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不同处理对叶下珠种子萌发的影响
叶下珠Phyllanthus urinaria L.为大戟科叶下珠属植物,全草入药,有清肝明目、利尿、降血糖、降压、解毒和消积等功效.其活性成分主要为酚类、萜类、黄酮、生物碱以及脂类化合物,其中短叶苏木酚酸甲酯等成分具明显的抗乙肝病毒的活性和护肝作用.另外有报道称叶下珠的水提物杠香藤酸A(repandusinic acid A)有抑制抗艾滋病毒逆转录酶活性的作用.
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关于抗HIV活性香豆素类化合物进展的探究
HIV(人类免疫缺陷病毒)感染是引发AIDS(艾滋病)的主要因素。目前,用于治疗AIDS的抗HIV化合物种类有20多种,其中香豆素类化合物是一种新型的抗HIV药物,其能有效抑制HIV整合酶、蛋白酶、逆转录酶活性,达到良好的抗HIV 效果。本文首先分析了香豆素类化合物的种类、来源,对抗HIV活性香豆素类化合物的研究进展进行了综述。
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γ射线照射后HeLa细胞端粒酶活性变化及机制探讨
端粒酶(telomerase)是近年发现的一种具有逆转录酶活性的核糖核蛋白(ribonucleoprotein),大量的研究充分证实了端粒酶和肿瘤的高度相关性[1].这种相关性使其不仅可用于肿瘤的诊断和鉴别诊断,而且可用于早期诊断及各种肿瘤治疗后的疗效检测和长期效果监测.端粒酶用于肿瘤治疗的靶点,其特异性远超过现有的抗肿瘤治疗手段[2].本实验观察不同剂量γ射线照射后HeLa细胞端粒酶活性的变化,探讨端粒酶活性变化机制.
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拉米夫定治疗慢性乙型肝炎疗效观察
慢性乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染性疾病,在全球有多达3.6亿人感染上慢性乙型肝炎病毒,我国约占1.2亿人.近几年来,拉米夫定作为一种新的核苷类似物广泛被医患接受,是目前临床应用中疗效较好的,具有代表性的核苷类似物.它的作用机制为抑制病毒DNA多聚酶和逆转录酶活性,并对病毒DNA链的合成和延长有竞争性抑制作用.现将我院感染科10年来观察的拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的治疗结果报告如下.
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PERT-ELISA法用于细胞逆转录病毒检测的再研究
目的 进一步分析PERT-ELISA法在细胞逆转录病毒检测应用中的意义.方法 分析不同细胞培养液及其添加成分对PERT-ELISA法检测结果的影响及检测方法的精密性和检测用试剂的稳定性,将该方法用于不同来源细胞的逆转录酶活性的检测,并通过共培养法对我国金黄地鼠肾细胞中逆转录酶活性是否具有感染性进行初步分析.结果 不同细胞培养液及其添加成分逆转录酶活性检测均为阴性,不会影响样本的检测结果.PERT-ELISA法具有良好的试验间精密性及重现性,检测用试剂在保存条件下,至少在1年内可保持稳定.近250株细胞的检测结果显示,含有逆转录病毒颗粒的细胞,无论是否具有感染性,均为逆转录酶活性阳性;除部分人淋巴瘤来源的细胞外,大部分人源细胞为逆转录酶活性阴性;8种91株猴肾来源的细胞包括74株Vero细胞均为逆转录酶活性阴性;而鼠源细胞则大部分为阳性,其中20株CHO来源的细胞均为阳性;3株猪源细胞及1株猫源细胞为阳性,而2株水貂细胞、2株生源细胞及1株犬源细胞均为阴性.被检测的15株组织工程产品用人源细胞逆转录酶活性均为阴性,而我国不同地区来源的金黄地鼠肾细胞上清中,逆转录酶活性均为阳性.金黄地鼠肾细胞与人2BS细胞共培养后连续传代7次,细胞上清中逆转录酶活性仍为阳性,但随着传代次数的增加呈下降趋势.结论 PERT-ELISA法可用于细胞逆转录病毒的检测,但对于阳性细胞,还需要进一步分析其与逆转录病毒或逆转录病毒样颗粒的相关性及是否具有感染性.
关键词: PERT-ELISA 细胞 逆转录酶活性 感染性 -
肝细胞癌端粒酶活性检测及其临床应用价值
端粒酶是一种核糖蛋白酶,该酶具有逆转录酶活性,能以端粒酶RNA(hTR)为模板,向染色体末端添加T2AG3序列.
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拉米夫定治疗与乙型肝炎病毒YMDD变异的动态观察
拉米夫定是核苷类似物,对乙型肝炎病毒(HBV)的复制有很好的抑制作用.其主要抗病毒机制是抑制HBV多聚酶的逆转录酶活性,有效阻止病毒核酸的复制合成,但它不能清除病毒的共价闭合环状DNA(cccDNA).HBV多聚酶具有逆转录酶、DNA聚合酶、RNA酶H的活性,计算机模拟分析表明,HBV多聚酶有A到E共5个活性部位,位于多聚酶结构域C的酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(YMDD)基序是该酶的活性区域,其中M552可被异亮氨酸(Ⅰ)或缬氨酸(Ⅴ)取代(即YMDD变为YIDD/YVDD),是HBV病毒对拉米夫定治疗产生耐药性的主要原因[1].本研究采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和扩增受阻突变体系聚合酶链反应(ARMS-PCR)检测技术,对136例慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗前后YMDD变异进行动态观察,同时监测其血清HBV DNA载量和丙氨酸转氨酶(ALT)水平的变化,以探讨YMDD变异的发生机制和拉米夫定治疗前后YMDD变异株的动态变化.
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逆转录酶活性检测方法在金黄仓鼠中的应用
目的 应用逆转录酶活性检测方法对金黄仓鼠及其它动物血清、细胞进行检测.方法 根据雀麦草花叶病毒RNA序列设计一对引物,加入样品对RNA进行逆转录PCR,电泳观察有无特异条带以确定样品中是否含有逆转录酶.结果 在兔、豚鼠,大鼠以及仓鼠血清中检出逆转录酶活性阳性样本.结论 该方法具有良好的敏感性和特异性,可以应用于动物血清中逆转录酶活性的检测.
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细胞培养中逆转录酶活性检测方法的建立与应用
目的 采用RT-PCR原理,建立有良好敏感性与可重复性的逆转录酶活性检测方法,用于组织细胞中逆转录酶活性的检测.方法 以MS2噬菌体RNA为模板,设计一对引物,采用逆转录酶催化合成cDNA后再用Taq DNA聚合酶进行PCR反应,琼脂糖凝胶电泳检测有无特异大小的目的条带出现,从而确定样品是否具有逆转录酶活性.结果 所建立的逆转录酶活性检测方法检出限为2×10-4U,目的条带为308 bp.经琼脂糖电泳能较好的观察判断,送检组织细胞培养液与裂解上清液样品均未检出逆转录酶活性阳性.结论 所建立的方法能有效地用于组织细胞培养中逆转录酶活性的检测.
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苯安莎霉素抗生素研究进展
苯安莎霉素具有共同的结构特征,即一个脂肪侧链连接在一个芳核的间位,构成安莎桥,并含有7个手性中心.研究表明,若芳核被还原,逆转录酶活性丧失;若安莎桥断裂,对逆转录酶的抑制活性无影响,但无抗菌活性,近年来人们对它们的全合成进行了较多的研究,概述如下.
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生物制品中逆转录酶活性检测
在以往报道的逆转录酶(RT)检测方法的基础上,以噬菌体MS2 RNA为模板,在有外源RT作用下,缩短逆转录的时间,产生特异性cDNA,经过PCR扩增,增加了试验的灵敏度.在PCR过程中,加入了Rnase A酶消化步骤,降低了逆转录反应的pH值到5.3,并用高浓度的琼脂糖凝胶观察扩增产物,减低了由于细胞内DNA聚合酶造成的假阳性结果的产生,而且使方法得到简化.