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胶体金标记免疫层析法检测大肠杆菌O157
目的 应用抗大肠杆菌O157(E.coli O157)单克隆抗体,制备一种简便快速的胶体金标记免疫层析(GICA)条用于检测标本中E.coli O157.方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗E.coli O157单克隆抗体,以硝酸纤维膜作为抗E.coli O157单克隆抗体的包被载体,制成GICA检测条.标本中E.coli O157与检测条上金标记抗体(Au-Ab)结合后,利用硝酸纤维膜的层析作用移动,与膜上的固相抗体结合形成可见的红色条带.结果 GICA检测条灵敏度可达105 cfu/ml.用GICA检测了1750份不同食品和人畜粪便标本中E.coli O157,GICA检测条阳性份数43份,后经分离培养检出29株大肠杆菌O157;另14份标本经鉴定,其中12份标本可疑为弗劳地枸橼酸杆菌.结论 GICA条检测标本的E.coli O157,特异性较高,不需任何仪器设备,较简便快速,易于判断结果,故可对标本进行快速筛查,适合各级疾控中心和临床检验部门使用.
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胶体金免疫层析快速定量检测西尼罗病毒抗体方法的建立
目的 建立一种胶体金免疫层析快速定量检测西尼罗病毒抗体的方法.方法利用胶体金免疫层析技术,建立快速检测西尼罗病毒抗体的方法,评价其特异性和敏感性,进行定量检测并拟合标准曲线.结果该法可在15min内完成定性和定量检测,定量检测灵敏度为1:104/test,线性范围1:101/test～ 1:10/test、回收率86.5％～ 122.7％.结论建立的检测西尼罗病毒抗体的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地对样本中的西尼罗病毒抗体进行定性、定量检测.
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蚊虫携带登革病毒快速筛查方法的建立
[目的]研究一种适合现场使用的快速检测方法,用于对蚊虫携带登革病毒的初步筛查.[方法]采用双抗体夹心技术,建立上转换发光(UCP)免疫层析方法,筛查蚊体携带的登革病毒.[结果]该方法能在15min内对蚊虫携带的登革病毒进行快速筛查.[结论]建立的免疫层析方法简便、快速、敏感、特异,适合卫生检疫工作现场使用.
关键词： 蚊 登革病毒 免疫层析 上转换发光(UCP) -
胶体金免疫层析法检测水产品中O1群霍乱弧菌方法的建立与优化
[目的] 研究了O1群霍乱弧菌免疫层析试纸的制备方法,通过对试纸材料的处理达到优化胶体金免疫层析体系的目的.[方法] 建立了快速检测食品中O1群霍乱弧菌的胶体金免疫层析方法,并应用该方法对弧菌属、假单胞菌属及其他常见肠道致病菌,共29株进行检测,同时对180份水产品进行了样品添加试验,并用<出口食品中霍乱弧菌检验方法))(SN/T1022-2001)进行确证,全面评估了该方法的灵敏度、特异性、准确性等.[结果] 该方法检测食品中O1群霍乱弧菌的灵敏度为105cfu/ml,与食品中常见的致病菌无交叉反应.该方法检测水产品中O1群霍乱弧菌的假阳性率为6.25%.[结论] 该方法操作简便,灵敏度高,特异性强,准确性高,适用于食品的快速检测.
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利用胶体金免疫层析技术快速定量检测单增李斯特菌方法的建立
[目的]建立胶体金免疫层析技术快速定量检测单增李斯特菌方法.[方法]利用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析技术,建立单增李斯特菌的快速检测方法,评价其特异性和敏感性,并拟合标准曲线进行定量检测;在牛奶、橙汁、果冻等即食食品样品中添加单增李斯特菌模拟污染样品,评价该方法对半固体、液体等即食食品、可疑生物恐怖样品的检测能力.[结果]该法可在10min内完成定性和半定量检测,定量检测灵敏度为3.5×103cfu/ml,线性范围3.5×105～3.5×108cfu/ml,回收率在99%~101.7%之间.[结论]建立的检测单增李斯特菌的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地对样品中的单增李斯特菌进行定性、定量检测.
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快速检测大肠埃希菌O157:H7免疫层析试纸条的研制
目的 建立一种快速、特异性强、方法简便和经济实用的检测大肠埃希菌O157:H7的免疫学方法. 方法 微波炉法制备胶体金,自制的大肠埃希菌O157:H7多克隆抗体包被胶体金制备探针,通过免疫渗滤法检测大肠埃希菌O157:H7. 结果 制备的胶体金颗粒均一、稳定性好,此法检测的灵敏度为3.1×106CFU/ml,特异性强,假阳性率为2.5%,检测时间只需3～5 min. 结论 该方法简单、快速,无需特殊的仪器设备,适合现场检测之用.
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磁性荧光纳米颗粒标记免疫层析技术检测副溶血性弧菌热稳定直接溶血素的试验研究
目的 通过抗体与标记的磁性荧光纳米颗粒相结合的免疫层析技术,建立一种快速检测产热稳定直接溶血素(TDH)副溶血性弧菌的方法.方法 构建产TDH副溶血性弧菌基因片段并进行扩增,扩增产物与质粒载体(pET-28a)连接,并在大肠埃希菌中表达,制备抗体.抗体与标记的磁性荧光纳米颗粒偶联后,制成免疫层析检测试纸条.将混有不同浓度标准菌株样品和阴性对照样品分别与荧光纳米颗粒-单抗偶联物和试纸条共同反应5min,紫外光下肉眼观察结果.对试验的敏感性、特异性、重复性进行测试并进行样品模拟试验.结果 重组质粒载体在大肠埃希菌B L21(DE3)可稳定高效地表达分子量为26 kD的可溶形式的目的蛋白,并实现了单克隆抗体与磁性荧光颗粒很好的偶联,所得偶联物与低浓度10 CFU/ml阳性菌株反应,阴性对照菌株无反应.结论 试验制备的产TDH副溶血性弧菌毒力基因表达产物与磁性荧光纳米颗粒有机结合,检测操作过程简单,具有灵敏度高、特异性强、重复性好和检测时间短等特点.
关键词： 副溶血性弧菌 热稳定直接溶血素 荧光纳米颗粒标记技术 免疫层析 检测 -
胶体金免疫层析技术快速定量检测金黄色葡萄球菌肠毒素B
目的 建立胶体全免疫层析技术快速定量检测金黄色葡萄球菌肠毒素B的方法.方法 利用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析技术,建立金黄色葡萄球茵肠毒素B的快速检测方法,评价其特异性和敏感性,并拟合检测曲线进行定量检测;在牛奶样品中添加金黄色葡萄球茵肠毒素B作为模拟污染样品进行检测.结果 该法可在5～10 min内完成定性和半定量检测,检出限为8 ng/ml,线性范围8～1000 ng/ml.结论 建立的检测金黄色葡萄球菌肠毒素B的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的金黄色葡萄球菌肠毒素B,并可实现定量,适用于现场快速检测.
关键词： 金黄色葡萄球菌肠毒素B 胶体金 免疫层析 双抗体夹心 -
鼠疫菌免疫胶体金快速检测方法的建立
目的利用免疫胶体金技术建立一种简便、快速并适用于基层人员使用的鼠疫菌抗原检测方法.方法将抗鼠疫菌F1抗原的抗体致敏硝酸纤维素膜,用于捕获鼠疫抗原,然后用免疫胶体金颗粒进行标记.结果应用鼠疫菌免疫胶体金快速检测法低可检出不同鼠疫菌(EV和Evp株)1.56×105 CFU/ml,检测鼠疫菌F1抗原低可检出1 ng/m1,与鼠疫反向间接血凝法的检测结果一致;并且不与假结核小肠结肠炎等耶尔森菌以及其他相关细菌发生交叉反应.结论鼠疫菌免疫胶体金快速检测法具有较好的特异性、敏感性和简便快速的特点.
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基于上转发光免疫层析技术的鼠疫耶尔森菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌快速检测方法研究与对比评价
目的 研制基于上转发光免疫层析技术(UPT-LF)检测鼠疫耶尔森菌(简称鼠疫菌)、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的试纸,与BioThreat Alert(R)免疫层析(BTA)试纸的检测和操作性能进行对比.方法 以上转发光纳米颗粒作为生物示踪物,采用双抗体夹心模式分别研制检测鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的UPT-LF试纸.分别配制1010、109、108、107、106、105、0 CFU/ml系列浓度的鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌标准品以及109 CFU/ml系列浓度的27种特异性评价菌株菌液,采用UPT-LF试纸对其进行检测,对3种UPT-LF试纸的敏感性、精密性、线性和特异性进行分析评价.配制模拟阳性样品,分别采用UPT-LF和BTA试纸对107、106、105、0 CFU/ml系列浓度的标准品以及模拟阳性样品进行检测,比较UPT-LF和BTA试纸的检测时间、敏感性以及鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的检出率.结果 鼠疫菌UPT-LF、炭疽杆菌芽孢UPT-LF、布鲁菌UPT-LF试纸的敏感性均达到105 CFU/ml,各系列浓度检测带信号/质控带信号(T/C)值的变异系数均≤15％,lg[T/C值-临界值(cut-off值)]与lg(标准品浓度)的相关系数分别为0.996、0.998、0.999(F=1 647.57、743.51、1 822.17,P值均＜0.001).鼠疫菌UPT-LF和布鲁菌UPT-LF试纸检测特异性评价菌株时,均无非特异性交叉反应,炭疽杆菌芽孢UPT-LF试纸检测枯草芽孢杆菌分离株2#芽孢、蜡样芽孢杆菌分离株l#芽孢存在非特异交叉反应,检测其他特异性评价菌株均无非特异性交叉反应.UPT-LF试纸检测鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌样品的时间分别为33、36、37 min,BTA为115、115、111 min;UPT-LF和BTA试纸检测0 CFU/ml标准品的阴性率均为5/5;UPT-LF试纸检测炭疽杆菌芽孢、鼠疫菌、布鲁菌的敏感性均达到l05 CFU/ml,BTA试纸分别为106、106、105 CFU/ml;模拟样品检测中,UPT-LF试纸炭疽杆菌芽孢、鼠疫菌、布鲁菌的检出率均为16/16,BTA试纸分别为7/16、16/16、16/16.结论 UPT-LF试纸检测鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的敏感性较高,特异性、线性和精密性较佳,检测和操作性能较BTA试纸更为优良.
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荧光微球免疫层析技术定量检测降钙素原方法的建立及性能评估
目的 建立一种能够定量检测人降钙素原的荧光微球免疫层析方法,用于诊断细菌感染,并对试纸条进行性能评估.方法 采用荧光微球标记技术与免疫层析技术相结合的方式,依据双抗体夹心原理,制备降钙素原荧光微球免疫层析试纸条;并从灵敏度、特异性、抗干扰性、精密度、回收率、稳定性以及与Roche试剂盒的符合率等方面进行全面的方法学评价.结果 试纸条的灵敏度为0.05 ng/mL;具有高的特异性和抗干扰性;批间和批内变异系数均<10.93%;回收率在95%~105%;试剂盒的有效期>12个月;且与Roche降钙素原试剂盒(电化学发光法)的相关性良好,回归方程为Y=0.8709X+0.8549,r=0.9519.结论 PCT荧光微球免疫层析试纸条能够实现定量、灵敏、准确检测,满足临床检测PCT的需求.
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胶体金免疫层析法检测血清癌胚抗原
建立一种快速、简易的检测血清中癌胚抗原(CEA)的胶体金免疫层析法(GICA).采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒, 标记抗CEA单克隆抗体4A3.将单克隆抗体3B5划线包被于硝酸纤维素膜上, 制成免疫层析检测试纸条.血清中CEA与试纸条上胶体金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动, 与膜上的包被抗体结合形成肉眼可见的红色线条.用GICA与ELISA试剂盒对比检测了637份血清标本, 其灵敏度为96.69%, 特异性为99.38%, 两法符合率为98.74%.GICA检测血清中的CEA特异性强、灵敏度高、简便快速, 无需特殊仪器设备, 有广泛应用价值.
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即时、定量黄曲霉毒素M1荧光淬灭免疫层析检测法建立和评价
目的 利用原创性荧光淬灭免疫层析技术进行黄曲霉毒素M1 (AFMl)快速、定量检测方法的探索.方法 对原创性AFM1检测试纸条从灵敏度、重复性与准确性方面进行性能验证,同酶联免疫吸附法原理的AFM1检测试剂进行比对研究.结果 荧光淬灭免疫层析AFM1检测试纸条低检测下限为0.075ng/mL,批内变异系数≤7.3％,回收率为65.8％ ～94.1％.AFM1荧光淬灭免疫层析检测试纸条与酶联免疫法检测试剂具有良好的相关性(R2=0.9659).结论 荧光淬灭免疫层析AFM1检测试纸条可灵敏、准确、定量检测牛乳中的AFM1.
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上转换荧光材料的化学修饰及在免疫检测的应用
上转换纳米材料是近年来发展起来的新兴稀土荧光材料。在近红外光的激发下可将其转变成可见光这一光学特性，使其具有抗光漂白能力强、宽的反斯托克斯位移、低毒性以及无自体荧光干扰等优点，在免疫检测中可提高灵敏度和信噪比。上转换稀土纳米颗粒水溶性和分散性较差，因此要通过化学修饰成水溶性和分散性较好的上转换稀土颗粒，以进一步与生物分子偶联。本文主要在合成上转换纳米颗粒的基础上，对化学修饰的方法及荧光共振能量传递机制、基于磁分离富集的免疫检测技术、固相微孔板荧光标记技术、免疫传感技术和免疫层析技术的应用研究做一综述。上转换技术的成功应用解决了传统的纳米材料应用中低灵敏度的问题，在医学检测领域具有很大的应用潜力。
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胶体金免疫层析法在检测粪便血红蛋白中的应用
胶体金免疫层析技术是把免疫层析技术与胶体金标记技术结合而建立的一种新的免疫学方法,具有灵敏度高,特异性强,简便、快速等特点,有广阔的应用前景.本文就胶体金免疫层析技术的基本原理及其在检测粪便血红蛋白中的应用进行综述.
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布鲁氏菌抗体胶体金免疫层析法快速检测技术的建立
目的 建立一种快速检测布鲁氏菌抗体的新方法. 方法 利用胶体金免疫层析技术,以大肠埃希菌表达、纯化的OMP31与BP26重组蛋白作为检测抗原,以金黄葡萄球菌A蛋白(SPA)作为胶体金标记物,制备胶体金免疫层析试纸条,用于检测布鲁氏菌抗体,并分析方法的敏感性和特异性. 结果 以粒径为40 nm胶体金制备的试纸条检测布鲁氏菌抗体的敏感性高,胶体金佳标记pH为6.2,SPA蛋白适标记量为6μg/ml.交叉试验证明试纸条不与其他非相关疾病感染血清反应,特异性高.试纸条检测结果与琥红平板试验方法的符合率为92％. 结论 制备的布鲁氏菌抗体胶体金免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,可用于鉴别布鲁氏菌自然感染和人工免疫,并可区分牛、羊种布鲁氏菌感染,可在基层推广使用.
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伯氏疏螺旋体外膜蛋白OspA胶体金免疫层析法快速检测技术的建立
目的 建立一种快速诊断莱姆病螺旋体的胶体金免疫层析试纸条检测方法.方法 以莱姆病伯氏疏螺旋体标准株B31 DNA为模板,PCR扩增OspA基因,构建重组质粒pET-30a-OspA,以IPTG诱导原核表达并用亲和层析方法对重组蛋白OspA进行纯化;用柠檬酸钠还原法以OspA作为检测线,优化试纸条制备条件,制备莱姆病诊断试纸条,检测其特异性和敏感性;用该方法对20份绵羊血清进行检测,并用WB验证结果的准确性.结果 构建了外膜基因OspA的原核表达体系,获得高纯度的OspA蛋白;用40 nm金颗粒制备的莱姆病胶体金试纸条,适胶体金标记pH值为6.2,SPA蛋白的佳标记量是6μg/ml,该蛋白不与布鲁氏菌、大肠杆菌等阳性血清反应,能重复多次与莱姆病阳性血清特异性反应.用该方法检测20份动物血清样品2份阳性(10％),与WB结果一致.结论 以纯化的OspA蛋白为包被抗原制备的免疫层析试纸条特异性强,敏感性高,与WB验证结果符合率高,且具有准确、快速、方便的优点,可用于临床样品的检测.
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用金标免疫层析法对恶性肿瘤患者弓形虫感染的调查
用金标免疫层析法检测临床多种恶性肿瘤1 206例,弓形虫抗体阳性率为6.72%(81/1206),健康体检者852例,阳性率为2.82%(24/852),差异有显著性( P ＜0.01),表明恶性肿瘤患者有继发弓形虫病的高度危险.
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基于CCD的胶体金免疫层析检测设备的设计
研制开发了一套用于细胞毒素相关基因A定量检测的胶体金免疫层析试纸条检测设备.该设备由硬件部分和软件系统两部分组成.硬件系统主要用于胶体金免疫层析试纸条图像的采集,而软件系统则实现了人机的交互.检测设备利用CCD(电荷耦合器件)图像传感器件采集试纸条图像,并传输至PC模块.然后,软件系统利用算法对其进行数据分析和结果诊断.软件系统主要采用了基于HSI色彩空间的移动k-均值图像分割算法,该算法实现了胶体金免疫层析试纸条图像的有效分割,完成了定量检测.本研究用10个不同浓度的胶体金免疫层析试纸条进行检测,绘制出定量曲线.还分别检测了50个阴性和50个阳性的细胞毒素相关基因A实验样品,检测结果显示特异性和灵敏度均为100％,证明了该设备的可靠性.
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HIV抗体纳米免疫磁珠快速检测试剂的研制
目的 研制一种用纳米免疫磁珠层析技术用以检测HIV抗体的快速诊断试剂.方法 运用碳二亚(EDC)将重组的HIV抗原gp41、gp36偶联到200 nm的超顺磁纳米颗粒上,在硝酸纤维素(NC)膜上包被gp41、gp36抗原,制备成免疫层析检测卡,然后对检测卡进行性能分析评估.结果 对HIV抗体国家参考品血清盘(胶体金类)检测,符合要求;对20份HIV抗体阳性和600份抗体阴性临床血清检测,灵敏度为100%,特异性为98.5%.检测卡室温保存12个月性能稳定.结论 研制出一种纳米免疫磁珠HIV抗体检测试剂,具有检测简便、快速、稳定性好和适于现场检测等特点.
