首页 > 文献资料
-
丙烯腈对大鼠脑单胺类神经递质及其代谢产物的影响
目的评价长期低浓度接触丙烯腈对大鼠脑单胺类神经递质及其代谢产物的影响.方法雄性SD大鼠30只,随机分成对照组、低剂量组和高剂量组,每组10只.通过饮水对大鼠进行丙烯腈染毒,分别给予0、50和200 mg/L的丙烯腈溶液.染毒时间为12周.染毒结束后从每组随机选取7只大鼠迅速分离双侧纹状体和小脑皮层,测定单胺类神经递质及其代谢产物的浓度,并取大脑皮层测定单胺氧化酶活性.结果随着染毒剂量的增加,低剂量组和高剂量组大鼠纹状体中的多巴胺含量分别降低到(2.2±0.7)和(3.2±2.0) μg/g脑湿重,与对照组的多巴胺含量(9.0±4.2) μg/g脑湿重比较,差异有统计学意义.3组大鼠小脑中的多巴胺未见减少,其代谢产物3,4-双羟苯乙酸分别为(186±41)、(245±90)和(115±65) ng/g脑湿重,低剂量组显著升高.3组染毒大鼠纹状体内的5-羟色胺含量分别为(249±34)、(155±95)和(128±101) ng/g脑湿重,呈逐渐下降趋势,并具有显著的剂量-效应关系,但3组大鼠小脑中的5-羟色胺及其代谢产物含量的变化无统计学意义.3组大鼠脑组织纹状体和小脑中的去甲肾上腺素及其代谢产物以及脑皮层单胺氧化酶活性的改变均无统计学意义.结论丙烯腈对单胺类神经递质及其代谢产物的影响可能是其神经行为毒性的生物学基础.
-
重组转化生长因子-β复合同种异体骨移植修复骨缺损的实验研究
目的 评价重组转化生长因子-β(TGF-β)复合同种异体骨移植修复骨缺损的效果。方法 用基因重组的方法提取TGF-β,与同种异体骨复合后植入兔桡骨缺损区,采用同体双侧对照方法,进行X线摄片、组织学及放射性核素骨扫描检查。结果 术后8～12周,复合物移植侧移植骨与桡骨断端全部连接,成骨活跃,单纯植骨侧移植骨与桡骨断端无连接,成骨差。结论 重组TGF-β复合同种异体骨移植修复缺损效果良好。
-
谷胱甘肽防治奥沙利铂神经毒性的临床观察
目的 评价谷胱甘肽防治奥沙利铂神经毒性的临床疗效. 方法 将68例使用奥沙利铂方案化疗的患者随机分为两组.预防治疗组在奥沙利铂化疗前一天开始使用谷胱甘肽,每日3000 mg,加入5%葡萄糖注射液250 ml中静脉滴注,连用3 d;对照组只予对症治疗,不用谷胱甘肽. 结果 对照组奥沙利铂神经毒性发生率为81.8%(27/33),预防组34.3%(12/35),经χ2检验,差异有非常显著性(P＜0.01). 结论 谷胱甘肽对预防奥沙利铂的神经毒性有较好的效果,是预防奥沙利铂的神经毒性的主要措施之一.
-
N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1亚单位参与兴奋性神经毒的机制及防治
离子型谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)是中枢神经系统中主要的兴奋性氨基酸受体.NR1是NMDA受体的基本亚基,构成Ca2+通道的主要成分.NR1在兴奋性神经毒过程中起关键作用.本文对近期有关NR1亚单位参与兴奋性神经毒的机制及防治的研究进展做一综述.
关键词： 受体 N-甲基-D-天冬氨酸 神经毒素类 -
神经毒素β-N-甲氨基-L-丙氨酸的毒理学与检测方法研究进展
β-N-甲氨基-L-丙氨酸(BMAA)是一种具有神经毒性的非蛋白氨基酸.研究表明,BMAA能够损伤运动神经元.在自然环境中,BMAA可以沿食物链传递,具有生物放大现象,可能参与肌萎缩侧索硬化-帕金森痴呆综合征的发病过程.大部分浮游蓝细菌(蓝藻)能够产生BMAA,环境中广泛存在的蓝藻可能会对人类健康构成威胁.本文对BMAA的理化性质、毒性、致毒机制、检测方法及其沿食物链的传递行为等进行了综述,以期为蓝藻毒素对人体健康的风险评估提供参考依据.
-
咖啡酸对神经毒素MPP+诱发大鼠小脑颗粒细胞凋亡的保护作用
目的:探讨咖啡酸(CA) 是否对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ion, MPP+) 诱导的大鼠小脑颗粒细胞凋亡具有保护作用.方法: 用咖啡酸孵育大鼠小脑颗粒细胞, 经MPP+处理后, 用MTT法测定细胞存活率, 荧光法检测caspase-3的活性.结果:咖啡酸对MPP+致小脑颗粒细胞存活率降低和caspase-3活性增强具有很好的抑制作用,并呈现稳定的量效和时效关系.结论:咖啡酸对MPP+诱导小脑颗粒细胞凋亡具有明显的保护作用.
关键词： 咖啡酸类 神经毒素类 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 细胞凋亡 大鼠 -
钙通道阻滞剂维拉帕米对甲基苯丙胺所致大鼠小脑神经细胞凋亡的抑制作用
目的:研究维拉帕米对甲基苯丙胺(MA)导致神经细胞损伤的影响,探讨维拉帕米的保护机制.方法:采用MTT法,乳酸脱氢酶(LDH)法,观察MA的神经毒性作用.运用DNA电泳法、流式细胞仪法,观察MA致神经细胞凋亡的作用,并研究了维拉帕米的保护作用.结果:(1)MA(0.25～3.00mmol/L)作用48 h和60h,能增加大鼠小脑神经细胞系R2细胞LDH的漏出率,分别为48.2%～89.3%和62.5%～97.3%,与对照组相比,差异有显著性(P＜0.01),活细胞明显减少;应用流式细胞仪检测,在G1峰前出现亚二倍体峰,MA所致R2细胞凋亡呈一定的时间依赖性和剂量依赖性.DNA电泳图谱则表现出典型的梯状条带.(2)维拉帕米(0.5～5.0 μmol/L)减少MA导致的R2细胞LDH的漏出率,改善细胞形态,对MA诱导R2细胞凋亡有明显的抑制作用.结论:维拉帕米对MA诱导的神经细胞凋亡具有保护作用,MA神经毒性作用可能与L型电压依赖性钙通道有关.
-
肉苁蓉成分campneoside Ⅱ对神经毒素MPP +诱发细胞凋亡的保护作用
目的：建立1-甲基-4苯基吡啶离子(1-methyl-4 -phenylpyridinium ion, MPP +) 诱导的大鼠小脑颗粒细胞凋亡模型，探讨肉苁蓉成分是否对MPP +诱导的大鼠小脑颗粒细胞凋亡有保护作用。方法：用肉苁蓉成分预先孵育大鼠小脑颗粒细胞，经MPP ＋处理这些细胞后，用甲基绿-派诺宁染色、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测。结果：浓度为 50 μmol*L －1MPP ＋使小脑颗粒细胞发生典型的凋亡，25 mg*L －1 campneoside Ⅱ具有抗凋亡作用。结论：以MPP ＋为诱导剂建立的大鼠小脑颗粒细胞凋亡模型，可用于研究与帕金森病(Parki nson's disease, PD)有关的细胞凋亡的调控机制和筛选抗PD药物, 中药肉苁蓉成分campne oside Ⅱ对神经毒素MPP ＋诱发细胞凋亡具有明显的保护作用。
-
噻萘普汀预处理对甲基苯丙胺神经毒性的影响
背景:甲基苯丙胺对中枢神经系统具有毒性,5-羟色胺再摄取增强剂噻萘普汀对甲基苯丙胺所致5-羟色胺能神经元的损害是否具有保护效应尚不清楚.目的:探讨甲基苯丙胺的神经毒性及噻萘普汀的神经保护作用和机制.设计:以动物为研究对象,随机对照的实验研究.单位:一所大学的动物研究室和病理研究室.材料:实验于2003-06/08在四川大学实验动物中心、四川大学华西医院分子病理实验室完成.选择Wistar雄性大鼠25只,腹腔注射甲基苯丙胺建模,甲基苯丙胺由中国药品生物制品检定所提供.噻萘普汀为法国施维雅药厂惠赠(批号0E3086).脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记检测试剂盒购自Boehringer mannheim公司.干预:设立对照组和实验组(A,B,C,D),A组腹腔注射甲基苯丙胺;B,C,D组分别在给予甲基苯丙胺前7,4 d和同时给予噻萘普汀;对照组注射等体积生理盐水.实验后采用苏木精-伊红染色、银染色,光镜观察神经元形态学变化;脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测凋亡细胞.主要观察指标:各组动物脑组织切片苏木精-伊红染色、银染色结果和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性神经元计数.结果:甲基苯丙胺可损害神经元的轴突、树突,银染阳性细胞吸光度为50.74±1.86;并诱导凋亡,每高倍视野凋亡细胞计数为29.26±4.14,噻萘普汀保护7 d组的凋亡细胞形成较少,每高倍视野计数为18.90±1.60.结论:甲基苯丙胺通过诱导凋亡引起神经毒性;预先给予噻萘普汀具有神经保护效应.
-
新生鼠脑损伤性神经变性的电镜观察
背景:由于儿童脑的发育尚未成熟,加上血脑屏障发育不完善,临床处理不当将影响其生长发育.对未成熟脑损伤性神经变性的进一步研究是十分必要的.目的:通过建立新生7 d SD大鼠顶叶皮质脑挫伤动物模型,观察大鼠同侧顶叶皮质和海马神经细胞的超微结构.设计:完全随机对照实验.单位:上海交通大学医学院神经形态实验室和细胞生物学实验室以及中科院上海生理研究所电镜室.材料:实验于2002-10/2003-06在上海第二医科大学(现称上海交通大学医学院)解剖教研室神经形态实验室、细胞生物学实验室以及中科院上海生理研究所电镜室完成.19只新生7 d SD大鼠,随机分为实验组15只、手术对照组2只和正常对照组2只. 方法:实验组用自由落体脑外伤装置建立新生7 d SD大鼠顶叶皮质脑挫伤动物模型.手术对照组除无自由落体重力锤撞击外,麻醉、头部皮肤切开等操作与实验组相同.正常对照组动物不做任何处理.经常规电镜处理,于透射电镜下观察细胞结构的变化.主要观察指标:各组大鼠同侧顶叶皮质和海马神经细胞超微结构观察.结果:19只大鼠均进入结果分析.①电镜下,实验组神经元有两种类型的形态改变.其一为神经元树突和胞体呈巨大膨胀,伴随着细胞器的改变.早期内质网池扩大,线粒体致密和浓缩.此后内质网空泡化,线粒体进行性肿、胀和空泡化,多聚核糖体从粗面内质网上解离,并散在于胞浆中,核的改变出现于胞浆改变明显之后.核染色质由簇状集聚于核膜下呈钟面排列到向中央积聚成轮廓不规则的团块.轴突基本正常.变化二为胞浆和胞核均浓缩,胞浆中有大小不等的空泡.②手术对照组和正常对照组同侧顶叶皮质和海马细胞均无异常改变.结论:脑损伤后脑细胞肿胀、胞浆和胞核均浓缩,对未成熟脑创伤性神经变性起十分重要的作用.
-
连续鞘内注射ω-芋螺毒素SO3对大鼠慢性神经痛的镇痛作用
目的:观察持续鞘内注射ω-芋螺毒素SO3对慢性压迫性损伤所致的神经痛大鼠的长期镇痛效果及其可能出现的副作用.方法:实验于2004-01/06在解放军军事医学科学院生物工程研究所完成.①制备右侧坐骨神经慢性挤压伤模型成功的雄性SD大鼠24只.采用随机数字法均分为4组.对照组持续鞘内注射生理盐水0.25μL/h;用药组分别持续经鞘内注射ω-芋螺毒素SO3生理盐水溶液15,30及60 ng/h,共28 d.②分别于大鼠坐骨神经结扎前、给药前、给药后3,7,14,21,28 d测量下列指标:体质量变化;触诱发痛采用Von Frey细丝0.4～60 g测定,从低值开始,每种细丝测量10次,引起大鼠足爪抬起5次以上时Von Frey细丝低值为其阈值;热刺激爪退缩阈值采用TF2-光热测痛仪测定,连续测3次,间隔5 min,取其平均值;冷敏阈值测定,分别记录大鼠双侧后肢在冷水中1 min后的抬足次数,记录时间为2 min.每只动物各种测痛方法之间间隔1 h.结果:①连续鞘内注射SO3对体质量影响小.②连续鞘内注射SO3可以显著提高结扎侧触诱发痛阈值,剂量越高,镇痛作用越强.SO3 30ng/h及60ng/h组镇痛强度明显强于15 ng/h组(21 d:18.7±5.7,20.5±6.0,11.7±2.6).连续鞘内注射SO3 60 ng/h时可以达到完全镇痛.用药28 d其镇痛作用无衰减;停药后各阈值回到给药前水平.③连续鞘内注射SO3可以显著提高结扎侧热刺激爪退缩阈值,剂量越高,镇痛作用越强.各剂量组热刺激爪退缩阈值均高于正常大鼠基础值.用药期内一直保持高效镇痛,停药后其阈值恢复至给药前水平.④连续鞘内注射SO3可以显著减少结扎侧抬足次数,剂量越高,镇痛作用越强,60 ng/h时可以达到完全镇痛.用药期内一直保持高效镇痛;停药后结扎侧抬足次数明显增加,基本恢复至给药前水平.结论:长期鞘内注射SO3可有效地治疗神经源性疼痛,未发生成瘾及耐药,其镇痛作用可逆.
-
3-硝基丙酸多次预处理对多巴胺能神经元的保护机制
背景:帕金森病的主要病理改变在于中脑黑质的多巴胺神经元不可逆转的变性减少,而氧化应激反应在帕金森病的发病过程中起着十分重要的作用.3-硝基丙酸为线粒体复合体-Ⅰ抑制剂,它可抑制氧化磷酸化作用从而抑制能量代谢,但德国Riepe教授发现小剂量的3-硝基丙酸可以提高神经元对缺血缺氧的耐受性,它是否可以增强多巴胺神经元对神经毒素的耐受性尚不得而知.目的:认识3-硝基丙酸多次预处理对帕金森病的预防及可能的机制.设计:对照观察动物实验.单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院神经科.材料:实验于2004-03/07在华中科技大学同济医学院附属协和医院神经科实验室进行.C57BL小鼠48只,体质量18～20 g,鼠龄二三个月,雌雄不限.小鼠随机分为6组,每组8只:①空白对照组:不用任何药物.②单次3-硝基丙酸组:仅腹腔注射3-硝基丙酸1次.③多次3-硝基丙酸组:每隔5d腹腔注射3-硝基丙酸,共5次.④神经毒素组:腹腔注射滗神经毒素,1次/d,共5次.⑤3-硝基丙酸单次预处理组:腹腔注射3-硝基丙酸1次,3 d后腹腔注射神经毒素,1次/d,共5次.⑥3-硝基丙酸多次预处理组:腹腔注射3-硝基丙酸,每隔5 d重复注射,共5次;3 d后再腹腔注射神经毒素,1次/d,共5次.3-硝基丙酸和神经毒素腹腔注射剂量分别为20 mg/kg及30 mg/kg.方法:各组小鼠实验前及后一次注射神经毒素后3 d,分别应用爬杆实验及悬挂实验对小鼠进行运动协调评分.各组小鼠在全部药物注射完毕后3 d,迅速处死,测定中脑黑质丙二醛及还原型谷胱甘肽含量.主要观察指标:①各组小鼠动作行为评分比较.②各组小鼠中脑黑质组织丙二醛含量的比较.③各组小鼠中脑黑质还原型谷胱甘肽含量的比较.结果:48只小鼠均进入结果分析.①经腹腔注射神经毒素后,小鼠爬杆实验,悬挂实验较对照组评分降低(P＜0.01);经过3-硝基丙酸单/多次预处理后,其评分明显上升,差异均有显著性意义(P＜0.05,P＜0.01);多次预处理组与单次预处理组间差异也有显著性意义(P＜0.05).②腹腔注射神经毒素后丙二醛含量较对照组明显升高,差异有极显著性意义(P＜0.01);3-硝基丙酸单次预处理后,丙二醛含量明显下降,与神经毒素组比较,差异有显著性意义(P＜0.05);3-硝基丙酸多次预处理后,丙二醛含量下降更为明显,与神经毒素组比较,差异有极显著性意义(P＜0.01);多次预处理组与单次预处理组比较,差异也有显著性意义(P＜0.05).③与空白对照组比较,小鼠在单次腹腔注射3-硝基丙酸后,还原型谷胱甘肽含量没有明显变化;多次腹腔注射3-硝基丙酸后,还原型谷胱甘肽水平明显升高(P＜0.05).在神经毒素组,还原型谷胱甘肽含量较空白对照组明显下降(P＜0.01);3-硝基丙酸单次预处理后,还原型谷胱甘肽含量与神经毒素组相比无明显变化(P＞0.05);3-硝基丙酸多次预处理后,还原型谷胱甘肽含量明显升高,差异有显著性意义(P＜0.05),多次预处理组与单次预处理组比较,差异有显著性意义(P＜0.05).结论:3-硝基丙酸多次预处理可通过减少丙二醛生成,激发还原型谷胱甘肽合成,保护多巴胺神经元,达到预防帕金森病的作用.
-
毒蛇咬伤急救处理1例
1 临床资料患者,男性,39岁,因左手背被毒蛇咬伤后左上肢肿痛1 d而入院.入院身体检查示,体温为36.5 ℃,脉搏为82次/min,血压为90/60 mmHg,呼吸为21次/min;患者呈急性痛苦表情,左上肢皮肤青紫,明显肿胀,散在张力性水泡,左侧胸部近肩关节处皮肤暗红,轻度肿胀,左手拇指根背部有两处小创口,局部发黑.
-
C型肉毒梭菌的鉴定及其神经毒素基因全序列测定
目的 对3株C型肉毒梭菌进行鉴定,并选择其中1株进行基因全序列测定.方法 对3株C型肉毒梭菌(C6514、C314/91和CAxA)进行生化鉴定、检出试验、确证试验、毒力测定、毒素定型试验,并对C6514株进行神经毒素基因全序列测序.结果 3株菌均能发酵葡萄糖,不能发酵乳糖,不能发酵牛奶和形成吲哚；3株菌均为产毒株；C6514株毒力较高,为2×104 LD50/ml;加C型或混合型肉毒诊断血清或加明胶磷酸盐缓冲液(GPB)煮沸均可中和或灭活C型肉毒梭菌产生的毒素；BoNT/C测得的序列拼接后与C-enBank中序列号为D90210的基因核苷酸和氨基酸序列同源性均为99％.结论 3株肉毒梭菌均为典型的C型肉毒梭菌.
-
注射用A型肉毒毒素的生物学特性及质量分析
目的 对注射用A型肉毒毒素(Botulinum toxin type A for injection,商品名衡力,出口商品名BTXA)制品中的活性药用成分(Active pharmaceutical ingredient,API)的性质及2009 ～ 2011年生产的注射用A型肉毒毒素原液的比活性进行分析.方法 对BTXA收获物样品进行阴离子交换层析,分离毒素复合体各组分；采用血凝试验、HPLC法、SDS-PAGE、等点聚焦电泳及N-末端氨基酸测序等方法分析A型肉毒毒素复合体及其各组分的性质；统计2009 ～ 2011年连续生产的注射用A型肉毒毒素原液的比活性数据,分析连续生产的工艺稳定性和质量重现性.结果 BTXA收获物样品在碱性条件下可被解离,解离出的A型肉毒神经毒素相对分子质量约为150 000,无血凝效价；BTXA的API为完整的单体,纯度均在99.5％以上；复合物和神经毒素的等电点分别为4.97、4.91,N-末端氨基酸测序结果与GenBank基本一致；在连续3年的生产过程中,原液比活性平均为3.0×107 LD50/mg蛋白,BTXA成品中API载量约为5 ng/瓶.结论 注射用A型肉毒毒素的活性成分是特异的复合体结构,可在碱性条件下解离出A型肉毒神经毒素；BTXA原液的比活性在连续3年的生产中持续稳定,具备很好的连续性,为临床使用的安全性提供依据.
-
肉毒毒素中毒的诊断和治疗
肉毒毒素（botulinum neurotoxin，BoNT）是由肉毒梭状芽胞杆菌产生的神经毒素，通过水解可溶性 N-乙基马来酰亚胺-敏感因子附着蛋白受体（soluble N-ethyl-maleimide-sensitive factor attachment protein receptor，SNARE）复合体，阻断神经递质释放，达到化学性去神经支配作用，已在临床诊疗及美容整形等多学科领域得到了广泛的应用。BoNT 中毒是由 BoNT 过量导致的一种神经瘫痪性疾病。医源性 BoNT 中毒大多与使用非正规渠道来源的 BoNT 或不规范使用 BoNT 有关。BoNT 中毒的临床症状主要为急性、对称性、下行性迟缓性瘫痪，严重者可致呼吸衰竭而死亡。BoNT 中毒有效的治疗方法是尽早使用 BoNT 抗毒素，因此早期诊断至关重要。由于病原菌检测或 BoNT检测耗时较长，因此临床诊断 BoNT 中毒主要依靠病史和临床表现，而神经电生理检查则有助于鉴别诊断。本文对 BoNT 中毒相关文献进行总结和讨论，以期为 BoNT 中毒的诊断和治疗提供指导。
-
N-甲基-D-天冬氨酸对豚鼠耳蜗内电位的影响
目的:观察N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)对耳蜗电位的影响,探讨NMDA对耳蜗的神经毒性作用.方法:用圆窗电极测试耳蜗的基础复合动作电位(CAP)和微音器电位(CM)后,在5 只豚鼠的圆窗上涂抹Hanks液,并保留20 min作为对照;然后再涂沫NMDA,也保留20 min.结果:NMDA升高所有频率的纯音诱发的CAP阈值,阈移在13～27 dB;显著降低CAP N1波幅,波幅被抑制达50%～75%;显著延长CAP的潜伏期(P<0.05);NMDA对所有频率纯音诱发的CM均无影响.结论:NMDA对耳蜗具有神经毒性作用,NMDA受体参与了介导谷氨酸的兴奋毒性作用.
-
硫酸镁预防奥沙利铂神经毒性的临床观察
目的观察硫酸镁对奥沙利铂引起的神经毒性的预防作用.方法入选病例均须用包括奥沙利铂的化疗方案,随机分为A、B两组.A组(试验组)为硫酸镁+化疗;B组(对照组)为单用化疗.A组用奥沙利铂前加用25%硫酸镁4 ml加入5%葡萄糖液500 ml中静脉滴注,每天1次,连用3天.完成4个周期后评价疗效.结果可评价疗效病例45例,A组22例,B组23例.其中A组发生1级2例,2级1例,3、4级均0例,总发生率13.6%.B组发生1级9例,2级3例,3级1例,4级0例,总发生率56.5%,两组差异有显著性(P<0.05).结论硫酸镁能降低奥沙利铂神经毒性的发生率,值得临床推广使用.
-
齐留通减轻小鼠小胶质细胞介导的鱼藤酮对PC12细胞的毒性作用
目的:观察5-脂氧酶选择性抑制剂齐留通对小胶质细胞介导的鱼藤酮神经毒性的影响.方法:以鱼藤酮预处理的小鼠小胶质BV2细胞条件培养液培养PC12细胞,通过MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)释放分析PC12细胞损伤和活性变化,Hoechst/碘化丙啶荧光双染检测PC12细胞死亡,并评估齐留通对小胶质细胞介导细胞毒性的作用.结果:1、3、10 nmol/L鱼藤酮对PC12细胞无直接毒性,但是其预处理的BV2细胞条件培养液间接诱导PC12细胞形态改变、活性下降,LDH释放和细胞死亡明显增加;0.01、1μmol/L齐留通能有效减轻小胶质细胞介导的鱼藤酮细胞毒性作用.结论:5-脂氧酶抑制剂齐留通能减轻小胶质细胞介导的鱼藤酮神经毒性,提示5-脂氧酶通路在小胶质细胞炎症诱导的神经细胞死亡中有重要作用.
-
福建产眼镜王蛇毒神经毒素的分离及活性测定
目的从眼镜王蛇蛇毒中分离神经毒素,测定其活性和毒性.方法应用CM-Sephadex C-50离子交换色谱,阶段梯度洗脱分离粗毒;用Sephadex G-50凝胶过滤纯化组分;用大鼠体外膈神经-膈肌标本鉴定分离组分对神经-肌肉接头的作用性质;观察神经毒素对乙酰胆碱(Ach)引起蛙体外腹直肌收缩的量效曲线的影响;以Meier法测定神经毒素对小鼠的半数致死量(LD50).结果眼镜王蛇粗毒经阳离子交换色谱后获得A～N共14个蛋白峰,经鉴定E、F、G、H、I、K等6个蛋白峰具有阻断神经-肌肉接头传导的作用,被鉴定为神经毒素,约占粗毒的48.3%;通过凝胶过滤对E、G和K组分进行初步纯化;E、G和K组分可使Ach引起的蛙腹直肌收缩的量效曲线平行右移,它们与N2-胆碱受体(N2-AchR)的解离常数(KD)分别为:145.87,73.53和20.04 ng/mL;E、G和K组分小鼠静脉注射的LD50分别为:0.884,0.749和1.58 mg/kg.结论眼镜王蛇粗毒经离子交换色谱获得6个神经毒素组分,经鉴定E、G和K组分为N2-AchR的竞争性拮抗剂.
