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抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白2的反式激活基因
HBV为带包膜的嗜肝DNA病毒属,其基因组由松弛环状、部分双链DNA(rcDNA)组成.负链较长,约为3 200个核苷酸(nt),其5'端共价结合病毒多聚酶;正链较短,长度可变,为1 700~2800nt,在其5'端有寡聚核糖核苷酸帽.HBV基因组具有4个开放读码框(ORF),通过不同的起始密码子(ATG)编码至少7个蛋白,包括3个表面抗原:包膜蛋白前-S1、前-S2、S,HBcAg,HBeAg,病毒多聚酶(P)及X蛋白(HBxAg).包膜蛋白的作用主要是允许病毒核壳体进、出宿主肝细胞而不引起细胞裂解.前-S1蛋白由前-S1基因编码,前-S1基因区的长度在不同亚型问有所差别,在324~357 nt.前-S1蛋白在HBV生物学中具有双重作用,它既是病毒包膜装配过程中与核心颗粒结合的配体,也是在病毒感染过程中与一个尚未鉴定出的宿主细胞受体相互作用的底物.许多研究表明,HBV前-S1蛋白具有反式激活作用[1-4].
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拉米夫定治疗与乙型肝炎病毒YMDD变异的动态观察
拉米夫定是核苷类似物,对乙型肝炎病毒(HBV)的复制有很好的抑制作用.其主要抗病毒机制是抑制HBV多聚酶的逆转录酶活性,有效阻止病毒核酸的复制合成,但它不能清除病毒的共价闭合环状DNA(cccDNA).HBV多聚酶具有逆转录酶、DNA聚合酶、RNA酶H的活性,计算机模拟分析表明,HBV多聚酶有A到E共5个活性部位,位于多聚酶结构域C的酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(YMDD)基序是该酶的活性区域,其中M552可被异亮氨酸(Ⅰ)或缬氨酸(Ⅴ)取代(即YMDD变为YIDD/YVDD),是HBV病毒对拉米夫定治疗产生耐药性的主要原因[1].本研究采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和扩增受阻突变体系聚合酶链反应(ARMS-PCR)检测技术,对136例慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗前后YMDD变异进行动态观察,同时监测其血清HBV DNA载量和丙氨酸转氨酶(ALT)水平的变化,以探讨YMDD变异的发生机制和拉米夫定治疗前后YMDD变异株的动态变化.
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单磷酸阿糖腺苷治疗慢性乙型肝炎研究进展
单磷酸阿糖腺苷(arabinofuranosyl adenine monophosphate,Ara-AMP)是阿糖腺苷(Ara-A)的单磷酸化合物,是人工合成的嘌呤核苷类化合物.实验和临床均证实它能选择性地抑制病毒DNA多聚酶(DNAP)与核糖还原酶,并能掺入病毒的核苷酸链抑制其延长,达到抑制DNA病毒复制的目的.它能抑制多种DNA病毒,包括单纯疱疹病毒、带状疱疹病毒、牛痘病毒、乙型肝炎病毒(HBV)以及多种动物疱疹病毒和少数致癌RNA病毒等.现介绍近几年有关Ara-AMP药理和临床研究情况并重点介绍Ara-AMP治疗慢性乙型肝炎(慢乙肝)的新进展.
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新型口服药可防未接种疫苗者感染麻疹
麻疹通过呼吸、咳嗽或打喷嚏等经空气传播。从接触麻疹病毒到出现皮疹、流鼻涕及发烧等麻疹症状,通常有一个为期2周的时间窗口,在这段时间内接种疫苗并不能保护人体不得麻疹。美国佐治亚州立大学和德国保罗·埃尔利希研究所等机构研究人员研发了一种口服药,专门设计成在这2周时间内能发挥作用,可以保护未接种疫苗的人群接触麻疹病毒后不会感染发病,并同时防止接触者把病毒进一步传染给他人。药物被命名为ERDRP-0519,是一种小分子药物,可以抑制麻疹病毒的RNA(核糖核酸)多聚酶,从而防止病毒复制。这种药物具有生产成本低且易于储存等优点。
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对阿昔洛韦静脉滴注致急性肾衰竭的治疗
阿昔洛韦(无环鸟苷)为鸟苷衍生物,能选择性抑制和灭活病毒DNA多聚酶,阻断病毒DNA合成,有较强抗单纯疱疹、水痘、带状疱疹病毒的作用,临床应用广泛.不良反应主要有过敏反应及胃肠道不适,致急性肾损害报道较少.现就我院近年收治的阿昔洛韦致急性肾衰竭(acute renal failure,ARF)的临床资料进行分析.
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拉米夫定停药后肝炎病情加重及随访
拉米夫定(Lamivudine)是强力DNA多聚酶的抑制剂,治疗慢性乙型肝炎须长期用药,随着疗程延长,HBeAg血清转换率可明显增加约27%[1,2].但近年已有停药后病情加重的报道.作者近遇见6例拉米夫定停药后肝炎病情加重,现报道如下.
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嗜肝DNA病毒多聚酶的研究进展
嗜肝DNA病毒多聚酶是病毒复制的关键蛋白,与病毒复制相关的重要的酶活性均聚其上,包括病毒DNA复制的引物作用、DNA聚合酶活性、逆转录酶活性、RNaseH活性等.此外,病毒多聚酶在病毒的致病作用、致癌作用、抗干扰素活性等方面也具有重要意义.病毒核壳外多聚酶的发现已引起了人们的广泛关注.
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98例拉米夫定停药后肝炎的临床观察
拉米夫定应用于临床已有多年,拉米夫定虽然可抑制乙型肝炎病毒(HBV)的DNA多聚酶,但不能将HBV从体内清除.因此,在停药后病毒复制仍可恢复,出现HBV DNA的反跳,有时甚至高于治疗前的水平.临床出现部分患者停药后肝炎复发,甚至发生严重的肝功能衰竭.
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HPLC-荧光法测定血浆中更昔洛韦浓度
更昔洛韦(Ganciclovir),化学名:9-(1,3-二羟基-2-丙氧甲基)-鸟嘌呤,是合成的核苷类抗病毒药物,鸟嘌呤核苷衍生物,适用于免疫缺陷患者(包括艾滋病患者)并发巨细胞病毒视网膜炎的诱导期和维持期治疗.更昔洛韦进入细胞后迅速被磷酸化为单磷酸化合物,然后经细胞激酶的作用成为三磷酸化合物,发挥抗巨细胞病毒作用.更昔洛韦可竞争性抑制DNA多聚酶,并掺入病毒及宿主细胞的DNA中,从而抑制DNA合成.其对病毒DNA多聚酶的抑制作用较宿主细胞多聚酶为强,对巨细胞病毒和人类疱疹病毒均有很强的抑制作用.体外实验证明其抑制病毒作用较阿昔洛韦强.由于更昔洛韦本身具有荧光,作者在参考国内外有关文献[1~2]的基础上,采用高效液相色谱荧光检测法测定血浆中更昔洛韦浓度.本方法工作曲线稳定,灵敏度更高,操作步骤简单,可以用于抗病毒药的药动学和药效学研究及临床治疗药物监测.
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结合肽抑制鸭乙型肝炎病毒复制作用的研究
目的:探讨与鸭乙型肝炎病毒多聚酶(DHBVP)特异结合的结合肽,对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)感染的原代鸭肝细胞中DHBV复制的抑制作用.方法:应用噬菌体表面展示技术(PDT)筛选出与DHBVP特异结合的结合肽,经测序得知其核苷酸序列,推论出其氨基酸序列,据此合成结合肽,将其作用于体外感染DHBV的鸭肝原代培养细胞,分时段检测细胞核、细胞浆及培养上清中的DHBV-DNA.结果:应用噬菌体展示技术筛选3轮后共筛到7条结合肽,根据推论出的氨基酸序列合成结合肽,作用于体外感染DHBV的鸭肝原代培养细胞,其中3号肽、6号肽的培养上清及胞浆中的DHBV-DNA含量低于对照组(P<0.05).结论:与DHBVP特异结合的结合肽对DHBV的复制有抑制作用.
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乙型肝炎病毒多聚酶P基因变异研究进展
乙型肝炎病毒(HBV)感染不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝硬化和肝细胞癌的发生、发展有密切关系.近年来,拉米夫定用于慢性乙型肝炎患者治疗效果显著,但存在停药后易反跳、需长期服用等缺点.
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耐拉米夫定HBV突变株存在时血清拉米夫定水平测定
该研究的目的是观察拉米夫定血清水平的个体间及个体内变化以及耐拉米夫定的HBV突变株感染对药物水平的影响.方法:用高效液相色谱法测量血清拉米夫定的浓度.利用特殊的引物对各个样本进行PCR分析和多聚酶的逆转录区序列分析.用PCR酶联免疫吸附测定法区分野生型与耐拉米夫定型HBV株.
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聚乙二醇干扰素联合苦参素治疗YMDD变异的慢性乙型肝炎19例分析
拉米夫定通过作用于HBV多聚酶逆转录酶的活性部位YMDD基因序列,而抑制HBV DNA复制,抗病毒效果明显,但长期使用易导致YMDD变异,YMDD变异株的出现使部分慢性乙型肝炎的治疗复杂化.
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汉坦病毒基因分型及其分子流行病学研究进展
汉坦病毒属布尼亚病毒科(Bunyaviridae)汉坦病毒属(Hantavirus,HV),为分节段的单股负链RNA病毒,病毒基因组有大(L)、中(M)、小(S)3个片段组成,分别编码病毒RNA依赖的RNA多聚酶、病毒糖蛋白G1和G2以及病毒的糖衣壳蛋白(NP)[1].已知人类感染HV病毒主要引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒肺综合征(HPS).该病毒自1978年韩国和1981年我国被发现并分离成功以来,已建立了许多的实验诊断技术和研究方法,并不断地改进和发展,极大的提高了相关实验技术的特异性和敏感性[2-3].近年来,随着分子生物学技术迅速发展,特别是PCR和序列分析技术的广泛应用,人们对HV病毒分子结构本质和特征的研究取得了突破性进展,新发现的HV病毒数目急剧增加,到目前为止至少有近30种HV病毒血清/基因型[4-5].现将近年基因分型及其分子流行病学研究综述如下.
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增殖细胞核抗原与胃癌浸润、转移和预后的关系
增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA),又称为周期蛋白(Cyclin),是1978年 Miyachi等(1)在系统性红斑狼疮患者的血清中发现并提纯的一种自身抗原,是DNA多聚酶δ的辅助蛋白,DNA合成必不可少的因子.
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更昔洛韦治疗小儿病毒性呼吸道感染疗效观察
更昔洛韦是继阿昔洛韦之后开发的广谱抗病毒药,可竞争性抑制DNA多聚酶,并渗入病毒及宿主细胞的DNA中,从而抑制DNA合成.对病毒DNA多聚酶的抑制作用较宿主细胞多聚酶为强.对单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、EB病毒等疗效好.
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拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的疗效评价
拉米夫定(贺普丁)在治疗慢性乙型肝炎时通过抑制病毒复制使病情好转,该药竞争性抑制乙型肝炎病毒DNA多聚酶,抑制乙型肝炎病毒DNA的合成.由于拉米夫定不能杀灭乙型肝炎病毒,停药后病情容易反跳.在连续用药过程中,乙型肝炎病毒对拉米夫定易耐药.
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乙型肝炎病毒感染血清标志物的阅读
现已发现乙型肝炎病毒(HBV)有4个开放可读编码框架(ORF ),即S、C、P、X区.S区编码表面抗原(HBsA g)和前S1、前S2等;P区编码多聚酶(DNA-P);X区编码X抗原和核心抗原(HBxAg、HBcA g);C区又分前C区和C区,前C区(1 814~1 900氨基酸)编码e抗原(HBeAg),C区(1 901~2 4 50氨基酸)合成HBcAg.上述标志物在不同个体、不同时间的不同表达代表着不同的临床意义,现简述之.
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拉米夫定治疗乙型肝炎病毒感染中诱发YMDD变异39例护理对策
2001年1月~2004年1月,我们应用拉米夫定为105例进行了治疗与护理,39例发生了HBVDNA多聚酶活性区的变异(YMDD变异),现将护理对策报告如下.
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乙型肝炎病毒耐药的研究进展
慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)治疗目前可用的药物包括免疫调节剂,如干扰素-a;口服核苷/核苷酸类似物(NAs),包括拉米夫定(lamivudine, LAM)、恩替卡韦(entecavir,ETV)、替比夫定(tebivudine,LdT),阿德福韦酯(adefovir dipivoxil, ADV)和富马酸替诺福韦酯(tenofovirdisoproxil fumarate, TDF)。NAs可以抑制HBV的DNA多聚酶的逆转录活性,并与正常的核苷竞争性掺入病毒的DNA链,终止DNA链的延长和合成,起到直接抑制病毒DNA复制的作用。