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α-干扰素对大鼠肝纤维化间质胶原酶基因表达的调控
1材料和方法清洁型Wistar♂大鼠70只,随机分为正常对照组(10只)、模型对照组(30只)和干扰素治疗组(30只).参照Montfort造模方法[1],应用40%(V/V)CCl4纯花生油溶液按2 mL/kg体重予干扰素治疗组及模型对照组Wistar大鼠ip,2次/wk,共6wk.
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血小板活化因子及其乙酰水解酶与中枢神经系统疾病研究进展
血小板活化因子(PAF)是具有多种生物学活性的磷脂,是迄今发现的有效的血小板激活剂.通过免疫促炎、促血栓形成、兴奋性氨基酸释放、自由基产生、离子超载、即早基因表达等途径,在神经系统疾病中扮演重要的角色.血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)能够水解PAF和相关的氧化磷脂并使之失活,从而发挥有效的调节作用.现就PAF、PAF-AH与中枢神经系统疾病的相关研究进行综述.
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环氧化物水解酶Tyr113His多态性与中国北方人群食管鳞状细胞癌易感性的研究
目的:研究微粒体环氧化物水解酶Tyr113His多态性与中国北方人群食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)易感性的关系.方法:采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法分析 257例食管癌患者和252名健康对照组人群mEH Tyr113His基因型分布.结果:Tyr 和His等位基因频率在食管癌患者和健康对照组中分别为44.2%、55.8%和44.0%、56.0%.等位基因分布在两组之间差异无统计学意义,χ2=0.008,P=0.929;基因型分布在病例组与对照组之间差异也无统计学意义,χ2=2.116,P=0.347.相对于Tyr/Tyr基因型,His/His基因型或His/His与Tyr/His基因型相加均未增加ESCC的发病风险.它们的危险度分别为1.076(95%可信区间=0.850～1.361)和0.756(95%可信区间=0.493～1.157).如按性别、年龄、吸烟状态及是否具有上消化道肿瘤家族史进行分类,His/His基因型或His/His与Tyr/His基因型相加也未对ESCC的发病风险造成明显影响.结论:mEH的Tyr113His多态性不能作为筛查ESCC患病风险的独立因素.
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白三烯A4水解酶基因多态性与结核性脑膜炎病情严重程度的相关性研究
目的 探讨白三烯A4水解酶(LTA4H)基因rs17525495位点多态性与结核性脑膜炎(TBM)患者病情严重程度的相关性.方法 以2014年1月至2016年10月河北医科大学第二医院神经内科收治的184例TBM患者为研究对象,参照英国医学研究会标准将患者病情严重程度分为3期,对患者LTA4H基因单核苷酸多态性位点rs17525495进行基因测序,并对患者的一般病例资料、临床表现、腰椎穿刺术检查结果进行数据描述与分析.结果 184例患者中LTA4H基因rs17525495位点CC基因型91例(49.5％),CT型75例(40.8％),TT型18例(9.8％),等位基因频率C为69.8％,T为30.2％.CC型患者中,Ⅰ期患者所占比例(54.9％,50/91)高于Ⅱ(22.0％,20/91)、Ⅲ期(23.1％,21/91);TT型患者中,Ⅱ(8/18)、Ⅲ期(8/18)患者所占比例高于Ⅰ期(2/18)患者(χ2=15.898,P=0.003).对患者头痛、发热、恶心呕吐、颈项强直、癫痫、意识障碍6个方面进行统计分析,发现TT型患者与CC、CT型患者相比,发热(TT型13/18,CC型42/91,CT型50/75,χ2=8.932,P=0.011)、颈项强直(TT型12/18,CC型38/91,CT型46/75,χ2=7.993,P=0.018)的发生率更高,不同基因型组间头痛、恶心呕吐、意识障碍、癫痫发生率差异无统计学意义.不同基因型患者间腰椎穿刺压力、氯化物、蛋白质、葡萄糖差异均无统计学意义.结论 TBM患者病情较轻时,多提示LTA4H基因rs17525495位点为CC型;病情较重的患者则提示LTA4H基因rs17525495位点为TT型.
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基质金属蛋白酶的表达与声门上喉癌淋巴结转移的关系
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)是基底膜(basement membrane,BM)和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解过程中的主要的蛋白水解酶类,在恶性肿瘤的转移过程中扮演着关键的角色[1].本研究运用免疫组化和逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)等方法,分析6种MMP在声门上喉癌中的表达与颈淋巴结转移的关系,报告如下.
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放射性肝损伤早期效应实验研究--Kupffer细胞数量与功能评价
肝组织内的Kupffer细胞突起丰富而长,与肝脏血窦中的内皮细胞及狄氏间隙的星状细胞和肝细胞窦面有广泛接触.Kupffer细胞内含有丰富的氧化、水解酶类,可分泌多种细胞活性因子.
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人血清对氧磷酶的部分纯化及解毒效应
目的寻求对氧磷酶(paraoxonase, EC 3.1.8.1)作为外源性抗毒剂对抗G类有机磷毒剂的可能性.方法采用亲和凝胶柱层析进行了人血清对氧磷酶的部分纯化,测定了其对于不同底物的米氏常数(Km)以及钙离子对于酶活性的影响,比较了不同种属的对氧磷酶活性,采用体外解毒,体内染毒的方法检测了对氧磷酶对于不同的底物的作用.结果部分纯化的对氧磷酶对于梭曼和对氧磷均有较好的催化水解作用.以对氧磷为底物时,Km值为0.22 mmol·L-1,比活性为375 μmol·min-1·g-1蛋白;以梭曼为底物时,Km值为0.60 mmol·L-1,比活性为434 μmol·min-1·g-1蛋白.不同种属来源的血清对氧磷酶的活性差异较大,是造成不同种属动物对有机磷毒剂中毒敏感性差别的原因之一.部分纯化的对氧磷酶在含1 mmol·L-1 CaCl2的缓冲液中活性良好,加入乙二胺四乙酸(EDTA)后,无论以对氧磷或梭曼为底物,酶活性均受到明显抑制,表明人血清对氧磷酶是钙离子依赖性酶.EDTA的pI50约为1.8 mmol·L-1.人血清对氧磷酶能有效地水解对氧磷、梭曼、沙林、塔崩及敌敌畏,但对VX及乐果无效,表明其对P-F、P-CN及P-O键有选择性,对P-S键无作用.结论对氧磷酶可作为G类毒剂的抗毒剂.
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人的基因工程氨酰基脯氨酸二肽酶的多效酶活性
目的研究人氨酰基脯氨酸二肽酶除催化水解C端为脯氨酸残基的二肽外,是否还有G类有机磷化合物水解酶(G酶)活性.方法用基因工程技术克隆及表达人的重组氨酰基脯氨酸二肽酶.氨酰基脯氨酸二肽酶及G酶活性用常规方法测定.结果 COS-7细胞表达的人氨酰基脯氨酸二肽酶催化有机磷化合物梭曼的水解,也水解二肽化合物Gly-Pro.两种活性比未转染的COS-7细胞高2倍.比较转染了带有氨酰基脯氨酸二肽酶基因的重组载体的COS-7细胞和对照组细胞中的两种酶活性,可以看到有平行的升高趋势及恒定的酶活性比值.结论G酶和氨酰基脯氨酸二肽酶为同一个酶,或至少属于同工酶.
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肝病与肝癌的新疗法:干细胞研究的新进展
一、肝病中的干细胞对转录因子Sox9细胞谱系的标记追踪证明成熟肝祖细胞(LPCs)存在或来源于胆管的上皮内膜.从3,5-diethoxycarbonyl-1,4-二氢三甲吡啶所诱导的小鼠胆管中分离出源于无性系和双潜能成熟的LPCs,也能从正常肝脏中分离出来,具有相同潜能的成人肝脏细胞有上皮细胞黏附分子(EpCAM)表达.尽管多能干细胞(iPSCs)和胚胎干细胞(ESC)存在遗传学的差异,将ESC和iPSCs入住到缺乏延胡索酰乙酰乙酸水解酶类(FAH)的肝衰竭小鼠后,均可产生肝细胞.不同来源的细胞不能影响人类iPSCs所具有的肝特性.
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基质金属蛋白酶与消化系统疾病
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)是一类结构中含Zn2+和Ca2+的蛋白水解酶类，主要参与细胞外基质的代谢。它们在血管形成、伤口愈合、肿瘤浸润和纤维化等方面起着重要的作用，因此备受关注。1 对基质金属蛋白酶的认识1.1分类和功能 目前已发现的基质金属蛋白酶已经超过14种，主要分为五类：间质胶原酶类，可降解间质胶原(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原)，包括MMP1、MMP8和MMP3；另一类为Ⅳ型胶原酶/明胶酶等，可降解基底膜Ⅳ型胶原和变性的间质胶原(明胶)，包括MMP2和MMP9；第三类为基质分解素类，可降解蛋白多糖、层粘连蛋白、纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原，包括MMP3、MMP7和MMP10；第四类为膜型金属蛋白酶类(membrane-type MMP3,MT-MMPs)，是近克隆克出来的MMP家庭新成员，并迅速成为研究热点，它包括MMP14、MMP15、MMP16和MMP17。膜型金属蛋白酶类有双重功效：激活MMP2酶原(proMMP2)，降解细胞外基质；第五类包括MMP11和MMP12。1.2 特性 基质金属蛋白酶类有许多共同的特性；(1)其催化机制依赖于含锌离子的活化中心；(2)以酶原形式泌出；(3)酶原需经蛋白酶等水解和修饰后才有活性；(4)结构相似，cDNA序列上显示同源性；(5)能裂解一种或多种细胞外基质；(6)可被金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloprotein-ase,TIMPs)或螯合剂EDTA所抑制。1.3 金属蛋白酶组织抑制剂 TIMPs同MMPs活性的主要抑制剂，目前已发现的有TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3和TIMP-4四型。关于TIMP的作用机理，可能是通过其17～19位上的亮氨酸—缬氨酸—异亮氨酸与MMP的S1′-S2′-S3′区结合，与MMP第16位上天冬氨酸残基的羧基和其活性中心的锌结合，从而抑制其活性。TIMP不仅能与酶的催化位点结合，使酶失活，还能与酶原的某些位点结合，阻止酶原活化。
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半胱天冬酶与糖尿病及其并发症
细胞凋亡是由体内外因素触发细胞内预存的死亡程序而导致的细胞死亡过程,它有重要的生理和病理意义.在机体的发育、生长过程中,凋亡在器官和组织的形成、成熟过程发挥了重要的作用,同时维持内环境的稳定及参与防御反应.
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基质金属蛋白酶及其抑制剂与中耳胆脂瘤的相关性
1 MMP家族及其生物学功能基质金属蛋白酶(MMP)是一组具有高度同源性的能降解基底膜的水解酶类.在正常的生命过程中,参与结缔组织包括骨组织的重建,其基因表达和活性的异常在恶性肿瘤的浸润和转移、骨代谢和器官硬化疾病的发展中起重要作用.迄今在人类至少已发现有19种之多[1-2],构成MMPs超家族.
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大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因的表达
目的:观察大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因表达的改变.方法:实验于2004-09/2005-06在中南大学湘雅医院神经病学实验室(实验室B级)完成.选择青龄(2月龄)健康雌性SD大鼠10只,老龄(20月龄)健康雌性SD大鼠10只.①反转录反应:反应体系20μL,取5 μg(2μL)总RNA,加1/gL Oligo(dT)18 0.5μL,焦碳酸二乙酯处理过的水8.5 μL,70℃保持5 min,然后冰上骤冷30 s,短暂离心3～5 s,再加5×反转录buffer4 μL,10mmol/L dNTPMix 2μL,4U/μLRnasin 05 μL,焦碳酸二乙酯处理过的水1.5μL,轻轻混匀、离心3～5 s,37℃保持5 min,后加200 U/μL M-Mulv反转录酶1μL,42℃保持1 h,70℃保持10 min变性,冰上冷却10 min,反转录产物(cDNA)于-20℃保存备用.②聚合酶链反应:总反应体系25μL,包括10×聚合酶链反应buffer 2.5μL,25 mmol/L氯化镁1.5μL,10 mmol/L dNTP 1μL, 2 U/μLTaq酶0.5 μL,上述反转录产物cDNA 2μL,50μmol/L上游目的引物0.5μL,50 μmol/L下游目的引物0.5μL,ddH2O16.5μL.各程序均采用95℃5 min预变性,94℃,45 s、退火温度30 s,72℃1 min进行32个循环,后72℃延伸10 min.退火温度,去整合蛋白和金属蛋白水解酶10:62.3℃;去整合蛋白和金属蛋白水解酶17:50.2℃;肌动蛋白:46℃.取聚合酶链反应产物5 μL于15g/L琼脂糖凝胶电泳,然后在凝胶图像处理系统上扫描,测定各目的基因和肌动蛋白扩增产物的吸光度值,分别计算其比值,即目的基因值=目的基因吸光度值/肌动蛋白吸光度值.结果:纳入动物20只,均进入结果分析.①老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶10的表达水平(1.2170±0.430 8)低于青龄大鼠(1505 0±0.495 8),但两组比较差异无显著性(t=1.239,P＞0.05).②老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶17的表达水平(1.572 0±0.567 0)高于青龄大鼠(0.974 0:±0.328 1),但两组比较差异无显著性(t=-1.476,P＞0.05).结论:去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17的基因表达水平可能不是老龄人易发阿尔茨海默病的生物学基础.
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AQP3、Caspase14、博来霉素水解酶对慢性湿疹皮肤屏障的作用研究
目的 探讨水通道蛋白3(aquaporin 3,AQP3)、半胱氨酸蛋白酶14(Caspase 14)、博来霉素水解酶(bleomycin hydrolase,BH)在慢性湿疹患者皮肤屏障中的作用以及窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗慢性湿疹的部分作用机制.方法 多功能皮肤测试仪测定30例慢性湿疹患者皮损及非皮损处皮肤含水量及经皮水分丢失(TEWL).免疫组化方法检测AQP3、Caspasel4、BH在慢性湿疹患者皮损及非皮损处的表达.400、800、1200 mJ/cm2三组不同剂量NB-UVB照射培养的角质形成细胞,免疫印迹方法检测AQP3、Caspase14及BH蛋白表达变化.结果 慢性湿疹患者皮损部位皮肤含水量显著减少,约为11.32±5.25,经皮水分丢失明显增加,约为86.28±16.35,与非皮损处比较,差异有统计学意义(P＜0.05).慢性湿疹患者皮损处AQP3及Caspase 14表达显著增高,分别为非皮损处的5.3倍及4.2倍.BH表达显著下降,约为非皮损处的1/3.皮损处与非皮损处比较差异有统计学意义(P＜0.05).400、800、1200 mJ/cm2 NB-UVB照射角质形成细胞后,AOP3及BH蛋白表达均明显下降,分别为对照组的0.48、0.23、0.16;0.82、0.78、0.22.而Caspase 14表达只有在1200 mJ/cm2较高剂量NB-UVB照射后才显著下降,为对照组的0.34.与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 慢性湿疹患者皮肤屏障功能受损可能与BH表达减少,Caspase 14及AQP3表达增加有关,NB-UVB治疗慢性湿疹的部分作用机制可能与下调AQP3、Caspasel4及BH的表达有关.
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甲真菌病分离菌株细胞外水解酶活性的测定
目的 对常见的甲真菌病分离菌株进行细胞外水解酶活性测定,以期发现可能与甲真菌病发病相关的毒力因子.方法 诱导培养基为含甲碎片的培养基,受试菌株包括常见皮肤癣菌、非皮肤癣菌的标准菌株及临床分离自甲真菌病的红色毛癣菌.细胞外水解酶谱的测定体系采用法国生物-梅里埃公司的酶活性测试试剂盒API ZYM.结果 与非皮肤癣菌相比,来自于含甲碎片培养基的皮肤癣菌的酯酶、酯脂肪酶、N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶和α-甘露糖苷酶活性增加(P＜0.05).与非红色毛癣菌相比,来自于含甲碎片培养基的红色毛癣菌N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性升高(P＜0.05).临床评分指数不同积分段甲真菌病的红色毛癣菌临床分离株除萘酚-AS-BI-磷酸水解酶外,其余酶的活性差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 在特定环境中,水解酶的活性与菌株的种类有关,并对甲真菌病的临床表现可能有一定影响.
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血小板活化因子乙酰水解酶基因Val279Phe突变与银屑病的相关性研究
目的探讨血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)在银屑病发病机制中的作用.方法等位基因特异性聚合酶链反应技术分析银屑病患者及健康对照者PAF-AH基因Val279Phe位点的多态性,并对含有突变等位基因的多态性片段进行DNA测序分析.采用PAF-AH活性检测试剂盒测定血浆PAF-AH的活性.结果所有研究对象中发现3例Val279Phe突变型杂合子,未发现突变型纯合子;银屑病组的突变等位基因频率与健康对照组差异无统计学意义(P＞0.1);银屑病患者血浆PAF-AH活性低于健康献血者,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论本研究结果提示PAF-AH基因的Val279Phe 突变与银屑病无明显的相关关系,可能不是银屑病患者血浆PAF-AH活性降低的主要原因.
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原发性肝细胞癌中内源性大麻素的含量变化及其意义
目的 检测并比较临床肝癌组织与相应癌旁组织中内源性大麻素及其相关受体、合成代谢酶的含量变化,为寻找肝癌新型标志物和治疗靶点提供依据.方法 采用HPLC-MS检测47例肝癌组织以及相应癌旁组织的内源性大麻素含量,采用RT-PCR和Western-blot法检测相关受体及合成代谢酶的mRNA、蛋白表达.结果 在肝癌组织中,内源性大麻素2|花生四烯酰甘油酯(2-AG)含量高,且显著高于癌旁组织(P<0.01);内源性大麻素花生四烯酰乙醇胺(AEA)的含量低,且显著低于癌旁组织(P<0.05).类内源性大麻素油酰乙醇胺(OEA)和棕榈酰乙醇胺(PEA)的含量在肝癌组织与癌旁组织中未检测到显著差异.肝癌组织中2-AG受体CB2的表达较癌旁组织显著上升(P<0.05);AEA受体CB1的表达则呈显著下降趋势(P<0.05).结论 肝癌组织中内源性大麻素系统发生了显著变化,提示2-AG高表达和AEA低表达可能对原发性肝细胞癌的形成和发展具有重要作用.
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酶水解-DNS比色法测定烟草中淀粉含量
目的: 烟草中淀粉经淀粉酶水解成单糖后,利用DNS比色法测定其还原糖并确定淀粉的含量.方法: 用DNS比色法取代传统经典的高锰酸钾滴定法测定烟叶中淀粉含量.结果: DNS试剂中的3,5-二硝基水杨酸与烟样中的还原糖共热生成的红棕色产物在反应后6 h内保持稳定,其吸光度在一定浓度范围内与还原糖含量成正比,可以稳定测定还原糖的含量,回收率98%～102%.结论: 与高锰酸钾滴定法比较,酶解DNS比色法的回收率高,成本低,特别适合大批量烟样淀粉含量的测定.
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丁苯酞对急性脑梗死患者血清UCH-L1、GFAP及TNF-α水平的影响
目的:探讨丁苯酞氯化钠注射液治疗脑梗死患者急性期对患者血清人泛素c末端水解酶(UCH-L1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响.方法:选取57例急性脑梗死患者,均应用丁苯酞进行治疗,观察患者治疗前后美国国立卫生院神经功能缺损(NIHSS)评分的变化情况,同时对比患者治疗前后血清UCH-L1、GFAP及TNF-α水平变化情况.结果:与治疗前相比,治疗后NIHSS评分显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与治疗前相比,57例患者治疗后血清UCH-L1、GFAP及TNF-α水平均有所下降,差异有统计学意义(P＜0.05);与治疗前相比,患者治疗7、14 d时Barthel指数评分显著提高(P＜0.05),且治疗14 d时与治疗7d时比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:丁苯酞注射液治疗脑梗死患者急性期可显著降低患者血清UCH-L1、GFAP及TNF-α水平,加速患者脑组织及神经功能的恢复对提高患者生活质量具有重要促进作用.
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基质金属蛋白酶家族MMPs在病理性瘢痕中的研究进展
病理性瘢痕以胶原等细胞外基质的过度沉积为主要特征,目前发病机制不清[1].基质金属蛋白酶(MMP)是一组锌依赖性的、能降解几乎所有细胞外基质成分的蛋白水解酶类,又被称之为MMP家族(MMPs),主要参与组织修复与重塑、瘢痕形成等病理生理过程[2].目前认为MMPS在病理性瘢痕形成中发挥了重要作用.为进一步了解MMPs及其在病理性瘢痕组织中的研究进展,笔者现做综述如下.
