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5-脂氧合酶在大鼠急性坏死性胰腺炎组织中的表达
目的:研究5-脂氧合酶(5-lipoxygenase, 5-LOX)在急性坏死性胰腺炎(ANP)病程中的表达.方法:将SD大鼠54只随机分为3组:假手术组、ANP组和齐留通组. 经十二指肠行胆胰管逆行加压注射50 g/L牛磺胆酸钠, 诱导大鼠ANP模型. 各组大鼠分别于6、12、24 h处死. 用RTPCR、免疫组化和Western blot免疫印迹法检测胰腺组织5-LOX mRNA及相应蛋白的表达.ELISA方法检测血清LTB4水平. 应用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清淀粉酶水平.结果:与ANP组相比较, 齐留通组各个时点5-LOX蛋白及mRNA表达均显著降低, 差异具有统计学意义(1.333%±0.516% vs 2.667%±0.516%, 3.000%±0.632% vs 4.500%±0.548%,3.833%±0.753% vs 5.833%±0.408%; 0.285%±0.005% vs 0.366%±0.004%, 0.608%±0.005% vs 0.949%±0.013%, 0.297%±0.002%vs 0.400%±0.006%, 均P<0.05). 假手术组血清淀粉酶、LTB4水平很低, ANP组和齐留通组水平都明显升高, 且齐留通组每个时点都较ANP组水平降低, 差异有统计学意义(血清淀粉酶:1967.50±41.21 IU/L vs 2123.50±49.11IU/L, 3242.33±87.76 IU/L vs 3531.17±74.14IU/L, 2286.83±93.91 IU/L vs 2903.33±90.90IU/L, 均P<0.05).结论:急性胰腺炎时, 5-LOX表达明显增加, 使用齐留通后, 5-LOX表达明显减少.
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齐留通在急性坏死性胰腺炎腺泡细胞凋亡中的作用
5-脂氧合酶(5-Lipoxygenase,5-LOX)是脂肪酸氧化代谢的重要酶类,近年的大量研究已经证实,5-LOX在许多肿瘤的发生和发展中都起到重要作用.而关于急性胰腺炎(AP)时,5-LOX在胰腺腺泡细胞凋亡中作用的研究却鲜有报道.本文旨在探讨5-LOX抑制剂与AP腺泡细胞凋亡的关系和意义.
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齐留通和塞来昔布对实验性口腔癌抑制作用的研究
目的通过局部应用5-Lox抑制剂齐留通和Cox-2抑制剂塞来昔布,研究它们对DMBA诱发的金黄地鼠口腔癌的抑制作用.方法用0.5%的DMBA石蜡油涂于地鼠左侧颊囊,每周3次,共涂6周.从第7周开始分别给地鼠左侧颊囊局部涂抹3%和6%的齐留通、3%和6%的塞来昔布及3%齐留通与3%塞来昔布的混合物,每周3次,连续18周.结果通过局部应用3%和6%的齐留通,鳞状细胞癌的发病率从76.9%分别下降到45.8%(11/24,P＜0.05)和32.1%(9/28,P＜0.01);应用3%和6%的塞来昔布分别下降到57.6%(15/26,P＞0.05)和50.0%(12/24,P＜0.05);用3%齐留通与3%塞来昔布的混合物组,鳞状细胞癌的发病率降至36%(9/25,P＜0.01).用药后齐留通组的白三烯B4水平降低;塞来昔布组的前列腺素E2水平降低;联合用药组前列腺素E2和白三烯B4同时降低.结论齐留通和塞来昔布能够抑制DMBA诱发的金黄地鼠口腔癌的发生.齐留通和塞来昔布预防肿瘤的机制可能与其抑制异常花生四稀酸代谢酯氧化酶和环氧合酶途径有关.
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齐留通对大鼠心肌缺血再灌注炎症损伤的抑制作用观察
目的 探讨5-脂氧合酶(5-LO)选择性抑制剂齐留通(zileuton)对缺血再灌注心肌的保护作用及其可能机制.方法 健康成年雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组(S组,n=10)、缺血再灌注组(I/R组,n=10)、齐留通组(Z组,n=10),采用结扎前降支造成缺血45min、松开结扎线灌注120min的方法建立缺血再灌注模型.Z组于手术前15min给予3mg/kg齐留通.再灌注结束后处死动物,HE染色观察心肌的病理损伤情况,TUNEL法检测心肌缅胞凋亡率,ELISA法检测血浆中白三烯B4(LTB4)、IL-1p、TNF-α的含量,Western blotting和免疫荧光法检测中性粒细胞中的5-LO分布变化.结果 与I/R组比较,齐留通处理可以明显减轻缺血再灌注所致的心肌病理损伤,降低心肌细胞凋亡率,降低血浆中炎症因子LTB4、IL-1β和TNF-α的水平,抑制5-LO的激活转位,差异有统计学意义(P＜0.05),但各组5-LO表达总量无明显差异(P＞0.05).结论 齐留通对缺血再灌注心肌具有一定的保护作用,其机制可能与抑制5-LO转位激活,进而减轻炎症损伤、抑制心肌凋亡有关.
关键词： 齐留通 花生四烯酸盐5-脂氧合酶 心肌再灌注损伤 -
LC-MS/MS法测定大鼠血浆中齐留通的含量及其药动学研究
目的:建立测定大鼠血浆中齐留通含量的LC-MS/MS方法,研究齐留通片和齐留通原料在大鼠体内的药动学过程和生物利用度.方法:大鼠灌胃(ig)给药后,分别于不同时间点采血,血浆样品采用LC-MS/MS测定血药浓度,采用DAS 2.0软件求算药动学参数.结果:齐留通的血浆浓度在1～1 000 ng·mL-1范围内线性关系良好(r =0.999 92),日间精密度和日内精密度RSD均小于15％,稳定性、回收率均在85％～115％.齐留通片和齐留通的半衰期分别为6.091和7.91 h,齐留通片在大鼠体内的相对生物利用度为138.90％.结论:该方法可用于测定大鼠血浆中齐留通的含量,齐留通片在大鼠体内吸收较好,本实验结果可为齐留通仿制药的研究提供依据.
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抗哮喘新药齐留通的合成
目的:合成抗哮喘新药齐留通.方法:以2-乙酰基苯并噻吩为起始原料,经3步反应合成齐留通.结果:目标化合物经1H-NMR, 13C-NMR,FT-IR和MS确证其结构,HPLC纯度在99.0%以上.结论:本方法原料易得,操作简便,总收率达50%.
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5-脂氧合酶抑制剂齐留通对胰腺癌细胞SW1990的生长抑制作用
目的 观察5-脂氧合酶(5-LOX)在胰腺癌细胞SW1990中蛋白、mRNA水平的表达,探讨5-LOX特异性抑制剂齐留通对胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响及可能机制.方法 2003-05-10-2004-05-25,南通大学附属医院消化实验室采用半定量反转录-聚和酶链反应(RT-PCR)法和免疫细胞化学方法检测5-LOX在胰腺癌细胞SW1990中的表达,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪检测齐留通对细胞的生长抑制作用.结果 胰腺癌细胞SW1990中5-LOX mRNA及蛋白表达阳性,齐留通明显抑制胰腺癌细胞生长,并呈时间、浓度依赖性.结论 5-LOX特异性抑制剂齐留通对胰腺癌细胞有显著的生长抑制作用,为胰腺癌的防治提供了一个新的实验依据.
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齐留通对急性坏死性胰腺炎大鼠中性粒细胞活化的影响
5-脂氧合酶(5-LOX)是将花生四烯酸、亚油酸和其他多不饱和脂肪酸转变为具有生物活性的代谢产物如白三烯类的限速酶,从而影响细胞信号转导、结构和代谢.然而关于其在重症急性胰腺炎(SAP)中作用的研究尚少.目的:研究选择性5-LOX抑制剂齐留通对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠中性粒细胞活化的作用.方法:将54只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、ANP组和齐留通组.以5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱导ANP模型.各组大鼠分别于6 h、12 h和24 h处死.行胰腺组织病理学评分,以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、可溶性E-选择素(sE-选择素)和可溶性P-选择素(sP-选择素)水平,以免疫组化染色检测胰腺组织ICAM-1、E-选择素和P-选择素的表达,常规方法检测胰腺组织髓过氧化物酶(MPO)活性和血清淀粉酶水平.结果:与假手术组相比,ANP 组同时间点胰腺组织病理学评分、血清sICAM-1、sE-选择素和sP-选择素水平、胰腺组织ICAM-1、E-选择素和P-选择素表达以及胰腺组织MPO活性和血清淀粉酶水平均显著增高(P<0.05).经齐留通预处理后,除外6 h组的组织病理学评分,上述各项指标均较同时间点ANP组显著降低(P＜0.05).结论:选择性5-LOX抑制剂齐留通能通过抑制中性粒细胞活化而有助于减轻ANP大鼠胰腺组织学损伤.
关键词： 胰腺炎 急性坏死性 花生四烯酸盐5-脂氧合酶 齐留通 中性白细胞 -
5-脂氧合酶特异性抑制剂对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响
流行病学和动物研究表明,胰腺癌的发生发展与亚油酸、花生四烯酸(AA)等多聚不饱和脂肪酸的摄入有关.5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)是催化AA转化为5-羟二十碳四烯酸(5-HETE)和白三烯(LT)的关键酶.齐留通(zileuton)其化学名为N-[1-(苯并[b]噻吩基)-2-乙基]-N-羟基,通过抑制5-LOX活性而抑制AA转化为LTB4,是特异性5-LOX抑制剂.我们应用齐留通阻断5-LOX代谢途径,研究对胰腺癌细胞SW1990凋亡及凋亡相关基因bcl-2 mRNA和bax mRNA的影响,从而为胰腺癌的治疗寻找一种新的有效途径.
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顶空气相色谱法测定齐留通中有机溶剂残留量
目的:建立测定齐留通中有机溶剂环己烷、乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷和甲苯含量的顶空气相色谱法.方法:采用10%FFAP(聚乙二醇硝基苯)+1%H3PO3(183 cm×2 mm)填充柱、程序升温和外标的方法.结果:各组分的线性关系良好(r＞0.999 0),回收率均在95%～105%,低检测限分别为31.00、63.00、9.00、13.00和8.70 ng.结论:该方法操作简单、实用,结果准确可靠.
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白三烯受体拮抗剂及合成抑制剂与哮喘
哮喘是涉及多种炎性细胞和炎性介质的复杂疾病,白三烯是其重要的介质之一,研究显示抑制白三烯合成以及拮抗其作用有助于哮喘的控制.本文就白三烯受体拮抗剂及合成抑制剂与哮喘的关系作一综述.
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齐留通片在健康人体内的药动学
目的 研究齐留通在中国健康人体内单次和多次给药的药动学.方法 12名健康志愿者,单次口服齐留通片0.6 g或多次口服齐留通片0.6 g·次-1,每日4次,连续5 d,在设计的时间点取静脉血.采用HPLC-UV法测定血药浓度,研究齐留通的药动学.结果 单次口服齐留通片0.6 g,平均血药浓度-时间变化规律符合单室模型,主要药动学参数如下:cmax为(6.6± 2.0)mg·L-1;tmax为(1.9±0.3)h;t1/2为(3·5±l·8)h;AUC0～6为(19±6)mg·h·L-1,AUC0～12(25±8)mg.h·L-1;AUCo0～00为(27±10)mg·h·L-1;CL/F为(26±8)L·h-1.除t1/2和tmax外,其余主要药动学参数在性别问有显著差异(P＜0.05).连续口服齐留通0.6 g达到稳态后,主要药动学参数如下:casmax为(7.4±1.6)mg·L-1;Casmin为(2.2±1.0)mg·L-1;Casav为(3.5±1.0)mg-L-1;盘为(1.2±0.3)h;AUCas0～6为(21±6)mg·h.L-1;AUCas0～12为(26±8)mg·h·L-1;AUCas0～00为(28±10)mg·h·L-1;t1/2为(3.1±1.1)h;DF为(1.5±0.4).连续给药5 d,cmax、A UC、t1/2等无明显增加(P＞0.05),性别间除tssmax、t1/2和DF外,主要药动学参数有显著差异(P＜0.05),女性明显高于男性.结论 齐留通片在人体内吸收迅速,分布广泛.中国健康志愿者体内的药动学参数在性别间有明显差异,多次给药后体内无明显蓄积现象.
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齐留通减轻小鼠小胶质细胞介导的鱼藤酮对PC12细胞的毒性作用
目的:观察5-脂氧酶选择性抑制剂齐留通对小胶质细胞介导的鱼藤酮神经毒性的影响.方法:以鱼藤酮预处理的小鼠小胶质BV2细胞条件培养液培养PC12细胞,通过MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)释放分析PC12细胞损伤和活性变化,Hoechst/碘化丙啶荧光双染检测PC12细胞死亡,并评估齐留通对小胶质细胞介导细胞毒性的作用.结果:1、3、10 nmol/L鱼藤酮对PC12细胞无直接毒性,但是其预处理的BV2细胞条件培养液间接诱导PC12细胞形态改变、活性下降,LDH释放和细胞死亡明显增加;0.01、1μmol/L齐留通能有效减轻小胶质细胞介导的鱼藤酮细胞毒性作用.结论:5-脂氧酶抑制剂齐留通能减轻小胶质细胞介导的鱼藤酮神经毒性,提示5-脂氧酶通路在小胶质细胞炎症诱导的神经细胞死亡中有重要作用.
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5-脂氧合酶抑制剂齐留通对N-甲基-D-门冬氨酸诱导的小鼠脑损伤的保护作用
[目的]观察5-脂氧合酶(5-LOX)抑制剂齐留通对N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)皮层注射诱导的小鼠脑损伤的影响.[方法]NMDA(100 nmoL)皮层直接注射建立脑损伤模型,用干湿重法评价脑水肿,脑切片TTC染色检测梗死体积,甲苯胺蓝染色法评价神经元的损伤.以NMDA拮抗剂氯胺酮(30mg· kg-1)为阳性对照药,3、10、30 mg· kg-1齐留通在NMDA皮层注射前30 min腹腔注射给药1次,NMDA注射后24 h评价上述指标.[结果]干湿重法显示皮层注射NMDA并未引起脑水含量的变化,齐留通对脑水含量没有影响;NMDA(100nmoL)皮层注射能诱导大面积脑梗死,中、高剂量的齐留通(10、30mg· kg1)和氯胺酮(30 mg· kg-1)能明显降低梗死灶体积;NMDA诱导神经元变性,中、高剂量的齐留通和氯胺酮减轻神经元变性,增加损伤区神经元数量.[结论]5 -LOX抑制剂齐留通对NMDA皮层注射诱导的小鼠脑损伤有保护作用.
关键词： 脑损伤 5-脂氧合酶 齐留通 N-甲基-D-门冬氨酸 -
齐留通对胰腺癌细胞增殖与凋亡的影响
目的 探讨齐留通阻断5-脂氧合酶(5-LOX)代谢途径对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 将人胰腺癌细胞SW1990与不同浓度齐留通(浓度分别为40,30,20,10,5,3和1 μg·mL-1)共同孵育,以不加齐留通的细胞为对照组.采用MTT法和流式细胞仪(FCM)Annexin V/PI双染法检测各组SW1990细胞增殖和凋亡比例,FCM检测细胞周期.结果 培养48 h后,40和30 μg·mL-1齐留通组对胰腺癌细胞增殖的抑制作用明显强于对照组,且均差异有极显著性(均P＜0.01);培养72 h后,40,30和20 μg·mL-1齐留通组对胰腺癌细胞的抑制较对照组显著增强(均P＜0.01).其他检测结果亦表明,齐留通可抑制SW1990细胞增殖,促进细胞凋亡,该作用呈浓度和时间依赖性.与对照组相比,齐留通作用18 h后G0/G1期细胞比例较对照组明显增高(P＜0.01),G2/M期、S期细胞所占比例降低.结论 齐留通能抑制胰腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,使细胞DNA合成受抑制,产生G1期阻滞.
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高效液相色谱法测定人血浆中齐留通
目的建立一种HPLC-UV测定人血浆中齐留通的方法,研究齐留通片单剂量给药的人体药动学.方法血样经液-液萃取(二氯甲烷-无水乙醇,9∶1)后, 采用BDS C18色谱柱(200 mm×4.6 mm, 5 μm)分离,以乙酰苯胺为内标,流动相为磷酸二氢钠( 20 mmol·L-1,pH 4.0)-乙腈-四氢呋喃(75∶20∶5,v/v/v), 流速为1.5mL·min-1, 检测波长为260 nm, 柱温为35 ℃.12名健康志愿者(男女各半),单剂量口服齐留通片0.6 g后,在规定的时间点取静脉血,并研究其药物动力学.结果齐留通与内标分离度好,内源性杂质不干扰测定.标准曲线:C =1.332 0 X -0.027 92,r =0.999 7,血浆中齐留通在0.0781～20.0 mg·L-1与峰面积比线性关系良好,定量限为0.0781 mg·L-1.齐留通的萃取回收率:82.6%～91.4% (n=15),内标的萃取回收率为82.9%～94.5%(n=15).方法回收率为95.8%～108.7%(n=5),日内RSD为6.4%～11.5%(n=5);日间RSD为4.0%～8.2%(n=15).单剂量服用齐留通0.6 g的主要药物动力学参数如下: Cmax为(6.62±2.02)mg·L-1; tmax为(1.9±0.3)h; t1/2为(3.54±1.81) h; AUC0～12为(25.03±8.31)mg·h·L-1.结论该法简便、灵敏、准确可靠,可用于齐留通在人体内的药物动力学研究.齐留通片在人体内吸收迅速,分布广泛.药物动力学参数在性别间没有明显差异.
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齐留通对胃癌SGC-7901细胞生长的影响
目的:观察5-脂氧合酶抑制剂齐留通对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响,初步探讨齐留通影响胃癌细胞生长的机制.方法:MTT法测定齐留通对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;TUNEL染色法计数细胞凋亡率;RT-PCR和免疫细胞化学检测齐留通处理前后SGC-7901细胞Bax、Bcl-2和caspase-3 mRNA和其蛋白表达的改变.结果:齐留通以时间剂量依赖的方式抑制SGC-7901细胞生长;TUNEL染色法显示6.2×10-5 mol/L、3.1×10-5 mol/L齐留通作用72 h后细胞凋亡率为19.6%±6.3%和28.9%±2.3%,均显著高于对照组0.6%±0.1%(P＜0.01);RT-PCR和免疫细胞化学显示6.2 × 10-3 mol/L齐留通作用胃癌SGC-7901细胞72h后,可显著促进Bax、caspase-3mRNA和其蛋白的表达(P＜0.05),抑制Bcl-2mRNA及其蛋白的表达(P＜0.05).结论:齐留通能抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,并通过促进Bax和caspase-3的表达,抑制Bcl-2表达,诱导其凋亡,从而抑制胃癌SGC-7901细胞生长.
关键词： 齐留通 胃癌 SGC-7901细胞 5-脂氧合酶抑制剂 凋亡
