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带蒂肌筋膜瓣充填与包裹构建喉支架形态组织工程软骨
目的 探讨带蒂肌筋膜组织瓣构建组织工程喉支架形态软骨方法,为肌筋膜瓣复合组织工程化软骨修复重建喉软骨支架功能提供实验依据.方法 采用溶剂浇铸、模压成形和颗粒滤沥方法制备喉支架形态聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物[poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate),PHBHH]生物材料塑形物,接种软骨细胞形成细胞-PHBHH复合物,体外共同培养1周后用于体内植入.12只新西兰白兔,以其脊背部一侧骶棘肌及其筋膜制备肌筋膜组织瓣,采用筋膜衬里方法充填与包裹软骨细胞-PHBHH喉支架形态复合物(实验组9只),原位植入.设空白对照组(3只).分别于术后6、12和18周取材,行大体形态观察,组织学和免疫组化检测评估喉支架形态组织工程化软骨成形与再生情况.结果 制备的PHBHH多孔生物材料塑形物呈中空半面喇叭状,形似喉支架形态,乙醇静态容积测定孔隙率＞90％.筋膜衬里的带蒂肌筋膜组织瓣血运丰富,可有效充填与包裹喉支架形态塑形物.不同时间点均获取大体形态维持良好的喉支架形态组织工程软骨,组织学和免疫组化检测均证实体内植入6周即可形成软骨组织,12周及18周软骨组织进一步成熟.单纯PHBHH喉支架作为对照组体内植入未检测到软骨组织.结论 带蒂肌筋膜组织瓣可保障血运,采用筋膜衬里的肌筋膜组织瓣充填与包裹方法可构建喉支架形态组织工程软骨.
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基于代谢组学的阿霉素肾病大鼠模型损伤程度评价
目的 以代谢组学技术对阿霉素肾病大鼠模型损伤程度进行量化分析.方法 采用1H-NMR代谢组学技术,结合数理统计方法对不同给药剂量、给药次数的阿霉素肾病大鼠血清样本进行分析,鉴定反映肾病进程的进展性标志物,并依据相关标志物的变化率对肾脏损伤程度进行评价.结果 终得到9个潜在的病理标志物,分别为含氧异己酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、丙酮酸、3-羟基丁酸、柠檬酸、肌酐和肉毒碱;其中含氧异己酸和肉毒碱存在一定的剂量依赖性,即阿霉素造模剂量越大,这些内源性代谢物的变异越大,表明肾脏损伤越严重,可作为反映肾病进程的进展性标志物.结论 这一研究为肾病提供了诊断标志物,为研究其他进展性疾病的发病进程及早期诊断标志物的发现提供研究方法和思路.
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3-羟基丁酸衍生物对PC12细胞凋亡的保护作用
目的：观察3-羟基丁酸甲酯和3-羟基丁酸乙酯对PC12缺血清诱导凋亡细胞的保护作用。方法化学法降解聚羟基丁酸酯制备3-羟基丁酸甲酯和3-羟基丁酸乙酯。培养PC12细胞，以含血清培养组细胞为阴性对照组，缺血清培养组细胞为阳性对照组，以在缺血清条件下添加不同浓度3-羟基丁酸甲酯或3-羟基丁酸乙酯细胞为样品组，通过形态学观察法、噻唑蓝（ MTT）法检测各组细胞形态及活性变化。结果与阴性对照组比较，阳性对照组细胞出现大量凋亡，形态变小变细，活性降低。样品处理组细胞活性不同程度提高，低浓度（0.01和0.001 mg·mL-1）3-羟基丁酸甲酯和3-羟基丁酸乙酯对凋亡细胞有保护作用，浓度为1 mg·mL-1时效果好。结论通过化学法能够制备高纯度3-羟基丁酸甲酯和3-羟基丁酸乙酯，上述两种样品对缺血清诱导凋亡的PC12细胞有保护作用。
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实时荧光定量PCR检测小鼠脑组织中3-羟基丁酸受体基因PUMA-G的转录表达
目的 检测小鼠海马、下丘脑、额叶皮质和颞叶皮质组织中的3-羟基丁酸和烟酸受体基因PUMA-G(protein upregulated in macrophages by IFN-g)的转录表达.方法 采用试剂盒法提取脑组织总RNA,分光光度法测定RNA的含量和纯度,变性凝胶电泳检测RNA的完整性,实时荧光定量PCR技术检测PUMA-G的转录表达.结果 与阳性对照组(心肌组织)一样,PUMA-G在小鼠海马、下丘脑、额叶皮质和颞叶皮质组织中均有转录表达,其循环阈值(cycle threshold, Ct)低于40个循环数.但是各种脑组织中的转录表达水平不同,其中下丘脑的表达量高,其Ct值为35.39±0.57,与阳性对照组35.15±0.31相似,而颞叶皮质中的表达低,其Ct值为38.67±0.90,海马和额叶皮质的Ct值分别为37.59±0.60和37.75±0.51.结论 通过实时荧光定量PCR技术检测到PUMA-G在小鼠脑组织中的转录表达.
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232例体检者尿酮体阳性结果分析
目的 探讨尿酮体在体检人群不同年龄段、不同性别的分布及其与血糖的相关性.方法 对232例尿酮体为阳性的体检者按年龄及性别分组进行分析,同时与其同期检测的血糖结果 进行对比分析.结果 尿酮体阳性者以1+和2+为主;主要出现在20～50岁年龄段中;大多数尿酮体阳性者其血糖不高(≤6.1).结论 在体检人群中尿酮体阳性与血糖高低不存在相关性,尿酮体阳性并不能准确反映患者的血糖水平;尿酮体阳性主要集中在20～50岁年龄组.
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T2基因突变致3-酮硫解酶缺乏症
目的:在非糖尿病性酮症酸中毒病例中寻找3-酮硫解酶(3-ketothiolase,3KT)(以下简称T2)基因异常情况,进一步为3KT缺乏症(3-ketothiolase deficiency,3KTD)的诊断提供依据,揭示T2在异亮氨酸代谢过程中的作用,并探讨基因突变导致该疾病的潜在机制.方法:采集先证者及家属外周血,同时采集50例正常儿童外周血为正常对照,提取外周血DNA,用PCR法扩增T2基因全部外显子及其侧翼,对扩增产物进行直接测序,检测突变位点.结果:先证者外显子5第46位C突变为T,该突变导致T2蛋白第127位氨基酸由丙氨酸突变为缬氨酸,先证者父母、哥哥及正常对照组该位点均未见突变;先证者外显子1、内含子5、内含子8发现多个单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP).结论:T2基因外显子5 A127V,可能是3KTD的潜在病因.
关键词： 3-酮硫解酶 非糖尿病性酮症酸中毒 异亮氨酸代谢 3-羟基丁酸 T2基因 -
3-HB协同bFGF诱导促进神经干细胞向神经元方向分化
目的 研究3-羟基丁酸(3-HB)与bFGF或EGF协同作用对神经干细胞(NSCs)活力及分化的影响.方法 分离培养孕14～15d大鼠胚胎脑皮质NSCs,以不加处理的实验组为对照,在bFGF(10ng/mL)或EGF(20ng/mL)处理条件下分别以不同浓度3-HB(0、0.02、0.2、2mmol/L)处理P3代NSCs.分别检测细胞活力,免疫细胞化学染色MAP2观察NSCs 向神经元方向的分化情况,RT-qPCR检测转录因子SOX2、PAX6和神经元核定位因子NeuN的mRNA表达水平.结果 3-HB协同bFGF处理NSCs能够提高NSCs的细胞活力.0.02mmol/L 3-HB处理组NSCs分化的MAP2阳性细胞比例增加,PAX6和NeuN的mRNA水平升高.外源添加bFGF的条件下,0.02mmol/L处理组3-HB促进NSCs向神经元方向分化的效果更明显.结论 低浓度3-HB能够促进NSCs向神经元方向的分化,0.02mmol/L的3-HB与bFGF协同作用对NSCs向神经元方向分化的促进作用更明显,其可能通过影响SOX2、PAX6及NeuN的表达而发挥此调控作用.
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3-羟基丁酸对体外培养大鼠皮质神经干细胞增殖分化的影响
目的 研究体外条件下3-羟基丁酸(3-HB)对神经干细胞(NSCs)增殖及分化的影响.方法 分离培养孕14.5d大鼠胚胎大脑皮质NSCs,分别以不同质量浓度3-HB(0.1、0.05、0.02、0.01 g/L)处理培养至第3代的NSCs,以未加药组作为对照.CCK-8试剂盒检测细胞增殖、活力,免疫细胞化学染色观察NSCs的分化情况.结果 与对照组相比,3-HB对NSCs的增殖、活力没有显著影响,但3-HB处理组NSCs分化为β-tubulinⅢ阳性细胞(神经元)的比例增加,而分化为GFAP阳性细胞(胶质细胞)的比例没有显著变化.结论 3-HB不影响NSCs的增殖,但可促进其向神经元方向分化.
