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基于CCD的胶体金免疫层析检测设备的设计
研制开发了一套用于细胞毒素相关基因A定量检测的胶体金免疫层析试纸条检测设备.该设备由硬件部分和软件系统两部分组成.硬件系统主要用于胶体金免疫层析试纸条图像的采集,而软件系统则实现了人机的交互.检测设备利用CCD(电荷耦合器件)图像传感器件采集试纸条图像,并传输至PC模块.然后,软件系统利用算法对其进行数据分析和结果诊断.软件系统主要采用了基于HSI色彩空间的移动k-均值图像分割算法,该算法实现了胶体金免疫层析试纸条图像的有效分割,完成了定量检测.本研究用10个不同浓度的胶体金免疫层析试纸条进行检测,绘制出定量曲线.还分别检测了50个阴性和50个阳性的细胞毒素相关基因A实验样品,检测结果显示特异性和灵敏度均为100％,证明了该设备的可靠性.
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幽-螺杆菌cagA/CagA分子生物学研究进展
幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)感染人数众多,但临床表现各异.大部分感染者终生无症状,但部分感染者会发展为慢性胃炎、十二指肠炎、消化性溃疡、胃癌、粘膜相关胃淋巴瘤Hp感染之所以有不同结局,在于菌株间存在致病力差异.
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白介素-8在胃癌的表达及其与cag Ahp感染的相关性研究
幽门螺杆菌(Hp)感染,特别是携带细胞毒素相关基因A(cagA)的Hp感染与胃癌的发生密切相关.白介素-8(IL-8)在Hp感染所致的胃炎中起重要作用.我们采用流式细胞术对胃癌及相应的癌旁正常组织中IL-8蛋白的表达水平进行定量检测,并对cagA Hp感染阳性及阴性的胃癌组织中IL-8的含量进行分析,以探讨cagA Hp感染对IL-8表达的影响.
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幽门螺杆菌cagA长度多态性及其临床意义
目的探讨我国幽门螺杆菌(Hp)分离株细胞毒素相关蛋白A(cagA)基因的分布和多态性情况与Hp感染相关胃十二指肠疾病的关系.方法设计针对cagA基因中一段297bp保守序列以及cagA基因3′端可变区两侧保守序列PCR引物,通过PCR检测82株我国Hp菌株的cagA基因分布情况,及其中77株Hp cagA基因3′端可变区长度多态性.结果 82株Hp中,77株(93.9%)297bp cagA基因片段扩增阳性;包括297bp片段扩增阴性的2株在内,71(92.2%)株可扩增出cagA基因3′端可变区,其中主要为PCR产物长度约825bp的Ⅰ型.结论我国Hp菌株cagA阳性率极高,其3′端可变区主要为较短的Ⅰ型.
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幽门螺杆菌亚型cagA+基因株与胃癌的关系
目的:探讨幽门螺杆菌(Hp)细胞毒素相关基因A阳性株(cagA+株)与胃癌的关系.方法:通过多聚酶链反应(PCR)检测92例胃癌和24例浅表胃炎组织石腊标本Hp和cagA+亚型株的感染.结果:①Hp感染在胃癌和慢性浅表胃炎间无差异,而cagA+株感染是前者高于后者(P＜0.05);②Hp感染早期胃癌高于进展期癌、胃窦癌高于贲门癌、肠型胃癌高于弥漫型癌(P＜0.05).然而只有肠型胃癌cagA+株感染显著高于弥漫型癌(P＝0.00135).结论:胃癌不同组织类型感染Hp亚型的程度不同,Hp-cagA+株感染率在肠型胃癌中显著增高.从而推测产生细胞毒素的Hp菌株,可能是胃癌尤其是肠型胃癌的发生发展过程中重要的危险因素.
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幽门螺杆菌毒力菌株感染与胃十二指肠疾病的关系
应用间接ELISA法,测定1 674例经胃镜检查患者的血清幽门螺杆菌(HP)细胞毒素相关基因A(CagA)抗体,探讨HP菌型差异与其致胃十二指肠疾病的关系.结果:疾病组血清CagA抗体检出率为49.70%,高于健康组的38%(P＜0.05);活动期十二指肠溃疡(DU)的抗体检出率显著高于活动期胃溃疡(GU)、胃癌(GC)和慢性胃炎(CG)(P＜0.01);活动性炎症的抗体检出率显著高于非活动性炎症(P＜0.01).随CG炎症程度加重,抗体阳性率呈递增性增加(P＜0.05,P＜0.01);GC及各癌前病变抗CagA检出率与健康组比较无差异.提示:HP产毒菌感染与胃十二指肠粘膜炎症活动及损伤程度有关.
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幽门螺杆菌感染对胃癌细胞株恶性转化的影响及机制研究
目的 探讨幽门螺杆菌感染对胃癌细胞株恶性转化的影响并探讨其可能的机制.方法 将胃癌AGS细胞分为细胞毒素相关基因A(CagA)质粒组(转染pCDNA3.1-CagA质粒)和阴性对照组(转染pCDNA3.1空白质粒)以及CagA质粒组(转染pCDNA3.1-CagA质粒和pEGFP-C1空白质粒)、CagA+程序化细胞死亡因子4(PDCD4)质粒组(转染pCDNA3.1-CagA质粒和pEGFP-C1-PDCD4质粒)和阴性对照组(转染pCDNA3.1空白质粒和pEG-FP-C1空白质粒).采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行PDCD4、Twistl、上皮细胞钙粘蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin) mRNA水平,采用蛋白质印迹(Western blot)法测定各组细胞PDCD4、Twist1、E-cadherin、Vimentin蛋白水平,采用transwell小室测定细胞侵袭能力.结果 CagA质粒组Twist1 mRNA、Vimentin mRNA表达量高于阴性对照组(P＜0.05),PDCD4mRNA、E-cadherin mRNA表达量低于阴性对照组(P＜0.05);CagA+ PDCD4质粒组Twist1 mRNA、Vimentin mRNA表达量低于CagA质粒组(P＜0.05),PDCD4mRNA、E-cadherin mRNA表达量高于CagA质粒组(P＜0.05).CagA质粒组Twist1蛋白、Vimentin蛋白表达量高于阴性对照组(P＜0.05),PD-CD4蛋白、E-cadherin蛋白表达量低于阴性对照组(P＜0.05);CagA+ PDCD4质粒组Twist1蛋白、Vimentin蛋白表达量低于CagA质粒组(P＜0.05),PDCD4蛋白、E-cadherin蛋白表达量高于CagA质粒组(P＜0.05).CagA质粒组侵袭细胞数高于阴性对照组(P＜0.05),CagA+ PDCD4质粒组侵袭细胞数低于CagA质粒组(P＜0.05).结论 幽门螺杆菌感染可增加胃癌细胞的侵袭能力,其机制可能为幽门螺杆菌独立因子CagA通过抑制PDCD4表达促进胃癌细胞的上皮-间质转化.
关键词： 幽门螺杆菌 细胞毒素相关基因A 胃癌 程序化细胞死亡因子4 -
结直肠腺瘤危险因素及幽门螺杆菌感染与腺瘤特征和血清胃泌素水平的相关性研究
背景幽门螺杆菌（Hp）感染不仅是胃癌的主要致病因素，而且与结直肠腺瘤相关，但在不同种族间的结论不一致。目的探讨结直肠腺瘤患者的危险因素，以及 Hp 感染与腺瘤特征和血清胃泌素水平的相关性。方法回顾性收集2011—2015年华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院收治的结直肠腺瘤患者1000例为结直肠腺瘤组，同时收集同时期本院通过结肠镜行结肠癌筛查未见肠道异常者1500例为对照组。收集两组患者一般资料，采用14 C 尿素呼气试验检测 Hp 感染情况。酶联免疫吸附试验法测定血清细胞毒素相关基因 A（CagA）蛋白和胃泌素水平。结直肠腺瘤组患者根据 Hp 感染情况分为 Hp 感染者（n ＝623）及非 Hp 感染者（n ＝377），Hp 感染者根据是否表达CagA 蛋白进一步分为 CagA 蛋白（＋）（n ＝510）和 CagA 蛋白（-）（n ＝113）。结直肠腺瘤危险因素采用多因素Logistic 回归分析。结果结直肠腺瘤组患者 Hp 感染率较对照组升高〔62.30％（623/1000）与54.33％（815/1500），OR ＝1.39，95％ CI（1.18，1.64），P ＜0.001〕。多因素 Logistic 回归分析结果显示：高脂血症、结肠癌家族史及 Hp 感染为结直肠腺瘤的独立危险因素（P ＜0.05）。结直肠腺瘤患者 Hp 感染者与非 Hp 感染者腺瘤数目、腺瘤蒂部分型、腺瘤病理类型比较，差异均无统计学意义（P ＞0.05）；Hp 感染者与非 Hp 感染者腺瘤大小及腺瘤伴高级别上皮内瘤变发生率比较，差异均有统计学意义（P ＜0.05）。结直肠腺瘤患者 CagA 蛋白（＋）Hp 感染者血清胃泌素水平〔（65.78±9.23）ng/ L〕高于 CagA 蛋白（-）Hp 感染者〔（55.04±8.05）ng/ L〕和非 Hp 感染者〔（51.04±4.95） ng/ L〕（P ＜0.05）。结论高脂血症、结肠癌家族史及 Hp 感染为结直肠腺瘤的危险因素，结直肠腺瘤患者 CagA 蛋白（＋）Hp 感染者血清胃泌素水平升高。推测 CagA 蛋白所释放的促炎因子可能会促进结直肠上皮细胞的增殖，导致CagA 蛋白（＋）Hp 感染人群结直肠上皮细胞增殖活跃、异常增生，从而增加结直肠腺瘤的发生。
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幽门螺杆菌感染与胃粘膜淋巴滤泡关系探讨
目的:为了探讨含有细胞毒素相关基因A(cagA)菌株感染与胃粘膜淋巴滤泡形成之间的关系,并对胃粘膜淋巴滤泡的发生与幽门螺杆菌(Hp)感染状况的关系等进行观察.方法:我们对655例慢性胃炎,消化性溃疡的患者进行胃镜检查,取胃窦粘膜组织作Hp检测和组织病理检查,并选择70份Hp培养阳性的临床分离菌,用PCR扩增法进行cagA基因的检测.结果:Hp感染患者中胃粘膜淋巴滤泡的发生率(60.14%)显著高于非Hp感染者(17.06%);胃粘膜淋巴滤泡在活动性胃炎比非活动性胃炎中更易检测到;在Hp相关性胃肠病中,慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠球溃这三者之间胃粘膜淋巴滤泡的发生率无显著性差异;另外,还观察到含cagA基因的Hp菌株与胃粘膜淋巴滤泡的增生两者之间无相关性.结论:胃粘膜淋巴滤泡的发生直接与Hp感染相关,并可作为一种Hp感染相关性胃肠病中一个较为恒定的形态特征;Hp作为一种抗原刺激胃粘膜产生淋巴滤泡的作用与Hp菌株的毒力(cagA基因)无关,任何Hp感染均可刺激胃粘膜产生淋巴滤泡.
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原位PCR检测幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A
幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A(Helicobacter pylori cytotoxin associated geneA,Hp-cagA)与胃部疾病关系的研究已成为当前热点.
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幽门螺杆菌细胞毒导致胃癌发生的作用机制
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染导致胃癌的重要原因之一是它的细胞毒作用.细胞毒素相关基因致病岛 (cytotoxin-associated gene pathogenicity island,cagPAI) 和空泡毒素A (vacuolatingcytotoxin A,vacA) 是Hp典型的细胞毒代表.cagPAI可诱发促炎因子的释放及增强促上皮细胞增殖信号的兴奋程度;vacA则导致上皮空泡化和病原体黏附.明确cagPAI和vacA在胃癌发生发展过程中的作用,将有利于全面理解Hp感染对机体造成的危害以及根治Hp感染的重要意义.
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慢性胃炎病人血清CagA抗体和胃黏膜炎症活动性及Hp密度检测
目的 探讨细胞毒素相关基因A(CagA)对慢性胃炎胃黏膜组织炎症活动性程度、幽门螺杆菌(Hp)密度的影响.方法 对慢性胃炎病人80例进行血清CagA抗体检测及胃黏膜组织病理学检查,分析CagA抗体与慢性胃炎病人胃黏膜病理变化之间的关系,以及CagA抗体对慢性胃炎病人Hp密度的影响.结果 慢性胃炎病人血清CagA抗体阳性52例(65.0％),阴性28例(35.0％).同性别CagA抗体阳性组与阴性组炎症活动性程度比较,差异有显著性(x 2=12.161、6.111,P＜0.05);肠上皮化生、萎缩、Hp密度差异均无显著性(P＞0.05).不同性别间各指标差异无显著性(P＞0.05).结论 慢性胃炎CagA抗体阳性病人的胃黏膜中性粒细胞浸润更明显,人体不能有效清除Hp在胃黏膜中的定植.
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儿童幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A检测的意义
目的 探讨儿童幽门螺杆菌(Hp)细胞毒素相关基因A(cagA)的流行情况,分析其与胃十二指肠疾病的关系.方法 对80例患儿经胃黏膜快速尿素酶试验和Warthin-Starry银染色,聚合酶链式反应(PCR)法检测Hp尿素酶C基因及血清抗Hp-IgG确诊为Hp感染儿童采用PCR法检测胃黏膜cagA.结果 80例患儿胃黏膜Hp菌株应用cagA的5对不同引物分别扩增cagA DNA 400、280、349、298 bp 和191 bp 5个片段,cagA检出率分别为43.8%、20.0%、55.0%、32.5%和61.2%,它们之间有显著性差异.cagA总检出率为83.7%.轻度与中重度炎症cagA检出率无显著性差异.慢性浅表性胃炎及消化性溃疡两组cagA检出率无显著性差异.结论 南宁地区儿童Hp以cagA阳性为主.cagA基因与胃黏膜炎症程度无关,且cagA基因不能作为南宁地区Hp菌株毒力强弱的指标.
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胃癌病人血清CagA抗体检测
目的:探讨细胞毒素相关基因A(CagA)阳性Hp菌株与胃癌的关系.方法:幽门螺杆菌(Hp)阳性胃癌病人24例,另以Hp阳性浅表性胃炎26例作为对照.采用ELISA定性测定研究对象血清CagA-HpIgG.结果:胃癌组血清CagA-HpIgG阳性率明显高于对照组(P＜0.01).结果提示:CagA阳性的Hp毒力菌株在胃癌致病过程中起重要作用.
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Hp-cagA感染与胃癌环氧化酶Ⅱ表达的相关性研究
目的观察胃癌组织中COX-2的表达情况,探讨Hp-cagA菌株感染与胃癌COX-2表达之间的关系,为胃癌的早期预防提供有价值的实验和理论依据.方法采用流式细胞术,定量检测及分析32例胃癌组织及相应的癌旁正常胃组织中COX-2的表达水平,并通过PCR技术对胃癌组织中cagA基因的扩增产物进行检测.结果32例胃癌组织中,有27例COX-2过表达,19例cagA阳性的胃癌组织中COX-2的表达水平明显高于13例cagA阴性的胃癌组织.结论COX-2在胃癌组织中过度表达,cagA菌株感染可上调胃癌组织中COX-2的过度表达.可能存在cagA菌株感染之外的其它因素或机制调节COX-2的表达.因此,在根治幼感染的同时,应用COX-2特异性抑制剂可能是一种有效预防胃癌发生、发展的新路.
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CagA+幽门螺杆菌根除前后对胃溃疡患者血清基质金属蛋白酶-9及hsCRP的影响
目的:探讨细胞毒素相关基因A+(CagA+)幽门螺杆菌(Hp)根除前后对胃溃疡患者血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及高敏CRP (hsCRP)的影响.方法:55例Hp+ CagA+胃溃疡患者为根除治疗组,同期就诊的55例Hp-CagA-胃溃疡患者为对照组,根除治疗组患者研究开始时根除Hp治疗采用三联疗法,包括阿莫西林(1 g,2次/日)、克拉霉素(500 mg,2次/日)及埃索美拉唑(20 mg,1次/日),疗程7d.随访3个月,研究前后同时检测两组患者血清hsCRP及MMP-9.结果:研究开始时,根除治疗组血清胆固醇、hsCRP及MMP-9水平比对照组高(P＜0.05)；研究结束时,两组血清胆固醇、hsCRP及MMP-9水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)；与研究前比较,根除治疗组研究结束时血清胆固醇、hsCRP及MMP-9水平明显降低(P＜0.05).结论:通过根除Hp+ CagA+,可降低胃溃疡患者血清hsCRP及MMP-9水平,降低患者的炎症损伤,因此可促进溃疡愈合.
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CagA抗体检测用于鉴定幽门螺杆菌高毒株感染的评价
目的 探讨通过检测血清CagA抗体鉴定幽门螺杆菌高毒株感染的可行性.方法 采集本地区临床门诊行胃镜检查的胃活检标本,作病理检查和幽门螺杆菌(Hp)培养,同时采集病人的血清.采用PCR法检测分离所得的Hp cagA基因,用ELA法测定患者血清CagA抗体,分析cagA基因的检出与消化性疾病的关系,比较cagA基因与CagA抗体的检测结果,评价应用CagA抗体检测Hp高毒株感染的可行性.结果 分离获得80株Hp,其中54株检出cagA基因,阳性率为67.50%.各病理类型胃病患者cagA基因阳性率分别为:浅表性胃炎77.42%,萎缩性胃炎62.86%,胃溃疡58.33%,胃癌50.00%,各组间无显著差异(P＞0.05);EIA法检测CagA抗体的阳性率为55.00%,敏感度为74.07%,特异度为84.62%,约登指数(Youden's index)58.69%,调整一致性77.68%.结论 检测血清CagA抗体用于诊断高毒力Hp感染存在局限性.
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免疫印迹法检测幽门螺杆菌抗体结果分析
目的 评价免疫印迹法检测Ⅰ型和Ⅱ型幽门螺杆菌抗体的价值. 方法 采用免疫印迹法对门诊随诊患儿227例进行分型检测. 结果 检出HP阳性85例,阳性率为37.44%,其中Ⅰ型58例,占68.23%;Ⅱ型27例,占31.76%. 结论 免疫印迹法检测幽门螺杆菌抗体具有较高的敏感性和特异性. 方法 简单,时间短,对临床治疗有重要的指导意义.
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幽门螺杆菌cagA基因 PCR检测方法初探
目的建立敏感性高的幽门螺杆菌菌株cagA基因PCR检测方法,为客观评价CagA在我国幽门螺杆菌感染致病中的作用提供基础.方法通过分析比较GenBank中已知的cagA基因序列,设计了一对针对cagA基因保守序列、可扩增297bp片段的PCR引物,用CR方法检测幽门螺杆菌的cagA基因,与SDS-PAGE检测CagA蛋白的结果进行比较.结果PCR检测82株国内幽门螺菌杆菌的cagA基因,77株为cagA阳性,阳性率为93.9%,SDS-PAGE显示包括所有PCR扩增阴性菌株在内的74株幽门螺杆菌均表达CagA,阳性率为100%.PCR检测cagA基因的敏感性为93.2%.结论建立了敏感性高的幽门螺杆菌cagA基因PCR检测方法.
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EB病毒、幽门螺杆菌cagA和vacA基因型感染与胃癌的关系研究
目的 探讨EB病毒,H.pylori cagA基因、vacA基因在胃癌发生发展中的作用及三者关系.方法 以病理活检确诊的胃癌病人为实验组(46例),癌前病变(包括肠化生、萎缩性胃炎、非典型增生等)病人对照组(43例),胃镜下取胃癌组织,采用PCR体外扩增方法,检测胃癌组织及癌前病变组织中EBV-DNA,用快速尿素酶试验检测HP,阳性病人做PCR体外扩增,并用PCR法进行H.pylori cagA和vacA基因检测,进行基因分型.结果 (1)对照组2例,阳性率为4.6%(2/43);实验组10例,阳性率为21.7%(10/46).实验组与对照组差异有统计学意义(P<0.05).EBVaGC(EBV associated gastric carcinoma ,EBVaGC)和EBVnGC (EBV negative gastric careinoma,EBVnGC)在年龄、病理类型方面差异无显著性(P>0.05);在性别方面差异有统计学意义,男性EBV阳性率高于女性(P<0.05).(2)等级统计分析表明,EBV 感染与慢性胃炎→萎缩→肠化生→高中低分化胃癌演变过程中呈正相关(r=0.25465 ,P=0.0160).(3)实验组H.pylori感染率60.9%(28/46),对照组H.pylori感染率37.2%(16/43),实验组与对照组差异有统计学意义(P<0.05).(4)慢性浅表性胃炎、萎缩、肠化生、胃癌各组织中H.pylori与cagA和vacA表达均呈正相关(P<0.01).(5)H.pylori、H.pylori cagA、vacA阳性和阴性在性别、年龄差异无显著性(P>0.05),但在病理类型方面H.pylori、cagA、vacA阳性和阴性有统计学差异(P<0.01.).(6)相关性分析表明EBV感染与H.pylori cagA呈正相关(P=0.0287,r=0.23199),与H.pylori vacA无相关性(P=0.8094,r=0.02595) .结论 (1)EBV感染与胃癌的发生发展有一定相关性,EBVaGC好发于男性,EBV感染与慢性胃炎→萎缩→肠化生→胃癌演变过程中呈正相关.但EBV感染与胃癌病人年龄、病理类型、无明显相关性.(2)H.pylori感染与胃癌的发生密切相关,H.pylori感染与胃癌的临床病理类型相关,但H.pylori感染与胃癌病人性别、年龄无明显相关性.(3)胃癌发生中EBV感染和cagA的表达呈正相关,与vacA无明显相关性.
