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乙型肝炎病毒基因治疗研究现状
近年来,干扰素(INF)-α和核苷类似物拉米呋啶的应用,虽然在慢性乙型肝炎的抗病毒治疗上取得较大进展,但总体疗效并不理想.IFN-α的长期有效率仅为30%~40%,抗病毒新药核苷类似物拉米呋啶(lamivudine)和华米可维(famiclovir),也存在着抗病毒作用短暂、易于诱发DNA多聚酶突变而形成耐药以及停药后易复发等缺点.抗乙型肝炎病毒的基因治疗目前技术虽不成熟,但却为抗乙型肝炎病毒治疗开辟了一个新的广阔的空间,并已成为当前国内外抗病毒治疗研究的一个热点.本文就反义核苷酸技术和外源基因的转导表达技术在抗乙型肝炎病毒治疗中的研究现状加以综述.
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HBVYMDD拉米夫定耐药变异及其检测的研究进展
主要阐述HBV多聚酶及其逆转录酶区C区的分子结构,YMDD基序及其变异的含义、类型及诱其发生的背景,YMDD变异病毒对拉米夫定耐药的分子机制,目前用于检测HBVYMDD变异的分子生物学方法.
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移植病人中HCMV激活感染标志的研究进展
HCMV感染率在我国人群中(≥90%)乃至在全世界均很高.移植受者中由于大剂量免疫抑制剂的投予,诱发潜伏的病毒激活,导致严重的临床症状,往往是至死性的.幸于目前抑制DNA多聚酶的丙氧鸟苷、磷甲酸等有效阻碍HCMV繁殖药物的问世.适时干预、早期治疗对移植受者免遭HCMV威胁是至关重要的.由于移植人群的特殊性,亦决定了潜伏病毒激活表现的复杂性,本文就新近有关研究移植病人中HCMV激活特点作一归纳.
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对利福平敏感的多耐药结核分枝杆菌rpoB基因突变一例
2011年10月11日,世界卫生组织《2011年全球结核病(TB)控制报告》显示,2010年全球结核病新发患者880万例,死亡145万例.虽较前有所下降,但下降过于缓慢[1],提醒我们结核病防治的工作仍任重道远.利福平是目前广泛使用的杀菌作用强的抗结核药物之一,其通过结合依赖DNA的RNA多聚酶β亚单位抑制细菌RNA转录[2].但利福平自1966年开始应用于结核相关疾病的治疗至今,已有近50年的历史,出现了很多利福平耐药现象,情况已不容忽视.
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乙型肝炎病毒逆转录酶区基因序列准种与变异特点
乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)P基因编码产物从功能上分为末端蛋白(1~178aa)、间隔区(179~336aa)、逆转录酶区(337~682aa)和RNA酶H区(683~816aa),各区有相应的生物学功能;逆转录酶区包含S基因主蛋白编码区.近年来的研究提出HBV感染者体内存在有准种[1,2]的假说.我们以逆转录酶区序列为研究靶区域,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增慢性乙型肝炎患者血清中的靶基因序列,随机选择克隆测序,比较其结果,证明了HBV准种特点的存在,并发现多种基因突变形式.
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miRNAs与肿瘤
微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长19~24 nt的单链、内源性非编码 RNA,其序列高度保守。成熟 miRNA的转录生成首先是在细胞核内经 RNA多聚酶 II和(或)多聚酶 III的作用形成初始 miRNA(pri-miRNA),然后在核内切酶 Drosha Rnase III作用下,去除 pri-miRNA的5'-cap和3'-poly(A)结构形成含茎环结构的前体 miRNA (pre-miRNA),再经由 Ran-GTP/Exportin-5受体将 pre-miRNA从核内输出到细胞质,在胞质经 Dicer酶和解螺旋酶作用后形成单链成熟 miRNA;成熟 miRNA被 RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex, RISC)如 Argonaute核蛋白家族包裹,形成 miRNA沉默复合体(miRNP),miRNP可以与靶基因 mRNA的3'-UTR互补配对,使 mRNA发生降解或转录抑制,发挥转录后水平调控作用[1]。单一 miRNA可调控多个靶基因,一个靶基因也可由多个 miRNAs共同调控,这些靶基因大多数参与了机体分化,细胞增殖、凋亡、代谢等生理过程。新研究还发现另一类内源性长非编码 RNA(long uncoding RNA, lncRNA)可调控靶基因 mRNA表达,也可作为竞争性内源 RNA(ceRNA)拮抗 miRNA的转录抑制作用[2](图1)。早报道 miRNA是在1993年,科学家在秀丽短杆线虫体内得到,分析发现它包含约21个非编码核苷酸序列,部分序列能与 lin-14 mRNA的3'-UTR互补配对结合,抑制 lin14蛋白合成,取名为 lin-4[3-4]。后来研究发现, miRNAs在多种动植物体内都存在,截至2014年6月, miRBase数据库报道的 miRNAs总数已达28645个。越来越多的研究证实,在人类多种疾病如肿瘤、心血管疾病和代谢性疾病等病理过程中,miRNAs 的表达均出现异常。
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汉坦病毒疫苗株84FLi的全基因序列测定
汉坦病毒(Hantavirus, HV)属于布尼亚病毒科,其基因组是一个单链含大(L)、中(M)和小(S)3个基因片段的负链RNA.编码的结构蛋白分别为L蛋白(即依赖RNA的RNA多聚酶)、外膜糖蛋白G1和G2以及核壳蛋白.
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维持性透析患者严重的感染症之一:病毒性肝炎
乙型肝炎及丙型肝炎的病原学一、乙型肝炎病毒(HBV)为DNA病毒,其直径为42~47 nm的球型颗粒(Dane颗粒 ).HBV由两层外壳及内核组成.外壳有许多小球状颗粒,含表面抗原(HbsAg).内核由环状双股DNA、DNA多聚酶、核心抗原(HbcAg)和e抗原(HbeAg).
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急性粒细胞性白血病患者端粒酶亚单位表达的临床意义
人类端粒酶(telomerase)是一种特殊的核糖核蛋白多聚酶,由几种蛋白亚单位和一种RNA模板所组成[1,2],如人端粒酶逆转录酶(hTERT)、人端粒酶相关蛋白1(hTEP1)和人端粒酶RNA组分(hTERC)等.
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乙型肝炎病毒DNA多聚酶P结构域研究进展
0引言乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝DNA病毒属,是一组以侵袭肝脏为主的病毒,主要感染哺乳动物和鸟类.HBVDNA的长度为3.2kb,具有4个开放读码框架(ORF),分别编码HBV的表面抗原蛋白,核心/e抗原蛋白,X蛋白以及HBV DNA多聚酶(HBVDNAP)[1].
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抗HBV多聚酶TP区VH抗体体外可抑制HBV复制
目的:研究抗HBV多聚酶TP区VH抗体抑制HepG2.2.15细胞的HBV分泌与复制.方法:用HepG2.2.15细胞分泌的HBV的多聚酶TP区作为抗原,用PCA方法进行VH抗体选择.VH抗体基因克隆到真核表达载体pZeoSV2(+),把载体转化入HepG2.2.15细胞而抑制细胞分泌病毒颗粒.荧光定量PCR检测各组细胞HBV DNA含量.结果:在抗体库中共选择出3个TP区相关抗体.抗TP区VH抗体可以抑制HepG2.2.15细胞分泌病毒颗粒.加入VH抗体的HepG2.2.15细胞(C组)比没加入VH抗体的HepG2.2.15细胞(A,B组)分泌病毒颗粒明显减少(上清内:3.480±0.32 vs 5.268±0.07,5.105±0.78,P<0.05;细胞内:5.718±0.15 vs 7.716±0.74,7.394±0.97,P<0.05).结论:抗HBV多聚酶TP区VH抗体可以抑制HepG2.2.15细胞的HBV分泌与复制.
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乙型肝炎病毒YMDD变异研究进展
核苷(酸)类似物拉米夫定作用于乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶活性部位YMDD基序(酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸),抑制HBV DNA复制,抗病毒效果显著.但临床上部分患者可表现为无应答或随着用药时间的延长,HBV会发生突变并导致对拉米夫定耐药,影响拉米夫定的疗效,常见的突变位点在YMDD基序的第204位上,即蛋氨酸被缬氨酸或异亮氨酸取代(rtM204V或rtM204I),分别称为 YVDD和YIDD突变.目前对YMDD变异的研究是一个热点,本文就近年来该方面的研究进展作一综述.
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乙型肝炎治疗性疫苗研究进展
成人罹患急性乙型肝炎康复后多表现出针对HBV核衣壳(HBcAg)、多聚酶和包膜蛋白(HBsAg)的多克隆抗体和特异性辅助性T细胞(CD4+T细胞)及细胞毒性T细胞(CTL)应答.
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基质金属蛋白酶及其抑制剂和增殖细胞核抗原在大肠肿瘤中的表达及意义
大肠癌患者根治术后约半数死于转移和(或)复发.基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)中MMP9可水解基底膜(basement membrane,BM)和细胞外基质(extracellular matrix, ECM)中IV型胶原等多种成分,金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP1)可特异抑制其活性.增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)是DNA多聚酶δ辅助蛋白,三者均与肿瘤密切相关.
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阿糖胞苷耐药代谢酶及相关耐药基因研究进展
急性白血病是儿童时期常见的恶性肿瘤,严重威胁患儿生命.阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C)是目前治疗急性白血病的主要的药物之一.阿糖胞苷是胞苷和脱氧胞昔类抗代谢药,其活性产物阿糖胞苷三磷酸核苷(Ara-CTP)可以抑制DNA多聚酶(DNA Polymerase),也可直接以伪代谢物形式掺入DNA分子,终止核苷酸链的延长,从而达到治疗急性白血病的目的.
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呼吸道合胞病毒感染及反义基因治疗的研究进展
一、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染及治疗现状1.RSV基因结构与蛋白功能:RSV属于副黏病毒科,肺炎病毒属,为非节段性单股负链RNA病毒,含有大约15 000个核苷酸,其基因顺序依次为:3'NS1-NS2-N-P-M-SH-G-F-M2-(M2-1/M2-2)-L-5',共编码11个病毒蛋白[1,2],分别为:核衣壳蛋白N、磷蛋白P、多聚酶亚单位L、转录延长因子M2-1、黏附蛋白G、融合蛋白F、小疏水蛋白SH、非结构蛋白NS1和NS2、基质蛋白M和M2-2.
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高效液相色谱法测定阿昔洛韦葡萄糖注射液中阿昔洛韦的含量
阿昔洛韦(Aciclovir,又名无环鸟苷)是二核苷类抗病毒药,其作用机理为对病毒DNA多聚酶产生抑制作用,阻止病毒DNA的复制过程.临床上主要用于治疗单纯性疱疹性角膜炎、带状疱疹、皮肤及生殖器疱疹.其含量测定方法报道较多,中国药典采用HPLC法测定阿昔洛韦的含量.本实验参考有关文献及资料,建立了用HPLC法测定阿昔洛韦葡萄糖注射液含量的方法.此方法简便、灵敏、重现性好,能满足阿昔洛韦葡萄糖注射液的质量控制.
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氧化苦参碱与甘利欣治疗YMDD变异的慢性乙型肝炎
核苷类似物拉米夫定的临床应用开创了慢性乙型肝炎抗病毒治疗的新纪元,拉米夫定是乙型肝炎病毒DNA多聚酶抑制剂,通过抑制乙肝病毒DNA多聚酶的活性而抑制乙肝病毒的复制,其作用可靠而强大,应用方便,副作用轻微,适用范围广,是目前慢性乙肝治疗中无可替代的抗病毒药物之一.但拉米夫定也有它的不足之处,主要表现在近期有效率较高而远期有效率较低,乙肝病毒DNA阴转率高而HBeAg-HBeAb转换率较低,随着疗程延长,乙肝病毒DNA多聚酶发生YMDD变异的可能性逐步增大.据资料报道,拉米夫定应用一年其YMDD变异发生率为17%,应用两年其YMDD变异发生率可达到25%.一旦出现病毒变异,则拉米夫定疗效下降,患者病情有可能出现反复.本文作者对应用拉米夫定出现YMDD变异的慢性乙肝患者共12例,应用氧化苦参碱与甘利欣联合保肝治疗,取得较好疗效,现报告如下.
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耐拉米夫定HBV多聚酶基因变异检测方法的建立及应用
拉米夫定(lamivudine,3-TC)是一种胞嘧啶核苷类似物,可以显著地抑制乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶活性,从而抑制HBV DNA复制,迅速降低HBV DNA的水平,改善临床生化指标,改善肝脏组织学的病变[1,2],是一种慢性乙型肝炎抗病毒新药.但由于其抑制病毒复制作用不持久,停药后易复发,故需要长期用药.
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汉坦病毒糖蛋白及其在细胞融合中作用的研究进展
汉坦病毒(Hantavirus,HV)属于布尼亚病毒科分节段负链RNA病毒,基因组根据大小将其分为L、M、S.分别编码病毒RNA依赖的RNA多聚酶、两种包膜糖蛋白Gn、Gc和一个非结构蛋白以及病毒的核衣壳蛋白.目前国内外至少有30个血清型/基因型,代表型别有汉滩病毒(Hantann virus,HTNV)、汉城病毒(Seoul virus,SEOV)、辛诺柏病毒(Sin Nombre virus,SNV)、普马拉病毒(Puumala virus,PUUV)、希望山病毒(Prospect Hill virus,PHV)、多布拉伐-贝尔格莱德病毒(Dobrava-Belgrade virus,DOBV)、泰山病毒(Thailand virus,THAIV)等[1,2].