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稽留流产绒毛及蜕膜组织中Survivin及Caspase-3的表达及相关性研究
目的 探讨生存素(Survivin)及半胱氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3)在稽留流产发生中的作用及相关性,从而从细胞和分子水平进一步阐明稽留流产的发病机制.方法 采用免疫组化方法检测30例稽留流产(实验组)患者绒毛及蜕膜组织中Survivin及Caspase-3的表达,并设30例正常早孕人工流产绒毛组织作为对照组.结果 稽留流产组绒毛及蜕膜组织中Survivin的表达均低于正常早孕组,Caspase-3的表达则高于正常早孕组. 以上差异均有统计学意义(P＜0.05). 实验组的绒毛及蜕膜组织中Survivin与Caspase-3的表达均呈负相关(P＜0.05).结论 Survivin及Caspase-3的异常表达在稽留流产的发生中起重要作用.
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生存素在乳腺癌中的表达及意义
目的：探讨乳腺癌中生存素的表达及其意义。方法：检测48例乳腺癌及29例乳腺良性病变中生存素的表达情况。结果：乳腺良性病变中生存素的阳性表达率24.1%；乳腺癌中生存素的阳性表达率72.9%，差异具有统计学意义(P＜0.01)。结论：生存素的异常表达对乳腺癌的发生、进展具有一定的推动作用，且可能对乳腺的良恶性病变有提示作用。
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三氧化二砷联合维生素C抑制耐药性肺腺癌裸鼠移植瘤生长机制的研究
目的:探索三氧化二砷(As2O3)联合维生素C(Vit C)对人耐药性肺腺癌裸鼠移植瘤抑制作用及其可能机制.方法:建立裸鼠人耐药性肺腺癌移植瘤模型,随机分为空白对照组,维生素C组(Vit C,250 mg·kg-1),As2031组(1.5 mg·kg-1),As203 2组(As2033 mg·kg-1),As203联合Vit C组(As203,1.5 mg·kg-1+VitC 250 mg·kg-1),ip2周,观察并记录各组裸鼠移植瘤的生长情况及肿瘤体积和裸鼠体重的变化,计算肿瘤生长抑制率,用药2周后,取瘤组织进行病理学检查.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测移植瘤内生存素(Survivin)与血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况.结果:Vit C组,As2031,2组,As203联合Vit C组的抑瘤率分别为:3.42%,42.3%,66.25%,79.93%.与对照组相比,As203各组和As203+Vit C组治疗后肿瘤体积减少,瘤质量减轻,差异均有显著性(P＜0.01);与As2O3单独用药组比较,As203+Vit C联合用药组肿瘤体积,瘤质量明显减少(P＜0.01),抑瘤率明显增高;而Vit C组治疗后肿瘤体积及瘤质量没有明显减少.病理检查显示各As203组、As203+Vit C组治疗后可见肿瘤坏死增多.RT-PCR及Western,blot结果显示:联合组与As203组、Vit C组比较Survivin、VEGF条带强度显著减小.结论:As203与Vit C联合用药比As203单独应用抑制耐药性肺癌移植瘤生长的作用更强,二者具有协同抗肿瘤作用,其作用机制可能与下调Survivin及VEGF的表达有关.两者联用有望成为低毒高效的化疗组合.
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齐墩果酸对H22荷瘤小鼠肿瘤组织中细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的:通过研究齐墩果酸在H22荷瘤小鼠肿瘤组织中细胞凋亡相关蛋白的表达的影响,探讨其在肿瘤发生、发展过程中的可能作用及意义.方法:建立H22荷瘤小鼠实体瘤模型进行体内试验,将50只已接种H22细胞株的小鼠随机分为模型组,环磷酰胺40 mg·kg-1组,齐墩果酸低、中、高剂量组(1.25,2.50,5.00 mg· kg-),连续灌胃给药10 d;处死小鼠,检测肝/体比及脾脏指数;采用免疫组化法检测瘤体内凋亡抑制基因生存素(survivin)及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的蛋白表达水平;利用原位末端标记法检测凋亡指数.结果:齐墩果酸可改善H22荷瘤小鼠的肝/体比和脾指数,齐墩果酸低、中、高剂量组对H22荷瘤小鼠肿瘤组织中survivin蛋白表达水平比模型组均显著降低(P＜0.01);齐墩果酸高、中剂量组对H22荷瘤小鼠肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达水平与模型组比较显著降低(P ＜0.01,P＜0.05);细胞经齐墩果酸处理后,survivin,Bcl-2表达下调,齐墩果酸各组细胞凋亡指数与模型组比较均显著升高,差异显著(P＜0.01).结论:齐墩果酸可通过抑制H22荷瘤小鼠肿瘤细胞中survivin及Bcl-2蛋白的表达,提高凋亡率,诱导肿瘤细胞凋亡,还可改善荷瘤小鼠机体免疫力.survivin,Bcl-2异常表达与肿瘤的发生密切相关,通过共同调节凋亡而发挥抗肿瘤作用.
关键词： 齐墩果酸 细胞凋亡 生存素 B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白 凋亡指数 -
重楼复方对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡及Survivin表达的影响
目的:研究重楼复方对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖抑制作用,及其对细胞周期、细胞凋亡的影响,并探讨可能的分子机制.方法:采用MTT法观察重楼复方对SMMC-7721细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,RT-PCR法检测凋亡相关基因生存素(Survivin) mRNA的表达.结果:重楼复方以剂量依赖方式抑制SMMC-7721的细胞增殖,其半数抑制浓度(48h)为(0.26±0.04)mg/mL.重楼复方0.2、0.4、0.8mg/mL作用于SMMC-7721细胞48h后,其早期凋亡率分别为4.8％、8.3％、21.6％,而对照组为1.8％,其诱导凋亡作用呈现剂量依赖性.重楼复方0.8mg/mL作用于SMMC-7721细胞24h后,细胞积聚在G0/G1期,同时S期细胞比例减少.重楼复方0.8mg/mL作用SMMC-7721细胞48h后,Survivin mRNA表达下调(P＜0.05).结论:重楼复方具有抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖及诱导细胞凋亡作用,并能阻滞细胞于G0/G1期,下调Survivin mRNA的表达可能为其诱导细胞凋亡的主要机制之一.
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内异康复栓对子宫内膜异位症大鼠异位和在位内膜细胞色素C和生存素表达的影响
目的 探讨内异康复栓直肠给药对子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)模型大鼠异位和在位内膜细胞色素C(cytochrome C,cytC)、生存素(Survivin)的不同影响.方法 将EMT大鼠随机分为内异康复栓高、低剂量组,丹那唑组,丹莪妇康煎膏组,模型组和空白组,采用免疫组化SP法检测cytC、Survivin的表达.结果 (1)内异康复栓高、低剂量组异位内膜cytc(IOD值)表达(分别为6.08±0.35、6.23±0.35)均显著增加,与模型组(5.07±0.70)及丹莪妇康煎膏组(5.98±1.02)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);内异康复栓高、低剂量组Survivin(IOD值)表达(分别为5.73±0.93、5.62±0.93)显著降低,与模型组(6.01 4-1.16)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).(2)内异康复栓高、低剂量组能显著上调在位内膜下降的cytC水平,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);内异康复检高、低剂量组在位内膜Survivin的表达,与模型组和空白组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 内异康复栓可能通过增加异位内膜cytC的表达并降低Survivin的表达,起到诱导凋亡的作用,而对在位内膜可上调cytC表达,对Sur-vivin表达无明显影响.
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子宫内膜癌组织中内分泌分化细胞的生物学特性及意义
观察子宫内膜癌组织中内分泌分化细胞的增殖与凋亡状况、雌激素受体(ER)与孕激素受体(PR)表达,探讨其生物学及临床意义.手术切除或活检的子宫内膜癌标本50例.采用嗜铬素A(CgA)作为内分泌分化的标记,进行CgA/PCNA及CgA/TUNEL双重染色,观察内分泌分化细胞的增殖与凋亡状况;并进行CgA与生存素(Survivin)双重免疫组化染色,探讨生存素与内分泌分化细胞凋亡的关系.通过CgA/ER及CgA/PR双重免疫组化染色观察内分泌分化细胞的ER、PR表达.结果显示CgA阳性细胞呈PCNA及TUNEL染色阴性.CgA阳性细胞多表达Survivin.CgA阳性细胞密集的区域ER或PR减少明显.大多数CgA阳性细胞不表达ER或PR.结果提示子宫内膜癌组织的内分泌分化细胞属暂不增殖细胞群,亦极少发生凋亡,是较稳定的细胞群.内分泌分化细胞高表达Survivin可能是其逃避凋亡的分子学基础.子宫内膜癌组织的内分泌分化与ER和PR的减少有关.
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藤梨根提取物对食管癌细胞系EC109细胞裸鼠移植瘤的抑制作用
目的 研究藤梨根乙酸乙酯提取物对食管癌细胞系EC109细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用和凋亡诱导作用,并探讨其作用机制. 方法 建立食管癌EC109细胞裸鼠移植瘤模型,观察藤梨根乙酸乙酯提取物的作用.将裸鼠分为对照组、治疗组(低剂量组、高剂量组),每组6只.通过测量移植瘤体积变化绘制生长曲线,根据终末瘤重比较计算抑制率;采用TUNEL法检测移植瘤凋亡指数,采用免疫组织化学法检测移植瘤生存素(Survivin)蛋白表达和增殖指数;用RT-PCR法检测移植瘤Survivin mRNA变化. 结果 各治疗组经藤梨根乙酸乙酯提取物治疗后移植瘤生长缓慢,治疗结束时治疗组移植瘤重及瘤体积明显低于对照组,高、低剂量组的瘤重抑制率分别为64.57%和46.78%.各治疗组移植瘤组织凋亡指数则明显高于对照组,而Ki-67抗原、Survivin mRNA及蛋白表达较对照组明显减少,高剂量组尤其明显,各组间上述指标比较差异均有统计学意义(P<0.01). 结论 藤梨根乙酸乙酯提取物对食管癌EC109细胞裸鼠移植瘤生长有抑制作用,其机制与抑制移植瘤细胞的增殖活性,降低其Survivin蛋白和mRNA表达及促进癌细胞凋亡有关.
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生存素,Fas,bcl-2和bax在急性髓系白血病病人骨髓细胞中的表达及其临床意义
为了研究抗凋亡基因生存素和bcl-2及促凋亡基因Fas和bax在急性髓系白血病(AML)中的表达及其临床意义,采用RT-PCR法分析生存素在68例初治AML病人骨髓细胞中表达的阳性率,用流式细胞术检测Fas,bcl-2和bax在AML病人骨髓细胞中的表达和bcl-2/bax比值.研究结果显示:①68例初治AML病人生存素mRNA阳性率为70.6%(48/68),明显高于对照(30%,6/20)(P＜0.005);②治疗前,AML病人骨髓细胞表达Fas和bcl-2明显高于对照(P＜0.001),但bax表达与对照差异无显著性(P＞0.05);③生存素阳性AML病人表达Fas明显低于生存素阴性AML病人(P＜0.01),bcl-2明显高于生存素阴性AML病人(P＜0.001),bax表达无差异(P＞0.01);④生存素阳性AML病人的CR率明显低于阴性组(31/48,64.6%vs18/20,90%,P＜0.05);⑤生存素阳性AML病人CR组Fas和bcl-2较治疗前明显下降(P＜0.001),bax变化无差异(P＞0.05),而生存素阳性的NR组Fas较治疗前显著下降(P＜0.001),bcl-2则上升(P＜0.001),bax变化无差异(P＞0.05),bcl-2/bax比值NR组明显高于CR组(P＜0.001).结论:①初治AML病人70.6%表达生存素,生存素阳性者CR低;②生存素阳性AML病人Fas低于生存素阴性组,而bcl-2和bcl-2/bax比值则高于生存素阴性组.
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慢病毒靶向携带survivin-siRNA抗肺腺癌裸鼠体内研究
目的 探讨慢病毒载体介导survivin-siRNA对人肺腺癌裸鼠移植瘤的体内抑瘤活性.方法 参考siRNA的设计策略,构建表达survivin-siRNA 的慢病毒载体;于各BALB/C裸鼠右侧腋窝皮下接种人肺腺癌A549细胞悬液,构建人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,肿瘤组织局部注射survivin-siRNA的慢病毒载体,观察肿瘤的体积及随时间变化的生长曲线: 通过碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色检测细胞凋亡情况;流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化.结果 慢病毒载体介导survivin-siRNA对裸鼠人肺腺癌A549的抑瘤率为46.07%:经过PI和Annexin-V染色区分凋亡早晚期的细胞为30%～35%,荧光显微镜下观察肿瘤细胞凋亡;G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例则明显减少.结论 慢病毒载体介导的siRNA能有效抑制裸鼠移植人肺腺癌A549的survivin基因的表达,有效激发细胞凋亡.
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凋亡抑制蛋白生存素在乳腺癌中的表达及其意义:临床标本47例分析
目的 探讨凋亡抑制蛋白生存素在乳腺癌中的表达及其临床意义.方法 采用逆转录聚合酶链反应方法检测47例病理证实的乳腺癌组织和26例正常乳腺组织中生存素的mRNA表达.结果 生存素在正常乳腺组织中无mRNA表达,而在61.7%的乳腺癌组织中(29/47)mRNA表达阳性.生存素基因mRNA表达率在病理分级为Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级的乳腺癌中分别为36.4%、65%和75%,表现出随分级的升高而升高的趋势(P=0.048).在浸润型的乳腺癌中,生存素基因的mRNA表达率为71.4%,显著高于非浸润型者(33.3%,P=0.019).生存素基因的mRNA表达率与年龄无关(P=0.563).结论 生存素的异常表达引起细胞凋亡抑制,对乳腺癌的发生、发展起重要作用,生存素的异常表达提示乳腺癌预后不良.
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HIF-1α和Survivin在乳腺癌中的表达及意义
目的：探讨低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和生存素（Survivin）在乳腺癌中的表达及意义。方法选择日照市人民医院2009年6月至2014年6月，应用免疫组化Ultra SensitiveTM S-P 法检测的乳腺浸润性导管癌（IDC）128例、乳腺导管原位癌（DCIS）89例、乳腺非典型导管增生（ADH）57例以及乳腺普通导管增生（UDH）60例，分析HIF-1α和Survivin的阳性表达差异及其与临床病理因素的关系。结果 HIF-1α的表达在IDC与DCIS组（χ2=13.442）、ADH组（χ2=22.272）以及UDH组（χ2=52.789）比较，差异有统计学意义，DCIS 与 UDH 组比较（χ2=8.144，P=0.004）差异同样有统计学意义，DCIS与ADH比较差异无统计学意义（χ2=2.188， P=0.139）；Survivin的表达在IDC组（χ2=70.540，P=0.000）、DCIS组（χ2=51.967，P=0.000）、ADH（χ2=42.829，P=0.000）与UDH组相比较，差异有统计学意义（P<0.0083）；IDC与DCIS（χ2=1.330， P=0.249）、IDC与ADH（χ2=1.484，P=0.223）比较，Survivin的表达差异均无统计学意义（P>0.0083）。在乳腺癌中，HIF-1α与Survivin的表达与组织学分级、淋巴结、远处转移及肿瘤分期呈正相关（P<0.05），而与患者年龄、肿瘤大小无关（P>0.05）。HIF-1α和Survivin的表达正相关（P=0.018，95%CI：0.0376～0.3839），但一致性不理想（κ=0.211）。结论 HIF-1α、Survivin高表达与乳腺癌发生、侵袭及转移行为有关，HIF-1α与Survivin联合检测有望作为乳腺癌发生发展、复发转移及预后的指标。
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精氨酸对大肠肿瘤增殖细胞核抗原、生存素表达的影响
目的 探讨精氨酸(Arg)对大肠肿瘤增殖细胞核抗原和生存素表达的影响.方法 将大肠腺瘤和大肠癌患者各60例随机分成两组:试验组、对照组各30例;试验组患者每日口服25% Arg 120ml,对照组每日口服5%葡萄糖液120ml,连续3天.干预前、后1日内取肿瘤组织、瘤旁组织和正常大肠黏膜,观察其增殖细胞核抗原和生存素的表达.免疫组织化学法观察增殖细胞核抗原(PCNA)、生存素的表达,表达结果用标记指数表示.结果 试验组增殖细胞核抗原标记指数干预前、后分别为腺癌[(78.8±5.6)%,(70.5±4.7)%]、腺瘤[(60.3±6.5) %,(52.9±4.2)%] 、癌旁组织[(40.2±4.4)%,(32.7±4.1)%],干预后显著低于干预前(P＜0.01).对照组干预前后差异无显著性.腺瘤瘤旁组织和两组的正常黏膜增殖细胞核抗原表达干预前后差异无显著性.试验组生存素标记指数干预前后分别为腺癌[(67.2±3.8)%,(55.7±6.3)%]、腺瘤[(80.5±6.1) %,(68.4±5.6)%],干预后显著低于干预前(P＜0.01).对照组差异无显著性.结论 Arg能够抑制大肠癌和大肠腺瘤高增殖活性及凋亡抑制蛋白生存素的表达,表明Arg对大肠肿瘤的发生和发展可能具有抑制作用.
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自然早产胎盘中细胞凋亡抑制因子survivin表达水平的定量检测及其临床研究
目的 分析自然早产胎盘中细胞凋亡抑制因子生存素(survivin)表达水平及其定量检测在自然早产中的诊断价值.方法 选择2015年12月-2016年12月福田医院住院部分娩的60例胎盘,其中自然早产30例(观察组),足月产30例(对照组).采集胎盘,对两组分别采用细胞凋亡抑制因子survivin免疫检测和survivin mRNA定量测定逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法并进行比较.结果 观察组胎盘survivin因子阳性表达率为26.67％(8/30),survivin-mRNA基因阳性表达率为16.67％(5/30),对照组分别为53.33％(16/30)、50.00％(15/30),差异具有统计学意义(P＜0.05).观察组胎盘survivin因子阳性细胞百分比为(57.10±4.82)％,survivin-mRNA相对表达量(0.68±0.23),对照组分别为(72.06±7.59)％、(2.09±0.47),差异具有统计学意义(t分别为11.102、4.910,P＜0.05).结论 适时监测诱发孕妇早产的survivin因子,及早治疗干预,有助于避免早产的发生,提高新生儿的生存质量.
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凋亡抑制基因Survivin的研究进展
肿瘤是严重危害人类健康的常见的重大疾病，机体对细胞的生长和分裂失去控制，细胞的增殖与凋亡调节失衡是肿瘤发生主要因素之一。细胞失控性异常增殖是肿瘤突出的生物学特性。生存素（Survivin）作为近年来被发现的凋亡抑制蛋白（IAP）家族中的新成员，研究表明其细胞凋亡抑制效应强，组织学表达具备肿瘤高度特异性，在抑制肿瘤细胞凋亡方面发挥重要作用。本文就 Survivin 的分子结构、生物学性能、与肿瘤发生发展的关系及其在肿瘤基因治疗中的作用作一综述。
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血管生成素-2和生存素在胃癌中的研究进展
胃癌基本的生物学特征是增殖失控、分化异常,并具有侵袭转移能力,其发生的分子基础是多种基因突变,长期、多阶段、多步骤的积累过程,包括细胞原癌基因的活化、抑癌基因的失活以及遗传不稳定状态等,并可涉及不同染色体上多部位基因的改变,终导致正常细胞转变成癌细胞.
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缺氧诱导因子-1α对A549细胞株中生存素表达及其生物学特性的影响
目的：观察非小细胞肺癌细胞株A549中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对生存素转录的调控作用及对A549细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法用凝胶电泳迁移率实验（EMSA）检测生存素启动子序列与核蛋白结合的情况。EMSA 实验分为阴性对照反应组、结合反应组、探针冷竞争反应组、突变探针的冷竞争反应组和特异性抗体反应组。应用脂质体将载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP miRNA HIF-1α质粒和阴性（错义链）、内参（β-肌动蛋白）微小 RNA（miRNA）质粒转染 A549细胞。转染分为未处理组（正常A549细胞）、HIF-1α沉默组（转染HIF-1α miRNA质粒）、阴性对照组和内参组。杀稻瘟菌素筛选阳性克隆扩大培养；用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹法筛选出对A549细胞干扰效果佳的miRNA HIF-1α干扰载体；常氧、缺氧条件下检测各组中HIF-1α、生存素在mRNA和蛋白水平的变化；用细胞计数法、流式细胞术和转移小室迁移试验检测各组细胞增殖、凋亡及迁移细胞数。结果（1）γ-32P 标记的生存素启动子序列-26～-9 bp与A549细胞核蛋白作用，该条带可与HIF-1α抗体结合产生特异性抗体结合条带；（2）常氧下 HIF-1α沉默组的 HIF-1α和生存素 mRNA 分别为0.313±0.051和0.060±0.008，明显低于未处理组的1.042±0.036和1.071±0.016（F＝436.433，0.002，均P＜0.05）；HIF-1α和生存素的蛋白含量分别为0.559±0.051和0.051±0.003，未处理组分别是1.452±0.146和0.194±0.007，两组比较差异有统计学意义（F值为53.525和331.646，均P＜0.05）。缺氧条件下HIF-1α沉默组中HIF-1α、生存素的 mRNA 和蛋白分别为0.604±0.040、0.394±0.018、0.997±0.026、0.172±0.006，明显受到抑制（mRNA的t值分别为7.809和-28.936，均P＜0.01；蛋白的t值分别为13.523和-14.202，均P＜0.01）；常氧条件下，转染miRNA后A549细胞增殖（24 h为0.273±0.008）无明显变化，但迁移细胞数（30±6）比未处理组（121±17）减少；缺氧条件下，转染miRNA后，A549细胞生长速度（24 h 为0.273±0.008）减慢，细胞体外的迁移细胞数（75±4）减少（均 P＜0.05）。结论 A549细胞中生存素核心启动子上存在HIF-1α结合位点；miRNA沉默A549细胞HIF-1α表达后，可有效下调生存素基因表达，常氧条件下仅抑制细胞迁移，缺氧条件下不仅促进细胞凋亡，还可抑制细胞增殖和迁移。
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胶体金免疫层析技术检测食管癌患者血清中生存素的表达
目的 探讨生存素(survivin)胶体金免疫层析试纸条作为食管癌血清筛选方法的可行性.方法 用survivin胶体金免疫层析试纸条检测158例食管癌和146名健康对照者血清标本,并评价其检测性能.结果制备直径20 nm的胶体金溶液后,用不同浓度的survivin多抗标记胶体金溶液,确定佳标记浓度12μg/ml.组装后survivin胶体金免疫层析试纸条检测临床血清标本结果显示,survivin在食管癌患者组中阳性率为51.9%(82/158),在健康对照组阳性率为15.1%(22/146),两组差异有统计学意义(χ~2=45.7,P<0.05).survivin阳性率在患者不同年龄组(42～54岁组47.1%,55～68岁组40.9%,69～81岁组63.9%)、不同性别组(男性患者组50.4%,女性患者组58.1%)、不同原发部位组(食管上段组56.3%,中段组46.1%,下段组32.1%)、不同分化程度组(高分化组56.3%,中分化组43.2%,低分化组32.7%)和淋巴结有无转移组(淋巴结转移组43.3%,淋巴结未转移组43.4%)的各组内差异均无统计学意义(χ~2分别为1.11、0.59、2.64、1.63和0.00,P均>0.05).survivin胶体金免疫层析试纸条敏感度51.9%(82/158),特异度84.9%(124/146),准确性67.8%(206/304).结论 survivin胶体金免疫层析试纸条操作简单,结果容易判定,可作为食管癌高发人群的筛选方法之一.
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SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测生存素基因的方法建立及条件优化
目的 建立SYBR Green Ⅰ染料实时定量PCR检测生存素(Survivin)基因定量的方法.方法 根据PCR产物荧光强度、循环阈值(Ct值)、标准曲线斜率、相关系数和熔解曲线优化反应体系中各组分的量及反应条件,对引物二聚体消除策略和Ct值获取方式进行评价.并用该方法检测43份胃癌组织Survivin基因扩增情况.结果 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR体系扩增Survivin的佳组成和条件是:Taq酶2.5 U/100μ1、MgCl2 2 mmol/L、引物浓度0.2 μmol/L和退火温度58℃;在PCR循环延伸结束后设置1个低于特异产物退火温度值2℃的荧光读取温度,能有效消除引物二聚体对定量检测的影响;以二次倒数大值方式确定Ct值,能避免主观因素所致误差.研究建立的SYBR Green Ⅰ染料实时定量PCR检测Survivin基因含量方法的灵敏度为10拷贝/μl,线性范围101～104拷贝/μl(r=0.999 7),批内变异系数(CV)1.13%～1.91%,批间CV 3.31%～4.50%;胃癌组织中Survivin基因扩增率为13.9%(6/43).结论 优化后的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法具有方便、经济、灵敏度高和重复好等特性,可用于Survivin基因含量分析.
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短发夹状RNA真核表达载体对HL-60细胞生存素基因表达的影响及诱导凋亡作用
近研究发现,白血病细胞凋亡受阻与生存素(survivin)的过度表达有关.为此,我们设计了survivin特异性短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,利用脂质体转染急性粒细胞白血病细胞株HL-60细胞,检测转染前后细胞survivin基因mRNA和蛋白表达以及凋亡情况,探讨以survivin为靶点,将RNA干扰(RNA interference,RNAi)用于白血病基因治疗的可行性.
