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诱蛋白基因敲除对雄性小鼠细胞因子水平的影响
细胞因子是一系列参与造血、免疫细胞发育、炎症反应和免疫应答等的调节蛋白.有的细胞因子可直接影响睾丸细胞的功能.有研究显示,细胞因子在睾丸的发育和发挥正常功能方面有着重要的作用[1].致炎细胞因子包括白细胞介素(IL)-1和IL-6对于生精细胞的分化和睾丸甾体激素的合成有着直接的作用.干细胞因子、白血病抑制因子和参与造血作用的细胞因子对于精子发生也有一定的作用.本课题组研究发现,attractin(Atrn)基因敲除后小鼠的生育能力有不同程度的下降.本实验旨在了解Atrn基因敲除后小鼠的细胞因子水平变化,为进一步研究Atrn基因对雄性生殖的影响机制提供依据.
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两种方法检测癌胚抗原的结果对比
目的：比较电化学发光与酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测癌症患者血清中癌胚抗原（CEA）的结果。方法选取2013年6月至2015年6月收治的60例癌症患者作为研究对象，抽取患者血清样本检测癌胚抗原，比较两种方法的阳性检出率。结果ELISA 检出 CEA 阳性例数为33例，阳性率为55.0％，电化学发光法检出 CEA 阳性例数为32例，阳性率为53.3％。两组比较差异无统计学意义（P ＞0.05）。结论电化学发光和 ELISA 均能较为准确地检测出 CEA 的含量，结果一致性较高，在检测癌症患者 CEA 的临床实践中具有良好的应用价值。
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乙型肝炎表面抗原三种检验方法结果的对比分析
目的：比较乙型肝炎表面抗原三种检验方法结果。方法对86例乙型肝炎患者进行检验，分别使用荧光免疫分析检测、酶联免疫吸附测定法（Engvail）以及胶体金法，并与86例非乙型肝炎患者的检验结果进行比较研究。结果三种检验方法中荧光免疫分析检测的精准度对高，酶联免疫吸附测定法检测数据准确度低，三种方法对比，差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论在对乙型肝炎患者进行检测时，使用荧光免疫分析检测的准确度更高，能够及时对乙型肝炎表面抗原进行分析，适用于临床医学研究。
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MB-Ⅳ型酶标仪在黄曲霉毒素B1酶联检测方法中的应用
本文主要介绍MB-Ⅳ型酶标仪应用北京营养源研究所真菌实验室、北京百林康源生物技术有限公司生产的黄曲霉毒素B1(AFB1)酶联免疫检测试剂盒能很好的满足对黄曲霉毒素B1定量分析的要求.从数据统计分析所得标准抑制曲线的结果来看,与Bio-Bad450型全自动酶标仪的负相关系数十分接近,有很好的可比性.并适用于各种通用型ELISA试剂.
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精子抗原肽的合成及其在酶联免疫吸附法检测抗精子抗体中的应用价值
目的:以合成精子抗原肽为抗原建立酶联免疫吸附测定法( ELISA)检测抗精子抗体(AsAb).方法:通过PS3全自动合成仪合成精于肽P10G、YLP12和SP17抗原肽,经反相高效液相色谱(HPLC)纯化和质谱鉴定,分别包板制备ELISA试剂盒,并检测血清标本.结果:成功合成3种目的肽,质谱分析结果主峰分子量与理论值基本一致,HPLC结果显示其纯度为97.5％、97.78％和95.5％.以3种合成肽为抗原建立ELISA检测AsAb,与商品化试剂盒比较,均显示极好的一致性(Kappa值＞0.75).结论:全自动固相多肽合成技术可用于高纯度的精子抗原肽合成,所合成的P10G、YLP12和SP17抗原肽均具有较好的抗原活性,可作为ELISA的包被抗原用于AsAb检测.
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毒理学生物标志的研究
毒理学是近年来发展迅速的研究领域之一，它用先进科学技术研究环境污染物进入人体后引起疾病(中毒)的生物学变化过程，特别是观察毒效应的生物标志。检测生物标志物方法学的更新，必将对毒效应产生新认识，毒理学安全性评价也随之带来新变革。回顾上个世纪60年代以来，由于基因突变、染色体损伤和DNA损伤检测在毒理学的广泛应用，致突变作用作为一种特殊毒效应已列入毒理学的篇章和毒理学安全性评价程序。近年来又有新的进展，由于基因芯片技术的应用，有可能快速检出产生毒效应的一些易感基因，成为可供检测的易感生物标志(susceptibility biomarker)，易感人群会获得保护；转基因技术的应用，带动了毒理学实验动物模型的更新，例如Apo E基因缺陷小鼠的培育成功，使我们可以获得致动脉粥样硬化和抗动脉样硬化比较理想的模型，会进一步推动心血管毒理学和食品毒理学的发展；一些化学分析技术的应用，例如电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)对生物材料中过量负荷的痕量元素可检出达10-9数量级，已用于研究稀土元素在骨髓、海马中的靶剂量，可供检测稀土在人体过量负荷的接触生物标志(exposure biomarker)；关于外源性雌性激素污染物对内分泌功能的影响，国际上对体内雌性激素水平的了解，已从测定雌二醇含量，发展到用酶联免疫吸附测定法，对其代谢产物16α羟雌酮(不利于健康的)和2-羟雌酮(有利于健康的)的测定，这种和乳腺癌危险性密切相关的代谢产物含量的测定，被认为是指示早期功能变化毒效应的效应生物标志(effect biomarker)。以上说明生物标志的研究会因先进科学技术方法的发展不断更新，毒效应的观察也会不断深入。 国际科联环境问题委员会曾提出近期加强方法学研究学术交流的重点：①致癌性(包括转基因技术)；②内分泌紊乱；③免疫功能。毒理学研究的信息与科技，会影响一个国家有关领域发展的步伐，应引起我们的关注。
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杭白芍和亳白芍中苯甲酸的含量测定
白芍为常用中药,商品为人工栽培的毛茛科植物芍药(Paeonia lactiflora Pall.)经去皮水煮加工后的干燥根.赤芍为毛茛科植物芍药(Paeonia lactiflora Pall.)或川赤芍(Paeonia veitchii lynch)的干燥根.芍药苷是芍药的主要成分,具有镇静、解痉、抗炎、抗应激性溃疡病、扩张冠状血管、对抗急性心肌缺血以及抑制血小板聚集等多方面的药效,而且毒性小,临床上已试用于治疗冠心病.为了比较道地与非道地白芍药材的质量,芍药苷无疑是首选化学指标[1].苯甲酸在芍药中一般被视为无效成分,而且还会增加肝脏的解毒负担,因而摄入一定量可产生毒副作用[2],故测定白芍中苯甲酸的含量,可作为评定白芍药材质量的指标.目前测定苯甲酸含量的方法较多,如碱滴定法、薄层层析法、GC、薄层色谱-紫外分光光度法、酶联免疫吸附测定法(ELISA)等.本文对样品进行氯仿提取碳酸氢钠除杂后,采用紫外分光光度法测定白芍中苯甲酸的含量,报道如下.
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骨桥蛋白对小鼠胚泡黏附和扩展的影响及其机制
目的 探讨骨桥蛋白(OPN)对小鼠胚泡黏附、扩展的影响及机制. 方法 采用纤维蛋白铺板微滴培养法培养胚胎,观察并统计重组小鼠OPN(rmOPN)、OPN抗体及精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽(RGD)对胚泡的脱带、黏附和扩展的影响;采用24孔板培养胚胎,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测胚泡培养液基质金属蛋白酶2和9(MMP-2、-9)的浓度. 结果不同浓度的OPN组间胚泡的脱带率、黏附率与对照组相比无显著性差异(P>0.05);但1.0 mg/L和10.0 mg/L OPN组可促进小鼠胚泡提前扩展,72h囊胚扩展率与对照组相比差异有显著性,10.0 mg/L组72h的扩展率显著高于OPN 0.1 mg/L组(P<0.05).OPN抗体和RGD均显著抑制胚泡的脱带、黏附和扩展,与对照组相比,差异有显著性,且随着浓度的增加,抑制作用越明显.OPN促进胚泡分泌MMP-2及MMP-9,且存在时间和剂量依赖性. 结论 OPN在体外可通过促进小鼠胚泡的扩展和分泌MMP-2、-9来调节小鼠早期胚泡着床.
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骨髓基质细胞衰老对造血细胞衰老的影响
目的 探讨骨髓基质细胞(BMSCs)衰老对骨髓造血细胞衰老的影响及其可能的机制.方法 贴壁培养大鼠骨髓基质细胞,传代BMSCs至P3代时分组.对照组:常规培养;衰老组:常规培养基础上加入D-半乳糖(D-Gal)诱导BMSCs衰老,两组细胞分别培养48h.收集培养上清液,ELISA法检测细胞因子:粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干细胞因子(SCF)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β,IL-2和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,CCK-8检测细胞增殖能力,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测BMSCs衰老.分离提取正常骨髓单个核细胞(BMMNCs),在衰老组与对照组BMMSCs上种植正常BMMNCs共培养24h,收集上层悬浮BMMNCs.CCK-8法测定细胞增殖能力;多向造血祖细胞集落(CFU-Mix)半固体培养法检测细胞增殖及分化能力;SA-β-Gal染色观察衰老细胞百分率;流式细胞术分析细胞周期与细胞凋亡;DCFH-DA荧光染色检测细胞活性氧簇(ROS)水平;酶学法检测细胞内丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 衰老组BMSCs增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率增加,细胞分泌GM-CSF、SCF、IL-6、IL-1β水平明显降低,IL-2、TNF-α水平显著升高.与衰老BMSCs共培养后,BMMNCs的增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率显著上升,BMMNCs形成CFU-Mix集落数量明显降低,细胞周期呈现阻滞且细胞凋亡率上升,细胞内ROS、MDA含量上升,SOD含量下降.结论 本实验中D-Gal成功复制了BMSCs衰老,衰老的BMSCs可诱导骨髓造血细胞衰老,其机制可能与BMSCs导致造血细胞氧化损伤有关.
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颗粒溶素酶联免疫吸附测定法的建立及临床初步应用
颗粒溶素(granulysin, GNLY)是脂结合蛋白-皂素样蛋白(saposin-like protein , SAPLIP)家族成员之一,具有广谱细胞毒活性,在抗感染和抗肿瘤免疫中发挥重要作用[1-3].因此,对GNLY血清表达水平准确定量具有重要意义.本中心建立GNLY血清水平酶联免疫吸附测定(ELISA)法,并检测30名正常人及30例传染性单核细胞增多症(IM)患者血清GNLY水平,以进行不同疾病期比较分析,并探讨GNLY在感染性疾病诊断和临床实时监测中的应用价值.
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以合成肽作抗原的酶联免疫吸附法检测抗精子抗体
血清、精浆和宫颈粘液中的抗精子抗体(AsAb)是导致不孕和自然流产的原因之一。现常用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测AsAb，但该法以正常生育者的精子直接或制成包被抗原来包被酶标板［1］，受抗原来源限制，且稳定性和重复性不理想。本研究用人工合成的特异性精子肽作包被抗原，以ELISA检测AsAb，取得较满意结果。
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PBC患者granulysin基因和蛋白的表达及临床意义
目的:探讨颗粒溶素(granulysin,GNLY)在原发性胆汁性肝硬化和患者(PBC)中的表达及其意义.方法:采用TaqMan探针技术,以18S rRNA为内参照,测定60例PBC患者外周血中GNLYmRNA的含量,同时应用酶联免疫吸附法(ELISA),检测PBC患者血清中GNLY蛋白的水平,并以健康体检组(n=100)和乙型肝炎肝硬化组(n=60)为对照.结果:PBC组GNLY mRNA的平均拷贝数显著高于健康对照组[(2.7±2.5)×108 vs (3.0±1.9)×107,P＜0.01]和乙型肝炎后肝硬化组[(2.7±2.5)×108 vs (4.7±3.6)×105,P＜0.001).PBC患者血清中的GNLY蛋白表达显著高于健康对照组(15.48±3.24 μg/L vs 4.76±2.32 μg/L,P＜0.01)和乙型肝炎后肝硬化组(1 5.48±3.24 μg/L vs 2.57±1.84 μg/L,P＜0.01).结论:GNLY的表达与PBC的发生、发展存在一定的相关性,可用于PBC临床诊断.
关键词： 原发性胆汁性肝硬化 颗粒溶素 逆转录-聚合酶链反应 酶联免疫吸附测定法 -
5-脂氧合酶在大鼠急性坏死性胰腺炎组织中的表达
目的:研究5-脂氧合酶(5-lipoxygenase, 5-LOX)在急性坏死性胰腺炎(ANP)病程中的表达.方法:将SD大鼠54只随机分为3组:假手术组、ANP组和齐留通组. 经十二指肠行胆胰管逆行加压注射50 g/L牛磺胆酸钠, 诱导大鼠ANP模型. 各组大鼠分别于6、12、24 h处死. 用RTPCR、免疫组化和Western blot免疫印迹法检测胰腺组织5-LOX mRNA及相应蛋白的表达.ELISA方法检测血清LTB4水平. 应用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清淀粉酶水平.结果:与ANP组相比较, 齐留通组各个时点5-LOX蛋白及mRNA表达均显著降低, 差异具有统计学意义(1.333%±0.516% vs 2.667%±0.516%, 3.000%±0.632% vs 4.500%±0.548%,3.833%±0.753% vs 5.833%±0.408%; 0.285%±0.005% vs 0.366%±0.004%, 0.608%±0.005% vs 0.949%±0.013%, 0.297%±0.002%vs 0.400%±0.006%, 均P<0.05). 假手术组血清淀粉酶、LTB4水平很低, ANP组和齐留通组水平都明显升高, 且齐留通组每个时点都较ANP组水平降低, 差异有统计学意义(血清淀粉酶:1967.50±41.21 IU/L vs 2123.50±49.11IU/L, 3242.33±87.76 IU/L vs 3531.17±74.14IU/L, 2286.83±93.91 IU/L vs 2903.33±90.90IU/L, 均P<0.05).结论:急性胰腺炎时, 5-LOX表达明显增加, 使用齐留通后, 5-LOX表达明显减少.
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半枝莲黄酮类化合物对体外肿瘤血管生成的影响
目的:探讨中药半枝莲黄酮类化合物A06对体外肿瘤血管生成的影响.方法:分别采用小管形成实验、Transwell小室、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、硝酸还原酶法检测半枝莲黄酮类化合物A06对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)小管形成、迁移及人宫颈癌Hela细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)、一氧化氮(NO)表达的影响.结果:与对照组相比,半枝莲黄酮类化合物A06(50和100 mg/L)都能有效抑制HUVEC细胞的迁移(37.7%±10.7%,13.7%±6.0% vs 68.0%±8.2%,均P＜0.01),减少小管样结构形成(9.7%±4.5%,1.8%±1.2% vs 30.2%±5.4%,均P＜0.05),以及降低24 h后Hela细胞VEGF和NO的表达(VEGF:135.6±14.6 ng/L,108.3±7.7 ng/L vs 231.1±6.4 ng/L,均P＜0.01;NO:42.3±2.3μmol/L,25.9±5.2 μmol/L vs 70.1±8.1 μmol/L,均P＜0.01).结论:半枝莲黄酮类化合物A06有抑制体外肿瘤血管生成的作用,可能与抑制肿瘤细胞血管生成相关因子的表达,抑制内皮细胞迁移、形成管样结构有关.
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免疫组织化学法与酶联免疫法对胰岛细胞抗体检测的比较
目的 比较免疫组织化学法与酶联免疫吸附法(ELISA)测定胰岛细胞抗体(ICA)的阳性率. 方法对同一批200份血清标本,在北京、上海两地三个三甲医院内分泌实验室分别采用免疫组织化学技术POPA法、ABC法及ELISA法检测ICA. 结果免疫组织化学POPA法与ABC法检测ICA的阳性率和阴性率基本一致,而用ELISA法检测的阳性率低,假阳性率、假阴性率高. 结论与ELISA法相比,用免疫组织化学法测定ICA的准确性高,重复性好,宜推广应用于临床.
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心复力颗粒对HF大鼠心肌细胞PPAR-α及ET-1的影响
目的：探讨心复力颗粒对阿霉素（ADR）致心力衰竭（HF）大鼠PPAR-α及ET-1的影响及治疗HF的相关作用机制。
方法：60只雄性SD大鼠随机分为正常组，模型组，心复力颗粒低、中、高剂量组。参照Nithipongvanitch R等方法制备扩张型心肌病（DCM）引起的HF大鼠模型，将注射用ADR用生理盐水配成2 mg/ml溶液，48只造模大鼠均腹腔注射ADR 2.5 mg/kg，正常组12只大鼠腹腔注射等量的生理盐水，每周1次，共6次。从注射ADR第5周开始各组大鼠灌胃给药，将心复力颗粒用生理盐水配成0.5 g/ml的混悬液，低、中、高剂量组的灌胃剂量分别为0.675 g/（ kg·d）、1.350 g/（ kg·d）、2.700 g/（ kg·d），正常组和模型组给予与中剂量组等量生理盐水，每天上午灌胃1次，连续给药4周。将待测左室前壁标本用10％中性缓冲甲醛液固定18 h后脱水、浸蜡、石蜡包埋。连续切片4μm厚，经苏木精-伊红（HE）染色，光镜下（10×20）进行病理学观察，采用常规分级标准定量损伤程度。用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血浆中内皮素-1（ET-1）含量；半定量RT-PCR法检测过氧化物酶体增生物激活受体（PPAR-α）mRNA的表达。 -
阿托伐他汀对扩张型心肌病患者心功能及心率变异性的影响
1对象与方法2002年4月～2003年3月,我院扩张型心肌病患者45例,男32例,女13例,年龄40～61(48.0±3.1)岁,病程＞6个月,NYHA心功能Ⅱ～Ⅲ级,血压、血糖、血脂、甲状腺功能均正常,并排除缺血性心肌病、心瓣膜病等.45例患者给予常规强心、利尿、硝酸酯类扩血管治疗3个月待病情稳定后开始研究,随机分为两组,对照组(22例)治疗不变,阿托伐他汀组(23例)在原治疗基础上加阿托伐他汀10 mg/d,12周后观察心功能、心率变异性及血浆丙二醛、一氧化氮、肿瘤坏死因子-α(TNF-ot)、白细胞介素-6、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的变化.丙二醛用硫代巴比妥酸比色法,一氧化氮用硝酸还原酶法,TNF-c、白细胞介素-6和MMP-9用酶联免疫吸附测定法测定.心功能检测采用东芝SSA270A彩色多普勒超声诊断仪,探头频率3.5 MHz.心率变异性检测采用三通道动态心电图及软件处理,行心率变异性时域及频域分析.治疗前、后及组间比较用t检验,并作单因素直线相关分析.P＜0.05为有显著性差异.
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人重组谷氨酸脱羧酶65基因的克隆表达及其在1型糖尿病诊断中的初步应用
目的 构建人重组谷氨酸脱羧酶65(GAD65)基因不同区段原核表达载体,诱导表达获得重组蛋白,并初步验证GAD65不同抗原区段在1型糖尿病GAD自身抗体检测中的价值.方法 应用巢式逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术调取目的 基因,构建相应的原核表达质粒,转化大肠杆菌E.coli HB101,诱导表达获得纯化重组蛋白,用重组蛋白作为包被抗原,初步建立检测GAD自身抗体的酶联免疫吸附测定法(ELISA)方法,评价各片段在1型糖尿病诊断中的价值.结果 获得了4种可被1型糖尿病患者血清识别的重组人GAD抗原区段,其中GAD65(180-585)抗原区段具有很好的特异性,检出率为55.3%,是首选的抗原区段.结论 所选重组人GAD65(180-585)抗原区段具有良好的抗原性,可作为1型糖尿病患者辅助诊断试剂的候选抗原.
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尿液质粒Gap-LCR-ELISA法检测重庆地区围产期孕妇沙眼衣原体感染
目的将尿液质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(Gap-LCR-ELISA)用于检测重庆地区孕妇以了解围产期沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)的感染现状. 方法以512名孕妇首段尿(first void urine,FVU)及配对宫颈上皮细胞为研究对象,按照扩大金标准,比较质粒探针和外膜蛋白探针Gap-LCR-ELISA法用于不同类型临床标本检测CT感染的方法学指标.结果(1)孕妇的CT感染呈现很强的隐匿性,由扩大金标准所确证的CT真阳性共42例,所检重庆地区围产期孕妇的CT感染率为8.2%(42/512),其中88.1%(37/42)可同时从尿道和生殖道检出CT,而另9.5%(4/42)和2.4%(1/42)仅能单独分别从生殖道或尿道检出.(2)Gap-LCR-ELISA用质粒与外膜蛋白作为探针检测FVU中CT的灵敏度分别为90.48%和71.43%(P＜0.05),质粒Gap-LCR-ELISA用于宫颈上皮细胞和FVU两种标本的灵敏度分别为97.62%和90.48%(P＞0.05),特异度均为100%.结论质粒Gap-LCR-ELISA法用于孕妇FVU以检测围产期无症状CT感染患者,是一种非侵袭性的、高度灵敏特异的、适于发展中国家和地区进行大规模流行病学调查的方法.
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癫痫复杂部分发作患者血清髓鞘碱性蛋白含量研究
目的探讨癫痫复杂部分发作(ECPS)患者血清髓鞘碱性蛋白(MBP)水平及其与癫痫发作的相关性.方法用酶联免疫吸附测定法对34例ECPS患者及28例精神分裂症(SP)患者及32名正常人血清MBP进行检测.结果 ECPS组血清MBP含量明显高于SP组及正常组(P＜0.01),且血清MBP含量与癫痫发作频繁、近周内发作、脑电图及脑CT/MRI异常有关(P＜0.05).结论提示ECPS可能与髓鞘损害有关.
