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通塞颗粒对29例老年慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者T淋巴细胞凋亡基因表达的影响
目的:探讨老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期T淋巴细胞凋亡基因(Fas/Apo-1)表达和细胞因子的变化意义及通塞颗粒对其影响.方法:56例COPD急性加重期患者分为治疗组和对照组.治疗组在对照组治疗(西医综合治疗)的基础上,口服中药通塞颗粒.检测COPD治疗前后和20例健康老年人血清Fas/Apo-1、白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.结果:COPD急性加重期患者血清Fas/Apo-1、IL-1β和TNF-α均明显高于健康老年人(P＜0.01);治疗后,治疗组和对照组Fas/Apo-1、IL-1β和TNF-α水平均明显降低(P＜0.01或P＜0.05),治疗组降低较对照组显著(P＜0.01).结论:细胞凋亡和细胞因子分子的变化参与老年COPD急性加重期病理过程,中药通塞颗粒降低Fas/Apo-1、IL-1β和TNF-α水平可能是该方治疗老年COPD的主要机制之一.
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健脑方对SHRsp大鼠卒中后脑神经细胞凋亡的防治作用
目的:观察急性脑卒中后大鼠脑神经细胞凋亡的变化及健脑方对凋亡的防治作用.方法:选择易卒中型自发性高血压(SHRsp)大鼠制作急性脑卒中动物模型,用健脑方干预治疗,观察造模前后大鼠神经系统症状、体征及大鼠海马组织病理结构的改变,应用原位末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)标记(TUNEL)法、免疫组化法及固定化蛋白质印迹(Western blot)法观察大鼠造模及药物干预前后脑神经细胞凋亡的改变.结果:预防给药组大鼠卒中发生率明显低于模型组(P＜0.01).TUNEL法显示模型组棕色颗粒在3天后达到高峰,应用健脑方干预后,棕色颗粒表达明显减少(P＜0.05).Western结果显示,模型组bcl-2、bax、caspase3在卒中后不同时相较正常组表达均增加.应用健脑方预防及治疗后均可使bcl-2表达升高(P＜0.05或P＜0.01),caspase3表达下降(P＜0.05或P＜0.01);bax在预防给药组表达下降(P＜0.05或P＜0.01),与治疗给药组比较差异无显著性(P＞0.05).结论:健脑方对脑卒中大鼠有明显的脑保护作用,其机制与抑制神经细胞凋亡及凋亡相关信号的传导有关.
关键词： 垂体卒中/中医药疗法 细胞凋亡/药物作用 @健脑方 -
中药复方博癌丸对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响
目的:研究中药复方搏癌丸对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的诱导作用.方法:采用细胞药理学和血清药理学方法,对比观察(阴性无药血清对照、阳性药5-氟尿嘧啶血清对照)搏癌丸诱导HepG2细胞的增殖及凋亡.(1)MTT法观察4个搏癌丸药物血清浓度对HepG2细胞增殖的抑制作用,从中筛选出搏癌丸的有效药物浓度.(2)电镜及流式细胞仪观察HepG2细胞凋亡.结果:(1)10%、5%、2.5%搏癌丸药物血清3个有效浓度均对HepG2细胞增殖有显著抑制作用(P＜0.01),增殖抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,3个有效浓度组间差异均有显著性(P＜0.01).(2)10%搏癌丸药物血清作用HepG2细胞48小时后,HepG2细胞核明显缩小,浆比减少,核仁减少、浓缩甚至消失,核内异染色质明显增多,核膜完整,可见早、中、晚期细胞凋亡,出现凋亡小体.(3)10%搏癌丸药物血清作用HepG2细胞48小时后,流式细胞仪检测的细胞凋亡率为25.34%,均显著高于相应无药血清对照组的3.54%(P<0.05).结论:搏癌丸能在一定程度上抑制HepG2细胞的增殖和诱导HepG2细胞凋亡.
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熄风通络方与补阳还五汤对大鼠脑缺血神经细胞凋亡调控基因(bcl-2、bax)的影响
目的:比较熄风通络方与补阳还五汤对大鼠脑缺血神经细胞凋亡调控基因bcl-2、bax的影响.方法:造成大鼠全脑缺血后,分别予以熄风通络方与补阳还五汤治疗,于缺血后24小时检测海马区细胞凋亡调控基因bcl-2、bax的表达量(定性与定量).结果:模型组bcl-2 mRNA的表达较正常对照组与假手术组明显降低,而熄风通络方组呈过表达,高于正常对照组与假手术组,也高于补阳还五汤组,差异均有统计学意义(P<0.01);模型组bax mRNA表达量则较正常组与假手术组增高,而熄风通络方组明显低于模型组,也低于补阳还五汤组,但高于正常对照组与假手术组,差异均有统计学意义(P<0.01).结论:熄风通络方防治大鼠脑缺血的可能机制是影响细胞凋亡调控基因bcl-2、bax的表达,其对凋亡调控基因的影响优于补阳还五汤.
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补肾法对去势兔动脉粥样硬化原代培养平滑肌细胞凋亡及血小板源生长因子A mRNA等表达的影响
目的:观察补肾煎对去势兔动脉粥样硬化原代培养平滑肌细胞凋亡及血小板源生长因子A(PDGF-A) mRNA与单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA表达的影响.方法:新西兰雌兔随机分为A组(卵巢切除)、B组(未切除卵巢)、C组(卵巢切除+补肾煎),均予高脂饮食并注射胎牛血清蛋白,造成动脉粥样硬化模型.同时C组予补肾煎,12周后检测相关指标.结果:C组培养平滑肌细胞凋亡率高于A组、B组, PDGF-A mRNA 及MCP-1 mRNA在A组、C组的表达明显高于B组(P＜0.01),而在C组的表达又显著低于A组(P＜0.01).结论:补肾煎可能通过增加血管平滑肌细胞的凋亡、降低PDGF-A mRNA及MCP-1 mRNA的表达而减轻去势兔动脉粥样硬化的形成.
关键词： 动脉粥样硬化/中医药疗法 细胞凋亡/药物作用 补肾 -
中药对支气管扩张症气道淋巴细胞凋亡的影响
为了探讨中药与氧氟沙星对大鼠支气管扩张症(支扩)模型气道淋巴细胞凋亡的影响。建立大鼠叶支气管内注射绿脓杆菌的支扩模型。以中药和氧氟沙星进行治疗，采用TUNEL法进行气道凋亡淋巴细胞的标记，对淋巴细胞的凋亡指数(AI)进行比较。结果,中药治疗组(AI)与对照组比较，差异有显著性(P＜0.05)；并且气道组织也显示出炎症细胞浸润改善。结果表明,中药可能是通过促进气道淋巴细胞凋亡，清除炎症细胞，以改善气道炎症反应。
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中医药治疗胃癌与细胞凋亡研究进展
细胞凋亡(apoptosis,APO)在胃癌发生、发展中具有重要的意义,诱导细胞凋亡是治疗胃癌的新思路.近年来,中医药治疗胃癌与细胞凋亡的研究引起了国内外学者的广泛关注,现综述如下.1 细胞凋亡与胃癌的发生、发展细胞凋亡是细胞在发育代谢过程中的一种生理现象,是细胞衰老、死亡的主要形式之一.其典型的形态学改变是:细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧贴于核膜周边,核碎裂,染色质片段化,凋亡小体形成.胃细胞学检查证明,正常的胃粘膜存在细胞凋亡,从腺体的底部到表面,都能看到少量的凋亡小体.细胞分裂的周期中决定细胞生长速度和凋亡的关键是G1期[1].近年来,发现胃癌不仅存在细胞过度增生,同时也存在细胞的凋亡异常[2],细胞凋亡异常在肿瘤发生发展中具有重要的病理生理意义[2,3].胃粘膜癌变过程可能与细胞凋亡的调控失常有关,肿瘤细胞丧失了自发性凋亡或存在凋亡受阻现象.许多研究证实,胃癌的发生与癌细胞凋亡的调节紊乱有关,细胞凋亡参与胃癌的起始过程,并对胃癌的发生起负调节作用.例如在早期胃癌到进展期胃癌的过程中,胃粘膜病变细胞凋亡减少,生长期延长,大量异常细胞堆积,是胃癌发生、浸润和转移的基础.不同分化程度的胃癌细胞凋亡指数也存在着差异,显示分化程度越差的细胞凋亡也越逃避[4].因此在胃癌的治疗中,不断地探索新方法新途径,包括化疗药物[5]、放射线[6],细胞因子、激素和基因编码[7]等.近年来,大量实验研究发现,胃癌细胞可以通过人为地触发细胞凋亡而被清除,而中药诱导细胞凋亡对今后胃癌的治疗研究提供了前景.
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补益方抗环磷酰胺造模小鼠脾细胞凋亡作用的研究
目的:研究六味地黄丸等5种补益方对环磷酰胺(CPP)造模小鼠脾细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:选择ICR小鼠,采用流式细胞术检测脾细胞凋亡率及细胞周期等.结果:5种补益方中,四君子汤、六味地黄丸、生脉散、金匮肾气丸能拮抗CPP引起的脾细胞增殖抑制;六味地黄丸、四君子汤能拮抗CPP引起的脾细胞凋亡;5种补益方均能拮抗CPP所致的脾脏萎缩.结论:5种补益方均有不同程度的改善CPP所致脾脏损害的作用,其中以四君子汤、六味地黄丸效果较佳.
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肠复康对人大肠癌HT-29细胞凋亡的影响
目的:研究中药复方肠复康对人大肠癌细胞凋亡的影响及其作用机制.方法:建立人大肠癌HT-29裸鼠移植瘤模型,设立肠复康低、中、高剂量组和空白对照组、5-氟脲嘧啶(5-FU)+甲酰四氢叶酸钙(CF)对照组,各组裸鼠8只,给药8周后处死裸鼠,瘤体称重,末端原位标记TUNEL法检测凋亡指数,并分别行半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bax、Bcl-2免疫组化染色,图像分析系统定量检测并比较该3种物质表达情况.结果:肠复康各组瘤重小于空白对照组,而凋亡指数均高于空白对照组和5-FU+CF组,其中高剂量组显著较高(与空白对照组和5-FU+CF组比较,P＜0.01).肠复康各组移植瘤Caspase-3表达及Bax、Bcl-2表达的相对比率(Bax/Bcl-2)均高于空白对照组.结论:肠复康具有诱导人大肠癌HT-29裸鼠移植瘤细胞凋亡的作用,其机制可能与促进移植瘤Caspase-3表达及增大Bax/Bcl-2表达比率有关.
关键词： 结肠肿瘤/中医药疗法 细胞凋亡/药物作用 @ 肠复康 -
半夏泻心方配伍与诱导BGC-823细胞凋亡关系的血清药理学研究
目的:研究半夏泻心方不同配伍药组含药血清对BGC-823细胞凋亡的影响及其机制.方法:采用MTT法观察半夏泻心方配伍药组含药血清对BGC-823细胞增殖的影响,采用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡、S-P免疫组化法检测凋亡相关基因bcl-2的表达.结果:半夏泻心方配伍中辛开组、苦降组和由其组成的辛苦组可明显抑制BGC-823细胞的生长,显著优于辛甘组、苦甘组、甘补组和全方组,呈剂量-效应关系,其含药血清浓度在10%作用48小时后,DNA琼脂糖凝胶电泳可见较典型的"梯状带",可使bcl-2基因的表达下调.结论:半夏泻心方中辛开、苦降的配伍形式具有抑制BGC-823细胞增殖,诱导细胞凋亡作用,辛开、苦降配伍后(辛苦)有显著的协同增效趋势,而其他配伍药群可能存在拮抗作用.提示辛开苦降法可能是中医药防治胃癌的主要治则治法之一.
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养心通脉片对动脉粥样硬化大鼠"痰瘀"病理细胞凋亡的影响
目的:观察养心通脉片对动脉粥样硬化(AS)大鼠"痰瘀"病理细胞凋亡的影响.方法:采用高脂饲料喂饲法复制Wistar大鼠动脉粥样硬化模型,造模1个月后检测动脉斑块形成,作为模型成功的指标,治疗组用养心通脉片,对照组用绞股蓝总甙片治疗1个月.检测血脂、血糖、血液流变学、胰岛素,光镜、电镜及运用免疫组化法观察动脉血管平滑肌细胞(VSMC)细胞凋亡的变化.结果:养心通脉片对动脉粥样硬化模型大鼠有明显的降脂、改善血液流变性、改善胰岛素抵抗功能,能消退斑块并维持主动脉组织结构及功能,使细胞凋亡趋于正常.结论:养心通脉片对改善AS大鼠"痰瘀"病理细胞凋亡有良好的效果.
关键词： 动脉粥样硬化/中医药疗法 细胞凋亡/药物作用 @ 养心通脉片 -
三氧化二砷对白血病HL-60细胞株的凋亡作用
目的:探讨三氧化二砷对HL-60的诱导凋亡作用.方法:琼脂糖电泳检测DNA条带;Hoecst 33258染色后荧光显微镜观察细胞核的变化.用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:10 μmol/L三氧化二砷处理HL-60细胞24～48 h可见到DNA出现梯形条带;处理24～48 h HL-60细胞核呈现细胞核浓缩和核碎裂现象,流式细胞仪测定12、24、和48 h的细胞凋亡率分别为(8.5±2.1)%、(12.8±3.4)%及(21.4±5.8)%,而培养48 h的HL-60细胞自然凋亡率仅为(1.5±0.5)%(P＜0.05).结论:三氧化二砷可诱导HL-60细胞凋亡.
关键词： 砷剂/药理学 白血病/病理学/药物疗法 细胞凋亡/药物作用 人类 -
三氧化二砷对肝癌细胞株HLE的细胞毒和诱导凋亡作用
目的研究As2O3对肝癌细胞株HLE细胞毒和诱导凋亡作用.方法应用MTT染色,流式细胞仪和电子显微镜观察As2O3对HLE细胞株的诱导凋亡作用和形态学改变,应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)测试肝癌细胞内[Ca2+]i变化.结果As2O3对肝癌细胞株HLE具有诱导凋亡作用,CLSM检测肝癌细胞内[Ca2+]i高浓度As2O3作用下48 h达高峰;在低浓度下96 h达高峰.结论 As2O3对肝癌细胞具有较强的细胞毒和诱导细胞凋亡的作用.
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纳洛酮对神经元GluR2表达的影响及缺氧损伤保护作用
目的:研究纳洛酮对缺氧损伤神经元膜表面AMPA(amino-3-hyoroxy-5-methylisoxazole-4-propionic acid,α-氨基-3-羟基-5甲基-4-异口恶唑丙酸)受体在谷氨酸受体第二亚单位(GluR2,glutamic acid receptor 2)表达的影响及其对神经细胞凋亡的保护作用.方法:取体外培养12 d的大鼠海马神经元,建立缺氧再灌注损伤模型,分别采用流式细胞和双重免疫荧光技术定量观察神经元凋亡数量、胞膜表面GluR2含量变化及纳洛酮的调节作用.结果:纳洛酮可上调缺氧损伤后神经元膜GluR2的含量(P＜0.05),减少缺氧诱导的神经元凋亡的数量(P＜0.01).结论:纳洛酮通过上调神经元膜表面GluR2含量,减少神经元凋亡,减轻继发性脑损害.
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SB203580对肠缺血再灌注大鼠p38MAPK及细胞凋亡的影响
目的:探讨大鼠肠缺血再灌注(IR)时p38MAPK特异性抑制剂SB203580对p38MAPK、凋亡调控因子及凋亡细胞表达的影响.方法:Wistar大鼠30只随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(Ⅰ组)和SB203580组(S组)(n=10),采用肠IR模型检测p38MAPK、Bcl-2、Bax、TNF-及凋亡指数的水平.结果:Ⅰ组中p38MAPK、凋亡调控因子及凋亡细胞的表达均显著高于C组(P＜0.05),而S组中p38MAPK、TNF-α及凋亡细胞的表达减少,Bcl-2/Bax比值增高(P＜0.05).结论:SB203580抑制了小肠组织中p38MAPK通路的活化,从而增加了Bcl-2的表达、减少了Bax和TNF-α的释放.在缓解细胞凋亡的过程中起到了重要的作用.
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中药通心络超微粉对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的干预作用
目的:探讨通心络超微粉对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的干预作用,为临床用药提供实验依据.方法:取SD大鼠随机分为3组:正常对照组、糖尿病心肌病变组(Diabetic Myocardi-opathy,DcM组)和通心络干预组(TXL组).采用Tunel法检测光镜下观察心肌细胞凋亡指数,免疫组化法测定Bcl-2,Bax及P53基因蛋白表达.结果:TXL组大鼠较DCM组大鼠心肌细胞凋亡指数明显下降(P<0.01),Bcl-2表达明显增多(P<0.1),Bax及P53表达明显减少(P<0.01).结论:通心络超微粉可以通过多种途径有效减少糖尿病大鼠心肌细胞凋亡.
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丹参酮ⅡA对MKN-45细胞生长的影响
目的:研究丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)对人胃癌细胞株MKN45的生长抑制作用.方法:选用人胃癌细胞株MKN-45,运用MTT法、流式细胞术(FCM)和逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)半定量法检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和各组p53 mRNA表达.结果:TanⅡA可明显抑制MKN-45细胞的增殖,其抑制作用具有时间-效应和剂量-效应关系.当2.0μg/mL TanⅡA处理MKN-45细胞96 h,增殖抑制率达(74.84±0.41)%.FCM检测肿瘤细胞DNA变化,观察到TanⅡA使MKN-45细胞周期阻滞于G2/M期,出现浓度依赖性的亚"G1"峰,同时野生型p53表达增加.结论:TanⅡA能有效地抑制人胃癌细胞株MKN-45的增殖,其可能的机制与凋亡有关.
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白藜芦醇抑制白血病K562细胞增殖机制的探讨
目的:探讨白藜芦醇(RES)抑制白血病K562细胞增殖的机制及非折叠蛋白应答(UPR)对其机制的影响.方法:选取不同浓度的RES干预K562细胞,并且用RES(100μmol/L)干预K562细胞不同时段；利用MTT法检测细胞存活率；利用流式细胞仪分析细胞周期并检测细胞凋亡率；利用蛋白质印迹法检测凋亡早期蛋白及UPR靶点蛋白表达水平；利用实时定量PCR法检测GRP78和CHOP mRNA的表达.结果:RES导致K562细胞细胞存活率明显减少,并呈剂量依赖方式；RES的生长抑制作用主要是阻断细胞周期中的G1期,G2/M期的变化较小；RES处理的K562细胞没有显著的细胞凋亡.RES可提高GRP78 mRNA的表达水平,呈剂量及时效依赖方式,RES对CHOP mRNA水平也有诱导作用,但只有在RES浓度较大时(50 μmol/L)或作用时间较长时(8 h)才开始上调,并且上调幅度较小.蛋白质印迹分析证实RES提高UPR靶点(GRP78、GRP94、磷酸化eIF2a和剪接作用XBP-1)的蛋白表达水平.结论:RES优先诱导UPR存活分支,表明UPR参与RES抑制白血病K562细胞增殖的机制.
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姜黄素对Raji细胞凋亡及bFGF表达影响的观察
目的:探讨抗血管生成药物姜黄素对人非霍奇金淋巴瘤(NHL) Raji细胞凋亡及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响,为临床抗血管新生治疗NHL提供理论依据.方法:不同浓度(5、10、25和50 μmol/L)姜黄素作用Raji细胞不同时间后,倒置相差显微镜下观察Raji细胞形态及生长情况；Annexin V-FITC双标流式细胞术检测姜黄素对细胞凋亡的作用；ELISA检测姜黄素对Raji细胞上清中bFGF含量的影响.结果:显微镜下可见,随姜黄素浓度的增加,Raji细胞由成团生长变为单个散在,细胞数明显减少,细胞体积变小,折光性减弱,有的细胞膜破裂,可见细胞碎片；流式细胞术检测结果显示,作用24、48和72 h后10 μmol/L姜黄素组细胞凋亡率分别为(11.12±1.05)％、(14.74±0.46)％和(25.11±1.43)％,25 μmol/L姜黄素组分别为(25.07±5.40)％、(33.50±5.89)％和(55.98±7.41)％,均高于对照组凋亡率(1.75±0.28)％、(2.25±0.29)％和(2.77±0.61)％,差异有统计学意义,P＜0.01.ELISA法检测结果显示,作用24、48和72 h对照组上清液中bFGF浓度分别为(643.41±57.12)、(732.26±60.19)和(931.27±81.04) ρg/mL;10 μmol/L姜黄素处理组分别为(212.76±20.07)、(173.23±14.76)和(107.21±12.37) ρg/mL;25 μmol/L姜黄素处理组分别为(95.32±11.59)、(71.24±10.03)和(36.41±7.58) ρg/mL;Raji细胞经10、25 μmol/L姜黄素作用24、48和72 h后,bFGF表达水平明显低于对照组,在3个时间点的表达量与对照组相比,差异有统计学意义,P＜0.01；不同浓度姜黄素处理组上清液中bFGF含量差异亦有统计学意义,P＜0.05.结论:姜黄素对Raji细胞凋亡具有促进作用,能够抑制Raji细胞分泌bFGF,其抑制作用具有浓度、时间依赖性,提示姜黄素可能有抑制血管新生的作用.
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地塞米松诱导结肠癌细胞凋亡的实验研究
目的:研究糖皮质激素受体(GR)在结肠癌细胞株Lovo、HCT-116、HT-29和SW-480中的表达,观察地塞米松(Dex)在体外对结肠癌细胞株的增殖抑制和凋亡诱导作用.方法:采用免疫组化、RT-PCR检测糖皮质激素受体(GR)在结肠癌细胞株中的表达;MTT、DNA Ladder和流式细胞仪等方法进行增殖抑制和细胞凋亡检测.结果:在4种结肠癌细胞株中只有Lovo和HCT-116表达GR.地塞米松在体外作用后,对4种细胞的增殖均有抑制作用,其中对Lovo 和HCT-116细胞作用显著.在Lovo细胞可检测到特征性的凋亡细胞DNA梯带.在流式细胞仪检测显示经1×10-4mol/L Dex诱导72 h后,在Lovo和HCT-116细胞检测到细胞凋亡,分别为(34.8±1.9)%和(33.6±1.4)%,明显高于未加Dex对照组的Lovo(2.9±0.4)%和HCT-116(6.4±1.3)%,差异有统计学意义(t值分别为28.934和22.980,P值均为0.000).结论:结肠癌细胞株Lovo和HCT-116表达GR,地塞米松体外抑制Lovo和HCT-116细胞增殖,并诱导其发生凋亡,可能与GR相关.
