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舟山海岛急性腹泻患者病原性弧菌监测分析
急性腹泻是由多种病原菌引起的以腹泻为主要临床表现的一组肠道传染病.舟山地处海岛,居民有生或半生食某些海产品的习惯,病原性弧菌是引起海岛居民急性腹泻和食物中毒的主要病种,发病多、流行面广、危害严重.查明病原性弧菌分布及构成特点,对制订有效的防治对策具有重要意义.
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采用脉冲场凝胶电泳和自动化核糖体分型技术分析MPN法分离出的副溶血性弧菌的同源性
目的 对15管MPN法分离的78株副溶血性弧菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)和自动化核糖体分型(RP)研究,以确定其同源性.方法 EcoR I酶切DNA进行核糖体分型;限制性内切酶Sfi I和Not I在50℃和37℃酶切包被的染色体DNA,进行脉冲场凝胶电泳分析,两者的结果均用BioNumerics软件进行聚类分析.结果 78株副溶血性弧菌用EcoR I、Sfi I、Not I酶切后各产生64、68、71种带型,同一样品中分离的菌株有的带型完全相同,但大部分带型不同,且划分到不同的群中.结论 PFGE是一种快速、有力、重复性好的分型技术,而且分辨能力要高于核糖体分型;在今后的溯源研究中,要考虑对可疑食品采用MPN定量法挑取多个菌落进行亲缘关系分析,防止漏检.
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丹东口岸国境外环境水体中检出O139群霍乱弧菌
[目的] 对丹东口岸中朝界河(鸭绿江)水体进行霍乱监测,从而了解丹东口岸国境外环境水体被霍乱弧菌污染情况.[方法] 对可疑菌落作霍乱O1群、O139群血清玻片凝集试验和聚合酶链式反应(PCR)检测,对凝集菌落和PCR扩增阳性的菌落作进一步的生化试验.[结果] 终鉴定出1株O139霍乱弧菌.[结论] 鸭绿江水体已被O139霍乱弧菌污染,出入境检验检疫部门应加强对江水的监测和进口水产品的检验工作.
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2001年某口岸地区霍乱流行病学分析
[目的]进一步做好霍乱的防治工作.[方法]对2001年珠海口岸地区霍乱疫源检索和发病情况进行分析.[结果]在13批11种水产品中检出O1群小川型霍乱弧菌11株、稻叶型霍乱弧茵5株;发现6例本地染疫的霍乱病人.[结论]2001年霍乱弧菌严重污染了某口岸地区的水体、水产品,霍乱疫情呈散发流行,采取有效的预防措施,可大大降低罹患霍乱的危险.
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从图们江水中分离出2株不凝集弧菌的报告
[目的)对国境口岸水域进行霍乱监测,防止传染病的传入.[方法]从图们江沿线6个监测点采集水样15份进行增菌培养;选择可疑菌落进行分离培养,糖发酵、霍乱弧菌血清凝集试验和生化反应试验.[结果]检出弗尼斯弧菌1株,辛辛那提弧菌2株.[结论] 图们江水体有弧菌污染,有适合霍乱弧菌存在和繁殖的条件,出入境检验检疫机关应加强对霍乱弧菌和不凝集弧菌的监测工作.
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提高霍乱弧菌检出率方法的探讨
[目的]提高霍乱弧菌的检出率,防止霍乱从国外传人.[方法]对来自东南亚霍乱流行区的入境活体水产品2817份进行了霍乱监测.并对提高阳性检出率的技术方法进行了研究.[结果]共检出霍乱弧菌8株,其中O1群的小川型和稻叶型霍乱弧菌各1株;O(139)群霍乱弧菌6株.在不同的分离培养基上霍乱弧菌的阳性检出率不同,庆大霉素培养基上霍乱弧菌阳性检出率为0.284％,在4号培养基上霍乱弧菌阳性检出率为0.231％.[结论]要提高霍乱弧菌的阳性检出率,应注意采样和检验过程中的技术和方法：采样要具有代表性,注意取材部位;分离培养基的选择十分重要,要严格控制增菌时间和pH值.
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1株致病性弧菌的分离鉴定
[目的]对鱿鱼中检出的1株致病性弧菌进行分离鉴定.[方法]采用镜检、生化反应、血清学凝集试验、仪器分析等方法进行.(结果]仪器分析结果为溶藻弧菌,实际鉴定结果为非O%1群霍乱弧菌.[结论]随着全自动微生物鉴定分析系统的广泛应用,自动化程度愈来愈高,在对细菌鉴定结果做报告时,还应结合该菌所具有的形态学特征、生化反应及血清学试验等结果综合判定.
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温州口岸外环境水体中致病性弧菌的监测
[目的]了解温州口岸外环境水体中致病性弧菌的分布情况,为预测霍乱疫情以及制定防治策略和措施提供科学依据.[方法]收集口岸内有代表性的外环境水样(包括淡水、沿海水域、下水道排放口和集中式供水网点),进行弧菌科的分离鉴定,并对调查资料进行统计分析.[结果](1)96份样品中55份检出了弧菌科,总检出率为57.3%.检出弧菌共分2属7种85株,其中弧菌属68株(80%);气单胞菌属17株(20%);优势菌为溶藻弧菌、河流弧菌和创伤弧菌.(2)4类外环境水样中弧菌检出率由高到低顺序为:淡水、海域水、下水道排放口、集中式供水网点,其中集中式供水网点无致病性弧菌检出.淡水、海域水、下水道排放口3类水的检出率和构成比之间差异无显著性(P检出率=0.37,P构成比=0.99);(3)6个月中,共检出2株非O1、非O139群霍乱弧菌.[结论]在温州口岸外环境水体中未检出所监测的O1群O139群霍乱弧菌,但检出了非O1/非O139群霍乱弧菌.
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广州机场口岸进口水产品霍乱监测结果分析及风险评估
[目的]调查广州机场进口食用鲜活水产品霍乱弧菌携带情况,防止霍乱弧菌通过水产品传入,保障人体健康.[方法]对1999～2000年由机场进口的水产品进行霍乱弧菌监测检验,并对结果及风险性进行分析.[结果]共抽检进口水产品样品4020份,检出霍乱弧菌8株,检出率为0.20％.以泰国进口的水产品检出率较高为0.82％,其次为印尼(0.47％)和马来西亚(0.14％).主要菌型为O(139)群霍乱弧菌(6／8).[结论]进口水产品霍乱弧菌阳性率为0.20％,个别国家的水产品检出率更高为0.82％,说明进口水产品存在传入霍乱弧菌的危险.
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拱北口岸出口水产品霍乱弧菌监测报告
[目的]2000年对拱北口岸出口水产品污染霍乱弧菌情况进行监测.[方法]共采集出口澳门水产品9255份,按《霍乱防治手册》方法进行检验.[结果]检出22株霍乱弧菌,其中小川型10株,稻叶型8株,O(139)群4株.[结论]拱北口岸出口水产品霍乱弧菌检出率为0.24％,比去年同期检出率0.04％(4／9166)明显增高.
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改良方法检验冷冻海产品中副溶血性弧菌
[目的]建立一种有效、可靠的方法检验冷冻海产品中副溶血性弧菌,弥补传统法的局限.[方法]用改进碱性胨水(MAPW)和盐结晶紫增菌液(SVPE)同时对5种冷冻海产品50份样进行增菌后,分别接种至科玛嘉弧菌显色培养基(CV)和硫代硫酸钠柠檬酸胆盐蔗糖培养基(TCBS),以评估2种增菌液和2种分离培养基的效果;随机选取改良方法检出的10个分离株,用PCR技术扩增副溶血性弧菌特有tl基因,以认证改良方法的准确性.[结果]当采用改良方法,即MAPW增菌CV分离时,检出率为100%;当采用传统法即SVPE增菌TCBS分离时,检出率为60%-80%;用PCR技术在所选取的10个分离株中都扩增出了tl基因.[结论]改良方法是一种高效、准确的检验方法.
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应用胶体金免疫层析法检测水产品中霍乱弧菌的研究
[目的] 应用胶体金免疫层析法,研究水产品中霍乱弧菌的快速检测方法.[方法] 通过模拟水产品棉拭子标本比对试验及现场应用比对试验,比较不同检验方法的差异.[结果] 70份增菌液中霍乱弧菌理论浓度为1.5×10CFU/ml的模拟水产品棉拭子标本分别按检验方法1、检验方法2检验,同时检出阳性51份,检验方法2的检出率(87%)显著高于检验方法1的检出率(74%);30份增菌液中霍乱弧菌理论浓度为1.5×101CFU/ml的"模拟水产品棉拭子标本"按检验方法2进行检验的检测结果均为阳性.对2 000份水产品进行检测的现场应用对照实验结果显示:检验方法3的检出率(0.4%)与检验方法1的检出率(0.3%)差异无显著性;胶体金试纸条实验的假阳性率为8%.[结论] 在胶体金免疫层析法实验中,增菌液增菌前霍乱弧菌含量为1CFU/ml,通过增菌后可被检出;增菌液霍乱弧菌含量为10CFU/ml,增菌12h后均可被检出;水产品棉拭子标本增菌12h检测阴性者可报告阴性,阳性者则参照<霍乱防治手册>[1]进一步分离鉴定.鱼贝类霍乱弧菌污染菌数较少(103CFU/100g以下)[2],无法满足使用胶体金免疫层析法所要求的含菌量(106CFU/ml)[3],可以通过改良增菌培养液成分,以提高待检菌繁殖能力,在短时间内提高增菌液待检菌浓度,使胶体金免疫层析法的灵敏性高于或接近常规的分离鉴定法.
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霍乱弧菌在2种不同增菌液中增菌效果的研究
[目的]了解霍乱弧菌在不同的增菌液中增菌效果.[方法]配制"模拟水产品棉拭子标本",在不同增菌液中增菌后进行胶体金试条检测及参照《霍乱防治手册》中的方法进行分离鉴定.[结果]在庆大琼脂上挑取典型菌落进行血清凝集,经增菌液2增菌的霍乱弧菌凝集菌株数均高于经增菌液1增菌的凝集菌株数;在胶体金试纸条试验中,霍乱弧菌在增菌液2中增菌6h开始出现阳性,增菌12h后均出现阳性;在增菌液1中增菌8h开始出现阳性,增菌12h部分未出现阳性.[结论]在增菌液2增菌后划线庆大琼脂较容易分离出霍乱弧菌;在胶体金试纸条试验中增菌液2增菌效果较好.这可能与增菌液2含有促进霍乱弧菌生长的物质及抑制杂菌生长的物质,以及胶体金试纸条不仅能检测活菌,还能检测死菌等有关.可以选择增菌12～14h进行胶体金试纸条试验.
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一种海马肠道疾病病原体的鉴定及其对抗生素的敏感性研究
[目的]研究海马致病病原体,筛选不同用途海马的高效病害治疗物,促进我国海马养殖的发展.[方法]室外采集标本分离患病海马病原体,从患病海马体内分离到3株菌株,用分离菌株的纯培养物感染健康海马.[结果]48h内实验海马发病,其临床症状与原患病海马相似,经形态学、生化和室内感染试验鉴定为副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus).药敏试验表明,所分离菌株对链霉素、利副平、卡那霉素、环丙沙星、氟派酸、四环素、复达欣、菌必治、奈定酸等抗菌药表现为高敏感性;对红霉素、新霉素、先锋霉素Ⅵ、强力霉素、新生霉素、头孢呋肟、呋喃妥因等药物敏感性较高;对氨苄青霉素、羟苄青霉素、头孢氨苄、林可霉素等药物敏感性较差.[结论]弧菌对海马的致病性作用很明显,但不同的情况下表现不同.不同的药物对弧菌的作用不同,而不同用途的海马其所用药物也不尽相同.
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实时荧光RT-PCR方法检测水及水产品中霍乱弧菌
[目的]探索实时荧光RT-PCR方法在霍乱弧菌检验方面是否比传统方法有优势.[方法]用深圳太太基因工程有限公司提供的霍乱弧菌实时荧光RT-PCR试剂盒方法进行检验.[结果]用实时荧光RT-PCR方法从样品的2次增菌液中检出2个样品为霍乱弧菌通用型阳性.用传统的微生物生理、生化培养法,从上述2个样品中分离出3株菌株.根据血清分型、API鉴定和荧光RT-PCR,确认所分离的菌株有2株是国际检疫传染病的病原-O1群霍乱弧菌;1株是非O1/非O139群霍乱弧菌.[结论]实时荧光RT-PCR方法在霍乱弧菌的检验方面具有快速、灵敏、特异性强等优势,有利于提高霍乱弧菌的检出率.
关键词： 弧菌 霍乱 实时荧光RT-PCR API鉴定 -
胶体金免疫层析法检测水产品中O1群霍乱弧菌方法的建立与优化
[目的] 研究了O1群霍乱弧菌免疫层析试纸的制备方法,通过对试纸材料的处理达到优化胶体金免疫层析体系的目的.[方法] 建立了快速检测食品中O1群霍乱弧菌的胶体金免疫层析方法,并应用该方法对弧菌属、假单胞菌属及其他常见肠道致病菌,共29株进行检测,同时对180份水产品进行了样品添加试验,并用<出口食品中霍乱弧菌检验方法))(SN/T1022-2001)进行确证,全面评估了该方法的灵敏度、特异性、准确性等.[结果] 该方法检测食品中O1群霍乱弧菌的灵敏度为105cfu/ml,与食品中常见的致病菌无交叉反应.该方法检测水产品中O1群霍乱弧菌的假阳性率为6.25%.[结论] 该方法操作简便,灵敏度高,特异性强,准确性高,适用于食品的快速检测.
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胶体金试纸条实验中pH值与氯化钠浓度对霍乱弧菌生长的影响
[目的]了解适合胶体金试纸条检测的霍乱弧菌生长的条件.[方法]对霍乱弧菌在不同pH值及不同氯化钠(NaCl)含量增菌液中增菌后的胶体金试纸条检测情况进行实验.[结果]碱性蛋白胨水与缓冲碱性蛋白胨水的检测结果一致,pH8.5增菌液与pH9.0增菌液的检测结果一致;质量分数为0.5%的NaCl各种增菌液均为阳性;质量分数为3.0%的NaCl各种增菌液均为阴性;质量分数为2.0%的NaCl加入"霍乱弧菌备用菌液"的增菌液为阳性,质量分数为2.0%的NaCl加入"霍乱弧菌备用菌液"及"杂菌备用菌液"的增菌液为阴性.[结论]增菌12h pH值的变化对霍乱弧菌生长无影响;霍乱弧菌在pH8.5与pH9.0中增菌后检测结果一致;质量分数为0.5%的NaCl增菌液较适合霍乱弧菌生长,杂菌对霍乱弧菌生长有抑制作用.
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水产品中致病性弧菌PCR快速检测研究
[目的]建立一种快速、准确、特异的方法,快速检测和鉴定出食品中的非致病性和致病性霍乱弧菌与副溶血性弧菌.[方法]针对霍乱弧菌的种特异性基因ompW、毒力基因tcpA、ctxA和副溶血性弧菌的种特异性基因tl、毒力基因tdh设计引物,建立PCR检测体系.[结果]检测结果显示,该方法能够特异性检出副溶血性弧菌或霍乱弧菌,并进一步确定其是否携带tdh、tcpA或ctxA毒力基因,检测的灵敏度可达到5×10(1)cfu/ml菌浓度.[结论]与传统方法比较,该方法快速、特异、灵敏,能在较短时间内对大量水产品样品进行检测.
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水产品中致病性弧菌PCR快速检测研究
[目的]建立一种快速、准确、特异的方法,快速检测和鉴定出食品中的非致病性和致病性霍乱弧菌与副溶血性弧菌.[方法]针对霍乱弧菌的种特异性基因ompW、毒力基因tcpA、ctxA和副溶血性弧菌的种特异性基因tl、毒力基因tdh设计引物,建立PCR检测体系.[结果]检测结果显示,该方法能够特异性检出副溶血性弧菌或霍乱弧菌,并进一步确定其是否携带tdh、tcpA或ctxA毒力基因,检测的灵敏度可达到5×10(1)cfu/ml菌浓度.[结论]与传统方法比较,该方法快速、特异、灵敏,能在较短时间内对大量水产品样品进行检测.
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水产品中致病性弧菌PCR快速检测研究
[目的]建立一种快速、准确、特异的方法,快速检测和鉴定出食品中的非致病性和致病性霍乱弧菌与副溶血性弧菌.[方法]针对霍乱弧菌的种特异性基因ompW、毒力基因tcpA、ctxA和副溶血性弧菌的种特异性基因tl、毒力基因tdh设计引物,建立PCR检测体系.[结果]检测结果显示,该方法能够特异性检出副溶血性弧菌或霍乱弧菌,并进一步确定其是否携带tdh、tcpA或ctxA毒力基因,检测的灵敏度可达到5×10(1)cfu/ml菌浓度.[结论]与传统方法比较,该方法快速、特异、灵敏,能在较短时间内对大量水产品样品进行检测.
