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抗黄曲霉毒素M1的单克隆抗体细胞株的建立
本研究建立了抗黄曲霉毒素AFM1的单克隆抗体细胞株.用AFM1-肟-牛血清白蛋白(AFM1-oxime-BSA)偶联物免疫Ba1b/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,经3～4次亚克隆建立了3个稳定分泌抗黄曲霉毒素M1抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3G2,3G3,6G8.3株抗体均属IgG1亚类.培养上清液的稀释度为1:2 000～1:12 800,腹水的抗体稀释度为1:3.2×106～1:20×107,参考工作稀释度为1:1×106～1:2.5×106.3G3和6G8抗体的IgG含量分别为0.8和1.43 g/L,亲和常数分别为5.438和4.369.6G8抗体与其它类型黄曲霉毒素均无交叉反应.
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黄曲霉毒素M1研究进展
黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化衍生物,为天然存在的I类致癌物(即人类致癌物),以乳及乳制品的污染为常见,具有很强的肝脏毒性和致畸性,被国际癌症研究机构列为I类致癌物.因此膳食暴露黄曲霉毒素M1与人类健康的关系越来越引起人们的重视.本文就黄曲霉毒素M1的理化性质、对食品的污染、毒性和风险评估等诸多方面进行综述.
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我国乳与乳制品中黄曲霉毒素M1的限量标准适宜性分析及居民膳食暴露风险评估
目的 对中国乳与乳制品中黄曲霉毒素M1(AFM1)的限量标准适宜性和居民通过AFM1超标液体乳暴露AFM1对健康影响的风险进行评估.方法 利用中国现行乳及乳制品中AFM1限量标准、乳及乳制品中AFM1污染水平数据及2002年中国居民营养与健康状况调查数据,对中国现行乳及乳制品中AFM1限量标准的适宜性进行分析,同时用确定性评估方法,对国家抽检液体纯乳中含有的AFM1对人群健康的影响进行初步风险评估.结果 理论假设市售所有乳及乳制品中AFM1的含量均达到我国限量标准0.5 μg/kg,中国全人群终身食用含该水平AFM1的乳及乳制品而暴露AFM1的平均水平为每日每公斤体重0.20 ng.在中国乙肝病毒携带率为7.18％的情况下,每年增加的肝癌发病风险为每10万人新增0.000 62个癌症患者.若全人群终身饮用国家质检总局公布含AFM11.2 μg/kg的超标液体乳,则摄入AFM1的平均水平为每日每公斤体重0.43 ng,每年增加的肝癌发病风险为每10万人新增0.001 33个癌症患者.结论 中国现行的乳及乳制品中0.5 μg/kg的AFM1限量标准可以充分保护人群健康；当乳及乳制品中AFM1的含量为1.2 μg/kg时,虽然短期摄入该类食品所增加的肝癌发病风险处于可接受水平,但政府部门应及时采取有效的监管措施,以降低长期暴露对健康影响的风险.
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超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中的黄曲霉毒素M1
目的 建立超高效液相色谱-串联质谱测定牛奶中黄曲霉毒素M1的方法.方法 采用Acquityuplc BEH C18液相色谱柱(50mm×2.1 mm,1.7 μm),梯度洗脱,多反应监测(MRM).通过黄曲霉毒素M1与免疫亲和柱中抗体结合,确定了从牛奶中提取黄曲霉毒素M1的处理条件并优化了质谱的测定参数.结果 黄曲霉毒素M1在0.1～10.0 ng/ml的范围内线性良好,其回归标准曲线方程的相关系数为0.997 8,回收率94.8％～ 98.2％,RSD为2.34％ ～3.87％,方法定量限为0.005 μg/kg.结论 提供了一种有效检测牛奶中黄曲霉毒素M1的方法.
关键词： 牛奶 黄曲霉毒素M1 超高效液相色谱-串联质谱 食品污染物 检测方法 -
HPLC法测定乳制品中的黄曲霉毒素M1
目的 建立孔制品中黄曲霉毒素M1的HPLC的检测方法.方法 样品经提取、过免疫亲和柱净化后,用高效液相色谱-荧光检测器进行分析.结果 黄曲霉毒素M1在0.1～1 μg/L范围内线性关系良好,γ＞0.999.回收率在90%～110%之间,定量限为5 pg,检测限为2 pg.结论 该方法快速、简便、准确,改善了现有国标GB/T18980-2003操作繁琐,测定结果易受操作影响的缺点.可作为乳制品中黄曲霉毒素M1的定量测定.
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乳及乳制品中黄曲霉毒素M1污染及检测技术研究进展
乳及乳制品中的黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化衍生物,对肝脏有致畸和致癌作用.随着人们生活水平的提高,乳及乳制品中黄曲霉毒素M1污染也引起越来越多的关注.本文从不同品种、季节及地域分析乳及乳制品中黄曲霉毒素M1污染水平,并综述了液相色谱法和免疫法的检测技术研究进展.
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部分国家母乳中黄曲霉毒素M1的污染状况
为了解母乳中黄曲霉毒素M1的污染状况,并为控制我国母乳中黄曲霉毒素M1的污染和降低对婴幼儿的危害提供借鉴和依据,本文从研究对象及采样、污染状况、时健康的影响等方面进行了综述.
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即时、定量黄曲霉毒素M1荧光淬灭免疫层析检测法建立和评价
目的 利用原创性荧光淬灭免疫层析技术进行黄曲霉毒素M1 (AFMl)快速、定量检测方法的探索.方法 对原创性AFM1检测试纸条从灵敏度、重复性与准确性方面进行性能验证,同酶联免疫吸附法原理的AFM1检测试剂进行比对研究.结果 荧光淬灭免疫层析AFM1检测试纸条低检测下限为0.075ng/mL,批内变异系数≤7.3％,回收率为65.8％ ～94.1％.AFM1荧光淬灭免疫层析检测试纸条与酶联免疫法检测试剂具有良好的相关性(R2=0.9659).结论 荧光淬灭免疫层析AFM1检测试纸条可灵敏、准确、定量检测牛乳中的AFM1.
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基于上转发光技术的奶粉及牛奶中黄曲霉毒素M1快速定量检测方法研究
目的：利用上转发光免疫层析技术（ AFM1-UPT-LF）建立奶粉及牛奶中黄曲霉毒素M1的快速检测方法。方法以UCP颗粒作为标记物，无需样品前处理，采用竞争免疫反应建立AFM1-UPT-LF方法。以AFM1阴性的奶粉、牛奶配制系列浓度AFM1标准品，确定检测方法的灵敏度、特异性、标准曲线与定量范围、精密度、准确度及回收率，并对实际样品进行定性和定量检测评价。结果利用AFM1-UPT-LF可实现奶粉及牛奶中AFM1定性及定量检测，20 min内即可完成。奶粉中检测下限可达0．1μg／kg，在0．1～0．7μg／kg间具有较好线性（r＝－0．99359， P＜0．01），牛奶中检测限为0．3μg／L，在0．3～0．7μg／L间具有较好线性（r＝－0．99938，P＜0．05）。在定性检测中，对奶粉检测灵敏度为100％，特异性为85％，受试者工作特征（ROC）的曲线下面积（AUC）为0．978±0．036；牛奶检测中灵敏度为81％，特异性为88％， ROC的AUC为0．891±0．099；与LC-MS结果进行χ2检验，P值均大于0．05，两种方法差异无显著性意义。在定量检测评价中，AFM1-UPT-LF对于奶粉及牛奶中AFM1检测均具有较好回收率，与LC-MS比较差异无显著性意义（奶粉：t＝0．66，P＞0．05；牛奶：t＝1．01，P＞0．05）。结论利用UPT-LF所建立的AFM1-UPT-LF方法可实现奶粉及牛奶中AFM1定性及定量快速检测，检出限满足国标限量标准要求；该法无需样品处理，操作简便，可满足食品安全中对现场快速检测的需求。
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免疫亲和-荧光光度法快速测定乳脂及其制品中的黄曲霉毒素M1
本文研究应用荧光光度法测定高乳脂乳和乳制品中的黄曲霉毒素M1,方法检测限为0.1μg/kg,相对标准偏差低于5%,回收率88%～93%.方法简便快速、灵敏准确,能够满足进出口乳及乳制品中黄曲霉毒素M1的测定.
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潍坊市售液态奶及奶粉中黄曲霉毒素M1污染分析
目的 对潍坊市售液态奶与奶粉中黄曲霉毒素M1的含量进行调查分析.方法 随机抽取不同品牌的超高温灭菌液态全脂纯牛奶(UHT奶)41份、巴氏灭菌液态全脂牛奶7份,牛奶粉51份(其中婴幼儿奶粉45份,其他10份)作为研究对象,采用免疫亲和层析净化-高效液相色谱-荧光检测法测定黄曲霉毒素M1含量.结果 液态奶中黄曲霉毒素M1阳性率为62.5％,其中超高温灭菌奶检出阳性率为56.1％,巴氏消毒奶检出阳性率为100.0％.奶粉中黄曲霉毒素M1阳性率为20.0％,其中婴幼儿奶粉的检出阳性率为17.8％,其他类奶粉检出阳性率为30.0％.结论 潍坊市售液态奶及奶粉的黄曲霉毒素M1污染总体上属于轻度污染,但巴氏奶检出率较高,收购原料奶中的黄曲霉毒素M1的检测还需加强.
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抗黄曲霉毒素M1抗体制备及检测方法建立
目的 制备针对黄曲霉毒素M1的单克隆抗体并建立针对黄曲霉毒素M1的间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法.方法 利用B细胞杂交瘤技术,建立能分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法.结果 研制出1株能特异性分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2F2.该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,亲和常数为2.8×10-11 mol/L.该抗体与黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2和黄曲霉毒素M2等结构类似物有微弱的交叉反应,具有较高的特异性.在此基础上建立了间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法.该方法的低检出浓度为0.07ng/ml,校正曲线的线性范围为0.02～2 ng/ml,线性方程y=-0.4364x+0.269 3(R2=0.994 9).方法的加标回收率为72.5%～131.3%.结论 制备了具有高特异性和亲和力的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体,并建立了快速、灵敏的针对黄曲霉毒素M1的酶联免疫吸附试验检测方法.
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SNAPTM检测系统用于筛选牛奶中黄曲霉毒素M1探讨
[目的] 评估SNAPTM检测系统用于筛选牛奶中黄曲霉毒素M1(AFM1)的可行性.[方法] 用SNAPTM检测系统检测10种模拟样品、市场销售的8个品牌8大品种的45件牛奶样品,从SNAPTM检测系统的检出限、适用检测样品的种类、质量控制三方面进行研究. [结果] SNAPTM检测系统能筛选出黄曲霉毒素M1浓度≥0.3μg/kg的样品;实测45件牛奶样品,有5件不能直接得出结果,但稀释后可得出结果. [结论] 牛奶中总固形物是影响SNAPTM检测系统的主要原因,每批样品检测时通过加内标(用0.3μg/kg和0.5μg/kg两点)的方法能保证检测结果的可靠性.
关键词： SNAPTM检测系统 筛选 牛奶 黄曲霉毒素M1 -
几种环境污染物质在体检人群中的内暴露水平
目的:测定体检人群中几种常见环境污染物质的含量,了解这些环境污染物质在正常人群中的内暴露程度.方法:采用GC、GC-MS、HPLC、ELISA等方法,对80例体检人群尿样中环境污染物的含量进行检测.结果:甲醛和甲苯的检出率分别为97.6％和41.2％；黄曲霉毒素M1(aflatoxin M1,AFM1)的检出率为91.4％;邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)的检出率为75.3％；有机磷的检出率在1.2％ ～41.2％之间；三种多氯联苯(polychlorinated biphenyl,PCBs)、氯丙嗪(chlorpromazine,CPZ)和4,5-二氯儿茶酚(4,5-dichlorocatechol,4,5-DCC)的检出率较低,检出人数均少于5例；三甲基氯化锡(trimethyltin-chloride,TMT)未检出.结论:部分环境污染物在体检人群中的内暴露程度较高,其对人体的影响和限值研究亟待加强.
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固相萃取-高效液相色谱法测定乳制品中的黄曲霉毒素M1
目的 建立一种简单方便的提取乳制品中黄曲霉毒素M1(AFM1)的方法.方法 试样经过沉淀蛋白质、除去脂肪后,提取上清液过滤,经免疫亲和柱固相萃取后,用高效液相色谱仪测定AFM1.结果 方法线性范围为0.1～1.0μg/L,回归方程y=9454.8x-628.2,相关系数r=0.99996,方法精密度(RSD) 4.02％～5.71％,回收率为71.0％～80.5％,检出限0.003 μg/kg.结论 该法提取样品简单方便,检测速度快,回收率高,精密度良好.
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全自动固相萃取免疫亲和柱净化—HPLC法测定乳制品中黄曲霉毒素M1
目的 建立全自动固相萃取免疫亲和柱净化—液相色谱—荧光检测法测定乳制品中黄曲霉毒素M1.方法 牛奶和奶粉样品中的黄曲霉毒素M1经GILSON GX-274全自动固相萃取仪萃取、净化后,用Welch Ultimate AQ-C18液相色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5μm)分离,荧光检测器检测.结果 本法在0.5μg/L～ 10.0 μg/L浓度内线性相关系数为0.999 7.牛奶的低检出浓度为0.004 μg/kg,奶粉低检出浓度为0.04μg/kg.牛奶的回收率为90.0％ ～ 95.3％,奶粉的回收率为88.0％～ 95.6％,相对标准偏差均＜5.0％.从广州市12区随机购买不同品牌牛奶和奶粉共120份样品依此方法测定,其中牛奶的阳性率为18.0％,奶粉的阳性率为4.2％,但所检测样品黄曲霉毒素M1含量均小于我国国家标准规定的限量标准.结论 本法操作简单,灵敏度高,重现性好,适合批量乳制品中黄曲霉毒素M1的检测.
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免疫亲和柱净化-反相高效液相色谱法检测乳与乳制品中黄曲霉毒素M1
目的 建立免疫亲和柱净化-反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定乳和乳制品中的黄曲霉毒素M1的方法.方法 乳及乳制品中黄曲霉毒素M1经包被特异性M1抗体的免疫亲和柱净化后,采用反相C18高效液相色谱柱进行分离,以乙腈-水(15∶85)为流动相,采用等度法洗脱,荧光检测器检测,激发波长365 nm,发射波长435 nm.结果 乳及乳制品中的黄曲霉毒素M1在C18高效液相色谱柱上得到很好的分离,保留时间为6.482 min.方法的检出限0.005,定量限0.015 μg/kg,相对标准偏差为3.3％ ～4.6％,平均回收率为80.1％～88.9％之间,相关系数r＞0.9999.结论 采用包被特异性M1抗体的免疫亲和柱净化乳及乳制品中的黄曲霉毒素M1,可以有效的去除样本中杂质的干扰,提高了黄曲霉毒素M1检测的灵敏度及准确度,该法适合乳与乳制品中黄曲霉毒素M1测定.
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厦门市售液态奶中黄曲霉毒素M1的污染状况分析
目的 了解厦门市售液态奶中黄曲霉毒素M1(AFM1)污染状况,以及不同季度,不同产地液态奶中AFM1含量差异.方法 在厦门大型超市和鲜奶订购点随机采集不同季度生产的不同品牌液态奶共75份,采用三重四级杆液质联用法测定样品中的黄曲霉毒素M1.结果 75份液态奶中AFM1含量在0.0021 μg/kg～ 0.080 μg/kg之间,均低于GB2761-2011规定的AFM1≤0.5 μg/kg;南北方产液态奶中AFM1平均含量差异明显,南方样本明显高于北方;第四季度和第一季度生产的液态奶中AFM1检出率相对较高.结论 厦门市售液态乳中黄曲霉毒素M1的含量总体上处于安全水平,但仍不能忽视个别样品中AFM1对人体的潜在危害性.乳及乳制品生产企业应加大原料奶中AFM1的检测力度,检测机构也应加强对饲料和食品中AFB1的持续监控,从源头上切断黄曲霉毒素的污染.
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云南部分奶源地原料奶中黄曲霉毒素M1抽检调查
目的 了解云南部分奶源地原料奶中黄曲霉毒素M1污染现状,为以后的监测提供依据.方法 收集奶牛养殖户原料奶50份,企业收购混合原料奶9份,采用免疫亲和层析净化高效液相色谱法检测分析.结果 62.7％样品检出黄曲霉毒素M1,其检出平均值为0.0252 μg/kg,大检出值为0.3960 μg/kg.结论 原料奶中黄曲霉毒素M1检出率较高,但所有阳性样品检出值都在国家标准限定范围内,总体上属于轻度污染.
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黄曲霉毒素M1的危害、污染现状及检测方法进展
本文针对黄曲霉毒素M1的理化特性、危害、产生及防治进行了总结,详细介绍了黄曲霉毒素M1的四类检测方法,并进行了比较,同时展望了检测方法的发展方向.
