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高效毛细管电泳分离氨基酸对肝癌肝硬化的诊断价值
目的:建立高效毛细管电泳分离氨基酸的方法探讨肝癌肝硬化患者血清氨基酸变化.方法:用毛细管电泳法对17种常见氨基酸的2,4-二硝基氟苯(DNFB)衍生物进行了分离研究,优化缓冲液浓度、pH、有机溶剂及表面活性剂对分离影响的条件,对正常人,肝癌及肝硬化患者各20例的血浆游离氨基酸进行测定.结果:在优化条件下,17种氨基酸除亮氨酸,异亮氨酸外均达到基线分离.9 min内分离18种氨基酸,线性在20-1 000μmol/L范围,回收率为77.5-113.3%,批内精密度2.6-11.4%,批间精密度5.8-19.7%.肝硬化组酪氨酸、丝氨酸、色氨酸明显升高,丙氨酸明显下降;肝癌组酪氨酸、半胱氨酸、缬氨酸明显升高,脯氨酸明显下降.结论:以浓度为30 mmol/L pH9.9的硼砂溶液含150 g/L异丙醇为运行缓冲液,分离氨基酸DNFB衍生物效果佳,分离时间30 min,出峰17个.毛细管电泳测定血浆游离氨基酸对肝癌肝硬化诊断和治疗有一定指导意义.
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乙型肝炎病毒YMDD变异研究进展
核苷(酸)类似物拉米夫定作用于乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶活性部位YMDD基序(酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸),抑制HBV DNA复制,抗病毒效果显著.但临床上部分患者可表现为无应答或随着用药时间的延长,HBV会发生突变并导致对拉米夫定耐药,影响拉米夫定的疗效,常见的突变位点在YMDD基序的第204位上,即蛋氨酸被缬氨酸或异亮氨酸取代(rtM204V或rtM204I),分别称为 YVDD和YIDD突变.目前对YMDD变异的研究是一个热点,本文就近年来该方面的研究进展作一综述.
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075 神经肽在鼻粘膜超敏反应中的作用
鼻粘膜除了受自主神经系统支配,还受非肾上腺素能非胆碱能神经(nonadrenergic noncholinergicherve,NANC)的影响。这些NANC神经释放多种神经肽,如P物质(AP)、神经激肽A(NKA)、神经激肽B(NKB)、降钙素基因相关肽(CGRP)、胃分泌素释放肽(GRP)、血管活性肠肽(VIP)、氨基端为组氨酸、羧基端为蛋氨酸的肽(PHM)和氨基端为组氨酸、羧基端为异亮氨酸的肽(PHI)、神经肽Y(NPY)等,它们与经典的神经递质共存共释,在鼻粘膜超敏反应中起重要作用。
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运动中补充支链氨基酸对肌肉代谢的影响
支链氨基酸包括异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸,是机体不能合成而由食物蛋白提供的三种必需氨基酸,是长时间持续运动时参与供能的重要氨基酸.肌肉内BCAA分解代谢非常活跃,与其它多数氨基酸相比,BCAA能以相当快的速率转氨基和完全氧化,并为丙氨酸和谷氨酰胺提供氨基.BCAA代谢的限速酶支链-酮酸脱氢酶复合物(BC复合物)在肌肉中的活性较强,使肌肉具有很强的氧化和利用BCAA的能力,所以BCAA主要在肌肉中代谢[1].BCAA在肌肉中氧化脱氨,生成相应的α-酮酸,进入三羧循环氧化供能,而脱下的氨基则由丙酮酸接受生成丙氨酸,经血液到肝脏,其氨基形成尿素,碳架经糖异生作用转化为糖,进入糖代谢.因此在运动中补充BCAA对肌肉代谢的影响十分重要,本文对其进行综述,以帮助全面了解BCAA,为合理使用提供参考.
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薄层扫描法测定藏药威隆风湿壮骨酒中异亮氨酸的含量
目的:建立藏药威隆风湿壮骨酒中异亮氨酸含量测定方法;方法:应用薄层扫描法,硅胶G薄层板,展开剂为正丁醇-冰醋酸-水(3:1:1),喷以1%茚三酮乙醇溶液,105℃加热至显色,测定波长为500nm;结果:异亮氨酸在0.908~4.54μg范围内线性关系良好,r=0.9999;平均回收率为99.08%,RSD=1.8%,(n=5);结论:本法简便,结果准确,稳定.
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基质金属蛋白酶与消化系统疾病
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)是一类结构中含Zn2+和Ca2+的蛋白水解酶类,主要参与细胞外基质的代谢。它们在血管形成、伤口愈合、肿瘤浸润和纤维化等方面起着重要的作用,因此备受关注。1 对基质金属蛋白酶的认识1.1分类和功能 目前已发现的基质金属蛋白酶已经超过14种,主要分为五类:间质胶原酶类,可降解间质胶原(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原),包括MMP1、MMP8和MMP3;另一类为Ⅳ型胶原酶/明胶酶等,可降解基底膜Ⅳ型胶原和变性的间质胶原(明胶),包括MMP2和MMP9;第三类为基质分解素类,可降解蛋白多糖、层粘连蛋白、纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原,包括MMP3、MMP7和MMP10;第四类为膜型金属蛋白酶类(membrane-type MMP3,MT-MMPs),是近克隆克出来的MMP家庭新成员,并迅速成为研究热点,它包括MMP14、MMP15、MMP16和MMP17。膜型金属蛋白酶类有双重功效:激活MMP2酶原(proMMP2),降解细胞外基质;第五类包括MMP11和MMP12。1.2 特性 基质金属蛋白酶类有许多共同的特性;(1)其催化机制依赖于含锌离子的活化中心;(2)以酶原形式泌出;(3)酶原需经蛋白酶等水解和修饰后才有活性;(4)结构相似,cDNA序列上显示同源性;(5)能裂解一种或多种细胞外基质;(6)可被金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloprotein-ase,TIMPs)或螯合剂EDTA所抑制。1.3 金属蛋白酶组织抑制剂 TIMPs同MMPs活性的主要抑制剂,目前已发现的有TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3和TIMP-4四型。关于TIMP的作用机理,可能是通过其17~19位上的亮氨酸—缬氨酸—异亮氨酸与MMP的S1′-S2′-S3′区结合,与MMP第16位上天冬氨酸残基的羧基和其活性中心的锌结合,从而抑制其活性。TIMP不仅能与酶的催化位点结合,使酶失活,还能与酶原的某些位点结合,阻止酶原活化。
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异亮氨酸改善上消化道出血患者肝脏和肌肉蛋白合成功能
2007年3月出版的《肝脏病学》杂志上(Hepatology,2007,45:560-568)Damink等通过经鼻胃内灌注氨基酸溶液模拟肝硬化患者上消化道出血(UGB)发作,同时静脉注射异亮氨酸,结果发现异亮氨酸可以明显改善"出血患者"肝脏和肌肉的蛋白合成功能,有望成为治疗并改善UGB预后的一个新方法.
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基于1H-NMR代谢组学比较不同品种海马化学成分差异性
目的 应用1H-NMR代谢组学技术比较线纹海马、大海马、三斑海马中化学成分的差异性,为中药海马质量评价研究提供依据.方法 采用1H-NMR代谢组学技术对3个不同品种海马药材进行NMR氢谱分析,归属、指认图谱中化合物,通过多元统计分析比较不同品种海马化学成分,发现其中的差异及其规律.结果 在海马甲醇-水(1∶1)提取物1H-NMR图谱中共指认出33种化学成分;多元统计分析结果显示线纹海马、大海马化学成分相近,差异性较小,而三斑海马相比于线纹海马、大海马,异亮氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸、羟脯氨酸、脯氨酸、精氨酸、半胱氨酸含量降低,呈显著性差异,牛磺酸、甘油含量则显著上升.结论 应用代谢组学技术从整体水平比较不同品种海马的化学成分,发现其中的差异性及其规律,为中药海马质量控制研究提供了新思路.
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基于代谢组学的阿霉素肾病大鼠模型损伤程度评价
目的 以代谢组学技术对阿霉素肾病大鼠模型损伤程度进行量化分析.方法 采用1H-NMR代谢组学技术,结合数理统计方法对不同给药剂量、给药次数的阿霉素肾病大鼠血清样本进行分析,鉴定反映肾病进程的进展性标志物,并依据相关标志物的变化率对肾脏损伤程度进行评价.结果 终得到9个潜在的病理标志物,分别为含氧异己酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、丙酮酸、3-羟基丁酸、柠檬酸、肌酐和肉毒碱;其中含氧异己酸和肉毒碱存在一定的剂量依赖性,即阿霉素造模剂量越大,这些内源性代谢物的变异越大,表明肾脏损伤越严重,可作为反映肾病进程的进展性标志物.结论 这一研究为肾病提供了诊断标志物,为研究其他进展性疾病的发病进程及早期诊断标志物的发现提供研究方法和思路.
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HPLC-ELSD法测定胡芦巴提取物中4-羟基异亮氨酸
胡芦巴Trigonella foenum-graecum L.,又名香豆子、香苜蓿、芦巴子,为豆科蝶形花亚科胡芦巴属一年生草本植物.胡芦巴种子中主要含有半乳甘露聚糖等多糖物质、蛋白质、芹菜香脂等.此外,还含胡芦巴碱、游离氨基酸、甾体皂苷、香豆素和黄酮类物质.4-羟基异亮氨酸是胡芦巴中存在的一种非蛋白质氨基酸,在调节血糖,促进肌肉形成方面有独到的功效[1].胡芦巴中4-羟基异亮氨酸的测定方法文献报道有HPLC-ELSD法[2].本实验的目的是对胡芦巴中4-羟基异亮氨酸的测定方法进行改进,改进后的检测方法不仅简便、快速、准确性、重现性好,而且更加稳定.
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一钵豆腐敌百珍
豆腐,价廉物美而营养丰富,是百姓饭桌上的家常菜肴.据营养学专家测定,豆腐含有人体必需的赖氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸等营养物质.
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3大营养素--人体能源
蛋白质、脂类、糖类对人体的健康有着非常重要的意义.蛋白质--生长发育的物质基础蛋白质是组成人体的重要成分之一,占人体全部重量的18%.组成食物蛋白质的氨基酸有20余种,其中有8种人体自身不能合成,必须由食物供给,称"必需氨基酸":色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸.婴儿除上述8种外,组氨酸也是必需氨基酸.其余为非必需氨基酸.
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逆杂交线探针法用于拉米夫定诱导的乙型肝炎病毒YMDD变异的检测
拉米夫定抗乙型肝炎病毒(HBV)效果显著,但长期应用可发生病毒变异而影响拉米夫定的疗效,常见的变异是编码多聚酶的P基因C区YMDD变异,即酪氨酸-甲硫氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸(YMDD)发生氨基酸置换,甲硫氨酸的rt204位点被缬氨酸(rtM204V)或异亮氨酸(rtM204I)替换[1].尽早发现该变异对于抗病毒药物疗效评估和及时调整抗病毒治疗方案具有重要意义.因此本研究中采用逆杂交线探针的方法对已知在拉米夫定治疗过程中出现YMDD变异的患者进行检测,并与直接测序法比较来评价该方法的准确性,实用性.
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氨基酸的临床运用
氨基酸是一类广泛存在于自然界中的小分子化合物,其结构上含有氨基和羧基.可作为葡糖的基质、氮的载体、神经递质.并与蛋白质转变、酶活性和离子通量调节有关.在天然氨基酸中,有20种参与蛋白质合成,其中有8种人体内不能合成,需外源供给,称必需氨基酸,其他称为非必需氨基酸.从结构上分类,可分为支链氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸等)和芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸等).
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知母水层化学成分研究
目的:研究知母水层的化学成分.方法:利用大孔吸附树脂、反相ODS柱色谱结合高效液相技术对知母水层进行分离纯化,并根据波谱数据鉴定化合物的结构.结果:从知母水层中分离出5个化合物,分别鉴定为L-脯氨酸(1),L-缬氨酸(2),亮氨酸(3),异亮氨酸(4),色氨酸(5).结论:化合物1~4为首次从百合科中分离得到,化合物5为首次从知母属中分离得到.
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乙型肝炎病毒YMDD变异患者肝组织表面抗原和核心抗原的表达
长期服用拉米夫定治疗慢性乙型肝炎可引起乙型肝炎病毒(HBV)YMDD变异.YMDD变异是指病毒聚合酶的活性区第552个或551个甲硫氨酸(M)发生突变,被缬氨酸或异亮氨酸取代,是导致HBV对拉米夫定耐药、治疗失败或者无应答的原因[1-3].本研究检测HBV YMDD变异患者肝组织中表面抗原(HBsAg)和核心抗原(HBcAg)的表达,以探讨YMDD变异引起拉米夫定治疗失败的细胞分子病理机制.
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乙型肝炎血清氨基酸谱变化与肝功能相关性研究
肝脏受损伤时,普遍存在着氨基酸代谢的紊乱.肝脏受损的程度不同,血清氨基酸谱发生的改变也不相同,其特征性的改变表现为芳香族氨基酸(AAA,包括苯丙氨酸、酪氨酸)升高,支链氨基酸(BCAA,包括亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸)降低,BCAA/AA比值降低[1].
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乙型肝炎病毒YMDD变异患者肝组织中HBsAg、HBcAg表达的比较
长期服用拉米夫定治疗慢性乙型肝炎,可引起HBV YMDD变异.HBV YMDD变异是指病毒DNA聚合酶活性区的第204位或551位甲硫氨酸(M)发生突变,被缬氨酸或异亮氨酸取代,是导致HBV对拉米夫定耐药、治疗失败或HBV无应答的原因[1-3].拉米夫定治疗失败主要表现为患者肝功能损伤、肝脏组织学病理变化和病情复发甚至加重[4,5].为了比较HBV YMDD变异患者肝组织中HBsAg、HBcAg表达的差异,我们对2004至2005年发生YMDD变异的45例慢性乙型肝炎患者进行了相关研究,现报道如下.
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拉米夫定治疗与乙型肝炎病毒YMDD变异的动态观察
拉米夫定是核苷类似物,对乙型肝炎病毒(HBV)的复制有很好的抑制作用.其主要抗病毒机制是抑制HBV多聚酶的逆转录酶活性,有效阻止病毒核酸的复制合成,但它不能清除病毒的共价闭合环状DNA(cccDNA).HBV多聚酶具有逆转录酶、DNA聚合酶、RNA酶H的活性,计算机模拟分析表明,HBV多聚酶有A到E共5个活性部位,位于多聚酶结构域C的酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(YMDD)基序是该酶的活性区域,其中M552可被异亮氨酸(Ⅰ)或缬氨酸(Ⅴ)取代(即YMDD变为YIDD/YVDD),是HBV病毒对拉米夫定治疗产生耐药性的主要原因[1].本研究采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和扩增受阻突变体系聚合酶链反应(ARMS-PCR)检测技术,对136例慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗前后YMDD变异进行动态观察,同时监测其血清HBV DNA载量和丙氨酸转氨酶(ALT)水平的变化,以探讨YMDD变异的发生机制和拉米夫定治疗前后YMDD变异株的动态变化.
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基因芯片技术检测乙型肝炎病毒YMDD变异
核苷类似物拉米夫定(3TC)治疗慢性乙型肝炎(CHB)过程中,乙型肝炎病毒(HBV)P基因YMDD基序中的甲硫氨酸密码子(M)易突变为缬氨酸(V)或异亮氨酸(I),形成YMDD变异的两种氨基酸序列,即YVDD和YIDD.国内外研究发现[1,2],YMDD基序变异与拉米夫定耐药、肝炎复发有密切关系.我们采用HBV基因多态性芯片检测技术,对102例长期用拉米夫定治疗CHB患者血清进行了检测,进一步探讨YMDD变异与临床的关系.