首页 > 文献资料
-
高效毛细管电泳分离氨基酸对肝癌肝硬化的诊断价值
目的:建立高效毛细管电泳分离氨基酸的方法探讨肝癌肝硬化患者血清氨基酸变化.方法:用毛细管电泳法对17种常见氨基酸的2,4-二硝基氟苯(DNFB)衍生物进行了分离研究,优化缓冲液浓度、pH、有机溶剂及表面活性剂对分离影响的条件,对正常人,肝癌及肝硬化患者各20例的血浆游离氨基酸进行测定.结果:在优化条件下,17种氨基酸除亮氨酸,异亮氨酸外均达到基线分离.9 min内分离18种氨基酸,线性在20-1 000μmol/L范围,回收率为77.5-113.3%,批内精密度2.6-11.4%,批间精密度5.8-19.7%.肝硬化组酪氨酸、丝氨酸、色氨酸明显升高,丙氨酸明显下降;肝癌组酪氨酸、半胱氨酸、缬氨酸明显升高,脯氨酸明显下降.结论:以浓度为30 mmol/L pH9.9的硼砂溶液含150 g/L异丙醇为运行缓冲液,分离氨基酸DNFB衍生物效果佳,分离时间30 min,出峰17个.毛细管电泳测定血浆游离氨基酸对肝癌肝硬化诊断和治疗有一定指导意义.
-
索氏提取法提取青蒿挥发油的研究
青蒿学名黄花蒿(ArtemisiaannuaL),属菊科春黄菊族蒿属.具有很高的药用价值.青蒿挥发油属于青蒿活性成分,具有抗菌、平喘、解热、止咳等药理作用.青蒿挥发油的提取方法主要有蒸馏法,溶剂提取法,压榨法,二氧化碳超临界流体提取法.本实验采用索氏提取法,以乙醚为溶剂,研究青蒿挥发油提取的优化条件是:料液比为1:7.8,蒸馏时间为3h,青蒿挥发油得率高.
-
甲苯废气吸收液的Fenton氧化处理条件优化研究
目的 探讨甲苯废气吸收液的Fenton氧化处理条件优化.方法 以吸收了甲苯气体的水基BDO-甲苯溶液为处理对象,采用Fenton氧化处理方法,通过正交实验,优化Fenton氧化的pH、FeSO4投加量、H2O2投加量和反应时间等反应条件.结果 采用Fenton氧化技术对甲苯去除效果明显,大去除率达83.5％.由正交试验得出优化实验条件为FeSO4投加量400 mg/L,30％H2O2投加量4 ml/L,pH为4,反应时间为30 min,其中pH的水平变化对实验效果影响大.结论 该方法可有效去除吸收液中的甲苯.
-
优化提取藏药甘青兰中萜类有效成分
目的:考察不同提取方法,优化藏药甘青兰中萜类有效成分的提取条件.方法:齐墩果酸为检测指标,通过溶剂体积分数、提取时间和温度的优化,提高藏药甘青兰中萜类成分的提取率.结果:超声法提取萜类成分的得率大于回流法提取得率,且超声法提取藏药甘青兰中萜类的优化条件为:温度60℃时,用90％的乙醇,提取30min,得率为0.58％.结论:此试验方法科学,设计合理,为高效提取藏药甘青兰中萜类成分,从而进一步利用和开发藏药甘青兰中萜类活性成分奠定基础.
-
墨旱莲多糖的过氧化氢脱色方法研究
目的:研究墨旱莲多糖过氧化氢脱色方法的优化条件.方法:以脱色率和多糖含量为指标,分别考察了H2O2加入量、脱色温度、pH值三个因素对脱色效果的影响,并采用正交试验法筛选墨旱莲多糖的佳脱色方法.结果:过氧化氢法应用于墨色旱莲多糖脱色的优条件为:温度为50℃,pH值为7.0,过氧化氢添加量为2mL.结论:该实验优选出的工艺稳定、经济、可行.
-
重组中华仓鼠卵巢细胞培养过程控制的研究进展
中华仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary Cells,CHO)是科研及生产中用于蛋白表达的常用体系.与大肠杆菌相比,CHO获得高表达的细胞株所需时间更长,蛋白产量更低.因此,大规模培养细胞所需的成本较高,培养条件也不易掌握.但该体系产生的蛋白纯度高,因而被广泛用于工业生产中.本文对CHO细胞的培养方式、pH值测定、渗透压、溶氧及培养液成分的选择等多方面条件进行综述,为优化中华仓鼠卵巢细胞培养的策略及具体方法提供理论依据.
-
填充柱气相色谱法测油脂脂肪酸组成优化条件探讨
本实验对用填充柱气相色谱法测油脂脂肪酸组成条件进行了优化.以菜油为例,用固定液为10%DEGS和20%DEGS两种比例的涂布量进行了测定和比较,并应用多因素等高线优选法,摸索了较好的测定条件,终使填充柱法不易分开的两组峰C18:0与C18:1,C18:3与C20:1得到分离,这对用该法测其他食用油脂的脂肪酸组成的气相色谱分析有着极大的参考价值.
-
均匀设计法在中药制剂中的应用概况
均匀设计(Uniform Design)是我国数学家方开泰将数论与多元统计相结合,在正交设计的基础上创造出新的适用于多因素、多水平试验的设计方法.与正交设计相比,它放弃了试验的"整齐可比”性,而是让试验在其试验范围内,充分地"均匀分散”,试验次数因而大幅减少.它将较复杂的数据分析工作交由计算机完成,且因素的水平可以适当调整,避免高档次水平或低档次水平相遇,故它在寻找佳实验条件、佳配比等方面是选择优化条件的有力工具[1].它首先在我国飞航式导弹的设计中得到有效的应用.1986年后开始应用于药物化学领域.近年来,在中药制剂的提取工艺、成型工艺等方面的应用逐渐增多.本文现将近年来在这方面的应用概况作一综述,并就存在的问题进行述评.
-
唾液Histatin 5突变体在巴斯德毕赤酵母中的优化表达
目的 通过优化重组毕赤酵母GS115-pPICZα-A-HRP5'表达条件,提高表达水平,增强产物抗菌活性.方法 将培养基甘油含量、pH、诱导前培养时间、甲醇诱导量、诱导后培养时间设置不同梯度,采用琼脂孔穴扩散法比较各梯度下表达产物抗菌活性.结果 以pH6.0、甘油含量2.0%YEPG培养基、培养30h后用1.5%甲醇诱导培养48h,表达产物抗菌活性高.结论 优化条件为HRP5'的大规模发酵奠定了基础.
-
延长电镜电子枪发射灯丝使用寿命的方法
目的电子显微镜在工作时,电子枪灯丝的寿命很短,需要频繁更换.针对这种情况,通过试验建立延长灯丝使用寿命的方法.方法在保证灯丝正常使用,而又不影响结果观察的前提下,采取安装使用灯丝电流限制装置,确保灯丝佳使用电流,保证电镜真空系统于高真空状态等措施优化灯丝的工作条件,以延长灯丝的寿命.结果采取以上方法,一只灯丝的使用寿命可以从10～12 h左右延长至100 h以上.结论不仅大大减少了维护费用,同时也减少了因灯丝过热污染而需要分解镜体的次数,很好的保证了电子显微镜的工作精度及稳定性.
-
纳米胶体金的制备及粒径的测定
目的 利用柠檬酸三钠作为还原剂,制备颗粒均一、分布均匀的纳米胶体金.方法 通过考察反应时间、搅拌速度以及初始沸腾时间3个因素来确定佳的制备条件,以紫外吸收峰、粒径及透射电镜扫描结果进行综合评价.结果 胶体金溶液的佳制备条件为:在200 r/min的搅拌速度加热至沸腾,沸腾后立即加入还原剂,反应12 min后停止搅拌;所制得的胶体金的粒径为20 nm左右. 结论 采用优化条件所制得的胶体金颗粒均一、分布均匀.
-
正交试验法优化奥拉西坦的合成工艺条件
目的 优化奥拉西坦的合成工艺条件.方法 以甘氨酰胺盐酸盐、4-氯-3羟基丁酸乙酯为原料合成奥拉西坦,通过正交试验法考察反应温度、反应时间、反应物料配比对奥拉西坦合成收率的影响.结果 反应温度对奥拉西坦的影响大,优化工艺为:反应温度为60～65℃,反应时间为25 h,物料配比为1∶1;在该优化条件下,产率达到70％以上.结论 工艺简单可靠、成本低,适合工业化生产,为奥拉西坦的工业化生产提供了可供选择的方法.
-
石蜡切片多重免疫荧光染色优化条件探讨
[目的]探讨在石蜡切片上不同染色条件对多重荧光标记结果的影响.[方法]根据不同组织抗原选择合适的固定剂;对石蜡组织切片采用高温高压的抗原修复方式,使用柠檬酸盐缓冲液或EDTA抗原修复液进行抗原修复,并在染色操作过程中增加封闭步骤,随后进行常规组织免疫荧光染色.[结果]常规石蜡切片用40g/L多聚甲醛固定、抗原糖基含量高的石蜡切片用过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定可以很好的保护切片中的抗原;pH 6.0的枸橼酸缓冲液及pH 8.0的EDTA-Na缓冲液分别对组织胞浆抗原及胞核抗原具有较好的抗原修复作用;多重荧光染色不同种属来源第一抗体染色间增加一次封闭步骤,可有效的改善多重荧光染色质量.[结论]选择合适的固定剂、抗原修复液及增加抗原封闭次数对石蜡组织切片上的多重荧光标记结果具有显著的影响.
-
人pcsk9基因原核表达载体的构建及诱导表达
目的 构建人前蛋白转化酶枯草溶菌素9(pcsk9)的原核表达载体,优化pcsk9诱导表达条件.方法 聚合酶链式反应扩增人工合成的pcsk9 cDNA序列.扩增产物经双酶切、连接,构建pET-28b-pcsk9表达载体;将重组质粒转化入大肠杆菌表达菌BL21(DE3)的感受态细胞中,分别在不同条件下对其进行诱导,获得pET-28b-pcsk9的佳诱导表达条件.结果 成功构建了pET-28b-pcsk9重组表达载体,其佳表达条件为菌液光密度值取0.6,诱导温度取30℃,诱导剂终浓度取1.0 mmol/L,诱导时间取8 h.结论 该重组表达载体构建成功,在大肠杆菌表达菌BL21(DE3)中可有效地表达,对诱导所用的温度和时间相对比较敏感.
关键词： 人前蛋白转化酶枯草溶菌素9 表达载体 诱导表达 优化条件 -
HPLC法测定酮洛芬缓释片含量的优化条件研究
目的探讨高效液相色谱法(HPLC)测定酮洛芬缓释片含量的优化条件. 方法采用Agilent C18色谱柱(200mm×4.6mm,5μm),以磷酸二氢钾溶液-乙腈(50:50)为流动相,考察测定酮洛芬缓释片含量的优化条件. 结果选择检测波长为254nm,流动相流速为1.0ml*min-1,酮洛芬在进样量为0.012 3～0.245 5μg范围内线性关系良好;精密度(r=0.999 9,n=6)RSD为0.49%,平均回收率为100.9%,RSD为0.65%,n=9. 结论选取的各项测定条件,显示本方法操作简便,结果准确、可靠.
-
头孢唑肟钠制备条件优化研究
本文就头孢唑肟钠生产过程中影响其产品质量和收率的各种因素进行了单因素实验和正交实验,旨在获得生产头孢唑肟钠的佳工艺条件.结果 表明:生产头孢唑肟钠的佳条件为反应温度低于30℃,无水碳酸钠:头孢唑肟酸(质量比):0.15∶1.0,反应时间2h,结晶前控制pH值为6.7,乙醇:头孢唑肟酸=30ml∶1.0g,乙醇滴加速度450 ml/h,养晶时间2h.产品收率达95.5%,产品质量满足药典标准.
-
重组Trail蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化条件的优化
目的:构建肿瘤坏死因子相关凋亡配体胞外功能区的原核表达质粒,优化诱导蛋白表达的相关条件,检测切胶纯化所得蛋白的抗原结合活性,以及亲和层析纯化蛋白的促凋亡功能.方法:扩增Trail胞外功能区第114 - 281个氨基酸基因序列,插入融合表达载体pET-28α(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28α(+)-Trial114 -281.以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组子,调整诱导前菌群的密度(A600)值,诱导时IPTG的浓度、温度及诱导时间,确定佳诱导条件,同时比较超声、渗透冲击和IP裂解三种破碎细菌方法以及切胶回收和Ni-NTA亲和层析方法对纯化目的蛋白的影响.Western blot鉴定切胶纯化蛋白的抗原结合活性,用Ni-NTA亲和层析方法得到的蛋白作用于A549细胞,采用流式细胞术检测检测该细胞的凋亡率.结果:成功扩增了Trail胞外区基因序列,经测序证实其正确插入到表达载体pET-28α(+)中,经IPTG诱导,在37℃时呈包涵体表达,25℃时为可溶性表达,经软件分析确定A600 =0.6,IPTG终浓度为0.6 mmol/L,诱导4h为包涵体表达的佳条件；A600 =1.0,IPTG1.0 mmol/L,诱导4h为可溶性目的蛋白表达的佳诱导条件.三种破菌方法的比较,超声法获得的蛋白多.切胶和Ni-NTA亲和柱纯化的方法都得到了目的蛋白,Western blot分析显示,切胶纯化的蛋白有较好的抗原结合活性,亲和层析得到的可溶性蛋白可以促使A549细胞发生凋亡.结论:成功构建了重组表达载体pET28α-Trial114 -281,在A600值、IPTG 以及诱导时间都相同的情况下,37℃出现包涵体表达,而25℃则出现了可溶性表达.切胶纯化获得蛋白有较好的抗原结合活性,亲和层析纯化的可溶性蛋白能保持其原有的功能不被破坏,促使肿瘤细胞A549的凋亡.
关键词： pET-28α-Trail114-281 优化条件 目的蛋白 纯化
