有异型性,形态不规则,大小不等,细胞核大、浓染,可见病理性核分裂相,无明显坏死区.结论:在裸鼠体内,槐耳清膏能抑制乳腺癌细胞MCF-7的成瘤性,从而达到抑制乳腺癌细胞生长的作用.
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槐耳清膏联合顺铂对人肺癌A549细胞和A549/DDP细胞Bax、Bcl-2及Survivin基因表达的影响
目的 研究槐耳清膏与顺铂联合使用对人肺癌细胞A549和A549/DDP Bax、Bcl-2以及Survivin基因表达的影响.方法 以体外培养的A549和A549/DDP细胞株为模型,将槐耳清膏进行梯度(将10g槐耳清膏溶解于100mL无血清PRMI-1640培养液中,分别制成0、1.0、3.0、5.0、7.0和9.0mg/mL的槐耳清膏溶液)稀释后与12μg/mL顺铂联合使用作用于A549细胞和A549/DDP细胞,并以无药物刺激作为空白对照组,分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测Bax、Bcl-2以及Survivin基因在A549细胞和A549/DDP细胞表达情况.结果 槐耳清膏与顺铂联合使用下,随着槐耳清膏浓度的升高,A549细胞和A549/DDP细胞Bax基因mR-NA表达逐渐升高,Bcl-2、Survivin基因mRNA表达逐渐降低,差异均有统计学意义(F=10.21、4.54、7.12,P<0.01,P=0.01,P<0.01;F=12.43、9.17、7.63,P均<0.01).槐耳清膏与顺铂联合使用的情况下,随着槐耳清膏浓度的升高,A549细胞和A549/DDP细胞Bax蛋白表达量逐渐升高,Bcl-2、Sur-vivin蛋白表达量逐渐降低,差异均有统计学意义(F=8.54、9.38、10.55,P均<0.01;F=15.71、17.98、14.68,P均<0.01).结论 槐耳清膏与顺铂联合使用能够显著提高人肺癌细胞A549和A549/DDP Bax基因表达,降低Bcl-2、Survivin基因表达.
关键词： 人肺癌细胞A549 人肺癌细胞A549/DDP 癌基因 槐耳清膏 顺铂 -
槐耳清膏抑制小鼠模型人胃癌MKN-45细胞生长和转移的实验研究
目的 研究槐耳清膏对人胃癌MKN-45细胞在裸鼠体内生长和转移的抑制作用,并探讨其作用机制.方法 采用BALB/c裸鼠建立人胃癌MKN-45细胞淋巴结转移模型,随机分为槐耳清膏组、空白对照组,每组20只.建模后,每5天测量裸鼠荷瘤并计算肿瘤相对体积(RTV);用药5周后处死裸鼠,Real-time qPCR检测肿瘤组织Wnt、β-catenin、E-cadherin、N-cadherin和VEGF表达水平.结果 槐耳清膏组末次测得的足垫瘤RTV为(662.75±450.66)mm3,明显小于空白对照组的(1611.85±611.83)mm3(P<0.01).槐耳清膏组淋巴结转移率8/20(40%)与对照组15/20(70%)相比,差异有统计学意义(P<0.05).槐耳清膏组肿瘤组织Wnt、β-catenin、N-cadherin和VEGF的△CT值分别为(11.36±1.32)、(11.31±1.76)、(12.82±2.22)、(13.22±1.52),均高于对照组的(9.48±2.07)、(9.37±1.88)、(7.74±2.64)、(11.04±1.61),而E-cadherin的△CT值(8.26±2.39)低于对照组的(10.64±1.48)(P<0.05).结论 槐耳清膏可抑制人胃癌MKN-45细胞在裸鼠上的生长及转移,其机制可能与抗血管生成和阻碍上皮间质转化(EMT)过程有关.
关键词： 裸鼠 槐耳清膏 人胃癌MKN-45细胞 淋巴结转移 上皮间质转化
