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罗丹明B-砷钨杂多酸光度法测定痕量砷
瓶装饮用纯净水中砷(As)含量的测定,首选方法为二乙氨基二硫代甲酸银分光光度法[1],但其低检测浓度为0.01 mg/L,在实际操作中很难达到,且瓶装饮用纯净水国家标准中砷含量又是≤0.01 mg/L[2].
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4种方法比较检测新鲜和陈旧标本中的结核分枝杆菌
我们应用抗酸染色、细菌培养、荧光染色、聚合酶链反应(PCR)4种方法分别检测陈旧标本和新鲜标本中结核分枝杆菌,并作比较分析如下.一、材料与方法1.标本来源:120份标本来自1996年10月~1997年4月长治医学院附属和平医院传染科结核患者的痰、脑脊液、胸腹水等并置于灭菌青霉素小瓶中.当即对其中43份标本处理,取每份标本的1/2做抗酸染色、细菌培养、荧光染色、PCR检测.其余的1/2留在容器中放4℃冰箱,直至1999年10月再用4种方法检测.2.抗酸染色、细菌培养按实验室常规方法操作.荧光染色试剂金胺0-罗丹明,结核分枝杆菌在背景中呈现金黄色荧光.PCR根据TB多拷贝插入序列S6110自行设计的寡
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重组人表皮生长因子促进大鼠皮肤生长的作用及量效关系
选2日龄大鼠5只(军事医学科学院实验动物中心),处死后无菌操作剪下背部全层皮肤,刮除皮下组织,切成2×2mm方形皮块,接种到涂有胶原的24孔培养板内,每孔一块,贴附1h.孔内分别加入0.4ml含有五种不同浓度重组人表皮生长因子(rhEGF,军事医学科学院生物工程研究所)的15%小牛血清Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM),同时设不含rhEGF的对照,每组n=20.标本置5%CO2培养箱内培养(37℃),2d后换液,4d终止培养.皮肤用10%福尔马林固定,2%罗丹明耐尔蓝染色.将培养板倒置,覆以透明塑料膜沿皮肤生长后的边缘画线、剪膜,置分度值为0.1mg的分析天平称重.根据单位面积膜重量换算出皮肤生长后的面积.
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临床微生物常规工作体会
检验科细菌室检测项目多,内容包括(1)常见菌,苛养菌,不常见菌和疑难菌,还有真菌(酵母菌和霉菌)鉴定,(2)抗生素药物敏感试验,(3)基本技术检查安徽省宿州市第一人民医院(234000)包括:革兰染色,金胺-罗丹明荧光抗酸染色,氧化酶试验,触酶试验,β-内酰胺酶试验,血浆凝固酶试验,动力试验,尿细菌计数,β溶血链球菌Lancefield分群,Optochin试验等.如何为临床提供快速、准确的病原学诊断,指导临床合理使用抗生素,对医院感染进行监控是摆在每一位临床微生物工作者面前的一项艰巨的任务.下面介绍一下我们在常规工作中的一些经验和体会.
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抗酸染色的改良及应用
抗酸染色是针对抗酸杆菌而言,在常规病理诊断中,主要应用于结核病与类结核病及麻风病的诊断与鉴别诊断[1],通常采用的是改良Ziehl-Neelsen染色法及荧光染料金胺O法(也称金胺-罗丹明法),在日常工作中较多采用前者。笔者在改良Ziehl-Neelsen 染色法的基础上作了一些改良,效果良好,现报告如下。
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分光光度法测定发样汞
汞能在人体内蓄积,发样汞含量能反映近期体内汞的吸收量,可作为环境污染的指标之一.发汞的测定常采用原子吸收法[1],此法所用仪器较贵,不便推广.分光光度法测定汞曾有报道[2,3],但其灵敏度有待进一步提高.本文采用非离子表面活性剂吐温-80增溶下,Hg2与溴化物及有机阴离子碱罗丹明B(RhB)形成水溶性离子缔合物,可直接在水相中测定发样中痕量汞.现介绍如下.
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荧光熄灭法测定生物材料中微量锌
以碱性染料为显色剂的离子缔合物体系具有极高的灵敏度,广泛用于金属离子的比色法测定[1,2].本文在文献[1]基础上,利用碱性染料罗丹明B的荧光特性(λ-EM=578 nm),建立荧光法测定生物材料中微量锌.当罗丹明B与硫氰酸锌形成离子缔合物后(Zn+2+-SCN+--RhB),大荧光峰位不变,荧光定量猝灭,其荧光熄灭程度与锌含量成正比.本文研究了在阿拉伯胶存在下水相荧光熄灭法测定锌的佳条件,线性范围为(0.05~0.5)μg/25 ml.
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微量碘测定方法探讨
目前碘化物的测定方法很多且各有所长.本文参考有关文献采用罗丹明B作显色剂,测定水中的微量碘,达到了快速、准确的测定效果,现报告如下.
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Annexin5对人精子线粒体功能的影响
目的 观察膜联蛋白5(annexin 5)对人精子线粒体功能的影响.方法 收集38例少弱精症患者精液标本.精子与annexin 5共温育,用罗丹明(Rh123)和碘化吡啶(PI)染色并用流式细胞术检测人精子线粒体功能.结果 添加annexin 5组与对照组相比,线粒体功能良好的活精子百分率[(38.77±9.20)%vs(26.12±10.09)%,P<0.05]和线粒体荧光值[(509.72±45.02)vs(452.88±39.39),P<0.05]均有显著性升高.结论 体外添加annexin 5能增强精子线粒体的活性.
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固相萃取-高效液相色谱荧光法同时测定辣椒面中罗丹明B和罗丹明123
目的:建立固相萃取-高效液相色谱荧光法同时测定辣椒面中罗丹明B和罗丹明123的分析方法.方法:样品经甲醇/水溶液(1∶1,V/V)提取,过Strata-X-CW固相萃取小柱净化,用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6mm×5 μm)以含0.1%甲酸(V/V)的乙腈/水为流动相进行梯度洗脱分离,荧光检测器测定,罗丹明B采用λex556 nm,λem581 nm,罗丹明123采用λex518 nm,λem542 nm检测,外标法定量.结果:罗丹明B在2.0 μg/L ~ 100.0 μg/L和罗丹明123在1.0 μg/L~50.0 μg/L范围均具有良好的线性(R2>0.9994),2种待测物的回收率在94.5% ~ 104.6%范围,RSD均小于5.0%,低定量检出限在1.0 μg/kg ~2.0 μg/kg范围.结论:该方法具有前处理简单,梯度洗脱分离效果和重现性好等优点,能满足实际工作的需要.
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毒花椒:罗丹明B堪比苏丹红
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以卡介苗和MTB H37 Ra的原生质体为亲本制备融合菌株的实验研究
目的:以卡介苗(BCG)和结核分枝杆菌(MTB)国际标准无毒株H37Ra (H37Ra)的原生质体为亲本制备融合菌株。方法:制备及鉴定BCG和H37 Ra的原生质体;对荧光染色标记的亲本原生质体进行电融合,制备融合菌株,同时优化其制备和再生培养条件。结果:成功制备BCG和H37Ra的原生质体;FDA标记BCG原生质体呈黄绿色荧光,罗丹明B标记H37Ra原生质体呈红色荧光,激光共聚焦显微镜观察到电融合条件在电压E=2.2 kV/cm、电击时间t=0.8 ms,呈桔色荧光的融合子融合率高、活性好。结论:成功制备了以BCG和H37Ra原生质体为亲本的融合菌株。
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生物素靶向显影探针Biotin-S-S-Rhodol对乳腺癌细胞的靶向显影作用
目的:对新型生物素靶向显影探针(Biotin-S-S-Rhodol,3a)的靶向显影性能进行分析。方法采用紫外吸收光谱和荧光光谱分析谷胱甘肽(GSH)处理后3a的光谱特性;采用不同浓度GSH处理3a,荧光光谱分析3a对GSH的敏感性;采用流式细胞术和荧光倒置显微镜观察生物素预处理前后MCF-7细胞、MDA-MB-231细胞和Hs 578Bst细胞对3a的摄取率和靶向显影性能;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)初步分析3a对MCF-7细胞、MDA-MB-231细胞和Hs 578Bst细胞的毒性。结果3a的强吸收峰在510 nm处,在544 nm处荧光发射信号强;荧光光谱结果显示随着GSH浓度(0~6 mmol/L)处理浓度提高,544 nm波长处的荧光强度升高;MDA-MB-231、MCF-7细胞对3a的摄取率明显高于Hs 578Bst细胞;3a能实现乳腺癌细胞专一性成像,成像清晰;2~20μmol/L 3a对人正常乳腺细胞无明显毒性,可在一定程度上抑制MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞存活。结论3a能通过生物素介导专一靶向乳腺癌细胞,成像清晰,对正常乳腺细胞毒性极低,有一定的抑制乳腺癌细胞存活作用。
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快速检测重金属汞离子的糖基罗丹明荧光探针的合成及评价
目的 建立快速测定重金属汞离子的方法.方法 合成糖基罗丹明荧光探针,在糖基罗丹明荧光探针溶液中加入汞离子,其在583 nm处呈现较强的荧光.结果 糖基罗丹明荧光探针可应用于快速检测水溶性媒介中的重金属Hg2,而不受Ca2、Ba2、Cd2、Co2、Mg2、Ni2+、Zn2、Na+、K+、Ce3+、Cu2等离子的干扰.结论 所用方法所需样品量和时间均较少,简便易行.