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  • FQ-PCR检测尿巨细胞病毒在婴儿CMV感染中的应用价值

    作者:李明辉;李海峰;夏海波;包国昌;高志明;王占华

    目的 探讨并分析荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测尿巨细胞病毒(CMV)在婴儿CMV感染的诊断与治疗动态监测中的应用价值.方法 以120例确诊或疑似CMV感染观察组患儿(观察组)和120例健康对照组儿童为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对尿CMV-DNA进行检测,对血细胞pp65抗原及血清CMV-IgM同时进行检测,并且对检测结果进行比较分析.另外,对30例确诊CMV感染患儿给予更昔洛韦治疗后尿CMV-DNA拷贝进行动监测.结果 FQ-PCR检测的灵敏性和特异性均高于pp65抗原检测,两种方法的灵敏性比较有统计学意义(x2=8.004,P<0.05),特异性比较有统计学差异(x2=10.047,P<0.05);FQ-PCR法的灵敏性、特异性均较CMV-IgM法高,两法的灵敏性比较有统计学意义(x2=14.468,P<0.05),特异性比较有统计学意义(x2=37.604,P<0.05).30例确诊患儿尿CMV-DNA病毒拷贝数治疗前后有统计学差异(x2=10.55,P<0.05).结论 FQ-PCR法检测尿CMV在婴儿CMV感染的诊断与治疗动态监测中有良好的应用价值,值得临床推广.

  • 2009-2010年江苏省徐州市儿童手足口病病原学检测分析

    作者:丁韧;杜阳光;杨晋川;孙永红;孙传武;王保安

    目的 了解江苏省徐州地区2009-2010年儿童手足口病流行的病原学特征.方法 2009年3-8月和2010年1 - 12月共采集徐州儿童医院门诊、住院及常规监测的511例疑似手足口病(HFMD)儿童患者的咽拭、肛拭标本,提取病毒RNA,用实时荧光定量PCR( real-time PCR)方法同时进行肠道病毒(EV),肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16(Cox A16)的特异性基因检测.结果 511例疑似手足口病患儿的标本中,总肠道病毒阳性288例,占56.36%;288个肠道病毒核酸阳性病例中,EV71核酸阳性202例,Cox A16核酸阳性55例,构成比分别为70.14%和19.10%.≤5岁儿童感染的肠道病毒有EV71型、Cox A16型及非EV71非Cox A16的其他肠道病毒感染,>5岁儿童则只有EV71感染病例.结论 2009-2010年徐州地区儿童手足口病患儿以1~3岁儿童为主,其主要病原是肠道病毒EV71型,其次是Cox A16型.

  • PCR方法检测202例阴道炎患者生殖道沙眼衣原体感染状况报告

    作者:俞信忠;吴满武

    沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)是1957年由我国学者汤飞凡和张晓楼发现的一种病原体,属立克次体纲,衣原体目,衣原体属.CT的核酸兼有DNA和RNA,沙眼衣原体具有细菌与病毒的中间性质,但更接近细菌.

  • 乙型肝炎血清标志物与乙型肝炎DNA含量的关系研究

    作者:杨国华;武玲梅

    我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染的高发区域.本文采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测246例乙型肝炎患者血清HBV DNA,并与时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)测定其HBV血清素标志物(HBV-M)的结果进行比较与分析,探讨HBV DNA含量与HBV-M之间的关系,现将结果报告如下.

  • 荧光探针定量聚合酶链反应检测684例女童泌尿生殖道淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体感染情况

    作者:王碧霞;王丽芳;祝撷英

    目的 了解女童泌尿生殖道淋病双球菌、沙眼衣原体、解脲支原体感染情况. 方法 对684例有泌尿生殖道感染症状的女童取阴道分泌物,采用荧光探针定量聚合酶链反应(PCR-荧光探针法)进行淋病双球菌、沙眼衣原体、解脲支原体检测. 结果 684例患儿19例淋病双球菌阳性,12例沙眼衣原体阳性,31例解脲支原体阳性. 结论 对于有反复泌尿生殖道感染的女童,临床上应考虑相关病原体感染的可能,建议进行此3种病原体的检查,以指导临床治疗.

  • 荧光定量聚合酶链反应检测去颌下腺大鼠睾丸Bc1 2和Bax mRNA的改变

    作者:王晨阳;马百坤;侯林;徐会茹;黄祝;蒋超;黄宇烽;姚兵

    目的 观察切除颌下腺对大鼠睾丸Bax和Bc1 2 mRNA表达的影响.方法 切除大鼠颌下腺,分别于术后14、28和42 d处死大鼠,提取睾丸总RNA,反转录,设计特异性引物和Taqman探针,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Bax和Bc1 2 mRNA的改变.结果 随着颌下腺切除时间的延长,实验组大鼠睾丸Bax和Bc1 2 mRNA的比值显著升高,与对照组比较,有显著性差异(P<0.01).结论 颌下腺切除大鼠睾丸Bax和Bc1 2 mRNA比值明显升高,提示颌下腺切除所致的大鼠睾丸生精细胞的凋亡可能是由Bax和Be1 2介导的线粒体途径进行,但Fas/FasL是否参与该凋亡过程还有待进一步研究.

  • FQ-PCR监测血浆EBV-DNA水平在鼻咽癌患者诊疗中的意义

    作者:林炜

    目的 探究荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法监测血浆EBV-DNA水平在鼻咽癌患者诊疗中的临床意义.方法 选择接受治疗的鼻咽癌患者31例作为试验组,采用FQ-PCR于不同治疗阶段对血浆EBV-DNA水平进行监测;同期选择31名阴性健康体检者设为对照组.对比分析两组相关指标.结果 对照组EBV-DNA阳性率显著比试验组低(P<0.05);于不同时期对试验组29例EBV-DNA阳性鼻咽癌患者血浆EBV-DNA水平进行监测,结果显示25例EBV-DNA水平明显下降,且在治疗6周后,患者EBV-DNA基本消失;而对照组3例于治疗期间均能被检测出EBV-DNA,且症状改善不明显.结论 对鼻咽癌患者应用FQ-PCR进行检测,可发现其体内血浆中含有大量EBV-DNA,说明将FQ-PCR应用于鼻咽癌患者的诊断与预后检测,可为临床提供应用价值较高的依据.

  • 3种荧光定量聚合酶链反应试剂筛查入境人员中疑似肺结核病例的效果比较

    作者:马艳艳;王永亮;李辉;石洁;马晓光

    目的 比较3种荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)试剂检测痰标本中结核杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR在国境口岸快速检测结核病人的价值.方法 对129例疑似肺结核患者的痰标本分别采用FQ-PCR试剂法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌;以培养法为金标准比较艾康、匹基和博奥3种FQ-PCR试剂的特异性和灵敏度.结果 艾康检测疑似肺结核病病例、涂片镜检阳性和涂片镜检阴性者的灵敏度为90.12%、93.55%、78.95%,特异度为95.65%、100%、95.65%;匹基检测疑似肺结核病病例、涂片镜检阳性和涂片镜检阴性者的灵敏度为87.50%、95.16%、61.11%,特异度为100%、100%、100%;博奥检测疑似肺结核病病例、涂片镜检阳性和涂片镜检阴性者的灵敏度为86.59%、95.24%、57.89%,特异度为100%、100%、100%.结论 FQ-PCR是一种简便快速方法,对于涂片镜检阳性结核病病例的检测具有很高的敏感性和特异性,对于涂片镜检阴性结核病病例检测有很高的特异性,适于国境口岸出入境人员中结核病病例的快速检测.

  • 梅毒螺旋体荧光定量PCR检测方法的建立

    作者:郭文秀;云华;毛兰英;孙志;陈宇飞

    目的 建立梅毒螺旋体的荧光定量PCR检测方法.方法 依据梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)DNA多聚酶Ⅰ(polA)基因序列,设计MGB-Taqman探针和PCR引物,对TPPA法检测到的不同国家和人种梅毒螺旋体抗体阳性患者和阴性人员血液样本进行检测,验证该PCR方法的灵敏度和特异性,以及2种检测方法的一致性.结果 PCR产物测序证实新建的荧光PCR方法可以扩增到梅毒螺旋体polA基因区200 bp长DNA片段.该方法特异性强、灵敏度高,可检出每微升血液中10拷贝梅毒DNA.在31例TPPA法检测结果为阳性的样本中,有21例为PCR阳性.证明其中10例TPPA法阳性为非现行感染,可能不具有传染性.统计分析表明该荧光PCR方法与TPPA方法对不同国家和种族人群检测结果未出现显著差异.结论 新建的荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,可排除TPPA法阳性梅毒患者中非现行感染的旅行者,是适用于不同地区和种族的旅行者进行梅毒检测的新方法.

  • 荧光定量聚合酶链反应技术检测孕妇外周血中游离胎儿DNA的可行性研究

    作者:贾颐舫;吴爱华;张爱东;杨丹彤;邱毅

    目的:探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术用于孕妇外周血浆中游离胎儿DNA检测的可行性.方法:利用FQ-PCR技术特异性扩增Y基因性别决定区(SRY)并定量分析妊娠中期(18~25周)孕妇血浆中含量.结果:148例男胎孕妇血浆标本中,SRY基因检出率为98.65%.139例女胎孕妇血浆标本中未检测到SRY基因.结论:FQ-PCR技术在孕妇外周血游离胎儿DNA的检测中具有较高的灵敏性和特异性,FQ-PCR技术可应用于非创伤性产前诊断.

  • 不同热处理方法对鲤鱼DNA的影响及不同DNA提取方法的比较

    作者:雍凌;张文众;刘玉梅;贾旭东;严卫星

    目的 研究不同加热方法处理后鲤鱼基因组DNA长度和含量的变化,并对4种DNA提取方法进行比较.方法 用电磁炉和微波炉将鲤鱼背部肌肉加热煮沸1、2、3 h取出,再分别用酚氯仿法、Wizard 试剂盒法、磁珠法和离心柱法提取处理前后鲤鱼基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳对处理前后的总DNA长度进行比较,再用实时荧光定量PCR法检测所得DNA样品中内参基因口β-actin含量的变化.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示,处理后DNA片段明显降解.生鱼肉提取β-actin的量为1 070 213.39拷贝/μl,电磁炉处理1、2、3 h的浓度分别为143 309.6、441 350.43和256 994.16拷贝/μl,微波炉处理1、2、3 h的浓度分别为269 121.17、267 371.16和134649.97拷贝/μl.酚氯仿法、Wizard 试剂盒法、离心柱法和磁珠法提取的平均DNA浓度分别为718 944.93、737 945.64、26 751.22和2 934.06拷贝/μl.结论 加热煮沸导致DNA降解,因此加工食品中DNA的检测应当选择较短的目标片段.4种DNA提取方法比较,Wizard 试剂盒法和酚氯仿法提取的DNA浓度显著高于离心柱法和磁珠法,且离心柱法又高于磁珠法.

  • 甲氨蝶呤对寻常型银屑病外周血TLR4及TLR9表达调控的研究

    作者:梁汉昌;范雪金;梁福贵

    目的:研究甲氨蝶呤(MTX)对寻常型银屑病患者外周血Toll样受体(TLR)4和TLR9表达的影响.方法:利用荧光定量聚合酶链反应法测定22例寻常型银屑病患者治疗前后外周血及20例正常对照者外周血中TLR4mRNA及TLR9mRNA的定量表达.结果:银屑病外周血中TLR4mRNA及TLR9mRNA的表达均高于正常对照者外周血的表达水平(t=11.26,P<0.001;t=8.39,P<0.001).银屑病患者经过MTX治疗4 w后,病情明显改善,外周血中TLR4mRNA及TLR9mRNA的表达水平低于患者治疗前的表达水平(t=3.49,P=0.0015;t=7.75,P<0.001),但与正常对照者的表达水平差异无统计学意义(t=1.76,P=0.0925;t=1.38,P=0.1741).结论:TLR4及TLR9的表达增高与银屑病的发病有关.MTX能抑制寻常型银屑病外周血TLR4mRNA及TLR9mRNA的过度表达,这可能是MTX治疗银屑病的作用机制之一.

  • 荧光定量PCR技术测定HBV-DNA中的临床应用

    作者:李晓清;赵永生;邱元华;欧阳青

    资料与方法2007年1月~2008年12月门诊与住院病人及外单位送来的血清4384份.其中门诊病人血清2255份,住院病人血清1968份,外单位送来的血清161份.试剂基因荧光定量PCR检测试剂盒.阴性对照及阳性标准品系列均来源于试剂盒,室内质控品购自江西省临检中心.

  • 巨细胞病毒感染对各期胚胎和肺疾患新生儿的影响

    作者:林晓梅;刘晓平;戴二黑;王彦慧;王建平;张云霞;严丽

    巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)是孕妇垂直传播给胎儿的常见病毒病原之一,可致新生儿多脏器功能的损害.CMV感染对各期胚胎、新生儿羊水或胎粪吸入性肺炎(简称吸入性肺炎)及肺出血(吸入性肺炎和肺出血统称肺疾患)的影响,目前尚未见文献报道.为探讨CMV先天性宫内感染对胚胎儿的影响及CMV感染与新生儿肺疾患之间的内在联系,我们采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)的方法对各期胚胎及因肺疾患死亡的新生儿肺组织存档标本进行CMV-DNA检测.

  • 孕妇乙型肝炎病毒感染与胎儿宫内感染的关系

    作者:王淑梅;王文光;刘广勤

    婴幼儿是乙型肝炎病毒(HBV)的易感人群,而母婴传播是一条重要的感染途径[1].采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测孕妇血清HBV标志物,同时采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术对不同HBV感染状态的孕妇血清和脐血中的HBV-DNA进行检测,结合上述二者作相关性分析,以探讨孕妇HBV感染状态对HBV母婴传播的影响.

  • HBsAg阴性或低值弱阳性的乙型肝炎病毒感染

    作者:夏邦世;陈友土;沈忠海

    目的了解HBsAg阴性或低值弱阳性/抗-HBc阳性人群乙型肝炎病毒(HBV)感染情况.方法常规ELISA法检测血清HBV标志物,筛选出173例HBsAg阴性/抗-HBc阳性(+抗-HBe阳性)标本,分别用微粒子酶免技术(MEIA)和荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对入选标本作HBsAg和HBVDNA定量分析.结果(1)66例(38.2%)血清HBsAg呈低值弱阳性,其中浓度在0.5 ng/ml以下者40例(23.1%)、0.5 ng/ml~2.0 ng/ml者22例(12.8%).(2)在66例HBsAg低值弱阳性标本中,HBVDNA阳性16例(24.2%);107例HBsAg阴性标本中,HBVD-NA阳性13例(12.1%).HBVDNA定量值均在102copies/ml~104copies/ml之间.结论用常规ELISA法检测血清HBsAg阴性,不能完全排除HBV感染,而可能存在低水平复制的病毒感染,临床需发展敏感、特异的检测方法.

  • 大黄酸对Caco-2细胞多药耐药蛋白转运体表达的影响

    作者:杨娜;隋峰;李沧海;李兰芳;张畅斌;郭淑英;朱晓新;姜廷良

    目的:探讨大黄酸对人结肠腺癌上皮细胞(Caco-2)多药耐药蛋白mRNA表达的影响.方法:用大黄酸作用于Caco-2细胞,采用荧光定量PCR(real time PCR)法检测转运体MRPl-5 mRNA的表达量,数据分析采用2-AACT法.结果:高(5.00 mg·L-1)低(2.50 mg·L-1)质量浓度大黄酸均可以显著上调Caco-2细胞MRP3 mRNA表达(P<0.05或P<0.01);低浓度大黄酸可以显著下调Caco-2细胞MRP5 mRNA表达(P<0.05);大黄酸对MRPI,MRP2和MRP4 mRNA的表达没有显著影响.结论:大黄酸可能通过上调Caco-2细胞MRP3 mRNA的表达和下调MRP5 mRNA的表达而影响其口服药物的生物利用度.

  • 不同浓度葛根芩连水煎液对Caco-2细胞P-糖蛋白及多药耐药蛋白转运体表达的影响

    作者:李雪莲;王嘉馨;王静;李森;董月柳;董玲

    为了检测葛根芩连水煎液对人结肠腺癌上皮细胞Caco-2 P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及多药耐药蛋白(multi-drug resistanceprotein,MRP) mRNA表达的影响,将不同浓度的葛根芩连水煎液作用于Caco-2细胞,采用Real-time PCR检测不同浓度葛根芩连水煎液对Caco-2细胞P-糖蛋白及多药耐药蛋白转运体MDR1及MRP1-6 mRNA的表达量.药液作用12 h后,当质量浓度为5.00 g·L-1时,可显著下调MDR1和MRP1-6的表达;2.50 g·L-1时,可显著下调MDR1,MRP1,MRP2,MRP4,MRP5和MRP6 mRNA的表达;1.00 g·L-1时,仅对MRP2和MRP5 mRNA的表达有显著性影响.结果证明,葛根芩连水煎液可以显著下调Caco-2细胞MDR1及MRP1-6 mRNA表达,且有浓度依赖性.葛根芩连汤可能通过下调Caco-2细胞转运蛋白的mRNA的表达而降低药物外排,增加药物作用时间,从而增大化疗药物的生物利用度.

  • 乙型肝炎患者病毒DNA含量与血清天冬氨酸氨基转移酶类的相关分析

    作者:陈汉斌;刘玥

    目的 探讨HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)(简称"大三阳")及HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)(简称"小三阳")乙型肝炎患者病毒DNA(HBV-DNA)和血清天冬氨酸氨基转移酶类(AST)的相关性.方法 酶联免疫方法 检测乙型肝炎表面血清标记物,将乙型肝炎患者血清标本分2组:大三阳组138例,小三阳组362例.实时荧光定量(FQ)PCR法定量检测HBV-DNA水平.酶耦联速率法检测AST水平,并对检测结果 行分析比较.结果 大三阳组和小三阳组HBV-DNA[(1.30±0.48)x107、(3.87±3.12)×102 copies/ml]和AST[(46±8)、(27±5)U/L]含量的差异均有统计学意义(均为P<0.05).大三阳组HBV-DNA异常率(92.03%)和AST异常率(43.48%)显著高于小三阳组(22.10%,21.27%)(均为P<0.01),但两组的HBV-DNA含量与AST并无相关性(P>0.05).结论 大三阳患者HBV-DNA含量及肝损伤程度高于小三阳患者,但HBV-DNA与AST未发现明显相关性.检测HBV-DNA与AST可以更准确地反映患者体内病毒感染情况,对于乙型肝炎诊断、治疗、预后判断具有重要的指导意义.

  • 百日咳鲍特菌双目标基因荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立及应用

    作者:刘勇;郭丽茹;刘鹏;黄海涛;张颖;高志刚;苏旭;陈锦英

    目的 建立以百日咳鲍特菌重复插入序列(Insertion Sequences 481 and 1002,IS481,IS1002)双目标基因检测为特点的荧光定量聚合酶链反应(Polymease Chain Reaction,PCR),用于检测百日咳鲍特菌核酸,探讨在百日咳鲍特菌诊断中的应用意义.方法 针对百日咳鲍特菌的重复IS481及IS1002基因保守区域设计特异性引物、羧基荧光素与小沟结合基团(5-CarboxyFluorescein-Aminohexyl Amidite-Minor Groove Binder,TaqMan-MGB)荧光探针,做为双目标基因检测、筛选并优化荧光定量PCR反应体系与反应条件,并通过体外克隆技术建立百日咳鲍特菌双目标基因定量分析模型.结果 引物与探针的优化浓度分别为600毫摩尔/升(mmol/L)和200mmol/L,与其他呼吸道菌均无交叉反应,具有良好的特异性.应用重组质粒绘制的标准曲线循环阈值(Cycle Threshold,Ct)与模板浓度具有良好的线性关系,方法检测灵敏度为102拷贝/微升(Copies/μl),标准曲线线性范围为103~107 Copies/μl.用荧光定量PCR检测50例百日咳病例标本,阳性45例,包括PCR方法检测阴性5份.结论 建立的双目标基因实时荧光定量PCR方法特异、敏感、快速,为百日咳鲍特菌的早期快速检测提供了技术支持.

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