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反相高效液相色谱法测定饮料和保健食品中阿力甜
阿力甜是一种二肽类甜味剂,化学名称为L-天冬氨酰.N-(2,2,4,4-四甲基-3硫化三甲基)-D-丙氨酰胺.其甜度为蔗糖的2000倍以上,且口感与蔗糖接近,甜味迅速、持久、安全[1-2].目前,阿力甜已在20多个国家获准使用,而我国早于1994年就已批准使用.
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谷氨酰胺双肽强化的肠外营养对腹部手术患者谷胱甘肽水平的影响
目的探讨谷氨酰胺双肽强化的肠外营养对腹部手术患者术后谷胱甘肽水平、免疫功能、肝功能及术后感染发生率、住院天数的影响.方法选择腹部外科手术患者40例,随机分为研究组与对照组,围手术期予完全肠外营养支持(TPN)7 d.对照组给予TPN,研究组给予TPN+谷氨酰胺双肽.两组均等氮、等热量,非蛋白热量83.6 kJ·kg-1·d-1, 糖∶脂为7∶ 5,氮量0.16 g·kg-1·d-1,热、氮比489 kJ∶1 g.分别于术前、术后第1天,第3天及术后第6天采取血样测定血浆、红细胞氧化型谷胱甘肽(GSSG)及还原型谷胱甘肽(GSH)水平、血生化指标和免疫指标.结果研究组术后血浆及红细胞内谷胱甘肽下降程度小于对照组.血浆GSSG和GSH比值(术后第3天)研究组明显高于对照组(分别为53±11和31±7,F=4.725, P=0.001).两组血浆白蛋白(ALB)术后均轻度下降,研究组术后第3天ALB水平明显高于对照组[分别为(3.8±0.4) g/dl 和(3.4±0.4)g/dl,F=2.128, P=0.02].术后两组免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA),T淋巴细胞亚群(CD4,CD8及CD4/CD8)指标差异无统计学意义.研究组术后无感染发生,对照组术后1例发生切口感染.研究组患者住院天数较对照组有缩短趋势[分别为(22.3±2.1)d和(24.9±1.7)d,t=0.935,P=0.32).结论围手术期应用谷氨酰胺双肽强化的肠外营养具有维持机体血浆及红细胞内谷胱甘肽水平的趋势,维持较高的GSH/GSSG比值,维护机体组织细胞抗氧化能力;维持术后ALB水平,对肝功能有一定保护作用;具有减少术后并发症,缩短住院天数的趋势.
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Notch基因细胞内区在子宫颈癌组织中的表达及DAPT对子宫颈癌细胞的影响
目的 了解宫颈癌组织中Notch基因细胞内区(NICD)蛋白的表达水平及其临床意义,探讨γ分泌酶抑制剂--氮-[氮-(3,5-二氟苯乙酰)-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯(DAPT)对宫颈癌细胞系的作用.方法 应用蛋白印迹法检测40份宫颈癌组织及21份正常宫颈组织中NICD蛋白的表达水平.体外培养宫颈癌细胞SiHa、HeLa,加入不同浓度的DAPT,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况;采用流式细胞仪检测细胞的S期细胞比例(SPF)、凋亡细胞百分比和增殖指数(PI);应用蛋白印迹法检测DAPT对SiHa、HeLa细胞中NICD蛋白表达的影响.结果 NICD蛋白的表达水平在宫颈癌组织中明显高于正常宫颈组织(分别为1.237±0.353、0.938±0.105),两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).在宫颈癌组织中,低分化者NICD蛋白的表达水平明显高于高～中分化者(分别为1.496±0.540、1.150±0.216),有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(分别为1.419±0.532、1.159±0.210),有宫旁转移者明显高于无宫旁转移者(分别为1.718±0.710、1.183±0.258),腺癌明显高于鳞癌(分别为1.463±0.395、1.162±0.187),分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).DAPT作用于SiHa、HeLa细胞后,NICD蛋白的表达水平下降(P<0.05).不同浓度的DAPT作用不同时间能够抑制宫颈癌细胞的增殖、促进其凋亡,且浓度越高出现作用的时间越早.结论 NICD在宫颈癌的发生、发展中起一定的促进作用;DAPT能抑制宫颈癌细胞的增殖,促进宫颈癌细胞的凋亡,其机制可能与抑制NICD的生成有关.
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随机十二肽噬菌体展示文库筛选血型B抗原模拟多肽的实验研究
目的:筛选出替代血型B抗原的模拟多肽,用多肽抗原替代糖类抗原.方法:抗血型B抗原的单克隆抗体作为固相筛选靶分子,对随机十二肽噬菌体展示文库进行生物淘选(bio-panning),经包被-结合-洗脱-扩增等循环3轮,对筛选的克隆ELISA鉴定,并通过剂量依赖实验验证其结合特异性.后提取DNA测序,确定模拟肽氨基酸序列.结果:3轮筛选结束,得到2个亲和力较强的十二肽序列TKNMLSL-PVGPG和HSLKHTQMSYSS.结论:经过生物筛选得到模拟多肽序列,利用噬菌体展示技术筛选糖类抗原的模拟肽具有可行性,为糖类抗原的研究提供一种新思路.
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组织蛋白酶B抑制剂干预鼠视网膜新牛血管形成的研究
目的 探讨组织蛋白酶B(Cathepsin B)抑制剂CA-074Me对视网膜新生血管形成的干预作用.方法 实验研究.将C57BL/6J 7日龄小鼠60只用随机数字表法分为正常对照组、空白对照组、阴性对照组和实验组,每组15只,空白对照组、阴性对照组和实验组在缺氧环境中建立视网膜新生血管模型.实验组小鼠出氧箱后每眼球周注射CA-074Me 5 mg·kg-1·d-1,阴性对照组球周注射与实验组溶剂等量的二甲基亚砜,正常对照组、空白对照组均不给予任何药物,连续5 d.测定眼组织组织蛋白酶B活性;通过免疫组织化学的方法 观察组织蛋白酶B在视网膜组织的表达;通过HE染色法测定不同组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目;通过视网膜ADP酶染色铺片,测量无血管区面积、无血管区面积与视网膜面积的比值.结果 正常对照组、空白对照组、阴性对照组、实验组组织蛋白酶B活性分别为(17.75±2.30)、(28.75±3.14)、(29.16±2.78)、(23.14±3.53)nmol·min-1·mg-1,实验组分别与各对照组比较,两组之间差异均有统计学意义(F=13.16,P＜0.01),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);免疫组化测定正常对照组、空白对照组、阴性对照组和实验组组织蛋白酶B平均吸光度值分别为0.24±0.02、0.35±0.05、0.36±0.07、0.35±0.01,实验组、空白对照组、阴性对照组之间两两比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);视网膜石蜡切片HE染色后,正常对照组、空白对照组、阴性对照组、实验组平均每张切片中突破内膜新生血管内皮细胞核数分别为2.71±1.07、67.51±11.55、65.16±5.78、27.14±3.53,实验组与各对照组比较差异均有统计学意义(F=9.12,P＜0.01),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);正常对照组、空白对照组、阴性对照组、实验组无血管区面积分别为(1.17±0.30)、(5.34±0.74)、(5.16±0.68)、(2.38±0.53)mm2,实验组与各对照组比较差异均有统计学意义(F=7.57,P＜0.01),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);正常对照组、空白对照组、阴性对照组和实验组无血管区面积/视网膜面积分别为0.09±0.01、0.24±0.03、0.23±0.07,0.16±0.05,实验组与各对照组比较差异均有统计学意义(F=8.32,P＜0.01),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 组织蛋白酶B抑制剂CA-074 Me对C57BL/6J小鼠视网膜新生血管形成有一定程度的抑制作用,有可能成为治疗视网膜新生血管的一种新的方法 .(中华眼科杂志,2008,44:207-211)
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基质金属蛋白酶抑制剂对培养的人晶状体上皮细胞移行抑制作用的研究
目的 通过体外人晶状体囊袋模型的建立,探讨基质金属蛋白酶抑制剂GM6001对白内障患者术后晶状体上皮细胞移行的抑制作用及其对细胞活性的影响,以寻找一种安全有效地防治晶状体后囊膜混浊的药物.方法 本文为实验研究.16例供体人眼行模拟白内障手术,建立人晶状体囊袋培养模型,确认赤道部晶状体上皮细胞开始移行后,将晶状体囊袋置于不同浓度(1 μmol/L、10 μmol/L和100 μmol/L)的GM6001及其阴性对照液(100 μmol/L)中培养(每组4个囊袋).相差显微镜下分别测量培养10、20及30 d时各组晶状体上皮细胞在后囊膜移行的距离;酶联免疫吸附实验测定囊袋培养液中MMP-2和MMP-9的浓度.四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定不同实验浓度GM6001对细胞活性的影响.多组间及组间计数资料的比较,采用随机区组设计的方差分析.结果 培养的人晶状体囊袋中赤道部晶状体上皮细胞第4天开始移行.GM6001明显抑制了晶状体上皮细胞在后囊膜的移行,呈剂量依赖性(F=53.79,P<0.01):实验第20天,10μmol/L GM6001组晶状体上皮细胞移行距离较对照组减少70%(P<0.01),100μmoL/L组减少98%(P<0.01);GM6001降低了MMP-2、MMP-9表达水平,浓度越高,抑制作用越明显(F=86.59,72.96;P<0.01):实验第20天,10 μmol/L GM6001组MMP-2和MMP-9表达水平较对照组均降低70%(P<0.01),100 μmol/LGM6001组MMP-2水平降低了90%(P<0.01),MMP-9水平降低了87%(P<0.01);MTT法显示,晶状体上皮细胞在GM6001中仍保持增殖活性,各处理浓度组光密度(A)值与对照组比较差异无统计学意义(F=0.62,P>0.05).结论 MMP抑制剂有效地抑制了体外囊袋培养的人晶状体上皮细胞在后囊膜的移行,且对细胞活性无明显影响.因此,MMP抑制剂可能对预防后囊混浊有一定作用.
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基质金属蛋白酶抑制剂抑制兔晶状体后囊膜混浊的研究
目的 观察基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂对兔晶状体后囊膜混浊的抑制作用和对眼内组织的毒性.方法 实验研究.选用新西兰白兔行超声乳化晶状体吸除术,用不同浓度的MMP抑制剂GM6001溶液(实验1组:100 μmol/L,实验2组:200 μmol/L,实验3组:500 μmol/L)和GM6001阴性对照液(500 μmol/L)进行术毕及术后隔日晶状体囊袋内灌注3次,观察术后第12周内后囊膜混浊情况,同时观察药物对眼前房反应、眼压、角膜内皮、虹膜、睫状体和视网膜的影响和毒性.采用四格表确切概率法分析使用GM6001后前房反应和对后囊膜混浊的抑制作用;采用单因素方差分析法分析GM6001对眼压的影响.结果 裂隙灯显微镜下观察,可见术后12周对照组后囊膜混浊明显,实验1组后囊膜混浊较对照组轻,实验2组和3组均无后囊膜混浊(P=0.007);病理学结果显示:对照组和实验1组后囊膜表面有多层排列紊乱的上皮细胞和成纤维细胞,而实验2组和3组后囊膜表面几乎无细胞生长;前房反应轻:用药2 d实验组和对照组兔眼前房闪光情况比较,差异无统计学意义(P=0.380);对眼压的影响:实验组与对照组用药2 d(F=0.642,P=0.597)、7 d(F=0.179,P=0.909)眼压比较,差异均无统计学意义;用药7 d,实验3组角膜内皮细胞呈规则的六边形,无变形脱落,与对照组眼角膜内皮细胞形态无明显差别;光镜观察发现对虹膜、睫状体和视网膜均无明显毒性.结论 MMP抑制剂可明显抑制兔眼超声乳化晶状体吸除术后晶状体后囊膜混浊的发生,对眼内组织无明显毒性,安全有效.
关键词： 基质金属蛋白酶类 金属蛋白酶类组织抑制剂 二肽类 白内障 -
基质金属蛋白酶抑制剂治疗碱烧伤后兔角膜融解的研究
目的研究基质金属蛋白酶抑制剂(GM 6001)在治疗兔角膜碱烧伤后角膜融解中的作用.方法将28只兔随机分为A、B组,将浸有2 mol/L(16只)及1 mol/L(12只)氢氧化钠的滤纸片分别置于A、B组兔右眼角膜上制备角膜重和中度碱烧伤模型;每组均设治疗和对照组,A、B治疗组术眼分别滴浓度为400及200 mg/L的GM 6001滴眼液,对照组滴药物基质液;均治疗30 d,然后处死动物.观察其角膜融解及混浊等情况,并进行病理组织学检查.结果 A组:对照组8只兔眼角膜自伤后(13±5) d开始全部发生融解,2只兔眼发生角膜穿孔;治疗组,仅有2只兔眼烧伤后(19±4) d发生角膜融解,无角膜穿孔;两组角膜融解发生率及角膜穿孔率比较,差异有显著意义(P<0.05).治疗组角膜融解开始的时间亦明显迟于对照组(P＜0.05).B组:对照组6只兔角膜自伤后(14±6) d全部融解,1只兔眼角膜穿孔;治疗组2只兔眼角膜自伤后(19±4) d融解,无角膜穿孔;两组角膜融解发生率间比较,差异有显著意义(P＜0.05);治疗组角膜混浊程度明显低于对照组(P＜0.01).病理检查结果显示治疗组角膜胶原纤维破坏轻,炎性细胞浸润明显少于对照组.结论 GM 6001可抑制和延迟碱烧伤后角膜融解的发生和发展,降低角膜胶原纤维的破坏及角膜组织中炎性细胞的浸润.
关键词： 角膜 烧伤 化学 二肽类 金属蛋白酶类组织抑制剂 -
缺氧复氧损伤后小肠上皮细胞刷状缘二肽转运载体生物学功能的改变及生长激素的调控作用
目的探讨缺氧复氧损伤后小肠上皮细胞模型Caco-2细胞刷状缘二肽转运载体(PepT1)生物学功能的变化及重组人生长激素(rhGH)对PepT1的调控作用.方法建立Caco-2细胞单层培养模型和缺氧复氧损伤模型,比较常规培养的Caco-2细胞单层及缺氧复氧损伤后Caco-2细胞模型对底物头孢氨苄转运和摄取功能的变化;用rhGH对两种细胞模型进行干预,比较两者对底物的转运和摄取能力改变;同时分别比较各种情况下PepT1 mRNA的变化.结果缺氧复氧损伤后Caco-2细胞PepT1 mRNA水平明显下降,对底物的摄取能力明显低于对照组(P＜0.05);正常培养的Caco-2细胞经rhGH孵育后对底物的转运和摄取能力明显强于对照组(P＜0.05);缺氧复氧损伤后的Caco-2细胞用rhGH孵育后对底物的转运和摄取能力明显提高,与单纯损伤组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论缺氧复氧损伤后PepT1 mRNA下降,在基因水平下调了肠上皮细胞刷状缘PepT1对二肽的转运和摄取能力;rhGH对正常培养的Caco-2细胞和缺氧复氧损伤的Caco-2细胞的二肽载体转运和摄取功能均有上调作用;rhGH是在基因水平调节PepT1的生物学功能.
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人的基因工程氨酰基脯氨酸二肽酶的多效酶活性
目的研究人氨酰基脯氨酸二肽酶除催化水解C端为脯氨酸残基的二肽外,是否还有G类有机磷化合物水解酶(G酶)活性.方法用基因工程技术克隆及表达人的重组氨酰基脯氨酸二肽酶.氨酰基脯氨酸二肽酶及G酶活性用常规方法测定.结果 COS-7细胞表达的人氨酰基脯氨酸二肽酶催化有机磷化合物梭曼的水解,也水解二肽化合物Gly-Pro.两种活性比未转染的COS-7细胞高2倍.比较转染了带有氨酰基脯氨酸二肽酶基因的重组载体的COS-7细胞和对照组细胞中的两种酶活性,可以看到有平行的升高趋势及恒定的酶活性比值.结论G酶和氨酰基脯氨酸二肽酶为同一个酶,或至少属于同工酶.
